喉癌中p16基因突变和甲基化的研究

目的 探讨ｐ１６基因在喉癌发生发展中的作用和在喉癌中的失活机制。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎａｌｙ－ｓｉｓ,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染方法和ＰＣＲ甲基化敏感内匹酶方法检测３２例喉癌和相应癌旁组织的ｐ１６基因第１,第２外显子突变和甲基化热点区域部分内切酶     

鼻咽癌肿瘤c—myc基因表达及p16基因失活的研究

目的 以原发性鼻咽癌为研究对象,探讨ｐ１６抑癌基因,ｍｙｃ家族癌基因在鼻咽癌发生、发展及其生物学行为的变化规律。方法 用多重聚合酶链反应（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＭＰＣＲ）,限制性内切酶ＰＣＲ、免疫组化及逆转录ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ＰＣＲ,ＲＴ ＰＣＲ）方法,检测６９例鼻咽癌活检肿瘤组织中,Ｐ１６基因纯合缺失、甲基化、ｐ１６基因蛋白表达（免疫组化）、ｃ－ｍｙｃ基因表达等情况。结果 Ｐ１６基因纯合缺失７例,甲基化１１例,总失活率为２６．１％（１８／６９）。免疫组化检测ｐ１６基因蛋白表达阴性６０．９％（４２／６９）;阳性３９．１％（２７／６９）。ＲＴ ＰＣＲ,ｍｙｃ基因检测表达结果７３．９％（５１／６９）,无表达者２６．１％（１８／６９）。     

喉癌中染色体9p21区域D9S319座位的杂合性丢失研究

为发现和定位新的抑癌基因提供线索和依据，应用聚合酶链反应检测了５４例喉癌（包括３例原位癌）组织中染色体９ｐ２１区域Ｄ９Ｓ３１９座位的ＤＮＡ微卫星多态标记的杂合性丢失（ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）。结果：２例可提供信息的原位癌病例中ＬＯＨ频率为２／２，４４例可提供信息的浸润期喉癌病例中ＬＯＨ频率为６６％（２９／４４）。研究表明，在染色体９ｐ２１区域存在与喉癌发生发展密切相关的抑癌基因，该区域抑癌基因失活是喉癌发生发展的早发事件     

喉鳞癌组织中RB1.20座位杂合性丢失和p110RB1蛋白表达的检测

目的探讨喉鳞状细胞癌组织中ＲＢ１基因在喉癌发生发展中的意义，为发现和定位新的抑癌基因提供线索和依据。方法应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ），选择１３号染色体上ＲＢ１．２０座位的微卫星多态标记，对５８例喉鳞状细胞癌组织进行杂合性丢失（ｌｏｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）分析和ｐ１１０ＲＢ１蛋白表达的检测。结果３例原位癌中均无ＲＢ１．２０座位杂合性丢失，５５例浸润癌中４５例可提供信息，杂合性丢失的频率为４０％（１８／４５），４１例中仅有８例ＲＢ蛋白表达缺失，其中６例伴有ＲＢ１．２０座位的杂合性丢失。结论ＲＢ１基因在部分喉癌中发生失活；在ＲＢ１．２０座位附近可能还存在与喉癌发生发展密切相关的抑癌基因。     

喉癌中p16基因突变和甲基化的研究

目的　探讨p16基因在喉癌发生发展中的作用和在喉癌中的失活机制。方法　应用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphismanalysis ,PCR SSCP)银染方法和PCR甲基化敏感内切酶方法检测 32例喉癌和相应癌旁组织的p16基因第 1,第 2外显子突变和甲基化热点区域部分内切酶位点的甲基化情况。结果　 32例喉癌中p16第 1第 2外显子无一例发生突变 ;在第 1外显子CfoⅠ位点有 6例发生甲基化 ,SacⅡ位点有 5例发生甲基化 ,HpaⅡ位点有 4例发生甲基化 ,甲基化发生频率为 (6 /32 ) 18 8%。在第 2外显子HpaⅡ位点有 5例发生甲基化 ,CfoⅠ位点有 6例发生甲基化 ,甲基化发生频率为 (6 /32 ) 18 6 %。结论　喉癌中p16基因的甲基化是该基因失活的重要机制之一 ,p16基因的失活与喉癌的发展和演进密切相关。     

