内皮细胞和平滑肌细胞联合种植研究

内皮细胞在人工器官表面的种植是当前组织工程学研究领域的热点课题这一，平滑肌细胞是内皮细胞的周细胞，对内皮细胞的形态结构，生理功能，再生和修复有重要影响。本文综述了进行内皮细胞和平滑肌细胞联合种植的定义，方法及联合种植后内皮细胞功率变化的研究概况，并对研究中有解决的问题作了进一步的分析和探讨。     

与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学和生长增殖

目的　探讨平滑肌细胞对内皮细胞形态和增殖的影响 ,为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。　方法　模拟血管壁的内层结构及内皮细胞平滑肌细胞间的相互影响途径 ,建立内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的模型 ,应用形态学、细胞计数对内皮细胞的结构和增殖进行研究。　结果　联合培养的新内皮细胞呈伸长性生长 ,沿细胞长轴排列的微丝增多 ,增殖受抑制。　结论　内皮细胞和平滑肌细胞联合培养的新模型是目前研究这两种细胞间相互影响的最佳方式。联合培养的内皮细胞的形态结构更接近于在体生理状态 ,这一变化可能更有利于其抗应力功能的调节     

与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血因子、粘附分子

目的 探讨平滑肌细胞对内皮细胞功能的影响。为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。模拟血管壁的内层结构及内皮细胞与平滑肌细胞间的相互影响途径,建立内皮细胞与平滑肌细胞接触生长的联合培养模型,用免疫细胞化学、放射免疫学技术和图像分析等方法研究内皮细胞ｖＷＦ、ＰＧＩ２、ＣＤ２９后的合成,分泌及表达。结果 联合培养的内皮细胞的Ⅷ因子相关抗原（ｖＷＦ）的合成减弱,前列腺环素的分泌增加,整合素β１亚族的表达     

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞F-肌动蛋白构筑的影响

目的　探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞抗应力和粘附能力的影响 ,为改进血管内皮细胞种植的组织工程学技术提供生物力学基础。　方法　应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术 ,以静态条件下单独培养的内皮细胞、联合培养的内皮细胞以及切应力作用下单独培养的内皮细胞为对照组 ,研究了切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的细胞骨架F 肌动蛋白构筑的变化。　结果　静态条件下单独培养的内皮细胞的F 肌动蛋白排列松散 ,不规则 ,微丝较细 ;联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白微丝明显增多增粗。切应力作用下 ,与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白发生重排 ,并形成大量沿切应力方向排列的应力纤维 ,且发生重排的时间明显早于单独培养的内皮细胞。　结论　在切应力作用和血管平滑肌细胞的影响下 ,内皮细胞F 肌动蛋白构筑的变化有利于增强内皮细胞的抗应力和粘附能力     

用于内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的流动腔系统

内皮细胞与平滑肌细胞的联合培养是体外研究这两种细胞生物学特性的重要手段。静态条件下联合培养的内皮细胞的形态及功能特性与在体条件下均有差异,这可能是没有血流切应力对内皮细胞直接作用的结果。为了了解切应力对与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的生物学作用,本文建立了用于多孔ＰＥＴ膜联合培养模型的力学系统,通过本系统可以产生０～４０ｄｙｎ／ｃｍ２的稳定层流切应力,并应用本系统观察了切应力对联合培养的内皮细胞的形态学影响,结果表明,在４０ｄｙｎ／ｃｍ２切应力作用下,与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞沿流体方向发生了重排。这一系统的建立为研究切应力作用下与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态和功能提供了手段。     

切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学改变

内皮细胞与平滑肌细胞是血管壁的主要组成细胞。血管平滑肌细胞与流体切应力是影响血管内皮细胞形态和功能的重要因素。形态学作为内皮细胞研究中最直观的指标,一直受到重视。单独培养的内皮细胞丧失了在体条件下的长梭形、沿流体方向平行排列的特征,呈现“铺路石”样外观。与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞呈长梭形,与在体条件下的内皮细胞形态较为接近;但排列无极性,这可能是因为内皮细胞缺少了与其腔面直接作用的流体应力的缘故。为了了解切应力对联合培养的内皮细胞的影响,本文建立了用于内皮细胞和平滑肌细胞联合培养的应力测试系…     

