近交系大、小鼠遗传检测方法研究进展

近交系动物的显著特征是基因纯合性及遗传稳定性。但在长期保种、育种及繁殖生产过程中，可能发生遗传变异。定期进行遗传监测非常必要。本文对近交系大小鼠的遗传检测方法的研究进展做一综述。     

三个品系小鼠的遗传监测

目的检测新培育的IRM-1近交系小鼠的基因纯合性,并与IRM-2、615近交系小鼠进行比较,确定其遗传特性。方法按照国家标准GB/T14927.1-2001、GB/T14927.2-2001遗传检测操作规程,对IRM-1近交系小鼠进行Akpl等25个遗传生化标记基因纯合度、组织相容性基因纯合度的测定,用同系异体间进行移植试验;以及毛色基因测试。结果IRM-1近交系小鼠的25个遗传生化标记基因均为纯合体,其中有5个生化标记基因多态性位点与IRM-2近交系小鼠不同,有8个生化标记基因多态性位点与615近交系小鼠不同;皮肤移植100d后,未见排斥现象;毛色基因测试,F1的毛色全部为野生色,基因型为aaBBCCDD。结论IRM-1小鼠遗传纯合度已达国家标准,是基因位点高度纯合的近交系小鼠。     

海南岛4种常见蜚蠊遗传多态性的初步研究

目的探讨海南岛常见蜚蠊遗传多态性，寻找蜚蠊分类的分子标记。方法采用随机扩增DNA多态性（RAPD）技术对美洲大蠊、澳洲大蠊、黑胸大蠊和褐斑大蠊进行随机扩增，分析DNA图谱、计算遗传距离并绘出亲缘关系聚类图。结果筛选出4条随机引物，扩增出122个条带，其中多态性条带占71．31％。根据RAPD图谱计算出4种蜚蠊间的遗传距离，以澳洲大蠊和黑胸大蠊间遗传距离最短，褐斑大蠊和美洲大蠊间距离最长。根据4种蜚蠊遗传距离构建出的系统聚类图中，黑胸大蠊先与澳洲大蠊聚成一簇，再与褐斑大蠊、美洲大蠊相聚类。结论蜚蠊基因组DNA遗传多态性丰富，RAPD技术能够反映出不蚓蜚蠊间的亲缘关系，并可准确进行蜚蠊分类。     

基于微卫星标记的中国南方沿海地区白纹伊蚊种群遗传多样性研究

目的 应用微卫星标记分析中国南方沿海地区白纹伊蚊种群的遗传多样性，为媒介生物控制提供依据。方法 利用微卫星位点对浙江省杭州市、义乌市和宁波市、福建省龙岩市、广东省广州市、广西壮族自治区南宁市、海南省海口市7个采样点的白纹伊蚊种群进行了遗传多样性检测和聚类分析。结果 共检测微卫星位点7个，各个群体的等位基因数（N_A）为5.429~7.571，有效等位基因数（N_E）为2.897~3.632，等位基因丰度（R_S）为5.236~7.170，期望杂合度（H_E）为0.538~0.637。各个群体近交系数（F_IS）为0.008~0.332，表现为群体内杂合子不足，群体间分化系数（F_ST）为0.058，表明7个白纹伊蚊种群间的遗传变异为5.8%。邻接法聚类分析表明，浙江省杭州市和义乌市的白纹伊蚊种群构建成为1个分支，福建省和广东省的白纹伊蚊种群构成1个分支，广西壮族自治区和海南省的白纹伊蚊种群构成1个分支，且海南种群显示出较大的遗传变异。白纹伊蚊种群贝叶斯分支分析表明，可能的分支数为3个。结论 中国南方沿海7个不同地理区域的白纹伊蚊种群在7个微卫星位点呈现较丰富的遗传多样性和中低水平的遗传分化，种群间遗传差异随着地理距离的增加而增大。     

