侧脑室注射β-淀粉样蛋白制作阿尔茨海默病样大鼠模型

目的 研究侧脑室注射β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)对大鼠学习记忆功能及海马区病理改变的影响,探讨侧脑室注射β-淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样动物模型的可行性.方法 将20只雄性SD大鼠随机分为2组:空白对照组和AD模型组,每组10只.采用侧脑室立体定向注射β淀粉样蛋白(amyloid-beta protein, Aβ)25-35的方法,建立AD的动物模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习、记忆能力,通过HE染色、刚果红染色观察大鼠海马区的病理改变.结果 大鼠经侧脑室立体定向注射10 μmol/L Aβ25-35 5 μl后,(1)AD模型组大鼠Morris水迷宫检测逃避潜伏期第1～3天分别为(42.19±12.29)s、(31.28±20.59)s、(23.91±8.05)s较对照组[分别为(27.35±14.96)s、(13.17±6.79)s、(13.01±6.83)s]明显延长(P＜0.05或P＜0.01);(2)HE染色见对照组大鼠海马神经元排列规则、紧密,形态完整,AD模型组海马区神经元明显疏松,排列紊乱,出现胶质细胞增生;(3)刚果红染色各组未见明显淀粉样斑块沉积,AD模型组于血管壁上见淀粉样物质沉积,这在国内损伤型AD动物模型中少见报道.结论 应用侧脑室内微量注射Aβ的方法建立AD动物模型,在行为学、病理学上均符合AD表现,可以作为一种简易而又经济的AD动物模型.     

五味子乙素对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及神经细胞凋亡的影响

目的研究五味子乙素(Sch B)对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及神经细胞凋亡的影响。方法 50只Bal B/C小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药对照组、Sch B低浓度组和Sch B高浓度组。应用Morris水迷宫实验检测AD小鼠的学习记忆功能,HE染色观察AD小鼠脑组织病理形态学变化,流式细胞术和TUNEL染色观察小鼠脑组织神经细胞凋亡,Western印迹法及免疫组织化学法检测AD小鼠脑组织相关凋亡蛋白P53、Bax、Cyto C、C-caspase-9、C-caspase-3的表达。结果与模型组比较,应用Sch B小鼠水迷宫实验路径和潜伏期较短;HE染色显示,与模型组比较,应用Sch B干预后的AD小鼠海马神经细胞排列较为规整,细胞水肿明显减轻;流式细胞术和TUNEL染色结果显示,凋亡细胞比例明显减少;Western印迹法与免疫组织化学实验显示,Sch B干预后AD小鼠脑组织内P53、Bax、Cyto C、C-caspase-9、C-caspase-3蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论 Sch B能明显改善AD小鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制神经细胞凋亡有关。     

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠tau蛋白的影响

目的 研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其机制.方法 清洁级Wistar鼠63只,随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌齐组和山茱萸多糖组.采用D-半乳糖与Aβ联合诱导法制作AD大鼠模型,Morris水迷宫检测学习记忆能力,免疫组化法检测海马神经元p-tau(Ser422)及tau蛋白的表达情况,Western印迹法检测大鼠海马神经元tau蛋白在Ser422位点、Ser396位点的磷酸化水平.结果 与青年组、假手术组比较,模型组大鼠海马p-tau(Ser422) 、p-tau(Ser396)表达增加(P＜0.05),多奈哌齐和山茱萸多糖显著降低p-tau(Ser422)、p-tau(Ser396)表达(P＜0.05)、提高tau蛋白表达(P＜0.05).结论 山茱萸多糖可通过抑制p-tau(Ser422)、p-tau(Ser396)生成,改善AD大鼠学习记忆能力.     

褪黑素对阿尔茨海默病样细胞总tau蛋白表达的影响

目的 建立冈田酸(OA)诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究褪黑素对此AD样细胞总tau蛋白表达的影响.方法 以OA处理NG108-15细胞建立AD样细胞模型,褪黑素进行干预,以免疫细胞化学及细胞免疫印迹技术观察细胞总tau蛋白表达的变化.结果 褪黑素可引起AD样细胞总tau蛋白表达明显升高.结论 褪黑素可升高AD样细胞总tau蛋白水平,起到拮抗AD的作用.     

