2 Gy γ射线照射对小鼠调节性T细胞和Th17细胞及其免疫平衡的影响

目的 观察2 Gy γ射线照射对小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法 50只C57BL/6雄性小鼠随机数字表法分为对照组和照射组,照射组小鼠接受2 Gy γ射线一次性全身照射(剂量率为164.94 Gy/min),对照组行假照射。于照射后1、3、7、14和28 d检测外周血象的变化;流式细胞仪分析外周血、胸腺及脾脏调节性T细胞(Treg细胞)和脾脏Th17细胞数量的改变。结果 受照后小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数降低(t=8.89～33.54, P<0.05)。小鼠外周血Treg略有升高;胸腺Treg在照后1、3 d显著高于对照组(t=-6.45和-10.59, P<0.05),至28 d明显低于对照组(t=5.34, P<0.05);脾脏Treg在照后1～14 d显著高于对照组(t=-6.82～-3.89, P<0.05)。脾脏Th17细胞于照后1 d出现显著增高,3 d达到最大值(t=-2.42, P<0.05),较脾脏内Treg增长更为明显。Treg/Th17比值在照后1～14 d降低,差异有统计学意义(t=4.02～8.04, P<0.05),导致Treg/Th17平衡模式向Th17方向明显偏移。结论 Treg/Th17免疫平衡失调在辐射所致免疫功能损伤中可能扮演重要角色。     

创伤脓毒症患者外周血Th17/Treg平衡变化及临床意义

目的 探讨严重创伤患者外周血中Th17和调节性T细胞(Treg)比例变化及其临床意义. 方法 35例多发伤患者根据治疗期间是否发生脓毒症分为创伤组(22例)和脓毒症组(13例),选择9例健康志愿者设为对照组.采集外周血,流式细胞术检测Th17和Treg比例,实时荧光定量RT-PCR检测RORγt和FoxP3 mRNA表达,ELISA检测血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)和C反应蛋白(CRP)水平,分析Th17/Treg比值变化及其临床意义. 结果 创伤组Th17比例与对照组差异无统计学意义,Th 17/Treg比值较对照组稍低(P＜0.05);而脓毒症组外周血Th17比例和Th17/Treg比值显著高于创伤组和对照组(P＜0.01).脓毒症组血清TGF-β、IL-6及IL-23含量均明显高于对照组(P＜0.01);脓毒症组与创伤组比较血清TGF-β含量差异无统计学意义,而血清IL-6、IL-23含量明显高于创伤组(P＜0.01);脓毒症组血清IL-17含量明显高于创伤组和对照组(P＜0.01).脓毒症组RORγt mRNA水平表达高于创伤组和对照组(P＜0.01). 结论 Th17/Treg失衡与创伤脓毒症的发生密切相关.     

肝细胞生长因子基因治疗促进大鼠放创复合伤愈合

目的 应用携带肝细胞生长因子（HGF）基因的质粒（pHGF）对大鼠放创复合伤进行基因治疗,探究其促愈作用。方法 120只SPF级雌性Wistar大鼠按体重随机分为单伤组、伤照组、伤照+阳性药（重组人表皮生长因子外用溶液,金因肽）治疗组（JYT组）和伤照+pHGF治疗组（HGF组）,每组30只。大鼠经致伤和照射后建立放创复合伤模型,建模后即刻HGF组在创面一次性给予pHGF质粒,JYT组给予金因肽治疗,伤照组给予等体积的PBS。伤照后3、7、14、21、28和35 d描记伤口面积、检测外周血象和伤口组织羟脯氨酸含量,并进行病理检测和伤口肉芽组织毛细血管计数,研究pHGF对大鼠放创复合伤的促愈作用。结果 伤照后3、28及35 d,大鼠体重及外周血白细胞计数显著降低。伤照后11 d内,HGF组伤口相对面积小于或显著小于伤照组（P<0.05）。伤照后7、14 d,HGF组羟脯氨酸含量明显高于JYT组（P<0.05）。毛细血管密度结果显示,伤照后3、7 d,HGF组肉芽组织毛细血管密度明显大于伤照组和JYT组（P<0.05）;伤照后14 d,HGF组毛细血管密度小于伤照组（P&...     