白纹伊蚊微卫星标记的筛选及种群遗传研究

目的 筛选出有效的白纹伊蚊微卫星标记（SSR），并利用这些SSR分析六个不同地区白纹伊蚊种群遗传特征。 方法 通过文献查找已公布于数据库的白纹伊蚊SSR位点，利用聚合酶链式反应（PCR）和生物信息学的方法选定白纹伊蚊SSR，ABI3730测序白纹伊蚊基因组中的这些SSR位点，通过STRUCTURE聚类分析和系统进化树分析六个不同地区种群遗传结构。 结果 查阅文献共找到49个已公布于数据库的白纹伊蚊SSR位点，选取最近发表的29个SSR做PCR鉴定，选取了其中16个多态性高且均匀分布在染色体上的SSR位点，利用这16个SSR位点对6个不同白纹伊蚊种群进行种群遗传分析。分析结果显示地理距离相近的种群遗传距离较近，并确定了最优类群数为2，可将这6个种群分为两个类群，南北方的白纹伊蚊种群分别聚为一个类群。 结论 通过PCR和生物信息学的方法筛选出的白纹伊蚊SSR位点，能够应用于白纹伊蚊种群遗传研究，并将本研究的6个不同白纹伊蚊种群成功地划分为南北两个类群。     

精神分裂症患者微卫星D6S289的多态性研究

目的 探讨微卫星D6S289等位基因多态性与江西汉族精神分裂症的关联性.方法 研究对象为江西汉族地区288例精神分裂症患者,以228名江西汉族健康人为正常对照.应用聚合酶链式反应和毛细管电泳技术检测基因多态性,观察D6S289多态性的分布.结果 D6S289-215bp等位基因在精神分裂症病例组和对照组的频率分别为0.057和0.118,差异有统计学意义(x2=4.107,P=0.043,RR=0.45),该基因可能为精神分裂症保护性基因.其他各等位基因频率分布在各组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人类6号染色体上D6S289位点区域可能存在江西汉族精神分裂症有关联的微效基因.     

21号染色体上STR位点的遗传多态性研究

目的 调查21号染色体上4个短串联重复序列位点:D21S11、D21S1432、D21S2054和D21S1446在西安汉族人群中的基因频率分布和法医学统计参数.方法 以西安地区汉族100例无关个体为研究对象,选用唐氏综合征关键区域内及其附近4个短串联重复序列位点.应用聚合酶链反应和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术时其进行遗传多态性调查分析.结果 100例无关个体4个位点(D21S11、D21S1432、D21S2054和D21S1446)分别检出12、8、6、8个等位基因;基因型分布均符合Hardy-Weinberg定律.结论 21号染色体上4个短串联重复序列位点均有较高的个体识别率,在个体识别和亲权鉴定中有应用价值,对唐氏综合征的基因诊断有临床指导意义.     

DDK品系小鼠遗传特异性的AFLP分析

目的利用25对AFLP引物组合对DDK品系小鼠与实验室常用的3个小鼠品系进行研究,分析DDK品系小鼠的遗传种质性,为解决其独特繁殖现象与遗传背景的关系做好理论准备。方法根据AFLP分析结果,统计每个引物组合在各个品系中的多态性条带数和特异性条带数,计算DDK小鼠与其他实验室常用小鼠(C57BL/6J、BALB/c、PWK)之间的遗传相似系数和遗传距离。结果 25对AFLP引物组合共检测到1 224个条带,多态性条带有279条,占总条带的22.79%。结论 DDK品系小鼠与BALB/c小鼠品系遗传关系最近,与C57BL/6J品系关系较近;DDK品系小鼠与PWK品系小鼠遗传关系最远;本研究为进一步探讨DDK小鼠的独特繁殖现象提供了理论依据;同时也阐明了AFLP技术在物种鉴定、遗传背景分析及预测亲本杂交效果等方面具有明显的优越性。     

