胞质紧密粘连蛋白1的研究现状

胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)是多域蛋白家族膜结合鸟苷酸激酶同系物中的一员,作为紧密连接的组成成分在组织分化和器官发生发面起关键作用,同时ZO-1的改变与细胞通透性的增加有关。ZO-1在包括肾、胎盘、血脑屏障等许多组织中表达,可与紧密连接上的很多跨膜蛋白相互作用。     

血脑屏障紧密连接蛋白claudin与脑缺血及其分子机制

组成血脑屏障紧密连接的重要物质,跨膜蛋白Claudin,对维持血脑屏障的紧密连接的完整性及其正常的生理功能起着重要作用,当Claudin蛋白出现结构或功能上的障碍时,血脑屏障功能也会随之改变。目前研究显示,脑缺血对Claudin的分布和表达等都影响着血脑屏障的功能,进而影响着整个内环境的稳态。所以,研究Claudin蛋白的结构、基因表达、病理状态下的变化和与之有关的信号转导等都对了解血脑屏障的选择性开放机制、及药物治疗靶点中的作用都有着深远的意义。     

大鼠急性脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的超微结构与血清S100B蛋白水平的动态变化

目的: 研究大鼠急性脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的超微结构与血清S100B蛋白水平的动态变化. 方法: 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注动物模型;硝酸镧示踪电镜观察血脑屏障通透性;采用ELISA方法检测血清S100B蛋白,观察其分别在脑缺血2 h再灌注0.5, 2, 6, 12, 24, 48 h时的变化. 结果: ①硝酸镧示踪电镜结果表明,再灌注0.5 h,镧颗粒出现在紧密连接处;再灌注2 h和6 h,血管内皮细胞空泡化明显,星型胶质细胞的足突与毛细血管基底膜开始分离;再灌注12 h和24 h,许多神经细胞和胶质细胞变性坏死,细胞核溶解,毛细血管基底膜的连续性受到破坏;再灌注48 h,大量的神经细胞和胶质细胞坏死、崩解,多数血管内皮细胞形态不完整. ②大鼠缺血再灌注后各组血清S100B蛋白水平与假手术组及对照组相比都明显升高,差异有显著性意义(P<0.01). 再灌注0.5 h,血清S100B蛋白开始增高;再灌注2 h和6 h,血清S100B蛋白处较高水平;再灌注12 h和24 h,血清S100B蛋白明显增高;再灌注48 h,血清S100B蛋白仍处较高水平. 结论: 脑缺血再灌注后血脑屏障通透性发生显著变化,血清S100B蛋白水平在脑缺血再灌注后的动态改变可较好的反映血脑屏障通透性的变化.     

PTD介导蛋白通过血脑屏障及其在脑组织中的分布

目的：探讨HIV－1 TAT的蛋白转导结构域（protein transduction domain,PTD）介导的大分子蛋白通过血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）的作用及其在脑组织中的分布。方法：将纯化的PTD－BCR／ABL融合蛋白及伊文思蓝经尾静脉注入小鼠体内，制备全脑组织恒冷箱连续切片，用免疫组织化学染色法检测PTD－BCR／ABL融合蛋白在脑组织中的分布，用伊文思蓝作为指示剂检测PTD对BBB开放的影响。结果：将其注射到小鼠体内后，在全脑组织细胞中均检测到PTD－BCR／ABL融合蛋，呈非特异性组织分布；全脑组织除无BBB区域外，余脑区均无伊文思蓝渗入，PTD不引起BBB的开放。结论：PTD可在体内特异性介导大分子蛋白通过血脑屏障，并在全脑组织细胞中分布，为肽类或蛋白类大分子药物通过BBB进入中枢神经系统（central nervous ystern,CNS)开辟了一条新的途径。     

β淀粉样蛋白的跨血脑屏障转运

<正>阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)作为一种神经退行性疾病,其重要病理特征之一是β淀粉样蛋白(amyloid beta-peptides,Aβ)在脑组织中沉积形成老年斑(senileplaques,SP)^[1],Aβ作为AD最重要的生物标志物之一,通过分析其含量可以区分AD患者的病情发展阶段,这对于早期发现疾病极其重要[2]。血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)作为维持机体脑部环境稳定的屏障系统,     