双细胞种植改善人工血管内皮细胞的保留率

背景:前期研究表明,在人工血管内壁种植内皮细胞,使其早期快速内皮化,可以改善移植血管的通畅性,但种植的单层内皮细胞往往黏附力差,在血流的冲击下容易脱落。目的:采用血管内皮细胞和平滑肌细胞双层种植方法,提高人工血管腔面内皮细胞的保存率。方法:采用标准酶分离技术和细胞培养技术分离培养兔内皮细胞。采用组织贴块法分离培养兔平滑肌细胞。并分别以lacZ和GFP基因转染内皮细胞及平滑肌细胞。双层细胞种植组在聚四氟乙烯人工血管管腔面先后种植平滑肌细胞和内皮细胞,以单纯种植血管内皮细胞为对照。在体外将受试的人工血管接入作者设计的灌流模型下灌注2h,计算比较灌注前后受试标本内皮细胞密度。体内实验,将人工血管植入兔子体内7d,分别测定内皮细胞保留率。结果与结论:灌注2h后,单纯内皮细胞种植组细胞保留率为0.39±0.04,而双层细胞种植组内皮细胞保留率为0.73±0.07,双层细胞种植组细胞保存率明显高于单纯内皮细胞种植组(P0.01)。人工血管植入兔体内7d,单纯内皮细胞种植组内皮细胞保留率为0.63±0.10,双层细胞种植组内皮细胞保留率为0.95±0.06,两组间差异有显著性意义(P0.05)。结果证实在内皮细胞和人工血管壁之间种植平滑肌细胞在体外和体内均可提高内皮细胞的保存率。     

转染组织纤溶酶原激活物及内皮型一氧化氮合酶基因的内皮细胞和平滑肌细胞共同种植于人工血管对内膜增生的影响

背景：前期研究表明,双层细胞种植能有效提高内皮细胞保留率,将组织纤溶酶原激活物基因转染到内皮细胞中能提高其细胞溶解纤维蛋白的能力。 目的：采用双细胞种植及修饰内皮的组织纤溶酶原激活物基因提高内皮细胞保留率和抗栓能力,通过内皮型一氧化氮合酶基因调控平滑肌细胞的增殖,观察对小口径人工血管通畅率的影响。 方法：以4种不同组合细胞(内皮细胞+平滑肌细胞SMC,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞,内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)种植在PTFE管腔面。将新西兰大白兔随机分成4组,4种人工血管经旁路分别移植在4组兔的腹主动脉上。 结果与结论：移植后60 d,种植内皮细胞+平滑肌细胞组和内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组内膜厚度无明显差异(P > 0.05)。与内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组相比,未转染内皮型一氧化氮合酶组(内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞）内膜明显增厚(P < 0.05);未转染组织纤溶酶原激活物组(内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)内膜较薄(P < 0.05)。提示组织纤溶酶原激活物基因转染可以促进血管内膜增生导致血管狭窄,但同时转入内皮型一氧化氮合酶基因可以抑制组织纤溶酶原激活物的促进平滑肌细胞增殖及内膜增生的作用。     

用于血管内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的力学测试系统的建立

内皮细胞的形态及功能受到血流产生的机械应力及平滑肌细胞的影响。而在体条件下的血管壁细胞的办迹究因其所处的生理环境的复杂性、实验条件的不易控制而很难得到满意的结果。因而人0］UIDi通过内皮细胞及平滑肌细胞的体gFjff养来研究在不同的实验条件下两种细胞的生物学特性。为了研究在平滑肌细胞存在的条件下切应力对内皮细胞的生物学特性的影响,我们建立了用于血管内皮细胞与平滑肌细胞联合培养模型的应力测试系统。这一系统主要由三个部分组成：（l）用于内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的平行平板流动胜。（）液体灌流系统。（）温…     

