AGGF1通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌发生发展

目的 研究G补缀FHA域血管新生因子1（angiogenic factor with G-patch and FHA domain 1，AGGF1）调控Wnt/β-catenin信号通路对结直肠癌细胞（colorectal cancer，CRC）增殖、侵袭和上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的可能机制。方法 通过裸鼠荷瘤免疫组化法检测AGGF1在正常组织和癌组织中的表达。qRT-PCR和Western blotting检测NCM460、SW620、HT29、HCT116、SW480中AGGF1的mRNA和蛋白表达水平。于HCT116细胞中过表达AGGF1，分为Vector组和AGGF1组；于SW620细胞中敲减AGGF1，分为shControl组和shAGGF1组。CCK-8法和克隆形成试验测定细胞活性和细胞克隆数目。划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭情况。免疫荧光检测细胞E-cadherin、N-cadherin的表达。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin、AGGF1、β-catenin、糖原合酶激酶-3β （glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）、p-GSK-3β蛋白表达水平。结果 AGGF1蛋白表达在CRC组织中明显增高。AGGF1 mRNA和蛋白表达水平在HCT116细胞中最低，在SW620细胞中最高。CCK-8法、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验结果显示，在HCT116细胞中，与Vector组比较，AGGF1组48，72，96 h细胞活性、克隆细胞数目、相对迁移距离、侵袭细胞数显著增加（P<0.05或P<0.01）；而在SW620细胞中，与shControl组比较，shAGGF1组结果相反（P<0.05或P<0.01）。免疫荧光和Western blotting检测结果显示，与Vector组比较，AGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平降低（P<0.01），N-cadherin增强（P<0.05或P<0.01），同时上调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.01）；与shControl组比较，shAGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平显著升高（P<0.01），N-cadherin显著降低（P<0.05或P<0.01），同时下调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。结论 AGGF1可通过激活Wnt/β-catenin信号通路异常表达，上调β-catenin、p-GSK-3β、N-cadherin表达，下调E-cadherin表达，促进CRC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT，从而促进CRC发生发展。     

dalbinol通过ROS/Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的探讨天然产物dalbinol对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测dalbinol对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用;利用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡率和ROS水平;通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(4.8±0.53)、(2.5±0.43)和(0.6±0.22)μmol·L-1;Hoechst 33342染色观察到细胞皱缩、核固缩和染色质凝集等典型凋亡的形态学变化,同时dalbinol可剂量依赖性地提高细胞凋亡率,且能增加细胞内ROS水平;Western blot结果发现dalbinol通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平,上调促凋亡蛋白Bax和Bim的表达,从而促进cleaved caspase-3和cleaved PARP活化裂解,进而诱导细胞凋亡;此外,dalbinol通过抑制Dvl-2和GSK3β(p S9)的蛋白表达,从而降低总的β-catenin和胞核β-catenin的表达,但胞质β-catenin无明显变化,最终下调Wnt/β-catenin通路下游靶蛋白c-Myc和Survivin的表达水平。结论dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与提高细胞内ROS水平和抑制Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

TGF-β3与熊果酸抑制人结肠癌细胞增殖作用的研究

目的研究TGF-β3与熊果酸(ursolic acid,UA)抑制结肠癌细胞增殖作用的关系及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色法和流式细胞术分析不同浓度UA对HCT116细胞增殖的作用。利用Western blot和流式细胞术等方法分析UA对HCT116细胞凋亡的影响。通过RT-PCR和(或)Western blot实验分析UA在HCT116细胞中对TGF-β3、Smad2/3和β-catenin表达及磷酸化水平的影响。采用TGF-β3重组腺病毒和特异性抑制剂以及萤光素酶报告质粒分析TGF-β3介导UA抑制结肠癌细胞增殖的可能分子机制。结果UA能明显抑制HCT116细胞增殖,诱导G1期阻滞,并促进其凋亡。UA能明显降低TGF-β3的mRNA和蛋白表达水平;UA对Smad2/3的总蛋白水平无明显影响,但能明显降低Smad2/3的磷酸化水平;外源性过表达TGF-β3可部分逆转UA对HCT116细胞增殖的抑制作用,TGF-β3特异性抑制剂则增强UA对HCT116细胞增殖的抑制作用;UA降低β-catenin蛋白水平,并明显抑制Wnt/β-catenin信号转导;外源性过表达TGF-β3促进β-catenin蛋白表达,并部分逆转UA对β-catenin蛋白表达的抑制效应;TGF-β3特异性抑制剂增强UA对β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论 UA能抑制结肠癌细胞HCT116增殖并诱导凋亡,其作用可能是通过下调TGF-β3表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号转导。     