肝移植急性排异患者外周血Th17及调节性T细胞的特征及意义

目的 探讨肝移植术后急性排异患者外周血中Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的变化特征及临床意义.方法 2011年1-9月解放军302医院肝移植研究中心收治的肝移植术后患者25例,根据移植组织穿刺活检病理结果分为急性排异组(排异组,12例)和非排斥稳定组(稳定组,13例),另选取13名健康体检者作为对照.采用流式细胞分析法检测外周血中Th17、Treg细胞占CD4+T细胞的比例,观察Th17/Treg比值变化及其与肝脏损伤的关系.结果移植术后排异组外周血中Th17占CD4+T细胞的比例(3.50％±0.86％)明显高于稳定组(2.10％±0.52％)和对照组(1.79％±0.42％,P＜0.01),稳定组和对照组比较无统计学差异(P＞0.05).排异组和稳定组患者外周血中Treg占CD4+T细胞的比例(分别为0.90％±0.25％、1.51％±0.23％)明显低于对照组(2.57％±0.79％,P＜0.01),且排异组明显低于稳定组(P＜0.05).排异组Th17/Treg比值(4.20±1.69)明显高于稳定组(1.43±0.47)及对照组(0.75±0.28,P＜0.01),且稳定组明显高于对照组(P＜0.01).Th17/Treg比值与丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酸转氨酶(GGT)水平呈正相关(分别为r=0.5023,P=0.0105; r=0.4561,P=0.0219;r=0.4393,P=0.0280; r=0.5516,P=0.0043).结论 肝移植术后急性排异反应患者外周血中存在Th17/Treg失衡,且与肝脏损伤有一定关系.Th17/Treg失衡可能参与了肝移植术后急性排异反应的发生发展过程.     

严重多发伤患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的变化及意义

目的 观察严重多发伤患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg细胞)的变化及意义.方法 40例严重多发伤患者于伤后1,3,5,8 d流式细胞仪检测各组患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比率的变化,ELASA法检测血清中IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)浓度,并与健康组进行对比.结果 CD4+细胞在伤后1～8 d均明显低于健康组(P＜0.01),CD8+细胞在伤后5～8 d明显高于健康组(P＜0.05或P＜0.01).严重多发伤患者伤后5 d外周血中CD4+CD25highTreg细胞比率开始升高,与伤后1,3 d比较,差异有统计学意义(P＜0.01);伤后8 d仍持续升高,与伤后5 d比较,差异有统计学意义(P＜0.05).患者外周血IFN-γ浓度持续下降,而患者外周血IL-10浓度则持续上升.结论 Treg细胞比率在严重多发性创伤后明显升高,更重要的是,其在减少Th1类细胞因子分泌及抑制创伤免疫等方面发挥了重要的作用.     

血小板源伤口愈合因子改善糖尿病大鼠伤口愈合及与β-转化生长因子表达的相关性

目的 探讨外源性血小板源伤口愈合因子(platelet-derived wound healing factors,PDWHF)改善糖尿病难愈性伤口愈合的作用与β-转化生长因子(TGF-β)基因表达的关系. 方法 44只雄性SD大鼠,分为正常对照组(鼠数＝12)、糖尿病组(鼠数=32).四氧嘧啶诱导糖尿病组大鼠血糖值＞1.8 g/L 1～2 d后,在每组大鼠背部用外科方法剪去2块直径为1.8 cm的全层皮肤,造成全皮层开放伤口.术后当日及以后连续6日,选糖尿病大鼠一侧伤口为PDWHF治疗组伤口,在其局部应用 PDWHF (100 μg/伤口),另一侧(糖尿病对照组伤口)及正常对照组伤口不予 PDWHF 治疗. 结果 伤后5 d,PDWHF治疗组伤口与糠尿病对照组伤口闭合指数无差异,均低于正常对照组(P＜0.05);伤后7,10,14 d,PDWHF 治疗组伤口闭合程度明显高于糠尿病对照组伤口(P＜0.05),但仍低于正常对照组(P＜0.05).伤后5, 7 d,PDWHF 治疗组伤口组织中TGF-β mRNA水平量是糖尿病对照组的4倍和5.6倍(P＜0.01),但低于正常对照组(P＜0.05);伤后10 d,3组间TGF-β mRNA水平量无明显差异. 结论 PDWHF 促糖尿病大鼠伤口愈合与其增强伤口组织TGF-β基因表达相关.     

