紫外线致Hep—G2细胞凋亡的分子机制初探

紫外线(UV)是人类最常接触的具基因毒作用的因子。为探索紫外线辐射致细胞凋亡和组织损伤的分子机制，本研究采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经紫外线辐射处理的Hep-G2细胞P53、Caspase3、bcl—2和P21等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果表明经紫外线辐射处理的Hep-G2细胞的P53、Caspase3和bcl—2基因表达增加，而P21未见明显改变，提示P53、Caspase基因在紫外线辐射诱导的细胞凋亡中起重要作用，bcl—2增高可能有抑制细胞的过度凋亡。保持内在平衡的作用。P21保持不变或下降可能反映了细胞对DNA损伤应答的新途径。     

H_2O_2致Hep-G2细胞凋亡及其分子机制初探

目的本研究旨在探索H2O2 诱导Hep-G2发生凋亡及其致凋亡发生的分子机制。方法采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经H2O2 处理的Hep-G2细胞Fas、bcl-2、P53、P21、Caspase3等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果检测结果表明H2O2 处理的Hep-G2细胞的Fas和Caspase3基因表达增加, bcl-2基因表达减少,而P53、P21基因的表达未见明显改变,提示Fas、Caspase3和bcl-2基因在H2O2 诱导的细胞凋亡中起重要作用;bcl-2通过抑制诱导凋亡所致的细胞永生化,可能在肿瘤的发生、发展中起重要作用。P53、P21、保持不变,可能反映了H2O2 诱导的细胞凋亡不依赖P53途径。     

NADH对X射线照射正常肝细胞L02后PARP和Caspase 3活性的影响

目的：为了研究NADH对X射线诱导的细胞凋亡和PARP、Caspase 3活性的影响。方法设假照射组、对照组及处理组。处理组正常肝细胞在6MV Varian 5．0Gy照射后立即加入含NADH（400μg／mL） RPMI 1640完全培养基,假照射组和对照组只加入培养液,培养24 h,用Annexin V／PI法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测bcl－2和bax蛋白阳性表达率;免疫印迹检测PARP和Caspase3活性。结果处理组与对照组相比细胞凋亡率明显下降, bax蛋白阳性表达百分率明显下调,而bcl－2表达则明显上调（P＜0．05）。对照组PARP和Caspase 3蛋白均出现剪切片断,处理组未发现剪切片断形成。结论 NADH具有抗辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤作用,其作用机制可能通过bcl－2和bax调控线粒体途径有关。     

饥饿诱导DRAM介导的自噬与HepG2和Hep3B细胞凋亡的关系

目的探讨饥饿诱导损伤调节自噬调控基因(DRAM)介导的自噬在HepG2细胞和Hep3B细胞凋亡中的作用。方法 HepG2细胞和Hep3B细胞经饥饿处理后,观察DRAM的表达和自噬的发生;利用DRAM小干扰RNA(siRNA)阻断DRAM,观察饥饿诱导的自噬水平;采用Calcein AM/PI染色,观察DRAM siRNA对饥饿引起的细胞凋亡的影响。结果经饥饿处理后12、24、36h,HepG2细胞和Hep3B细胞内DRAMmRNA均显著高于处理前(P﹤0.001),细胞凋亡明显增加(P﹤0.01),但两种细胞系间细胞凋亡计数的差异无统计学意义。DRAM siRNA阻断DRAM的功能后,HepG2和Hep3B细胞自噬减少,但对饥饿引起的细胞凋亡没有明显影响。结论 DRAM参与了饥饿诱导的自噬,可能不是饥饿引起肝癌细胞凋亡的机制。     