当归对慢性脑低灌注大鼠阿尔茨海默病样变与认知功能的影响

目的观察当归对慢性脑低灌注大鼠阿尔茨海默病样变及认知功能的影响。方法选择SD大鼠44只,随机分为假手术组、双侧颈总动脉结扎模型(2VO)组、低剂量当归组及高剂量当归组,每组11只。通过Morris水迷宫和物体再认实验评价大鼠海马依赖的空间学习和记忆能力,并采用酶联免疫吸附法检测大鼠海马区β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积,Western blot免疫印迹法检测海马区脑源性神经生长因子(BDNF)、β分泌酶1、Aβ、Tau蛋白和蛋白激酶B(Akt)/糖原合酶激酶3β(GSK3β)信号通路磷酸化水平。结果与假手术组比较,2VO组大鼠第3、4、5天逃逸潜伏期明显延长,目标象限探索时间明显缩短,优先指数显著降低,Aβ1-40、Aβ1-42、磷酸化Tau、β分泌酶1表达明显增高,Akt/GSK3β通路磷酸化水平、BDNF明显降低(P<0.05,P<0.01)。与2VO组比较,低剂量当归组和高剂量当归组第3、4、5天逃逸潜伏期明显缩短,目标象限探索时间明显延长,优先指数显著升高,Aβ1-40、Aβ1-42、磷酸化Tau、β分泌酶1表达明显降低,Akt/GSK3β通路磷酸化水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。与低剂量当归组比较,高剂量当归组逃逸潜伏期明显缩短,目标象限探索时间明显延长。与2VO组比较,高剂量当归组海马BDNF表达明显增高(0.360±0.027 vs 0.056±0.019,P<0.01)。结论当归可能通过抑制Akt/GSK3β通路和β分泌酶1活性而抑制慢性脑低灌注大鼠海马内磷酸化Tau蛋白和Aβ沉积等阿尔茨海默病样病理变化,从而改善认知功能。     

NSE在阿尔茨海默病模型大鼠脑组织中的蛋白表达变化

目的探讨阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑组织中的蛋白表达变化。方法实验选取Wistar雄性成年大鼠20只,随机分为正常组及AD模型组。切断大鼠双侧海马制备AD动物模型。肽指纹图谱是通过NCBI对特定差异蛋白点进行生物质谱分析、鉴定。对不同实验组海马蛋白进行测定。通过蛋白变化的比较,选取有差异的蛋白点条件:AV Ratio>1.3或<1.3,t检验P<0.05,为有意义蛋白点。结果进一步通过SwissPort蛋白数据库进行鉴定。结果质谱分析发现AD模型组海马内有一表达明显升高的蛋白点,经鉴定为神经元烯醇化酶(NSE)。结论 NSE在AD的病程中,表达发生变化,是在AD疾病中起重要作用的酶。     

红景天对阿尔茨海默病模型大鼠行为学及海马区突触相关蛋白的影响

目的探讨红景天对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠行为学能力及海马组织突触后致密蛋白(PSD-95)、shank-1蛋白表达的影响及其治疗AD的可能作用机制。方法采取腹腔注射D-半乳糖+灌胃AlCl3+一次性注射东莨菪碱法制备AD大鼠模型,用红景天采取灌胃方式对实验大鼠进行干预,并以喜得镇作为对照,观察其干预效果。用Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组化法检测大鼠海马区PSD-95、shank-1蛋白水平的变化。结果模型组与空白组相比,学习记忆能力明显减退(P<0.01),PSD-95、shank-1蛋白水平下降(P<0.01);中药组与模型组相比,学习记忆能力显著改善(P<0.01),PSD-95、shank-1蛋白水平提高(P<0.01);中药组和西药组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天明显增高AD大鼠海马组织中PSD-95、shank-1蛋白水平,从而影响突触可塑性,这可能是其改善AD大鼠学习记忆功能的作用机制之一。     

tau蛋白与阿尔茨海默病

<正>阿尔茨海默病(AD)是最常见的老年期痴呆综合征,其主要病理特征之一为tau蛋白引起的细胞内神经纤维缠结(NFTs)〔1〕,研究tau蛋白是探讨治疗AD病变的基础。近年来,以tau蛋白作为AD治疗靶点的药物研究受到越来越多的关注,特别是针对tau蛋白聚集新型抑制剂的研究取得初步进展。1 tau蛋白微管系统是神经细胞的骨架组分,与有丝分裂、细胞内转运、细胞特性及细胞标志等多种功能有关。微管由微管蛋白和微管相关蛋白组成,tau蛋白是一种含磷量最高的微管相关蛋     