应用微卫星DNA标志研究我国大劣按蚊群体的遗传差异

目的应用微卫星DNA分子标志阐明我国大劣按蚊（广义）群体的遗传差异水平。方法研究样本包括经分子鉴别的大劣按蚊（海南省实验室品系和海南省毛阳野生群体）和大劣按蚊D种（云南省江城和云南省勐腊野生群体）,扩增10个多态的微卫星DNA位点,用Arlequin软件分析和计算相关指标。结果对89个大劣按蚊样本进行微卫星位点的扩增,等位基因数范围为1～32个,平均值为3.60～25.20,并非所有微卫星位点在所有群体中均呈现多态性。群体的平均期望杂合度和观察杂合度的范围分别为0.49～0.72和0.36～0.58,两者在海南省群体中均为最低。成对群体间的FST值为负值或很小,提示群体间未出现遗传分化。分级AMOVA计算结果显示,大劣按蚊群体内的变异占总变异的103.29%,种内变异为负值（-3.97%）,种间变异仅占总变异的0.67%。结论大劣按蚊与大劣按蚊D种内和种间遗传差异均非常小,微卫星DNA的变异主要在个体间。     

北京市褐家鼠种群遗传多态性及与汉坦病毒分布关系的研究

目的了解北京地区褐家鼠不同地理种群遗传多态性与该地区汉坦病毒（HV）基因变异及其分布可能存在的关联。方法选取北京市不同地区捕获褐家鼠，采用巢式RT—PCR法检测HVM基因片段，获得的阳性标本产物进行直接测序，构建系统发育树。另一方面对不同HV来源的宿主个体和其对应种群内随机选取的其他个体，以及其他一些地区鼠类作为参照，用随机扩增多态DNA（RAPD）技术获得褐家鼠基因组DNA多态性图谱，利用RAPDDIST和PHYLIP软件分析褐家鼠种群多态性，并与对应的北京地区的HV差异和分布进行比较。结果选用50个随机引物进行扩增，有5个引物获得清晰、多态性高的RAPD谱带。不同区域种群RAPD标记不尽相同，北京市褐家鼠地理种群之间存在一定程度的遗传分化，大部分种群遗传距离较为接近，其中采集于某农产品集散地的XFD种群遗传距离相对较大，有特异性标记条带。11个HV代表序列均为汉城型汉坦病毒，基因差异为0．1％～8．0％，可分为2个主要的支系，多数毒株变异类型在不同地域中交叉分布，但BjFT01株变异较大，成一个独立的支系。通过Bootstrap分析和系统树图比较，种群分化较大的XFD种群与该区获得1株亲缘关系相对较远的HV相对应。结论北京市不同区域HV及其褐家鼠DNA多态性均存在一定差异，不同种群尤其是输入性种群对北京HV流行影响程度不同，初步显示一些特定种群与特定的基因性别有一定的关联。XFD种群外源基因交流渗入的可能性较大，进一步证明北京市HV随着鼠类种群迁移输入的可能性极大，但仍有待于选用一些特异性标记基因多态性进行继续研究。     

DNA修复基因XPD多态性与地方性砷中毒关系的研究

目的研究核苷酸切除修复基因XPD单核苷酸多态性与地方性砷中毒患病风险的关系。方法采用病例对照研究，包括正常对照99人，地方性砷中毒患者92人。以聚合酶链反应一限制性长度多态性方法分析XPD基因Lys751 Gin多态性，比较不同基因型和地方性砷中毒患病风险的方法。结果病例组中野生型XPD75Gln纯合子的频率明显低于对照组，和携带XPD751Lys／Lys基因型比较，携带至少一个XPD75Gln等位基因的个体即Lys／Cln和Gin／Gin基因型。地方性砷中毒发病风险显著增加，锨值分别为1．59和8．56。结论XPD基因Lys751Gln多态性和地方性砷中毒易感性有关，XPD751Gln等位基因可能是地方性砷中毒的风险等位基因。     