桔梗皂苷D对肝癌干细胞活力和细胞凋亡的干预作用及其机制研究

目的探讨桔梗皂苷D对肝癌干细胞活力和细胞凋亡的干预作用及其机制。方法 MTT法和Annexin V染色流式细胞术检测桔梗皂苷D和5-氟尿嘧啶对Hep G2肝癌干细胞细胞活力和细胞凋亡的影响;采用Western blot检测Hep G2肿瘤干细胞HAX1表达;运用JC-1染色流式细胞术、Annexin V染色流式细胞术及Western blot方法研究桔梗皂苷D联合5-氟尿嘧啶对肝癌干细胞凋亡通路的影响。结果 5μmol/L 5-氟尿嘧啶处理下Hep G2肿瘤干细胞活力抑制率为(29.1±2.4)%,显著低于常规Hep G2细胞活力抑制率(72.7±5.2)%(P0.05)。5-氟尿嘧啶联合桔梗皂苷D对Hep G2肿瘤干细胞的细胞活力抑制率为(66.7±3.4)%,凋亡诱导率为(33.9±2.1)%,显著高于5-氟尿嘧啶单独处理的细胞活力抑制率[(28.7±1.8)%,P0.05]和凋亡诱导率[(8.9±0.6)%,P0.05]。桔梗皂苷D处理后Hep G2肿瘤干细胞HAX1相对表达水平比对照组显著下降[(0.24±0.02)比(0.78±0.05),P0.05];5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D+HAX1质粒组Hep G2肿瘤干细胞凋亡率显著低于5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D组[(10.1±0.7)%比(34.8±2.2)%,P0.05];5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D组Hep G2肿瘤干细胞相对线粒体膜电位显著低于5-氟尿嘧啶组[(0.21±0.02)比(0.84±0.04),P0.05]。结论桔梗皂苷D可能通过下调HAX1表达抑制肝癌干细胞对5-氟尿嘧啶的抵抗性。     

东亚钳蝎蝎毒多肽组分Ⅲ对肝癌细胞凋亡的影响

目的：探讨东亚钳蝎蝎毒多肽组分Ⅲ对肝癌细胞凋亡的影响及其诱导凋亡的初步机制。 方法：将人肝癌细胞株Hep G2浸润在不同浓度的蝎毒多肽组分Ⅲ溶液中,应用DNA凋亡梯状带分析法和DNA末端转移酶介导的末端标记法（TUNEL法）测定凋亡的发生及凋亡率;用Western blotting方法观察Bcl-2蛋白和Caspase-3的表达量。 结果：蝎毒多肽组分Ⅲ引起的肝癌细胞株Hep G2凋亡呈剂量依赖性变化。DNA凋亡呈现明显的梯状带电泳行为。经5、10、50、100及200 mg·L^-1蝎毒多肽组分Ⅲ处理12 h 后,肝癌细胞凋亡率分别为（6.1±3.0）%、（15.3±4.9）%、（48.5±5.2）%、（66.7±6.5）%和（91.2±6.9）%。凋亡伴随着bcl-2基因的表达下调,在凋亡过程中Caspase -3被激活。 结论：东亚钳蝎蝎毒多肽组分Ⅲ可以促进人肝癌细胞株Hep G2的凋亡,并且这种凋亡可能与通过下调bcl-2基因和激活Caspase-3途径有关。     

柠檬酸钠与三氧化二砷联合应用对胃癌SGC一7901细胞的作用

目的探讨柠檬酸钠（sodiumcitrate,CT）与三氧化二砷（As：O,,AS）联合应用对胃癌SGC-7901细胞凋亡及作用机制。方法用sodiumcitrate（终浓度为5mmol／L,CT5）和As20,（终浓度依次为5t~mol／L,AS5）处理体外传代培养的胃癌SGC-7901细胞株。应用DAPI细胞核染色和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT—PCR法观察抗凋亡相关基因bcl一2表达的变化。结果sodiumcitrate与As：03联合应用相对于单用sodiumcitrate或As203可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率（P〈0．05）;与空白组相比,用药后G0／G1期细胞比例下降,G2／M期细胞比例上升,细胞周期阻滞于G2／M期,抗凋亡基因bcl．2表达明显下降。结论sodiumcitrate与As：O,联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