喉癌组织中FHIT基因蛋白表达的研究

目的:以喉鳞状细胞癌为研究对象,探讨FHIT基因蛋白表达在喉癌发生、发展中的作用及临床意义.方法:用免疫组织化学SP法检测52例喉癌组织、23例癌旁组织及10例正常组织中FHIT基因蛋白的表达,分析在不同临床病理指标下FHIT蛋白表达的情况.结果:FHIT蛋白在正常组织中的阳性表达率(90.0%)及癌旁组织中的阳性率(78.3%)均高于癌组织中的阳性率(46.2%),差异有统计学意义(均P＜0.01).癌组织FHIT蛋白阳性表达率与临床分期和颈淋巴结转移有关,与病理分级无关.结论:喉癌的发生、发展与FHIT抑癌基因的失活有密切关系,FHIT基因很可能是喉癌重要的侯选抑癌基因.     

喉癌组织Rb、P53、C-myc和HPV基因测定及意义

采用PCR技术检测了33例喉癌及4例正常喉组织Rb、P53、C-myc、HPV基因的异常状况，结果：P53基因突变率为69.69%(23/33)(P＜0.01)，Rb基因突变率为48.48%(16/33)(P＜0.01)，C-myc基因扩增率为58.62%(17/29)(P＜0.01)，HPV阳性率为72.72%(24/33)(P＜0.01)。结合病毒感染和重度吸烟探讨发生喉癌因素的相互关系，研究表明：HPV感染和吸烟与C-myc基因激活和Rb、P53基因突变失活有关，是导致喉癌发生发展的多因素、多基因、多阶段的相互作用。     

喉癌中染色体9p21区域D9S319座位的杂合性丢失研究

发发现和定位新的抑癌基因提供线索和依据，应用聚合酶链反应检测了５４例喉癌组织中染色体９ｐ２１区域Ｄ９Ｓ３１９座位的ＤＮＡ微卫星多态标记的杂合性选择。结果：２例可提供信息的原位癌病例中ＬＯＨ频率为２／２，４４例可提供信息的浸润期喉癌病例中ＬＯＨ频率为６６％。研究表明，在染色体９ｐ２１区域存在与喉癌发生发展密切相关的抑癌基因，该区域抑癌基因失活喉癌发生发展的早发事件。     

鼻内翻性乳头状瘤及其癌变与p53蛋白异常表达

目的：探讨鼻内翻性乳头状瘤及其癌变与ｐ５３基因的关系。方法：采用免疫组化方法（ＡＢＣ法）对３６例鼻内翻性乳头状瘤（ＩＰ）组织和１６例鼻内翻性乳头状瘤癌变（ＩＰ＋ＳＣＣ）组织进行了ｐ５３蛋白检测。结果：３６例ＩＰ均为ｐ５３蛋白阴性，而在１６例ＩＰ＋ＳＣＣ组织中有５例为ｐ５３蛋白阳性，阳性率为３１．３％（５／１６），经统计学处理，二者差异显著（Ｐ〈０．００１）。结论：ｐ５３蛋白异常表达可能与ＩＰ的发生     

喉癌组织Rb、P^53、C—myc和HPV基因测定及意义

采用PCR技术检测了33例喉癌及4例正常喉组织Rb、P^53、C-myc、HPV基因的异常状况，结果：P^53基因突变率为69．69％（23／23）（P＜0．01），Rb基因突变率为48．48％（16／33）（P＜0．01），C－myc基因扩增率58．62％（17／29）（P＜0．01），HPV阳性率为72．72％（24／33）（P＜0．01）。结合病毒感染和重度吸烟探讨发生喉癌因素的相互关系。研究表明：HPV感染和吸烟与C－myc基因激活和Rb、P^53基因突变失活有关，是导致喉癌发生发展的的多因素、多基因、多阶段的相互作用。     

Cyclin D1 amplification and p16(MTS1/CDK4I) deletion correlate with poor prognosis in head and neck tumors