氯乙烯暴露工人代谢酶基因多态性与DNA损伤的关系研究

目的探讨氯乙烯(VCM)暴露工人代谢酶基因多态性与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系。方法应用彗星实验测定145名VCM暴露工人外周血淋巴细胞DNA损伤情况,并按DNA损伤情况将工人分为DNA损伤组和对照组,采用病例-对照设计,PCR-RFLP测GSTP1A/G、CYP2E1c1/c2、CYP2D6LG/C基因多态;PCR法测GSTT1、GSTM1缺失情况。同时,通过问卷调查的方式了解被调查者的年龄、性别、吸烟、饮酒和个人职业暴露史。结果GSTP1 AA和AG GG基因型在DNA损伤组和对照组间的分布频率分别为60.7%,39.3%和78.7%,21.3%,经检验,两组间的分布差异有统计学意义(P<0.05);GSTT1、GSTM1、CYP2E1和CYP2D6L各基因型的分布频率在DNA损伤组和对照组间的差异无统计学意义(P>0.05)。多元Logistic回归分析的结果表明,GSTP1多态在氯乙烯所致DNA损伤中的作用与单因素研究结果一致,携带GSTP1 AG GG基因型的个体较携带GSTP1 AA基因型个体DNA损伤的风险性升高(OR=2.48,95%CI:1.11~5.53,P<0.05);其他因素两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论代谢酶GSTP1基因型与VCM诱导的DNA损伤有关,携带GSTP1 AG或GG基因型个体可能为氯乙烯致DNA损伤的易感人群。     

DDB2基因单核苷酸多态性与焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤的关联

[目的]探讨DDB2基因单核苷酸多态性与焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤的关联。[方法]选取焦化厂在岗焦炉工325名作为接触组,选择同厂无职业多环芳烃暴露者150人作为对照组,使用反向高效液相色谱法测定尿1-羟基芘含量,采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测淋巴细胞DNA损伤情况,应用TaqMan探针荧光标记聚合酶链反应方法对DDB2基因进行分型。[结果]接触组尿1-羟基芘含量[（4.41±1.06）μmol/mol肌酐]高于对照组[（3.33±1.03）μmol/mol肌酐],差异有统计学意义（P〈0.05）;接触组外周血淋巴细胞彗星尾距（olive tail moment,OTM）[0.41（0.08～4.28）]也高于对照组[0.31（0.08～3.16）],差异有统计学意义（P〈0.05）。两组中DDB2基因SNPs的不同基因型携带者OTM差异均无统计学意义。分层结果表明,对照组年龄〈39岁个体中,启动子区rs2029298位点AA基因型携带者DNA损伤高于GG基因型携带者,差异有统计学意义（P〈0.05）;其他差异均无统计学意义。[结论]DDB2基因多态性对焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤程度无影响,在对照组低年龄个体中rs2029298位点AA基因型携带者的DNA损伤程度高于GG基因型携带者。     

Genotype-phenotype analysis for the polymorphic CA repeat in the insulin-like growth factor-I (IGF-I) gene

Polymorphic microsatellite dinucleotide (cytosine–adenine, CA) repeats of the insulin-like growth factor-I (IGF-I) gene may have implications in the development of certain types of cancer and osteoporosis. We studied correlations between IGF-I genotypes determined by direct sequencing and plasma IGF-I levels among 113 healthy individuals (60 men and 53 women), who were originally enrolled as controls for hospital-based case–control studies of breast and prostate cancer. On the contrary to an earlier observation, there were no differences in plasma IGF-I levels between those with and without the allele of 19 repeats. With adjustment for other confounders, there were no trends in plasma IGF-I levels with increasing or decreasing the number of CA repeats among all study subjects combined, all Whites or all Blacks, suggesting no overall functional significance of this polymorphism. Opposite trends observed in gender and racial subgroups, i.e., an inverse association between plasma IGF-I levels and the CA repeat length in white women and a positive association in black men, are likely to be chance findings.     