小檗碱抑制HCT116细胞生长与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究小檗碱对结肠癌细胞的增殖抑制作用与Wnt/β-catenin信号的关系。方法结晶紫染色法检测小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用,采用流式分析及West-ern blot研究小檗碱诱导HCT116细胞凋亡;Western blot检测β-catenin蛋白表达、RT-PCR法检测β-catenin mRNA表达,确定小檗碱对其表达的影响;采用外源性过表达β-cate-nin研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与β-catenin的关系。结果小檗碱处理组细胞较对照组细胞增殖明显受到抑制,并诱导HCT116细胞凋亡。小檗碱处理组全细胞、胞质及核内β-catenin蛋白水平均明显较对照组低。外源性过表达β-catenin能减弱小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用。小檗碱处理组β-catenin mRNA表达明显受到抑制。结论小檗碱能抑制HCT116细胞增殖并抑制Wnt/β-catenin信号转导,其机制可能与下调β-catenin mRNA表达有关。     

白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞生长的研究

目地探讨白藜芦醇抗肿瘤活性的作用机制。方法本研究使用白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HCT116后,通过细胞生长实验和MTT增殖实验来探讨其对HCT116细胞生长、增殖的影响;通过免疫印迹实验检测β-catenin的表达水平和Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达,检测白藜芦醇对Wnt信号通路活化的影响。结果白藜芦醇能显著抑制HCT116的生长增殖,降低β-catenin的表达水平,抑制Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达。结论白藜芦醇通过抑制Wnt信号通路从而抑制肿瘤生长,本研究为白藜芦醇抗肿瘤机制提供了新的思路和方向。     

miR-27a对两种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨microRNA-27a(miR-27a)对2种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法应用miR-27a反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO)在体外转染结肠癌细胞系SW620和HCT116,设置转染无义序列组作为对照组。RT-PCR检测细胞miR-27a表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测转染细胞FOXO1蛋白表达。结果与对照组相比,转染miR-27a ASO后结肠癌细胞系SW620和HCT116的miR-27a表达水平均明显降低(P<0.001),增殖能力和侵袭能力均受到明显抑制(P<0.01),FOXO1蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论抑制miR-27a表达可显著降低结肠癌细胞系SW620和HCT116的增殖能力和侵袭能力,而调控下游FOXO1蛋白表达可能是miR-27a参与结肠癌细胞增殖和侵袭的主要机制。     

粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

白细胞介素1β对结直肠癌细胞HCT116迁移能力和上皮-间质转化的影响

目的 研究白细胞介素1β（IL-1β）诱导结直肠癌细胞HCT116转移的分子机制。方法 HCT116细胞分为空白对照组（不进行任何处理）,IL-1β处理组（加入200 pmol/L IL-1β处理）,干扰阴性对照+IL-1β处理组（转染阴性干扰对照再加入IL-1β处理）,干扰锌指绑定增强蛋白1（ZEB1）+IL-1β处理组（转染ZEB1干扰RNA）。使用Transwell迁移实验研究各组细胞的迁移能力。荧光定量聚合酶监链式反应（PCR）检测各组细胞中E-cadherin和ZEB1基因的表达。免疫印迹实验检测各组细胞E-cadherin和ZEB1蛋白的表达。结果 空白对照组穿过Transwell小室的细胞数量为（58.3±7.2）个,IL-1β处理组为（129.6±12.1）个,差异有统计学意义（P<0.05）;干扰阴性对照+IL-1β处理组穿过Transwell小室的细胞数量为（108.7±15.9）个,干扰ZEB1+IL-1β处理组为（68.2±11.4）个,差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组HCT116细胞中E-cadherin基因的相对表达量、E-cadherin蛋白相对灰度值均高于IL-1β处理组,差异均有统计学意义（P<0.05）;干扰阴性对照+IL-1β处理组HCT116细胞中E-cadherin基因的相对表达量、E-cadherin蛋白相对灰度值均低于干扰ZEB1+IL-1β处理组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-1β通过诱导ZEB1表达促进结直肠癌细胞HCT116发生EMT转化并提高其迁移能力。     