乳腺癌胞质内腔的研究

对９７例乳腺癌、２１例乳腺良性病变和９６例其它恶性肿瘤ＩＣＬｓ进行了研究，发现ＩＣＬｓ有两种类型，Ａ型ＩＣＬｓ含有分泌物，Ｂ型不合分泌物。乳腺癌ＩＣＬｓ阳性率显著高于良性病变和其它恶性肿瘤（ｐ＜０．００５），提示ＩＣＬｓ有助于乳腺癌的诊断和确定淋巴结转移癌的乳腺原发灶。并对ＩＣＬｓ发生机制进行了讨论。     

体外循环对大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白表达的影响

目的探讨体外循环（CPB）对大鼠血脑屏障（BBB）功能及脑血管内皮紧密连接蛋白表达的影响。方法 24只成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组（S组）和体外循环组（C组）。S组进行相应的麻醉和手术操作但不进行CPB,C组进行CPB 60 min并继续观察2 h。每组随机取6只测脑组织伊文思蓝（EB）含量,另6只做脑组织含水量测定、紧密连接蛋白Oc-cludin和ZO-1的表达以及大鼠BBB超微结构的观察。结果与S组比较,C组大鼠海马区脑组织EB含量和含水量升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。与S组比较,C组大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达水平下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。S组BBB基膜均匀一致,完整性良好,内皮细胞间的紧密连接完整;C组基底膜变厚,微血管腔狭窄,内皮细胞间紧密连接不清楚。结论 CPB使大鼠BBB的结构发生变化、通透性增加,其机制可能与大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白改变有关。     

实验性脑出血血肿周围组织血脑屏障葡萄糖转运蛋白的表达

目的观察实验性脑出血血肿周围组织血脑屏障葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达.方法建立脑出血大鼠模型,使用免疫组化检测脑出血血肿周围组织血脑屏障GLUT1的表达.结果脑出血后12 h,GLUT1表达增强,24 h达到高峰,48 h后表达减少.结论脑出血早期,血肿周围血脑屏障GLUT1表达增多,有助于恢复脑的能量代谢.     

胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4对胶质瘤细胞生长的影响

目的 探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation-element-binding protein,CPEB4)在脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响。 方法 测定脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白表达、脑胶质瘤组织和细胞中CPEB4 mRNA水平、细胞中CPEB4蛋白、PIK3CA蛋白、SMAD3蛋白的表达、细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖和细胞的侵袭能力。 结果 低级别脑组织和高级别脑组织中CPEB4蛋白阳性率高于正常脑组织(P<0.05),高级别脑组织中CPEB4蛋白阳性率高于低级别脑组织(P<0.05);低级别脑组织和高级别脑组织中CPEB4蛋白水平高于正常脑组织(P<0.05),高级别脑组织中CPEB4蛋白水平高于低级别脑组织(P<0.05);SiRNA-CPEB4组细胞CPEB4蛋白表达量低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05);SiRNA-CPEB4组早期细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05);SiRNA-CPEB4组G₁期细胞比例高于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05),SiRNA-CPEB4组S期细胞比例低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05);SiRNA-CPEB4组第3天、第7天细胞OD值均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);SiRNA-CPEB4组侵袭细胞数低于阴性对照组和空白对照组;SiRNA-CPEB4组细胞PIK3CA蛋白、SMAD3蛋白表达量均低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.05)。 结论 脑胶质瘤组织中CPEB4水平升高,CPEB4影响脑胶质瘤细胞的凋亡、细胞周期、增殖和侵袭,其机制可能和PIK3CA、SMAD3有关。      

实验性脑出血血肿周围组织血脑屏障葡萄糖转运蛋白的表达

目的观察实验性脑出血血肿周围组织血脑屏障葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达。方法建立脑出血大鼠模型,使用免疫组化检测脑出血血肿周围组织血脑屏障GLUT1的表达。结果脑出血后12 h,GLUT1表达增强,24 h达到高峰,48 h后表达减少。结论脑出血早期,血肿周围血脑屏障GLUT1表达增多,有助于恢复脑的能量代谢。     

感染对血脑屏障通透性改变的研究进展

血脑屏障(BBB)是脑组织与外界进行营养物质交流的系统,它保证了中枢神经组织内环境的稳定。感染引起BBB损伤在脑水肿的发生、发展中起重要作用。研究表明,多种机制参与了BBB结构功能的改变,这些变化是脑水肿病理改变的重要环节。阐明BBB结构功能改变的机制,对脑水肿的防治有着重要的意义。     