OBJECTIVES/HYPOTHESIS: Cyclin D1, a cell cycle regulator localized to chromosome 11q13, is amplified in several human tumors including head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Amplification and/or overexpression of cyclin D1 have been correlated to a poor prognosis. Deletion of the p16 gene, localized to 9p21, has also been observed in a significant proportion of HNSCC. The p16 gene regulates cyclin D1-CDK4 activity and prevents retinoblastoma tumor suppressor gene phosphorylation, thereby downregulating cellular proliferation. Detection of cyclin D1 amplification and p16 deletion using a simple and sensitive method will be valuable for the development of effective treatment modalities for head and neck cancer. STUDY DESIGN: We have used fluorescence in situ hybridization (FISH) to study cyclin D1 amplification and p16 gene deletion in head and neck tumors. Both single- and dual-color FISH were performed. METHODS: Paraffin-embedded tissues from 103 patients with HNSCC were analyzed using genomic DNA probes for cyclin D1 and p16. Dual-color FISH was performed with chromosome 11 or 9 centromeric probes as a control. Twenty-eight of these samples were analyzed for p16 expression by immunohistochemistry. RESULTS: Cyclin D1 amplification was observed in 30% (31/103) of patients, and p16 deletion in 52% (54/103). Lack of p16 expression was observed in 64% (18/28) of patients. There was a good correlation between the deletion of p16 sequences and the loss of p16 expression (P = .008). Amplification of cyclin D1 had a statistically significant association with recurrence, distant metastasis, and survival at 36 months. There was a significant association between p16 deletion and the development of distant metastases. Cyclin D1 amplification and p16 deletion together correlated with recurrence, distant metastasis, and survival. CONCLUSIONS: We demonstrate that FISH is a simple and sensitive method for detecting cyclin D1 amplification and p16 deletion in head and neck cancer. Our results suggest that these two genetic aberrations together portend a poorer outcome than either of the abnormalities alone in head and neck cancer.     

Genetic deletions of glutathione-S-transferase as a risk factor in squamous cell carcinoma of the larynx: a preliminary report

PURPOSE: To test whether genetic deletions of glutathione-S-transferase (GST) are associated with squamous cell carcinoma (SCC) of the larynx. GST are a group of detoxifying enzymes that may help reduce the risk of developing cancer in response to environmental carcinogens. Polycyclic aromatic hydrocarbons, found in high concentration in cigarette smoke, are known carcinogens especially for SCC of the larynx. Individuals with absolute or relative deficiency of the GST enzyme system may therefore be at a higher risk of developing laryngeal carcinoma. MATERIALS AND METHODS: Genotyping for GST-M1 and GST-T1 was performed using polymerase chain reaction (PCR) assay on fresh frozen tissue specimens of 20 patients with SCC of the larynx and on 20 control subjects with a similar smoking history. Because this assay results in the absence of a PCR product in individuals expressing the GST-M1/GST-T1 null genotype, oligonucleotide primers that amplify a portion of the albumin gene were included in a multiplex PCR as a positive control for DNA quality and PCR conditions. The chi-square test was used for statistical analysis. RESULTS: GST-M1 gene was deleted in 80% of patients with laryngeal SCC and in 50% of control subjects (P <.05). No statistically significant difference was observed in the incidence of GST-T1 gene deletion in patients with SCC of the larynx and control subjects. CONCLUSION: GST-M1 gene deletion was significantly associated with SCC of the larynx and may produce a risk for this particular disease.     

p53蛋白在喉鳞癌及癌旁组织中表达的研究

应用抗ｐ５３单克隆抗休琢ＬＳＡＢ免疫组织化学染色法检测喉鳞癌，喉癌旁组织及声带息肉ｐ５３蛋白的表达。结果显示：２５例喉鳞癌呈阳性反应，４例距肿瘤边缘〈０．５ｃｍ的喉癌旁组织呈弱阳以应，２０例距肿瘤边缘〉２ｃｍ的喉癌旁组织及１６例声带息肉均为阴性。     

喉癌手术安全切缘的免疫组化研究

目的：从基因蛋白水平角度研究喉癌手术安全切缘。方法：应用 Ｌ Ｓ Ａ Ｂ免疫组化法,检测了ｒａｓ、ｃｍ ｙｃ、ｐ５３ 癌基因在３０ 例喉癌,边缘区,癌旁０．５、１．０、１．５、２．０ ｃｍ 粘膜处和 ４ 例正常喉粘膜中的表达情况。结果：三种癌基因产物的单独及联合表达阳性率依正常粘膜→癌旁２．０ ｃｍ →１．５ ｃｍ →１．０ ｃｍ →０．５ ｃｍ →边缘区→癌顺序递增,且癌基因蛋白的表达在距肿瘤０．５ ｃｍ 以内的癌旁组织与癌旁组织１．０ ｃｍ 处有显著性差异（ Ｐ ＜ ０．０５）。结论：距肿瘤０．５ ｃｍ 内的癌旁组织应视为癌前期病变,以切缘距肿瘤０．５ ｃｍ 作为喉癌手术安全切缘的标准较为合适     