吡格列酮改善胰岛素抵抗大鼠脑组织Tau蛋白磷酸化水平

目的探讨胰岛素增敏剂吡格列酮(PIO)对胰岛素抵抗(IR)模型大鼠皮质Tau蛋白磷酸化水平的影响及可能的机制。方法选择Wistar大鼠46只,随机选20只分为对照组和PIO组,每组10只;另26只通过果糖喂养建立IR大鼠模型后,分为IR组和IR+PIO组,每组13只,采用免疫印迹法检测皮质Tau蛋白磷酸化、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(PKB)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)及GSK-3β位点中Ser9的磷酸化水平。结果与对照组比较,IR组大鼠皮质Tau蛋白磷酸化水平明显增高;磷酸化PI3K、磷酸化PKB和磷酸化GSK-3β蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);而PIO能显著抑制Tau蛋白磷酸化水平,上调磷酸化PI3K、磷酸化PKB和磷酸化GSK-3β的水平(P<0.05,P<0.01);各组GSK-3β差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IR通过抑制PI3K-丝/苏氨酸蛋白激酶通路激活,促进GSK-3β活性上调,可能是引起大鼠海马Tau蛋白过度磷酸化的重要原因;PIO可能通过降低GSK-3β活性进而抑制Tau蛋白的过度磷酸化。     

石菖蒲联合奥拉西坦对阿尔茨海默病大鼠神经相关蛋白和炎性因子的影响

目的 分析中药石菖蒲联合奥拉西坦对阿尔茨海默病大鼠血清和脑海马β-淀粉样蛋白(Aβ)、微管相关蛋白(tau)、磷酸化tau(P-tau)及炎性肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的影响.方法 选取SPF级Wistar雄性大鼠60只,分为空白对照组10只和实验组50只;实验组均为通过Morris...     

粒细胞集落刺激因子对阿尔茨海默病大鼠脑内炎症的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)治疗阿尔茨海默病(AD)大鼠对脑内炎症反应的影响。方法 54只Wistar雄性大鼠(3~4个月龄),随机选取18只作为正常组、36只制作AD大鼠模型成功后采用随机数字表法各选取18只分别作为治疗组、模型组;模型组和正常组采用HE染色法对大脑皮层组织进行观察,治疗组给予G-GCS(0.3 ml·kg-1·d-1),模型组和正常组分别给予等量磷酸盐缓冲液(PBS)注射,又分别于第7、14、21天进行相关指标的检测并进行组间比较。结果正常组治疗第7、14、21天的大脑皮层细胞IL-1β染色光密度值均显著低于模型组、治疗组(P0.05),治疗组治疗14、21 d后大脑皮层细胞IL-1β染色光密度值低于模型组(P0.05)。正常组治疗第7、14、21天的大脑皮层细胞TNF-α染色光密度值均显著低于模型组、治疗组(P0.05),治疗组治疗14、21 d后大脑皮层细胞TNF-α染色光密度值低于模型组(P0.05)。结论 AD大鼠对脑内炎症反应作用显著增强,G-CSF可以有效降低AD大鼠的炎症反应作用,对大鼠大脑皮层细胞具有一定的保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响。方法42只大鼠随机分为3组:假手术组、单纯缺血再灌注组、缺血再灌注+银杏叶提取物组,每组14只。通过免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL)检测热休克蛋白70表达及凋亡细胞数,TTC染色观察梗死体积。结果3组均可检测到热休克蛋白70的表达,单纯缺血再灌注组热休克蛋白70的表达较假手术组增强(P<0.01),缺血再灌注+银杏叶提取物组较缺血再灌注组表达增强(P<0.05)。缺血再灌注+银杏叶提取物组梗死体积及凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过上调缺血缺氧后热休克蛋白70的表达减少神经细胞凋亡。     

罗格列酮钠对非酒精性脂肪肝大鼠COX-2表达的影响

目的 探讨罗格列酮钠(RSG)对高脂诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠COX-2表达的影响.方法 30只SD大鼠分为对照(CON)组、高脂(HFD)组、RSG组.高脂饮食8 w建立大鼠NAFLD模型,建模后,RSG组灌胃3 mg·kg-1·d-1RSG,CON组及高脂组灌等量蒸馏水,共12 w.测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、C反应蛋白(CRP).光镜观察形态学变化,免疫组化法观察COX-2的表达.结果 与CON组相比,HFD组的MDA、CRP升高(P＜0.01),SOD降低(P＜0.01),HFD组出现明显的脂肪变性(P＜0.01),COX-2表达明显增高(P＜0.01).与HFD组相比,RSG组的MDA、CRP降低(P＜0.01),SOD升高(P＜0.01),肝脏脂肪变性减轻(P＜0.01),COX-2表达下降(P＜0.01). 结论 RSG可以减轻高脂诱导的NAFLD大鼠COX-2的表达,从而减轻NAFLD的炎症.     