氨基胍对大鼠脑缺血再灌注损伤及血脑屏障的影响

目的探讨氨基胍(AG)对大鼠脑缺血再灌注后的血脑屏障的影响及对再灌注损伤的保护作用。方法采用线栓法建立鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型。于缺血2 h再灌注22 h,测定脑梗死体积,并用伊文思蓝染色荧光显微镜观察血脑屏障破坏的程度,HE染色观察中性粒细胞浸润变化。结果再灌注22 h后,AG治疗组脑梗死体积减小,脑缺血区血脑屏障破坏程度和中性粒细胞浸润程度明显减轻(P<0.05)。结论AG对脑缺血再灌注具有确切的脑保护作用,并能减轻脑缺血再灌注对血脑屏障的破坏程度和炎症细胞浸润程度。     

聚氧乙烯蓖麻油微乳对血脑屏障通透性的影响

目的 :以伊文思蓝为指示剂 ,研究聚氧乙烯蓖麻油 (cremophor)微乳对血脑屏障通透性的影响。方法 :采用甲酰胺提取 紫外分光光度法测定小鼠各脏器中伊文思蓝的浓度 ,比较不同微乳体系中伊文思蓝在小鼠体内的组织分布情况。结果 :伊文思蓝在脑组织中的浓度依次为 :聚氧乙烯蓖麻油微乳、陈皮油微乳、(cre mophor/Tween 80为 1∶1)微乳、Tween 80微乳、胶束、伊文思蓝水溶液。其中聚氧乙烯蓖麻油微乳、陈皮油微乳组脑中伊文思蓝的浓度分别为水溶液组的 5 . 0倍、3 2倍 (P     

体外血脑屏障模型的建立

目的:利用自发转化的人脐静脉内皮细胞系ECV304和分离纯化的大鼠星形胶质细胞共培养试图建立一种具有重复性好、细胞纯度高、培养操作简便、接近在体状态的体外血脑屏障模型。方法:分3步:(1)分离纯化培养大鼠星形胶质细胞;(2)建立体外血脑屏障BBB模型(内皮细胞系/星形胶质细胞非接触共培养);(3)模型鉴定。结果:利用ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立的血脑屏障模型无论是在形态学、屏障功能上还是内皮细胞的特异性标志物的表达水平上都与在体血脑屏障的特性相似。结论:可以利用ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型。     

脑水肿对大鼠血脑屏障内皮细胞膜表面ICAM—1表达量的影响

采用液氮冷冻Ｗｉｓｔａｒ大鼠－侧大脑制成血管源性脑水肿模型，将大怀脑冷冻中心制成冠状面冰冻切片，运用免疫组化染色观察脑水肿组及对照组白质脑屏障内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１蛋白表达量的变化 。     

D1 Receptor-Mediated Endogenous tPA Upregulation Contributes to Acute Blood Brain Barrier Damage

Background: Disruption of the blood brain barrier (BBB) integrity at the early stage of ischemia is becoming a critical target to reduce hemorrhage transformation (HT) because of the potential to predict HT. However, the mechanism underlying early BBB damage is not very clear. It was reported that after acute ischemia, there was a significant increase of dopamine release in striatum where we have reported BBB damage as well as upregulation of HIF-1α after 2-h ischemia. Objective: In current study, we aimed to investigate the role of dopamine signal pathway in BBB damage after acute ischemia using in vivo rat middle cerebral artery occlusion (MCAO) model. Results: Our data showed that there was an increase of endogenous tissue plasminogen activator (tPA) in BBB damage area and intra-striatum infusion of tPA inhibitor neuroserpin, significantly alleviated ischemia-induced BBB damage. In addition, intra-striatum infusion of D1 antagonist SCH23390 significantly decreased ischemia-induced upregulation of endogenous tPA, accompanied by decrease of BBB damage and occludin degradation. More important, inhibition of HIF-1 with inhibitor YC-1 significantly decreased acute ischemia-induced endogenous tPA upregulation and BBB damage. Conclusion: Taken together, our data demonstrate that acute ischemia disrupted BBB through activation of endogenous tPA via HIF-1 upreguation-induced dopamine increase, thus representing a new therapeutic target for protecting BBB, and may help alleviate HT following thrombolysis after ischemia stroke.     

