H_2O_2致Hep-G2细胞凋亡及其分子机制初探

目的本研究旨在探索H2O2 诱导Hep-G2发生凋亡及其致凋亡发生的分子机制。方法采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经H2O2 处理的Hep-G2细胞Fas、bcl-2、P53、P21、Caspase3等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果检测结果表明H2O2 处理的Hep-G2细胞的Fas和Caspase3基因表达增加, bcl-2基因表达减少,而P53、P21基因的表达未见明显改变,提示Fas、Caspase3和bcl-2基因在H2O2 诱导的细胞凋亡中起重要作用;bcl-2通过抑制诱导凋亡所致的细胞永生化,可能在肿瘤的发生、发展中起重要作用。P53、P21、保持不变,可能反映了H2O2 诱导的细胞凋亡不依赖P53途径。     

紫外线致Hep—G2细胞凋亡的分子机制初探

紫外线(UV)是人类最常接触的具基因毒作用的因子。为探索紫外线辐射致细胞凋亡和组织损伤的分子机制，本研究采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经紫外线辐射处理的Hep-G2细胞P53、Caspase3、bcl—2和P21等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果表明经紫外线辐射处理的Hep-G2细胞的P53、Caspase3和bcl—2基因表达增加，而P21未见明显改变，提示P53、Caspase基因在紫外线辐射诱导的细胞凋亡中起重要作用，bcl—2增高可能有抑制细胞的过度凋亡。保持内在平衡的作用。P21保持不变或下降可能反映了细胞对DNA损伤应答的新途径。     

胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养、P1染色、流式细胞仪检测的方法，观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率，western blot方法分析4种胃癌细胞中bel-2和Caspase3的表达。结果 TRAIL300ng／ml作用于胃癌细胞24h后，胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-790I的凋亡率分别为36．05％、20．27％、16．50％和11．80％。Western blot结果显示MKN28细胞Caspase3的表达高于其它细胞，而bel-2的表达在各细胞间并无明显差别。结论 胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关，而与bel-2的表达无关。     

Bcl-2基因转染对小鼠心脏移植中细胞凋亡的影响与作用机制的研究

目的探讨Bcl-2基因转染在小鼠心脏移植急性排斥反应模型中对心肌细胞凋亡的影响和作用机制。方法通过TDT介导的原位末端标志(TUNEL)、DNA阶梯及Western免疫印迹(WesternBlot)等检测方法,分析了小鼠心脏移植模型急性排斥反应时细胞凋亡的情况,并结合心脏移植急性排斥反应的组织学分级,探讨了心肌细胞凋亡在急性排斥反应中的作用。同时应用免疫组织化学染色(SABC法)分析活化型Caspase3蛋白的表达,探讨了Bcl2基因转染对心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。结果与同种异体移植组比较,Bcl2基因转染后能显著减少急性排斥反应中的心肌细胞凋亡现象,同时,活化型Caspase3蛋白的表达从9.75±2.71被下调到3.56±0.62(P<0.01)。结论小鼠心脏移植急性排斥反应过程中存在心肌细胞的凋亡。它是小鼠心脏移植急性排斥反应中心肌组织损伤的主要机制,Bcl2基因转染能有效地抑制心肌细胞的凋亡,可能主要通过阻断细胞凋亡信号传导途径的中下游阶段,达到阻止Caspase3蛋白酶活化而发挥抗心肌凋亡作用。     

胎儿生长受限胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bcl-2、bax的表达

目的探讨胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)患者胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bax、bcl-2的表达及意义。方法收集2014年3月～2017年6月大连市妇女儿童医疗中心剖宫产分娩患者的胎盘,其中正常妊娠晚期(对照组)、FGR(实验组)各50例。应用免疫组化S-P法检测两组胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bcl-2、bax的表达。结果实验组bax蛋白表达明显高于对照组,差异有显著性(P0.05),实验组bcl-2蛋白表达低于对照组,差异有显著性(P0.05)。P53蛋白在正常妊娠晚期、FGR组均未见表达或仅有个别细胞表达,差异无显著性(P0.05)。结论 FGR患者胎盘滋养细胞凋亡是非P53依赖的凋亡,凋亡相关因子bax、bcl-2蛋白可能共同介导FGR胎盘滋养细胞的凋亡。     