丙戊酸钠对癫痫大鼠脑损伤时GFAP表达的影响

目的探究应用丙戊酸钠(valproate,VPA)对大鼠癫痫脑损伤时海马胶质原纤维蛋白(glial fibril protein,GFAP)表达的影响。方法选择成年健康SD雄性大鼠80只,以随机数字表法分为A组、B组、C组以及D组各20只。A组不作任何干预措施;B组只进行单纯的VPA洗胃;C组为癫痫模型,不进行任何治疗;D组为癫痫模型,应用VPA治疗。对比各组大鼠海马CA1、CA2区GFAP阳性细胞数、平均截面积、平均灰度值、累积光密度以及平均光密度。结果在海马CA1、CA2区GFAP阳性细胞数C、D组显著高于A、B组,并且D组低于C组。海马区CA1、CA2区中平均截面积、累积光密度以及平均光密度C、D组高于A、B组,并且C组高于B组;而C、D组平均灰度值低于A、B组,并且C组低于B组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 VPA具有显著抑制癫痫大鼠模型中GFAP表达的效果,同时减少脑损伤程度,安全程度较高。     

七叶皂苷钠对脑出血大鼠脑水肿的影响及其机制探讨

目的 观察七叶皂苷钠对脑出血大鼠脑水肿的影响,并探讨其可能的机制.方法 将150只SD大鼠随机分为A、B、C组各40只和D组30只,A、B、C组参照Rosenberg等的方法进行苍白球定位注射制作脑出血模型;D组仅向颅内同部位针刺,留针相同时间,不注射药物.造模成功后,A、B、C组立即向腹腔分别注射溶解于1 mL生理盐水的七叶皂苷钠5、10 mg/(kg·d)及等量生理盐水,各组于脑出血后6h及1、3、5、7d断头取脑,收集脑组织标本.利用干湿重法测定脑组织含水量,免疫组化法检测血肿周围脑组织中的水通道蛋白4(AQP4).结果 A、B、C组出血侧脑组织含水量及血肿周围AQP4表达在6h内即开始明显升高,3d达高峰,随后逐渐下降,7d时仍高于D组(P＜0.05或0.01);A、B组各时点脑组织含水量均明显低于C组(P均＜0.01),B组均亦明显低于相应时间点的A组(P均＜0.05).各组大鼠不同时间点出血侧大脑含水量与血肿周围AQP4表达的灰度值呈正相关(r =0.862,P＜0.01).结论 七叶皂苷钠可能通过抑制血肿周围AQP4表达减轻脑水肿,并具有一定的剂量依赖性.     