棉酚通过Akt/β-catenin通路抑制胃癌细胞迁移

目的探讨棉酚(gossypol)对胃癌细胞迁移能力的影响,并探讨相关机制。方法胃癌细胞经不同浓度棉酚处理后,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测丝/苏氨酸激酶/β-链蛋白(Akt/β-catenin)信号通路活性及相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(Ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白表达水平。结果MTT实验显示,棉酚对胃癌细胞具有增殖抑制作用,且随浓度增加而增大;Transwell小室实验显示棉酚对胃癌细胞迁移能力具有抑制作用;棉酚对胃癌细胞迁移能力的抑制率高于增殖抑制率;与对照组相比,棉酚可明显下调胃癌细胞的pAkt、β-catenin、cyclin D1、MMP-2和vimentin蛋白表达水平,明显上调E-cadherin蛋白表达水平。结论棉酚通过下调Akt/β-catenin通路活性抑制胃癌细胞迁移。     

TGF-β1对结直肠癌细胞株侵袭转移及IL-22表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对结直肠癌细胞株侵袭转移及白细胞介素22（IL-22）蛋白表达的 影响。方法 以结直肠癌HCT116细胞株为研究对象,以不同浓度（0、5、10、15、20、30、50 μg/L）TGF-β1处理24、48 h 后,CCK-8法检测结直肠癌HCT116细胞体外增殖情况;将结直肠癌HCT116细胞株分为对照组和10 μg/L TGF-β1 处理组。Transwell侵袭迁移实验和划痕实验检测TGF-β1对HCT116细胞侵袭迁移能力的影响;采用RT-PCR检测 TGF-β1对HCT116细胞TGF-β1、IL-22 mRNA表达的影响;免疫细胞化学染色和Western blot 检测HCT116细胞中 TGF-β1、IL-22、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平。结果 CCK-8结果显示, 0、5、10、15、20、30、50 μg/L TGF-β1 溶液刺激 24、48 h 后,不同 TGF-β1 浓度处理组结直肠癌 HCT116 细胞光密度 （OD）值差异均无统计学意义（均P＞0.05）。10 μg/L TGF-β1处理HCT116细胞48 h后,细胞侵袭能力、迁移能力和 迁移距离均明显升高（均P＜0.01）;TGF-β1处理组TGF-β1 mRNA表达水平明显高于对照组,而IL-22 mRNA表达水 平明显低于对照组（均P＜0.01）;免疫细胞化学染色和Western blot结果显示,TGF-β1处理组TGF-β1、STAT3蛋白表 达水平明显高于对照组,而IL-22、E-cadherin蛋白表达水平明显低于对照组（均P＜0.05）。结论 TGF-β1可能促进 HCT116细胞侵袭和迁移,但对HCT116细胞的增殖影响不明显,结直肠癌HCT116细胞中TGF-β1可能抑制IL-22蛋 白的表达。     

白藜芦醇抑制HCT116结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色和Western blot分析Res对HCT116细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和Western blot分析Res对HCT116细胞凋亡的促进作用;利用TCF4/LEF萤光素酶报告质粒检测Res对Wnt/β-catenin信号转导的影响。采用Western blot和PCR分析Res对HCT116细胞内β-catenin表达水平的影响。结果与对照组相比,Res能抑制HCT116细胞增殖,下调PCNA蛋白水平;流式细胞术和Western blot检测结果均显示,Res能明显促进HCT116细胞凋亡;报告质粒分析结果显示,Res呈浓度依赖性降低TCF4/LEF报告质粒萤光素酶活性(Res为20μmol·L-1时,P<0.05;Res为40或80μmol·L-1时,P<0.01);Western blot和PCR分析结果显示,Res不仅明显降低HCT116细胞中β-catenin的蛋白水平,同时也下调β-catenin mRNA的表达水平。结论Res能抑制HCT116细胞增殖并促进凋亡,其机制可能至少与Res下调β-catenin mRNA表达,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