细胞凋亡相关基因P53和bcl-2在乳腺癌中的表达

目的 :研究凋亡相关基因P53和bcl- 2乳腺癌中的表达情况 ,以探讨其与乳腺癌发生发展的关系。方法 :采用免疫组化S -P法检测 31例乳腺癌中凋亡相关基因P53和bcl- 2的表达。结果 :31例乳腺癌中P53和bcl- 2的阳性表达率分别为 87%和 77.4% ;bcl- 2的阳性表达在乳腺癌高中分化组与低分化组间比较差异有显著性 (P <0 .0 5) ;P53和bcl- 2的共同阳性率为 70 % ,二者的共同阴性率为 0 ,二者表达之间无明显相关 (P >0 .0 5)。结论 :P53基因的突变以及bcl- 2的表达增高均与乳腺癌的发生发展相关 ,通过改变肿瘤的抗凋亡状态进行肿瘤的基因治疗 ,将具有重要的临床实用价值     

耐药肺癌细胞caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA的异常表达

目的探讨肺癌细胞耐药性与凋亡蛋白caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA异常表达的关系。方法培养肺癌A 549耐药株(A 549R)和敏感株(A 549S),采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)对两株细胞bcl-2 mRNA进行扩增并作琼脂糖电泳,设-βactin为内对照比较其表达水平;W estern B lot法检测caspase8、bcl-2、细胞色素C蛋白表达并比较两株细胞中上述蛋白质表达水平。结果A 549S凋亡启动蛋白caspase8及细胞色素C的表达高于A 549R(P<0.05),而bcl-2蛋白表达低于后者(P<0.05);bcl-2 mRNA表达相对丰度分别为:A 549S 8.74±1.81,A 549R 10.29±2.92,差异无统计学意义(P>0.05)。结论bcl-2的过度表达可能使caspase8和细胞色素C蛋白表达降低从而造成细胞耐药,但bcl-2的这种过度表达可能是在转录或其后的过程而非基因水平发生。     

来曲唑通过下调bcl-2和上调caspase-3的表达促进人子宫肌瘤细胞调亡

目的 探讨来曲唑对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡以及bcl-2和caspase-3表达的影响. 方法 来曲唑处理原代培养的人子宫肌瘤细胞,用MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞术测定细胞凋亡率,放射免疫法测定培养基中雌二醇水平,用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测bcl-2和caspase-3表达. 结果 来曲唑呈浓度和时间依赖性抑制子宫肌瘤细胞的增殖,降低子宫肌瘤细胞的凋亡率,同时呈浓度依赖性降低子宫肌瘤细胞雌二醇的分泌.来曲唑呈浓度依赖性降低bcl-2的表达,增加caspase-3的表达. 结论 来曲唑抑制子宫肌瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与来曲唑减少雌二醇的分泌、降低bcl-2表达和增加caspase-3表达有关.     

紫外线致HeLa细胞损伤作用的研究

目的观察UVB辐射对体外培养的HeLa细胞的损伤作用。方法培养HeLa细胞,用紫外线以一定时间(1、5、10、15分钟)进行照射。MTT法检测细胞增殖活性,荧光显微镜检测各受试组细胞凋亡率。结果UVB照射后24h,上述细胞均出现增殖活性下降,活性下降程度与照光时间成正比;UVB照射可诱导HeLa细胞产生凋亡,其凋亡率随UVB照射时间延长而增加。结论紫外线辐射可引起真皮成纤维细胞损伤。     

紫外线诱导细胞凋亡分子机制的研究进展

由于近年来大气中臭氧层的破坏，辐射到地面的紫外线（ultraviolet，UV）增多。近年来研究发现UV不仅能引发日光性皮炎、皮肤老化、免疫抑制、白内障和皮肤癌等疾病，还能诱导细胞发生凋亡。机体通过凋亡这种方式清除受损的细胞，从而避免癌症的发生。因此，有关UV诱导细胞凋亡的分子机制成为此领域研究的热点。     