Caspase依赖的氧化应激对脓毒症肾小管上皮细胞损伤的作用及机制

目的：观察不同活性氧（reactive oxygen species,ROS）及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体?Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法：用终浓度为10 μg/mL的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理人肾小管上皮HK?2 细胞 12 h建立脓毒症细胞模型,将细胞模型随机分为H2O2组（H2O2,300 μmol/L）、Caspase 抑制剂组（Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）、Caspase抑制剂+H2O2组（H2O2,300 μmol/L+Ac?DEVD?CHO,15 μmol/L）和阴性对照组（不处理）;另以正常培养的HK?2细胞为空白对照组。Western blot检测Cleaved?Caspase 3和Cleaved?多聚ADP核糖多聚酶（poly ADP?ribose polymerase,PARP）蛋白表达,MTT 检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞 ROS水平、细胞凋亡和细胞周期。结果：阴性对照组细胞ROS水平、凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较空白对照组升高（P均 < 0.05）,增殖率较空白对照组降低（P < 0.05）。H2O2组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较阴性对照组升高（P均 < 0.05）,而增殖率较阴性对照组降低（P < 0.05）。Caspase抑制剂+H2O2组细胞ROS 水平、凋亡率、Cleaved?Caspase 3和 Cleaved?PARP水平以及G1期细胞比例均较 H2O2组降低（P均 < 0.05）,但均高于阴性对照组（P均 < 0.05））;增殖率较H2O2组升高（P <0.05）,但仍低于阴性对照组（P < 0.05）。结论：脓毒症细胞模型中存在异常升高的氧化应激反应。ROS能通过线粒体?Caspase凋亡途径抑制脓毒症肾小管上皮细胞增殖,促进细胞凋亡和引起细胞周期G1期阻滞。抑制Caspase对ROS引起的脓毒症肾小管上皮细胞损伤有一定保护作用。     

通过沉默P2X4受体减少帕金森病细胞凋亡

【摘要】目的：研究P2X4受体（P2X4R）在帕金森病(PD)细胞模型中的作用。方法：用6-羟基多巴胺（6-OHDA）处理人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）,建立帕金森病细胞模型,检测P2X4R表达。沉默P2X4R,CCK8检测细胞活性,蛋白质免疫印迹法检测凋亡因子和pannexin 1表达。用PCR检测Pannexin 1过表达时TLR-2蛋白表达,检测TLR-2过表达时细胞活性、细胞凋亡和凋亡因子的活性。结果： 6-OHDA处理组P2X4R蛋白和mRNA表达均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。P2X4R沉默后细胞凋亡减少、细胞存活率提高,Caspase 3、Cleaved caspase 3及 Pannexin 1蛋白表达低于PD组,差异有统计学意义（P<0.05）。P2X4R沉默组和受体抑制组TLR2蛋白表达低于PD组,Pannexin 1过表达后TLR2蛋白表达降低（P<0.05）,TLR2过表达时Caspase 3和Cleaved caspase 3蛋白表达降低、细胞活性增高,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：本实验利用帕金森病细胞模型,通过沉默P2X4R改变Pannexin 1和TLR2表达,发现Caspase 3和Cleaved caspase 3蛋白表达降低和细胞活性增高,说明P2X4R很可能通过调控Pannexin 1及TLR2减少细胞凋亡。     

DNA损伤后细胞凋亡与周期停滞中△40P53的作用

目的 探讨HCT116 p53-/-细胞△40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确△40P53与野生型P53的不同作用.方法 荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测△40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析△40P53的生物学功能.结果HCT116 p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116 p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同;免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞△40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达;LDH法检测50 μg/ml的MMS刺激后52.2％的HCT116 p53+/+细胞凋亡,而只有32.5％的HCT116 p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P＜0.05);流式细胞仪检测MMS处理后88％的HCT116 p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66％的HCT116 p53+/+细胞进入G2/S期细胞.结论 经MMS刺激的HCT116 p53-/-细胞的△40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.     

Expression of P53 during lens epithelial cell apoptosis induced by ultraviolet

Cataract is a disease induced by multi- factorsand its pathologic mechanism isstill unknown.Ithasbeen accepted that ultraviolet irradiation ( UVR) isone of the most important pathogenesis.Li etal hasreported that UVR could induce the apoptosis of lensepithelial cells( LECs) and resulted in lens opacities.In order to study the pathologic mechanism of UVR-induced cataract at molecular and cellular levels,weinvestigated the apoptosisof LECs and the expressionof P5 3.1　 MATERIALSAND M…     