随机扩增多态性DNA技术用于青藏高原型鼠疫菌的比较

目的对青海、西藏和甘肃省（自治区）境内不同宿主体内分离的21株青藏高原型鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）的基因进行分析,旨在比较不同宿主鼠疫菌之间的关系。方法采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术。结果扩增产物在凝胶电泳上显示的条带,其中16007、28001、01080号菌株相同,且与其余18株菌株存在差别。结论该实验中不同宿主体内检出的21株青藏高原型鼠疫菌在遗传学上属于同源。     

Polymorphisms of DNA repair genes XRCC1 and LIG4 and idiopathic male infertility

Sperm DNA damage is one of the associated factors of idiopathic male infertility and abnormal spermatogenesis. This study was conducted to assess possible association between risk of male infertility with X-ray repair cross complementing group 1 (XRCC1) Arg399Gln (G to A) and DNA ligase 4 (LIG4) Thr9Ile (C to T) gene polymorphisms which are involved in different DNA repair pathways. In this case-control study 191 fertile and 191 infertile men (29-40 years old) were enrolled. The single-nucleotide polymorphism genotypes and alleles of XRCC1 Arg399Gln and LIG4 Thr9Ile were assessed using the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) technique. There was no significant association between XRCC1 Arg399Gln polymorphism and risk of male infertility. The frequency of LIG4 Thr9Ile genotypes and alleles were statistically different between fertile and infertile men (p<0.001). We found that the CT genotype increased infertility risk more than threefold (OR, 3.12; 95% CI, 1.803-5.407). The LIG4 TT genotype carriers had decreased progressive motile sperm (p<0.05) and increased non-progressive motile sperm (p<0.001) compared with the CC genotype. Moreover, sperm concentration in subjects carrying the CT genotype was lower than that observed in CC carriers (p<0.05). The results revealed that the GG/CT and GA/CT combinations of genotypes increase the risk of infertility 3.5 and fourfold, respectively (p=0.021 and 0.004, respectively). This study demonstrated that there was an association between LIG4 Thr9Ile polymorphism and male infertility and suggests CT genotype as a risk factor for male infertility.     

焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关联。[方法]选择某焦化厂234名焦炉作业工人和130名无多环芳烃(PAHs)及其他毒物暴露者,采集外周静脉血,分离淋巴细胞,使用单细胞凝胶电泳实验评价DNA损伤;应用多聚酶链反应-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测热休克蛋白70(HSP70)基因多态性;运用PHASE2.0.2遗传分析软件计算单倍型。[结果]焦炉工外周血淋巴细胞的Olive尾矩(OliveTailMoment,OTM)高于对照组(对数转换后分别为1.29±1.07、0.56±0.99),差异有极显著性(P<0.01)。焦炉工中,HSP70-1基因190位点C/C基因型携带者外周血淋巴细胞的OTM为2.19±0.65,高于G/C及G/G基因型携带者(分别为1.30±1.03、1.23±1.10),差异有极显著性(P<0.01);HSP70-2基因1267位点A/A、A/G及G/G基因型携带者OTM分别为1.23±1.02、1.27±1.06和1.42±1.18,三者间差异无显著性(P>0.05);HSP70-hom基因2437位点T/T、T/C及C/C基因型携带者OTM分别为1.32±1.09、1.25±1.01和0.83±0.96,三者间差异也无显著性(P>0.05)。焦炉工HSP70-hom基因2437位点、HSP70-1基因190位点和HSP70-2基因1267位点组成的单倍型对中,TCG/TCG单倍型对携带者DNA损伤程度较重(OTM为2.04±0.59),显著高于单倍型对中含一个TCG单倍型者(OTM为1.24±1.14)及不含TCG单倍型者(OTM为1.30±1.01),P<0.05。[结论]焦炉工外周血淋巴细胞HSP70-1基因190位点C/C基因型与TCG单倍型和DNA严重损伤有关联。