微囊藻毒素LR诱导L-02细胞发生凋亡

目的了解微囊藻毒素（MC）LR对L-02细胞的毒性机制。方法以L-02细胞为材料,用不同浓度的MCLR处理该细胞,观察了细胞增殖能力、细胞形态改变、乳酸脱氢酶（LDH）泄漏、细胞凋亡率及凋亡相关基因等一系列指标的变化。结果MTT细胞增殖实验可知,MCLR在24h内对L-02细胞有轻微的抑制作用,随后却促进细胞增殖。48h处理对LDH泄漏没有显著影响．延时处理导致LDH泄漏发生,且MCLR浓度越高,LDH泄漏越严重,此结果显示发生了细胞氧化损伤。光镜下50μg／ml的毒素浓度在60h处理后可造成明显的细胞形态改变,如细胞变圆、不贴壁、萎缩、膜发泡,这些都是典型的细胞凋亡形态变化。36h不同浓度MCLR处理的细胞凋亡率较低,约为22％-9％,延长处理时间至60h,高浓度（50μg／ml）处理的L-02细胞的凋亡率可达80％。经高浓度MCLR处理60h的L-02细胞中．p53和Bcl-2基因产物大量表达。结论微囊藻毒素LR可诱导L-02发生凋亡并上调凋亡相关基因p53和bcl-2的表达。     

bcl-2,P53蛋白在前列腺癌的表达及对判断预后的意义

目的:检测bcl-2,P53蛋白在前列腺癌中的表达情况,探讨其病因和发病机制及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测40例前列腺癌中bcl-2,P53蛋白表达情况。结果:bcl-2,P53蛋白在前列腺癌中的表达率分别为35.0%,37.5%。bcl-2,P53蛋白的表达与前列腺癌的病理学分级和临床分期呈正相关(P<0.05)。结论:检测bcl-2,P53蛋白在前列腺癌中的表达率将有助于对前列腺癌患者病理学分级、临床分期和预后的判断,可以作为判断前列腺癌临床分期和预后的重要指标。     

P53、bcl-2在维吾尔族外阴癌中的表达及其意义

目的：探讨突变型P53及bcl-2在维吾尔族外阴癌发生发展中的表达及其相互关系。方法：应用免疫组化SP法对67例维吾尔族妇女外阴手术切除存档蜡块（其中外阴癌57例,正常外阴组织10例为对照组、来自于外阴癌手术阴性切缘）进行突变型P53及bcl-2蛋白的检测。结果：（1）P53及bcl-2蛋白阳性表达率分别为52．63％（30／57）及70．18％（40／57）,而两者在10例癌旁组织中表达均阴性。（2）40例bcl-2蛋白阳性的外阴癌组织中有21例突变型P53阳性（52．50％）,17例bcl-2阴性的外阴癌组织中有9例突变型P53阳性（52．94％）,突变型P53及bcl-2蛋白之间无直线相关关系（r^2=-0．04,P=0．976）。（3）突变型P53在Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期外阴癌中表达率分别为74．4％、45．0％及70．0％,其表达在各期别之间无显著性差异（P=2．395）;bcl-2在Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期外阴癌中表达率分别为70．18％,75．0％及50．0％,其在各期别之间无显著性差异（P=0．302）。突变型P53及bcl-2在外阴癌高,中及低分化组织中的表达无显著性差异（P=0．474、0．215）,bcl2在外阴鳞癌淋巴结阳性组明显高于淋巴结阴性组,两者之间有显著性差异（P=0．044）,而突变型P53在外阴鳞癌淋巴结阳性组和淋巴结阴性组之间差异尢显著性（P=0．512）。结论：（1）突变型P53、bcl-2的表达与维吾尔族外阴癌的发生密切相关,可能为外阴癌发生、发展中的相对独立因素。（2）P53突变型和bcl-2的表达可能与外阴癌临床分期及组织学分级无明显相关,bcl-2阳性表达与淋巴结转移有关,而突变型P53阳性表达与淋巴结转移无关。     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大与凋亡干预的研究

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA（TSN）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞，采用相差显微镜测量细胞大小，测定心肌细胞^3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标；用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，用Westamblot法检测心肌细胞凋亡蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达。结果TSN能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞增大、心肌细胞^3H-亮氨酸掺入率的显著增加（P〈0.01）、心肌细胞凋亡率的增加（P〈0．05）、心肌细胞促凋亡蛋白P53和Bax表达的明显增高（P〈0.01），其效果与AngⅡ受体阻滞剂缬沙坦（Valsartan）相似。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，这可能与其同时抑制了心肌细胞的凋亡有关。     