丙戊酸通过GSK3β/β-catenin信号轴抑制胃癌细胞的增殖和迁移

目的探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及可能涉及的分子机制。方法以0、2、4、6和8 mmol·L^-1浓度的VPA分别处理人胃癌细胞AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-82324、48、72 h后,MTT法检测细胞的活性;软琼脂克隆实验检测VPA对胃癌细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell迁移实验检测VPA对胃癌细胞迁移能力的影响;应用STITCH、STRING和Enrichr数据库预测VPA可能影响的信号通路;免疫印迹实验检测上皮间质转化和GSK3β/β-catenin信号通路等标志物的表达情况;免疫荧光实验检测上皮间质化相关标志物的表达情况。结果与对照组相比,VPA可显著抑制AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-823细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性;可抑制AGS和SGC-7901细胞的迁移能力及EMT进程(上皮标志物E-cadherin表达上调,间质标志物Vimentin、Snail表达下调);可下调p-GSK3βser9和β-catenin的蛋白表达水平。结论VPA可有效抑制胃癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与GSK3β/β-catenin信号轴的抑制及EMT进程的逆转有关。     

银莲花素A对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究银莲花素A(RA)对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡及β-连环蛋白(β-catenin)/c-Myc通路的影响。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,将细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用5、10和20μmol·L^-1 RA处理细胞。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测RA对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用;用荧光显微镜观察细胞核的形态学改变;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用蛋白质印迹法检测细胞β-catenin/c-Myc信号通路相关蛋白的表达情况。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞抑制率分别为0、(19.15±0.65)%、(35.11±0.40)%和(49.93±1.13)%,细胞凋亡率分别为(0.16±0.18)%、(9.26±0.42)%、(17.87±2.54)%和(38.10±2.70)%,β-catenin蛋白相对表达水平分别为0.74±0.03、0.69±0.01、0.33±0.02和0.16±0.04,c-Myc蛋白相对表达水平分别为0.89±0.01、0.54±0.03、0.29±0.03和0.1...     

lncRNA FOXCUT调控Notch通路抑制结肠癌细胞增殖、侵袭的实验研究#br#

目的　研究长链非编码RNA（lncRNA）FOXC1启动子临近转录体（FOXCUT）对结肠癌细胞（HCT116）增殖、侵袭的影响及作用机制。方法　向HCT116细胞转染FOXCUT siRNA（FOXCUT siRNA组）,以转染阴性siRNA为阴性对照组（FOXCUT siRNA-NC组）,未转染组为正常对照组（NC组）,通过qPCR法确定FOXCUT干扰效果,并检测结肠癌及癌旁组织、人结肠癌细胞株（SW480、SW620、HCT116、HT29）和人正常结肠上皮细胞（NCM460）中FOXCUT mRNA表达水平;通过CCK-8、集落形成实验和Transwell实验检测沉默FOXCUT对HCT116细胞增殖、集落形成能力及侵袭能力的影响;qPCR检测沉默FOXCUT后HCT116细胞中Notch1、Hes1 mRNA表达变化;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测HCT116细胞中Notch1、Hes1蛋白表达情况。结果　与癌旁组织比较,结肠癌组织中FOXCUT mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）;与NCM460细胞比较,SW480、SW620、HCT116、HT29结肠癌细胞株中FOXCUT mRNA表达水平均显著增高（P＜0.05）,其中以HCT116细胞中表达水平最高;与FOXCUT siRNA-NC组比较,FOXCUT siRNA组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）;NC组、FOXCUT siRNA-NC组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;沉默FOXCUT可显著抑制细胞增殖、集落形成能力及侵袭（P＜0.05）,并抑制Notch1、Hes1 mRNA及蛋白表达（P＜0.01）。结论　沉默FOXCUT可抑制结肠癌HCT116细胞增殖及侵袭,可能与抑制Notch通路有关。     

甲氟奎对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的 研究甲氟奎对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制.方法 运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)法检测甲氟奎(5、10、15、30μmol/L)对食管鳞癌细胞KYSE140的增殖的调控,筛选最适浓度30μmol/L;用β连环素(β-catenin)信号通路激活剂Wnt3a或二甲基亚砜(DMSO)与30μmol/L甲氟奎共处理KYSE140细胞48 h.Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中β-catenin、周期素依赖激酶抑制剂p21、增殖细胞核抗原(PC-NA)、神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏素(E-cadherin)的蛋白表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中β-catenin的表达.结果 甲氟奎可呈浓度依赖性抑制食管鳞癌细胞KYSE140的增殖,最适浓度为15μmol/L;在24、48和72 h时对照组细胞吸光度分别为(0.21±0.02)、(0.52±0.04)、(1.19±0.10),15μmol/L甲氟奎组细胞吸光度分别为(0.21±0.01)、(0.34±0.03)、(0.68±0.06);对照组迁移和侵袭细胞数分别为(120±8)个、(80±6)个,甲氟奎组迁移和侵袭细胞数分别为(62±5)个、(45±4)个,甲氟奎可明显的抑制KYSE140细胞的增殖、迁移和侵袭,上调p21、E-cadherin,下调PCNA、N-cadherin;最重要的是,甲氟奎可明显的抑制β-catenin信号通路的关键基因β-catenin的表达,且激活β-catenin信号通路可逆转甲氟奎对KYSE140细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制.结论 甲氟奎可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制与抑制β-catenin信号通路的活性相关,将可为甲氟奎治疗食管鳞癌提供更充分的依据.     