流体切应力对血管内皮细胞的生物学作用

生物医学技术的不断发展，为心血管人工移植物(如人工血管、人工瓣膜)的临床应用提供了广阔的发展空间。内皮细胞与平滑肌细胞作为血管壁的主要组成细胞在人工血管的构建研究中占有重要地位。体外培养是研究内皮细胞与平滑肌细胞细胞形态和功能的重要手段。但静态条件下的内皮细胞与平滑肌细胞的联合培养缺少在体条件下的力学环境，因而近年来国内外开始将两种研究方法结合起来，研究在力学环境下内皮细胞与平滑肌细胞的相互作用，从而为人工血管移植物的研究提供理论基础。     

切应力对与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞细胞外基质构筑及含量的影响

为了探讨切应力对血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞黏附能力的影响，为改进血管内皮细胞种植的组织工程技术提供实验基础，我们应用免疫荧光细胞化学、激光共聚焦扫描显微镜和图像分析等技术，研究了切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的细胞外基质中纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和IV型胶原的构筑及含量的变化，同时以静态条件下联合培养的内皮细胞为对照组。结果表明，静态条件下，纤维粘连蛋白和层粘连蛋白在细胞内均以颗粒的形式存在于核周区，以纤丝的形式存在于细胞外，且纤丝相互交职成网状。IV型胶原主要以颗粒的形式存在于核周围，纤丝极少。切应力作用下纤维粘连蛋白形成纤丝束，并有沿切应力方向排列的趋势，层粘连蛋白、IV型胶原也形成纤维束，但排列无方向性。细胞外基质各组分的含量均有不同程度的变化。本文结果提示，切应力作用下，与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的黏附能力可能增强。     

切应力对联合培养的血管内皮细胞F-肌动蛋白排列的影响

与平滑肌细胞联合培养的血管内皮细胞在静态时形态就开始发生变化,即由单独培养条件下在的多边形到联合培养条件下的长梭形。切应力作用下,联合培养的内皮细胞的形态在较短时间内发生更进一步的变化。F－actintlEylli持细胞形态及使内皮细胞与细胞外基质的粘附上起着重要的作用。为了探讨切应力对联合培养的血管内皮细胞卜肌动蛋白的排列的影响,本文应用平滑肌细胞与内皮细胞联合培养模型,将牛主动脉平滑肌细胞和内皮细胞进行联合培养,待内皮细胞形成单层后,用手行平板流动胜,将内皮细胞置于40dyn／cm’稳定层流切应力之下12、24／…     

切应力条件下联合培养的血管内皮细胞细胞外基质的含量及组成形式的变化

内皮细胞细胞外基质（ECM,extracellularmatrix）是指位于内皮下层,其主要成分有纤维连接蛋白（Fn,Fibronetin）,层粘连蛋白（Ln,laminin）,IV型胶原（colIViv,collagentypeIV）和玻璃体粘连蛋白（Vn,Vitronectin）。它们不仅对于内皮细胞的接触、迁移、增生、分化以及基因表达的调控方面起重要的作用,而且在介导内皮细胞粘附和传递力学信号等方面具有显著的作用。为了探讨切应力条件下血管平滑肌细胞对内皮细胞的细胞gbe质有何直接影响,本文应用平滑肌细胞与内皮细胞联合培养模型,将牛主动脉平滑肌细胞和内皮细胞进行联合…     

切应力对联合培养的血管内皮细胞分泌PDGF-B的影响

临床上常用自体静脉、自体动脉、聚四氟乙烯和涤纶等移植物用于治疗心血管疾病。而这些移植物都不同程度地引起血管的再缩窄。研究显示移植术后再缩窄的形成是由于早期血栓的形成和后期内膜增生引起的。平滑肌细胞均增生和向内膜迁移在移植物引起的内膜增生的形成中起着关键作用。血小板源性生长因｝B（PpoFffi）是平滑肌的促分裂剂和血管收缩物质。由于生理条件下内皮细胞分泌PDGF－B的重问时受血流应力和平滑肌细胞的影响。因此,本文模拟在体条件,应用平滑肌细胞与内皮细胞联合培养模型,将牛主动脉平滑肌细胞和内皮细胞进行联合培…     