阿司匹林对脑缺血-再灌注大鼠脑能量代谢的影响

目的观察阿司匹林（ASA）对脑缺血一再灌注大鼠脑组织能量代谢的影响。方法取雄性sD大鼠50只，随机分为假手术组（12只）、溶剂组（26只）、ASA组（12只），根据再灌注时间将每组再分为24、72h两个亚组。线栓法制作大脑中动脉缺血2h，再灌24、72h模型。ASA组大鼠于再灌注同时灌胃给予ASA，60mg／kg（60mgASA加0．05ml无水乙醇助溶，用中性PBS液定容至10m1），1ml/100g。溶剂组大鼠灌胃给予等体积的0．5％无水乙醇PBS溶液。高效毛细管电泳分析法测定三磷酸腺苷酶（ATP）含量，无机磷法测定Na＋-K＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性，比色法测定乳酸脱氢酶及乳酸含量。结果①ASA组大鼠再灌注24、72hATP含量为（27．7±3．5）、（29．7±2．5）μml/g（湿重）；Na＋-K＋-ATP酶为（8．6±0．9）、（7．8±0．6）μmol·mg-1·h-1；Ca2＋-ATP酶为（6．1±0．8）、（6．6±0．7）μmol·mg-1·h-1，与溶剂组大鼠的（10．3±1．0）、（4．6±0．8）μmol／g（湿重），（4．5±0．7）、（5．8±0．8）及（4．5±0．4）、（2．5±0．5）μmol·mg-1·h-1比较，差异有统计学意义（P〈0．01或0．05）；与假手术组比较，除Ca2＋ATP酶含量高于假手术组[（4．3±0．5）、（4．6±0．3）μmol·mg-1·h-1]外，其他指标差异无统计学意义。②ASA组再灌注24、72h乳酸含量为（0．68±0．25）、（0．62±0．15）mmol／g（蛋白）；乳酸脱氢酶活性为（9769±957）、（9677±532）U／g（蛋白）；与溶剂组大鼠的（0．42±0．12）、（0．33±0．16）mmol／g（蛋白），（4033±723）、（5902±689）U／g（蛋白）比较，差异有统计学意义（P〈0．01或0．05）；与假手术组大鼠的（0．58±0．19）、（0．61±0．23）mmol／g（蛋白），（9430±273）、（9382±375）U／g（蛋白）比较，差异无统计学意义。结论阿司匹林对脑缺血-再灌损伤24和72h大鼠脑组织均有明显的保护?     

罗格列酮对2型糖尿病并发非酒精性脂肪肝大鼠肝脏解偶联蛋白-2表达的影响

目的观察罗格列酮对2型糖尿病（T2DM）并发非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠肝脏解偶联蛋白-2（UCP-2）表达的影响,探讨其防治T2DM并发NAFLD的部分作用机制。方法高脂高糖饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立T2DM并发NAFLD大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、罗格列酮治疗组,每组各16只,并设立正常对照组。治疗组给予罗格列酮3 mg/（kg.d）灌胃治疗。于实验第16（治疗后8周）、20周（治疗后12周）末分批处死大鼠,检测肝功能、空腹血糖、血脂和血清胰岛素水平,光镜下观察大鼠肝脏组织学形态,分别以免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肝组织UCP-2蛋白和UCP-2mRNA的表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠血清转氨酶、空腹血糖、血清胰岛素及血脂水平均明显升高,胰岛素敏感指数明显下降（P均〈0.01）,肝脏出现不同程度脂肪变性,肝组织UCP-2蛋白和UCP-2 mRNA表达增高,以20周末最为明显。在16周末（治疗后8周）和20周末（治疗后12周）,治疗组大鼠血清转氨酶、血糖、血清胰岛素及血脂水平均有改善,胰岛素敏感指数明显升高,肝细胞脂肪变性明显减轻,肝组织UCP-2蛋白和UCP-2 mRNA表达明显下降,与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 T2DM并发NAFLD大鼠肝组织UCP-2表达增强,罗格列酮可以调控T2DM并发NAFLD大鼠肝脏UCP-2 mRNA和UCP-2蛋白的适度表达,这可能是其治疗T2DM并发NAFLD的分子机制之一。     

利血平对大鼠唾液蛋白分泌的影响

目的: 观察利血平对大鼠唾液蛋白分泌的影响.方法: 实验大鼠随机分为2组,实验组皮下注射利血平0.4 mg/(kg·d),正常组皮下注射等量生理盐水. 10 d后,抽取唾液检测酸刺激前后唾液淀粉酶活性(sAA)比值;HE染色检测腮腺形态学和透射电镜计数腮腺酶原颗粒;ELISA法检测血管活性肠肽(VIP)和环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果: 实验组较正常组摄食量明显减少,体质量下降;sAA活性比值显著低于正常组(0.39±0.18 vs 0.80±0.21,P<0.01);HE染色未见2组腮腺有明显病理改变,透射电镜发现实验组腮腺单位观察视野内酶原颗粒数量明显高于正常组(41.4±4.9 vs 34.6±5.2,P<0.01);实验组血清VIP含量明显低于正常组(22.5±13.1 μg/L vs 38.5±14.1 μg/L,P<0.05),2组腮腺VIP含量无明显差异;实验组血清cAMP明显高于正常组(125.8±15.5 nmol/L vs 105.3±16.7 nmol/L,P<0.05);2组腮腺cAMP水平无明显差异.结论: 利血平导致大鼠消化代谢机能下降,在酸刺激下大鼠的唾液蛋白分泌明显减少,可能是通过降低血清VIP水平调节唾液蛋白分泌.