shRNA沉默STAT3基因对结肠癌细胞增殖及顺铂敏感性的影响

目的 构建携带信号转导与转录激活子3（STAT3）基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体,观察pGPU6/GFP/Neo- STAT3重组质粒对HCT116细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法 设计并构建稳定转录shRNA STAT3的质粒,采用脂质体法转染结肠癌HCT116细胞,Western blot法检测转染后STAT3蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖变化。重组质粒联合顺铂作用于HCT116细胞后,MTT法检测细胞存活率。结果 成功构建了pGPU6/GFP/Neo-STAT3重组质粒,测序证实重组质粒构建正确。重组质粒转染HCT116细胞后,细胞增殖明显受抑制,STAT3蛋白表达降低。重组质粒联合顺铂治疗后,细胞增殖活性显著降低。结论 shRNA STAT3重组质粒能明显降低HCT116细胞中STAT3蛋白的表达,抑制细胞增殖,提高结肠癌细胞对顺铂的敏感性。     

秦艽多糖通过调控STMN1表达影响肺癌细胞增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨秦艽多糖是否可通过调控微管不稳定性蛋白1（STMN1）表达而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法:体外培养肺癌细胞A549,随机分为对照组、秦艽多糖低、中、高浓度组(25,50,100μg·ml-1);采用甲基噻唑基四唑（MTT）与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭; pcDNA 3.1-STMN1转染至A549细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测STMN1、增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67（Ki67）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量。结果:与对照组比较,秦艽多糖中、高浓度组细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数及STMN1、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平显著升高（P<0.05）,且秦艽多糖各浓度组间的指标差异均有统计学意义（P<0.05）;与高浓度秦艽多糖+pcDNA 3.1组比较,高浓度秦艽多糖+pcDNA 3.1-STMN1组细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数及STMN1、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:秦艽多糖可能通过下调STMN1的表达从而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

微小RNA-152-3p 对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-152-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法2019年2月至2020年4月,将结肠癌SW480细胞分为miR-152-3p模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-152-3p模拟物(miR-152-3p)组、抑制物(anti-miRNC)组、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)组、阴性对照(si-NC)组、沉默转移相关蛋白2(si-MTA2)组、miR-152-3p模拟物+空载体(miR-152-3p+pcDNA3.1)组、miR-152-3p模拟物+过表达MTA2(miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2)组,均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中,另取未转染结直肠癌SW480细胞记为Control组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-152-3p和MTA2 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法测定蛋白的表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结肠癌HCT116、SW480及LoVo细胞中miR-152-3p表达分别为0.72±0.04、0.29±0.02、0.49±0.01,人正常结肠上皮细胞NCM460中miR-152-3p表达为1.06±0.12,与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞HCT116、LoVo、SW480中MTA2 mRNA和蛋白较高,miR-152-3p较低(P<0.05);Control组、miR-NC组、miR-152-3p组、si-NC组及si-MTA2组结肠癌SW480细胞吸光度分别为0.92±0.22、0.96±0.17、0.31±0.07、0.99±0.17及0.32±0.09,细胞迁移数分别为(172.00±23.52)个、(169.00±20.66)个、(53.67±12.22)个、(155.67±16.8)个及(54.33±8.74)个,细胞侵袭数分别为(124.67±10.02)个、(122.33±9.45)个、(26.00±5.00)个、(108.33±10.02)个及(42.00±4.00)个,与miR-NC 组相比,miR-152-3p 组SW480细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)及上皮钙黏素(E-cadherin)较高(P<0.05);与si-NC组相比,si-MTA2组SW480细胞中cyclin D1、MMP-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,P21及E-cadherin较高(P<0.05)。转染miR-152-3p和MTA2野生型表达载体的结肠癌SW480细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。相比miR-152-3p+pcDNA3.1组,miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2组SW480细胞中P21、E-cadherin的表达较低,MTA2、cyclin D1、MMP-2蛋白的表达较高,SW480细胞活性、迁移、侵袭数量较高(P<0.05)。结论miR-152-3p可能通过下调MTA2抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