非小细胞肺癌组织中P53和C-erbB-2蛋白的表达

目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中P53和C-erbB-2蛋白的表达。方法：采用免疫组织化学sP法检测30例癌旁正常组织和58例NSCLC组织中P53和C-erbB-2的表达,结合临床资料进行分析。结果：NSCLC组织中P53和C-erbB．2蛋白的阳性表达率分别为63．8％（37／58）和70．7％（41／58）,均高于癌旁正常组织（13．3％（4／30）,17．7％（5／30）,P均〈0．05）。NSCLC淋巴结转移组P53和C-erbB-2蛋白的阳性表达率分别为75．O％和80．O％,均高于无淋巴结转移组（38．9％,50．0％,P均〈0．05）。NSCLC组织中P53和C-erbB-2的表达有关（x2=5．32,P〈0．05）。结论：NSCLC组织中P53和C-erbB-2蛋白高表达,2者可能共同参与了NSCLC的发生发展与转移。     

大肠癌中Survivin表达及其与bcl-2和P53基因表达的关系

目的:研究Survivin在大肠癌组织中的表达及其与bcl2和P53基因表达的关系。方法:应用免疫组织化学方法对74例大肠癌及相应癌旁正常大肠组织中Survivin、bcl2和P53蛋白的表达。结果:74例大肠癌中Survivin阳性表达率为71.6%,而在相应癌旁正常大肠组织中Survivin阴性表达。Survivin表达上调与患者性别、年龄无明显相关(P>0.05),而与大肠癌分化程度低、肿瘤浸润深度及临床分期晚相关(P<0.05)。大肠癌组织中bcl2表达阳性与阴性者中Survivin阳性表达率分别为75.0%和65.4%,两者比较无显著性(P>0.05);P53表达阳性与阴性者中Survivin阳性表达率分别为82.4%和47.8%,两者比较有显著性(P<0.05)。结论:Survivin在大肠癌组织中表达上调,提示该基因在大肠癌的发生发展过程中起重要作用,Survivin表达越高,大肠癌分化程度越低,侵袭性更强,临床分期愈晚。大肠癌中Survivin阳性表达与P53阳性表达密切相关。     

Bcl—2、P^53和c—erbB—2蛋白在子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达及意义

目的了解bcl-2、P53和c-erbB-2蛋白在子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的存在状况及意义.方法用bcl-2、P53和c-erbB-2抗体对50例子宫内膜癌和20例子宫内膜增生过长活检标本进行S-P法免疫组化检测bcl-2、P53和c-erbB-2基因蛋白的表达及与病理分级的关系.结果bcl-2、P53和c-erbB-2在内膜癌、非典型增生过长和单纯性增生过长中的表达分别为60%、100%和80%,68%、40%和0%,76%、40%和20%.除bcl-2在内膜癌中的表达低于非典型增生和单纯性增生外,P53和c-erbB-2在内膜癌中的表达均高于各组,且内膜癌与单纯性增生之间亦存在高度显著性差异(P＜0.01).bcl-2、P53和c-erbB-2均随内膜癌的恶性程度增高而呈增高趋势,Ⅲ级阳性表达率均高于Ⅱ级和Ⅰ级,Ⅲ级与Ⅰ级之间存在高度显著性差异(P＜0.01),Ⅱ级与Ⅰ级之间亦存在显著性差异(P＜0.05).结论子宫内膜癌的发生与bcl-2、P53和c-erbB-2基因蛋白的过度表达有关系,bcl-2、P53和c-erbB-2之间可能有相互协同作用;bcl-2基因蛋白的异常表达可能是内膜癌的早期诊断指标bcl-2、P53和c-erbB-2的表达反映了癌细胞的分化程度及增殖情况,因而可作为子宫内膜癌的诊断、鉴别诊断及预后的参考指标之一.     

子宫颈鳞状细胞癌中P53、MDM2的表达与HPV16感染的关系

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌中P53、MDM2蛋白的表达及其与高危HPV16型感染的关系。方法免疫组化二步法检测43例子宫颈鳞状细胞癌、20例CIN、15例慢性子宫颈炎中P53、MDM2的表达,HPV16的检测应用原位杂交法。结果43例子宫颈鳞状细胞癌中HPV、P53、MDM2的表达率分别为46.51%、34.88%、25.58%,CIN中的表达率分别为45%、5%、15%,HPV16在慢性宫颈炎中的表达率为6.67%,P53、MDM2未见阳性表达,三组比较有统计学意义（P〈0.05）。P53、MDM2在HPV16阳性和阴性两组间的表达差异无统计学意义。结论HPV16与子宫颈鳞状细胞癌的发生密切相关,P53、MDM2的表达并不因HPV16的存在而消失。