NADH抗紫外线诱导的肝细胞株L02凋亡

目的 研究还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）抗紫外线照射所致的细胞损伤的分子机制。方法 采用UVB紫外线照射正常肝细胞株L02（照射剂量为200J／m^2），实验组加／对照组不加NADH（400μg/ml）培养24h。AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率，DNA凝胶电泳观察DNA断裂片断，流式细胞仪检测p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 NADH可明显抑制紫外线诱导的肝细胞凋亡，并且能够上调Bcl-2蛋白表达，下调p53、Bax蛋白表达。经紫外线照射后的肝细胞存在自身修复。结论 NADH能够抗紫外线诱导的细胞凋凋亡，其机制可能与上调Bcl-2，下调p53、Bax表达有关。     

Multiple defects of cell cycle checkpoints in U937-ASPI3K, an U937 cell mutant stably expressing anti-sense ATM gene cDNA

Ataxia--telangiectasia(AT)isanautosomalre-cessivemultisystemdisordercausedbytheheterozy-gousorhomozygousmutationofATMgene(ATrnutant).Atthecellu1arlevel,itischaracterizedbyhypersensitivitytoradiationorradiation--mimiccytcrtoxicagentsandinefficientcelIcycIecheckpointacti-vation[]'2J.ATMgeneencodesa350kdnuc1earphosphoproteinthatcontainsatitsCOOHterminusaphosphatidylinositol3kinase(Pl3K)catalyticdo-main.ATMproteinfunctionsincontrollingcellcyclecheckpointsinrespondingtoDNAdamageandpro-tect…     

PC12细胞缺氧培养后细胞凋亡及其机制的研究

目的　探讨PC12细胞缺氧后细胞凋亡及其发生机制。方法　采用末端标记法 ,结合流式细胞术观察PC12细胞缺氧培养不同时间点细胞凋亡现象 ,以及DNA损伤相关基因表达的改变。结果　在缺氧 0 .5h开始出现凋亡细胞 ,p5 3、p2 1wafl/cipl蛋白表达也开始增高。至缺氧 1h凋亡细胞达高峰 ,p5 3、p2 1蛋白表达亦最高 (P <0 .0 1) ,缺氧 6～ 12h ,则以坏死为主 ,以上基因的表达均减弱。结论　缺氧后PC12细胞凋亡部分是由于DNA损伤严重、损伤不能及时得到修复所致。     

氧化型辅酶Ⅰ对受辐射小鼠免疫功能的影响

目的探讨氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)对受辐射小鼠免疫功能的影响。方法 60只小鼠随机分为对照组、照射组和NAD+组,每组20只。收集处理24 h后各组小鼠股骨骨髓细胞,进行骨髓有核细胞计数,检测细胞凋亡率、p53和bcl-2蛋白阳性表达以及Caspase-3活性;收集处理后10 d各组小鼠脾脏单核细胞,检测脾淋巴细胞凋亡率、p53和bcl-2蛋白阳性表达以及Caspase-3活性。结果照射组和NAD+组小鼠骨髓有核细胞数显著少于对照组(P<0.05),而NAD+组小鼠骨髓有核细胞数显著高于照射组(P<0.05)。照射组和NAD+组小鼠骨髓有核细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),而NAD+组小鼠骨髓有核细胞凋亡率显著低于照射组(P<0.05)。照射组和NAD+组小鼠骨髓有核细胞p53蛋白阳性表达率显著高于对照组(P<0.05),而NAD+组小鼠骨髓有核细胞p53蛋白阳性表达率显著低于照射组(P<0.05)。照射组和NAD+组小鼠骨髓有核细胞bcl-2蛋白阳性表达率显著低于对照组(P<0.05),但NAD+组骨髓有核细胞的bcl-2蛋白阳性表达率显著高于照射组(P<0.05)。照射组和NAD+组骨髓有核细胞的Caspase-3活性显著高于对照组(P<0.05),但NAD+组骨髓有核细胞的Caspase-3活性显著低于照射组(P<0.05)。照射组和NAD+组脾淋巴细胞凋亡率和p53蛋白阳性表达率显著高于对照组(P<0.05),NAD+组小鼠脾淋巴细胞凋亡率和p53蛋白阳性表达率显著低于照射组(P<0.05)。照射组和NAD+组小鼠脾淋巴细胞的bcl-2蛋白阳性表达率显著低于对照组(P<0.05),但NAD+组脾淋巴细胞的bcl-2蛋白阳性表达率显著高于照射组(P<0.05)。照射组和NAD+组小鼠脾淋巴细胞Caspase-3活性显著高于对照组(P<0.05),但NAD+组小鼠脾淋巴细胞Caspase-3活性显著低于照射组(P<0.05)。结论 NAD+可通过抑制受辐射损伤小鼠免疫细胞凋亡而发挥免疫防护作用;NAD+发挥抗免疫细胞凋亡作用的分子机制可能是通过下调受辐射损伤细胞p53表达水平、上调bcl-2表达以及抑制Caspase-3活性。     