红景天苷通过抑制STAT3活化调控结肠癌细胞增殖和转移

目的：研究红景天苷对结肠癌细胞增殖和转移的抑制作用,并探讨其分子机制。方法：采用平板克隆和CCK-8法检测结肠癌HCT116细胞活力,Transwell观察细胞侵袭与迁移能力,蛋白质印迹法检测增殖蛋白[c-Myc,细胞周期蛋白D1（cyclinD1）]、侵袭转移相关蛋白[E-钙黏附蛋白（E-cadherin）和基质蛋白酶9（MMP-9）]及JAK2/STAT3信号通路蛋白[STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）、JAK2和磷酸化JAK2（p-JAK2）]的表达。结果：平板克隆和CCK-8实验显示,与对照组相比,0.5,1,2 μg·mL^-1红景天苷显著抑制HCT116细胞的增殖,且在该范围内有浓度依赖性。Transwell实验显示,0.5,1,2 μg·mL^-1红景天苷分别作用于HCT116细胞24 h,细胞的侵袭、转移能力也逐渐降低（P<0.05）。蛋白质印迹法检测结果显示：与对照组相比,0.5,1,2 μg·mL^-1红景天苷组c-Myc、cyclinD1、MMP-9、p-STAT3、p-JAK2蛋白水平均明显降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平均升高（P<0.05）,而JAK2、STAT3蛋白水平无明显差异（P>0.05）。与红景天苷组比较,红景天苷+Y705D组细胞增殖能力增强,迁移和侵袭细胞数增多（P<0.05）,p-STAT3,c-Myc,cyclinD1,MMP-9蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达减少（P<0.05）;而与Y705D组比较,红景天苷+Y705D组细胞增殖能力减弱（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数减少（P<0.05）,p-STAT3、c-Myc、cyclinD1、MMP-9蛋白表达减少（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达增加（P<0.05）。结论：红景天苷抑制结肠癌细胞增殖和转移,其作用机制与抑制STAT3信号通路有关。     

氧化苦参碱通过Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌HCT116细胞凋亡和焦亡作用研究

目的 探究氧化苦参碱诱导结肠癌HCT116细胞死亡的作用机制。方法 将结肠癌HCT116细胞随机分为对照组和氧化苦参碱（2、4、8、12、16、20、30、40 mmol·L^-1）组,通过CCK-8法检测各浓度氧化苦参碱作用24、48 h对结肠癌细胞存活率的影响;光学显微镜下观察氧化苦参碱（15、20、25 mmol·L^-1）对HCT116细胞形态的影响;通过Hoechst染色法和Annexin V/PI双染流式细胞术法观察氧化苦参碱对HCT116细胞凋亡的影响;JC-1染色观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blotting法检测各组细胞成熟体半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、BCL2关联X蛋白（Bax）、细胞色素C （Cyt-C）、消化道皮肤素E （GSDME）、细胞周期蛋白1（cyclin-D1）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（c-Myc）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、β-连环素（β-catenin）、生存素（survivin）的蛋白表达情况。结果 与对照组比较,氧化苦参碱可以明显降低HCT116细胞的存活率,且存在剂量及时间相关性,作用24、48h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为18.80、10.75 mmol·L^-1;氧化苦参碱组形状正常的HCT116细胞明显减少,均出现部分类圆球形的细胞,并且折光率明显降低;经Hoechst染色后氧化苦参碱组HCT116细胞的蓝色荧光明显加深,且相对集中,流式细胞术结果显示细胞凋亡率显著增加（P<0.05、0.01）;JC-1染色结果表明氧化苦参碱可以降低HCT116细胞线粒体膜电位;氧化苦参碱组Bcl-2、β-catenin、c-Myc、cyclin D1和survivin蛋白表达水平显著下降（P<0.05、0.01）,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Cyt-C、GSDME蛋白表达水平及Bax/Bcl-2显著上升（P<0.05、0.01）。结论 氧化苦参碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路,促进线粒体依赖的细胞内源性凋亡和细胞焦亡发挥抗结肠癌作用。