本体构建原则及其在中医顶层本体构建中的应用

本文介绍了本体的概念及作用,提出了本体的构建原则,并对这一原则在中医顶层本体构建过程中的应用做了初步的探索.     

以肺痨病为例探讨中医证候本体的构建

本体是语义web的关键技术。中医证候本体的构建对于中医理论探讨、数据整理、知识共享是一件极具现实和学术意义的工作。本文探讨了中医哲学对中医证候本体的影响，阐明了中医证候本体与中医顶层本体的关系；并以protege-owl plugin为工具．对中医证候本体的构建思路和过程进行简单的介绍。     

BALB/c小鼠I-Adαβ链编码基因真核双顺反子载体的构建及表达

目的：为了获取BALB／c小鼠I-A^d α、β链编码基因，构建真核双顺反子表达载体并在NIH3T3细胞中表达，建立BALB／c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈细胞研究模型。方法：采用Trizol提取BALB／c小鼠脾细胞总RNA，RT-PCR获取I-A^d αβ链cDNA，连接pGEMT载体测序，正确后亚克隆至plRES真核双顺反子表达载体；用Lipofectamine2000转染NIH3T3细胞，G418筛选转染克隆株。RT-PCR鉴定外源基因在mRNA水平的表达；流式细胞术（FCM）鉴定外源基因在蛋白质水平的表达以及在细胞表面展示的水平。结果：建立了BALB／c小鼠I-A^d αβ链编码基因真核双顺反子表达载体plRES-I-A^d αβ；plRES-I-A^d αβ转染NIH3T3细胞，在G418筛选下可获得高达72％的转染细胞；转染细胞总RNA RT-PCR显示外源基因在mRNA水平得到表达；FCM显示外源基因编码的蛋白高水平表达并定位于细胞表面。结论：为进一步研究BALB／c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈的分子机制奠定了基础。     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Comparison of galE gene of Campylobacter jejuni strains associated Guillain-Barré syndrome

目的 测定3株格林.巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)相关宅肠弯曲菌的gale基因序列,并同GenBank中的空肠弯曲菌菌株相应序列进行比较,了解致GBS的序列特征并分析其遗传进化关系.方法 选取分离自GBS患者粪便并经动物模型证实为致GBS的3株AMAN型空肠弯曲菌菌株进行培养并提取基因组DNA测序.将基因测序结果通过与NCTC11168菌株进行对照比较寻找galE基因突变位点并对gaZE基因片段进行遗传距离计算.结果 3株致GBS空肠弯曲菌菌株的galE基因均由987个碱基构成.与NCTC11168的galE基因序列相比,此3株空肠弯曲菌菌株gale基因核苷酸序列有4个相同碱基突变并导致了4个对应的相同氨基酸突变.遗传距离计算,zhanxing株与qiaoyuntao株距离为1.5%,zhanxing株与lulei株距离为1.6%,qiaoyuntao株与lulei株距离为0.5%.结论 GBS相关空肠弯曲菌中galE基因核苷酸序列的确存在相同变异且发生变异概率较非GBS相关空肠弯曲菌明显增大,遗传距离反映了此3株致GBS的空肠弯曲菌具有一定的区域特征.     

Tpr-Met转化的Ba/F3稳定株的构建

目的:建立一种可用于高通量筛选c-Met抑制剂的细胞模型.方法:采用电转染将Tpr-Met表达载体导入Ba/F3细胞中并筛选出能够稳定表达Tpr-Met的细胞株.而后对这种稳定株的白细胞介素3(IL-3)非依赖性增殖、Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SUl1274对细胞增殖和信号通路的抑制作用进行全面评价.通过酶标仪检测细胞MTS吸光度值判断细胞的增殖水平,通过Western blot法检测Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞信号通路的抑制作用.结果:获得稳定表达Tpr-Met的Ba/F3细胞株,该细胞株呈现IL-3非依赖性生长；能够表达持续活化的Tpr-Met；下游信号通路中关键分子Erk的磷酸化水平显著提升；c-Met特异性抑制剂SU11274通过抑制Tpr-Met磷酸化抑制下游信号通路的活化并抑制稳定株细胞增殖.结论:成功构建了Tpr-Met转化的Ba/F3细胞株.     

HMGA1基因转染诱导NIH3T3细胞恶性转化实验研究

目的：通过建立稳定转染外源HMGA1基因的NIH3T3细胞，探讨HMGA1基因表达与肿瘤发生、发展的相关性。方法：脂质体转染法将真核表达载体pcDNA3．0-HMGA1稳定转染NH3T3细胞，G418筛选获得阳性细胞克隆；RT-PCR法及基因测序技术，确定外源HMGA1基因在阳性细胞克隆转录水平的表达；MTT法绘制细胞生长曲线以及流式细胞术测定细胞周期观察细胞增殖能力的变化；软琼脂集落形成实验判断转染细胞的非锚定依赖性生长能力；RT-PCR法检测转染细胞免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA表达。结果：筛选获得稳定转染HMGA1基因的NIH3T3细胞克隆，与对照细胞相比稳定转染HMGA1基因，细胞生长增殖速度加快，在软琼脂中形成细胞集落，并表达免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA。结论：HMGA1基因转染可诱导正常NIH3T3细胞恶性转化，并参与调控免疫抑制因子mRNA表达，揭示HMGA1是肿瘤发生发展、转移以及免疫逃逸的关键分子。     

一种新的成形微波体模

本文提出了一种新的成形微波体模，本体模具行以下几个优点：１）能成形且有弹性，２）透明；３）易于加工成各种形状；４）配制简便，使用期较长，本体模与实际人体肌肉组织在微波段ＩＳＭ频率上其介电特性的差别小于９％。     