喉非典型增生和鳞癌的PCNA,p21表达及其意义

为探索增殖细胞核抗原和ｐ２１在喉非典型增生与其转化后的鳞癌中的表达有无差异。     

基因MTA1在喉癌中的表达和意义

目的：研究肿瘤转移相关基因Mtal（metastasis-associated gene）表达与喉癌淋巴结转移的关系。方法：应用RT-PCR技术,对30例喉癌组织、12例喉癌颈部淋巴结和10例正常喉部组织,进行了Mtal mRNA表达的检测。结果：有转移喉癌原发灶Mtal mRNA高表达率为100％（8／8）,无转移为22．7％（5／22）,P〈0．01;有癌转移淋巴结高表达率为87．5％（7／8）,无癌转移为0（0／4）,P〈0．05。30例喉癌有13例Mtal mRNA高表达,高表达率为43．3％。结论：Mtal mRNA表达与喉癌淋巴结转移呈相关关系。基因Mtal可成为判断喉癌转移有价值的指标。     

6种基因蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨p15、p16、Rb、p27、p53及PCNA基因蛋白在不同分期、不同部位和不同分级的喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达和临床意义。方法:用免疫组织化学染色SP法对65例LSCC进行染色,30例正常黏膜为对照组,检测p15、p16、Rb、p27、p53及PCNA基因蛋白的表达,并进行统计学分析。结果:6种基因蛋白的表达在正常黏膜和LSCC中的差异有统计学意义(均P<0.01)。且p15和p27表达不仅和LSCC生长部位相关,而且和临床分期、分化程度相关。p16蛋白表达与LSCC的病理分级呈负相关,PCNA蛋白的表达与LSCC的病理分级呈正相关,两者的表达均与临床分期和肿瘤生长部位无关。而LSCC生长越晚期,Rb、p53蛋白的表达,前者呈下降,后者呈上升状态,且p53蛋白的表达和恶性程度呈正相关。结论:p15和p27基因表达的缺失是LSCC发生发展的重要过程,对两者的检测在LSCC的治疗和预后方面有一定意义。p16和PCNA反映肿瘤细胞的增殖状态,与肿瘤的发生有关,与肿瘤的发展过程无关。而Rb、p53基因表达多与肿瘤的发展过程相关。     

喉癌中Ki67和VEGF的表达及其相关性的初步探讨

目的 :探讨细胞增殖抗原标记物 (Ki6 7)和血管内皮生长因子 (VEGF)在喉鳞状细胞癌中的表达及其相互关系。方法 :用免疫组织化学方法研究Ki6 7和VEGF在 4 0例喉鳞状细胞癌组织 (喉癌组 )和 5例正常喉黏膜标本 (对照组 )中的表达。结果 :Ki6 7和VEGF在喉癌组中的表达高于对照组 (P <0 .0 1) ;在有淋巴结转移的喉鳞状细胞癌中的表达高于无淋巴结转移者 (分别为P<0 .0 5和P <0 .0 1) ;Ki6 7和VEGF在不同年龄、性别患者中的表达差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;Ki6 7和VEGF的表达与喉癌T分期有关 (P <0 .0 5 ) ,且Ki6 7和VEGF的表达之间存在正相关关系 (r =0 .82 3,P <0 .0 1)。结论 :Ki6 7和VEGF均可作为反映喉鳞状细胞癌生物学行为的客观参考指标 ,两者相结合可有助于喉癌的诊断、分期的判断和治疗方案的制定。     

雄激素受体mRNA基因在喉癌组织中的表达与研究

以探讨雄激素受体（ＡＲ） ｍＲＮＡ基因在喉鳞状细胞发展中的作用，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，以及喉癌组织的总ＲＮＡ分离、激光扫描等方法，观察、分析检测了ＡＲ基因在喉鳞状细胞组织中，以及癌旁正常组织中表达及意义。结果显示，２７例喉癌组织中及６例癌旁正常组织中均存在ＡＲ，且喉癌组织中ＡＲｍＲＮＡ基因的表达水平明显高于癌旁正常组织，通常情况下在癌旁正常组织中ＡＲｍＲＮＡ基因的表达水平明显高于癌旁正常组