p21在大肠肿瘤细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞内基本p21水平和被应急反应诱导的p21,在大肠肿瘤细胞DLD1对化学治疗、放射治疗和基因治疗所诱发的细胞凋亡中的作用和机制。方法 建立受IPTG控制表达p21大肠肿瘤细胞系DLD1－p21,用阿霉素、X射线和暂时性转染p53基因的方法处理表达和不表达p21的两种DLD1细胞,观察其细胞形态、DNA片段化和测定细胞的生存率;并用放射性同位素标记进入S期细胞来显示细胞周期和凋亡间的关系。结果 （1）p21不仅能以p53依赖性方式产生,而且还能以p53非依赖性方式产生。（2）细胞内基本的p21在抗细胞凋亡中发挥着主要作用,而相反,应急产生的p21几乎不在抗细胞凋亡中发挥作用。凋亡细胞数分别为9％对55％、12％对65％和7％对59％。结论 在抗细胞凋亡作用中,基本的p21比应急产生的p21起着更为重要作用。     

miR-34a在辐射损伤时对细胞周期的调控作用

目的探讨60Coγ射线诱发大鼠肝脏BRL细胞辐射损伤时p53激活诱导的miR-34a改变对细胞周期的调控作用。方法以大鼠BRL肝细胞为研究对象,予4 Gy60Coγ射线照射后,分别培养4、12、24、48 h。采用流式细胞技术检测各组BRL细胞周期的变化,实时定量PCR检测各组细胞中miR-34a mRNA和c-myc mRNA表达水平的变化,Western blot方法检测各组细胞中p53蛋白和Myc蛋白的表达。结果 60Coγ射线4 Gy照射后4 h即出现G2期阻滞（P〈0.05）,至照射后24 h,G2期阻滞恢复;照射后12 h起,S期细胞减少（P〈0.05）,出现G1阻滞,48 h仍未恢复。照射后4 h p53蛋白和miR-34a mRNA表达增加（P〈0.05）,12 h均有下降（P〈0.05）,24 h和48 h已基本回至正常水平,而c-myc在照射后4 h开始呈持续降低趋势,48 h有所恢复。结论细胞在电离辐射引起DNA损伤后,早期即激活了p53蛋白,p53蛋白调节miR-34a表达,可能再经由miR-34a的靶基因c-myc介导,使细胞阻滞于G1和（或）G2期进行DNA修复。     

幽门螺杆菌诱导胃癌细胞凋亡与p53状态和bax、caspase表达的关系

目的 探讨幽门螺杆菌(HP)体外诱导胃癌细胞凋亡与p53状态和bax、caspase表达的关系.方法 流式细胞术检测HP国际标准菌株NCTC 11637诱导SGC-7901和AGS细胞凋亡,检测NCTC 11637对SGC-7901和AGS的bax、caspasemRNA和蛋白表达的影响.结果 HP能够在体外直接诱导SGC-7901和AGS细胞凋亡,SGC-7901细胞发生凋亡的高峰时间出现在12～24h,AGS细胞的凋亡率则随着HP感染时间的延长而增高.HP能够呈时间依赖性地上调SGC-7901和AGS细胞的Bax mRNA和蛋白表达,并促进caspase-9和caspase-3的激活.结论 幽门螺杆菌可以通过线粒体途径直接诱导胃癌细胞凋亡,而且野生型p53具有放大线粒体凋亡途径的作用.