麻黄附子细辛汤加味治疗毛细支气管炎探讨

本文针对小儿发病容易，传变迅速和不耐补泻的特点，结合其典型临床表现，认为毛细支气管炎属中医伤寒少阴病兼表证，按表实里虚或上盛下虚来辨证施治，采用温阳化饮宣肺之法，以麻黄附子细辛汤加味治疗，并附以典型临床病例。从病机、治法、方药、调护等几个方面总结了导师运用中医辨证治疗婴幼儿毛细支气管炎的独到见解。     

基于本体的医学知识库构建及应用

目的为了充分有效地管理和利用医学知识资源,本体论被引入到医学知识组织当中。本文描述了医学本体知识库的构建步骤,构建出包括中医本体和西医本体两大分支的医学本体框架。方法采用NKI（national knowledge infrastructure）本体描述语言,结合已有的医学知识,分4级举例给出冠心病类的详细设计过程,引入美国斯坦福大学的大型本体构建工具Protege,并使用Protege2000构建冠心病医学知识体系,同时进行了初步的应用。结果通过对比已有的医学知识组织形式,本文所建立的医学本体系统具有可行性、可扩展性和可重用性的特点。结论基于本体的医学知识库将可能有效解决医学知识工程领域的多个问题。     

人整合素αvβ3在CHO细胞表达的研究

目的 使人整合素αvβ3在CHO细胞表面有效表达，为从分子水平了解汉坦病毒(hantavirus，HV)的感染及致病机制。方法 构建含人整合素β3 ORF区基因的真核表达载体pcDNA3．1．β3；将其与含人整合素αv全长cDNA的质粒pcDNA3-αv分别及共转染至CHO细胞中进行表达；采用间接免疫荧光法、流式细胞仪、免疫沉淀及免疫印迹实验对外源基因的表达进行定性、定位及定量检测，并确证表达产物的免疫反应性。结果 人整合素αv、β3基因在共转染组细胞中有高效表达，目的蛋白主要定位于细胞膜上；β3基因在pcDNA3．1-β3单独转染组细胞中的表达明显弱于共转染组；而pcDNA3.1-β3单独转染组则未见有效的表达。结论 人整合素αvβ3在CHO细胞表面的有效表达需要2个亚基共同参与.     

Tim-3/galectin-9调控脂多糖诱导的人淋巴细胞中Th1/Th2细胞平衡

目的 探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)/半乳糖凝集素-9(galectin-9)在脂多糖(LPS)诱导淋巴细胞炎性过程中对辅助性T细胞(Th)Th1/Th2细胞失衡中的作用。方法 收集脓毒症患者的外周血。分离外周血单个核细胞(PBMC),RT-qPCR检测Tim-3、galectin-9、T-bet和GATA3的表达；ELISA检测血清sTim-3、galectin-9、IFN-γ和IL-4的水平；分离的外周血单个核细胞体外培养，LPS刺激建立体外炎性模型；ELISA法检测细胞培养上清中Th1和Th2细胞相关细胞因子的水平；Western blot检测JAK2/STAT3相关因子的表达；Pearson相关系数分析Tim-3、galectin-9、IFN-γ和IL-4的相关性。结果 脓毒症患者外周血中Tim-3和galectin-9的mRNA表达增多，sTim-3、galectin-9、IL-4和GATA-3升高，IFN-γ和T-bet水平下降，磷酸化JAK2和STAT3升高(P<0.05)。阻断Tim-3表达后，IFN-γ水平升高，而IL-4的水平明显下降，磷酸化...     

STAT3在溃疡性结肠炎患者肠黏膜的表达及活化增强

目的 检测溃疡性结肠炎（UC）患者结肠黏膜STAT3、pSTAT3蛋白及STAT3 mRNA的表达及与UC疾病活动度的关系。方法 47例UC患者根据内镜及临床活动度进行分级，收集正常对照结肠黏膜标本13例；用免疫组织化学法检测STAT3、pSTAT3在结肠黏膜的定位；用Western blot及RT-PCR法检测STAT3、pSTAT3蛋白及STAT3 mRNA在结肠黏膜的表达。结果 ⑴ STAT3为胞质着色；pSTAT3主要为胞核着色，胞质中也有表达，二者均主要表达于大量浸润的单个核细胞，且二者在UC患者黏膜的阳性细胞数及染色强度均有随病变的加重逐渐增加的趋势；⑵UC患者肠黏膜STAT3、pSTAT3蛋白的表达量高于对照者，且随着病变分级逐渐增加。⑶UC患者肠黏膜STAT3 mRNA的表达与蛋白表达一致。结论 UC患者结肠黏膜中STAT及pSTAT3的表达随病变程度逐渐增加，在一定程度上可以反映疾病的活动度。     

t(3;6)染色体平衡易位伴死胎与流产

患者女，结婚10年，怀孕4次，第1胎40天左右人工流产；第2胎为双胎，7个月时，不明原因早产两男婴，两男婴体重分别为1520g和1525g，表型均正常。第1个男婴存活4～5天后死亡，第2个出生时面部发紫，活了4～5小时死亡，死因均不明，未做任何检查；第3胎与第4胎均在怀孕3个月时阴道流血，B超检查妊娠只有30～40天大小，有胎囊，无胎芽，做人工流产。夫妇表型正常，身体健康，非近亲婚配，无有害物品接触史。母亲在怀孕期间有过两次自然流产；其兄结婚有一男孩，其嫂无流产史，家系成员不配合未做任何检查。