内皮细胞种植的组织工程

组织工程（ｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）又称细胞工程（ｃｅｌｕｌａｒｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ），其实质是应用活的功能细胞改进人工器官的功能。本文介绍了在心血管移植物表面种植内皮细胞的研究概况，从内皮细胞的获取，移植物表面的预处理，内皮细胞的生物力学及内皮细胞的基因修饰等几个方面阐述了这一研究进展，并提出，进一步探讨在体外给培养的单层内皮细胞一个应力环境和／或与平滑肌联合培养可能有利于形成耐血流冲击的单层内皮细胞     

体外构建组织工程化小口径血管模型

目的体外构建组织工程化人工血管模型。方法将诱导细胞制成细胞ECMgel悬液培养,镜下观察细胞形态;将诱导的平滑肌细胞和内皮细胞悬液分层种植于支架内表面,以荧光显微镜、扫描电镜和HE染色光镜观察。结果在ECMgel凝胶中细胞生长良好;旋转培养的血管模型,质地均匀,内腔面光滑;HE染色可见血管壁三层结构:内皮细胞层、平滑肌细胞层、PGA 交联胶原层;扫描电镜可见内皮细胞融合成片;荧光显微镜观察可见均匀分布的内皮细胞。结论①ECMgel是携带细胞良好的基质;②旋转培养条件可以促进细胞的贴附和分化;③利用体外诱导的种子细胞分层种植可以构建成与天然血管结构相似的血管模型。     

大鼠提睾肌缺血再灌注损伤时血管平滑肌细胞和内皮细胞的增殖与凋亡

目的研究大鼠提睾肌缺血再灌注后血管平滑肌细胞和内皮细胞的增殖和凋亡。方法以免疫组织化学SP法和末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)对大鼠提睾肌缺血再灌注后的血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax、P53和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达进行观察研究。结果缺血再灌注后 ,血管平滑肌细胞和内皮细胞均有Bcl-2、Bax、P53和PCNA的表达 ,在平滑肌细胞 ,Bcl-2阳性细胞数量明显高于Bax和P53。PCNA阳性细胞明显增多。在内皮细胞 ,Bax和P53的表达最强 ,TUNEL阳性细胞率最高。结论大鼠提睾肌缺血再灌注可造成平滑细胞的增殖和内皮细胞的凋亡 ,其结果可能与微循环障碍有关。     

组织工程血管种子细胞的研究进展

组织工程血管种子细胞的来源、制取、培养分化、验证及种植已成为组织工程血管研究的关键步骤。目前常用的种子细胞是血管内皮细胞，干细胞如内皮前体细胞、间充质干细胞、脂肪干细胞等，尤其是间充质干细胞及脂肪干细胞具有易于分离培养、增殖能力强和可定向分化为内皮细胞及平滑肌细胞的特点而成为热点研究的种子细胞，干细胞的研究进展将会促进组织工程血管的临床应用。     

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞环氧合酶血栓素A_2合成酶表达的影响

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞环氧合酶血栓素Ａ２合成酶表达的影响同济医科大学病理生理教研室（武汉４３００３０）于江洲王迪浔本研究旨在初步探讨内皮细胞对平滑肌细胞的旁分泌调节作用。我们应用内皮细胞常氧及缺氧条件培养液分别在常氧下培养平滑肌细胞，经分子杂...     

切应力条件下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞整合素β1和F-actin的变化

目的 探讨与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞力学信号转导的机制，研究切应力对联合培养的内皮细胞表面整合素和F-actin的影响。方法 应用免疫荧光双重标记、激光共聚焦扫描显微镜和计算机图象分析等技术，观察了在2Pa层流切应力的作用下，与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞表面整合素β1的含量及细胞骨架F-actin的变化，时相点分别取lh、6h、12h和24h。同时，以静态条件下联合培养的内皮细胞为对照组。结果 静态条件下联合培养的内皮细胞表面整合素β1含量少，F-actin含量亦少；在2Pa层流切应力的作用下，随着时间延长，整合素β1表达逐渐增多，并且有沿F-actin分布的趋势，在12h达到峰值，后又下降；F-actin含量持续增加直至24h。结论 结果提示整合素β1作为重要的粘附分子，与细胞骨架F-actin的相互协作，在联合培养的内皮细胞的力学信号转导中起重要作用。