不同剂量重组人促红细胞生成素在宫内缺血缺氧环境中透过胎盘屏障及血脑屏障的通透性

目的探讨不同剂量重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)在宫内缺血缺氧时透过胎盘屏障及胎鼠血脑屏障的通透性。方法孕19d(孕晚期)SD大鼠,分为3组:rhEPO治疗组(Treat组)、假手术对照组(Sham组)和生理盐水缺血对照组(I/R组)。Treat组和I/R组制备宫内缺血缺氧模型,Sham组只进行开关腹手术。Treat组和Sham组根据注射rhEPO的剂量不同各自再分为3组,分别在宫内缺血缺氧处理或开关腹手术前30min经孕鼠尾静脉注射125I标记的rhEPO 2500U/kg、5000U/kg、7500U/kg,I/R组在宫内缺血缺氧处理前30min经尾静脉注入生理盐水。均于缺血缺氧处理或开关腹手术后24h取胎盘、羊水及胎鼠脑、肝、心、肺和肾,检测并比较各组织中125I-rhEPO的放射比活性。结果 Treat组和Sham组胎盘、羊水及胎鼠各组织中均能检测到125I-rhEPO的分布。125I-rhEPO在胎盘、羊水及胎鼠各组织中的分布均随rhEPO注射剂量的增加而增加。在各剂量组中,Treat组胎鼠各组织中的125I-rhEPO含量均高于Sham组(P<0.05)。结论在宫内缺血缺氧环境下,胎盘屏障及胎鼠血脑屏障对外源性rhEPO的通透性增加。     

蛋白转导技术在新生儿缺氧缺血性脑病中应用研究进展

新生儿缺氧缺血性脑损伤是我国新生儿急性死亡和慢性神经系统后遗症的重要原因之一。目前新生儿缺氧缺血性脑药物治疗效果不佳,主要原因是药物无法通过血脑屏障。蛋白质转导结构域（prote in transduction domain,PTD）是指一类能携带其他生物大分子（蛋白多肽、DNA、寡核苷酸等）穿过多种哺乳动物细胞并使其在细胞内积聚的小分子阳离子多肽。PTD能携带生物大分子物质透过血脑屏障（Blood-Brain Barrier,BBB）,这为我们研究、治疗中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）疾病提供了新的思路。本文就PTD的结构特征、转导过程、与物质连接方式、CNS疾病治疗现状等方面来阐述PTD在新生儿缺氧缺血性脑病中的应用前景。     

缺血预处理对脑缺血血脑屏障通透性和MMP—9表达的影响

目的：研究缺血预处理（IP）对再缺血脑组织血脑屏障通透性和MMP－9的表达的影响。方法：3组SD大鼠分别给予：①一侧颈内动脉注射生理盐水（SI）；②双侧颈总动脉夹闭（BCAO）；③双侧颈部动脉夹闭同时一侧颈内动脉注射生理盐水（BS）处理，24h后，应用动脉腔内线栓法作大脑中动脉阻断（MCAO），观察3种预处理对再缺血脑组织含水量、血脑屏障（BBB）通透性和MMP－9表达的影响。结果：缺血24和48hBS组脑含水量均值分别为82．92％和83．12％，SI组和BCAO组分别为85．29％，85．96％和86．17％；85．58％；缺血24和48NA和蛋白水平的表达水平明显低于其他两组两组（P＜0．01）。结论诱导脑缺血耐受的BS处处理能明显减轻再缺血性脑水肿和BBB损伤，降低MMP－9的表达可能是脑缺血耐现象的重要机制之一。     

脑干损伤早期一氧化氮含量和血脑屏障通透性的改变

目的：探讨机械性脑干损伤早期脑组织中一氧化氮含量和血脑屏障通透性的改变及其意义。方法：建立机械性脑干损伤大鼠模型，用荧光分光光度法检测脑组织的一氧化氮含量，并用白蛋白的免疫组织化学染色显示血脑屏障通透性的改变。结果：与正常对照组相比，脑干组织的一氧化氮含量在伤后10-15min显升高，并可见大量白蛋白免疫阳性神经细胞；而小脑和大脑组织无明显改变。结论：在机械性损伤早期，脑干组织的一氧化氮含量增多，并且血脑屏障通透性增加。