携带人肝细胞生长因子的重组裸质粒对放射复合皮肤创伤促愈作用的实验研究

目的应用携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的重组裸质粒(pUDKH)观察其对放射复合皮肤创伤伤口愈合的影响。方法清洁级雄性Wistar大鼠110只,按体重随机分为单纯创伤(单伤组)、创伤+伤口局部照射(伤照组)和创伤+伤口局部照射+pUDKH治疗(pUDKH组)3组。图像分析仪测量伤口愈合面积和肉芽组织内血管密度;病理学观察各组大鼠伤口愈合的动态变化。结果伤后第1～28天伤照组动物伤口面积差值持续小于单伤组(对照组),伤口愈合速度较慢;而pUDKH组于伤后第7～21天其面积差值明显大于伤照组(P0.05),表明pUDKH基因能促进放射性复合伤伤口的愈合,其愈合速度较伤照组提前1周左右。病理学观察表明,照后早期伤照组渗出物较单伤组和pUDKH组减少,出血坏死较明显,中后期肉芽组织生机不良,新生毛细血管较单伤组和pUDKH组明显减少,晚期伤口愈合较慢,其愈合时间较单伤组和pUDKH组延迟1周左右。结论 HGF基因能明显促进放射复合创伤伤口的愈合,表现在促进伤口区肉芽组织的生长、肉芽组织内成纤维细胞增生和毛细血管的生成及促进表皮角质层的形成和重上皮化过程。pUDKH重组质粒组伤口愈合速度较伤照组提前1周左右。     

γ射线对小鼠Th1和Th2细胞功能亚群的影响

目的观察γ射线照射对小鼠辅助性T细胞等功能亚群的影响，探讨辐射所致的免疫系统损伤在细胞学和分子水平上的机制。方法应用细胞表面标志和细胞内因子的流式细胞仪分析方法，检测小鼠外周血和脾脏Th1和Th2等淋巴细胞亚群的变化。结果①6Gy了射线照射后1d，即可见小鼠脾脏不同细胞亚群的降低，尤以CD19^＋和CD8^＋的降低更为明显，分别为对照组的30％和41％（P〈0．01），照后7和14d降至最低，分别为对照组的7．9％和14％，照后21d开始恢复。②对Th1和Th2功能亚群的分析表明。照后1d，小鼠外周血和脾脏Th1亚群均明显降低，分别为对照组的2．6％和7．6％（P〈0．01），而Th2亚群未见明显降低甚至在外周血出现一定程度的升高。③由于CD8^＋亚群的显著降低，导致CD4^＋／CD8^＋比值的明显升高（照后1d，P〈0．01），照后21d仍未恢复到对照组水平；由于Th1亚群的显著降低，使得照射小鼠外周血和脾脏的Th2／Th1比例失衡，即发生明显的Th1／Th2模式向Th2免疫反应漂移的现象。结论6Gy γ射线照射后，Th1和Th2功能亚群的失衡导致小鼠免疫功能的抑制，揭示了Th1和Th2功能亚群的失衡在辐射所致的免疫损伤中具有较重要作用，为深入探索辐射损伤的分子免疫学机制提供了新的启示。     

原核pprI基因活体转染对BALB/c小鼠急性放射损伤保护作用的研究

目的 研究耐辐射奇球菌pprI基因活体转染对小鼠急性放射损伤的防护作用.方法 采用SPF级纯品系BALB/c雄性小鼠,应用活体电转染技术,将pEGFP-c1空载质粒及pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转入小鼠股前肌肉.应用60Coγ射线进行全身照射,死亡率观察组吸收剂量为6 Gy,观察照后30 d内小鼠死亡率的变化;放射效应观察组吸收剂量为4 Gy,于照后1、7、14、28和35 d观察小鼠外周血象、胸腺、脾脏和骨髓细胞的凋亡率,并于照后第7和28天观察小鼠肺脏和睾丸组织的病理变化.结果 质粒注射剂量为50 μg/50μl,电场强度为200 V/cm时转染肌细胞的效率最高.pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠急性辐射死亡率为30％,显著低于单纯照射组(60.0％)和空载体组(63.3％)(x2=4.90、6.24,P＜0.05).与单纯照射组、空载体组比较,pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠的外周血白细胞计数在照后1、7、14和28 d显著增高(F=16.26、8.10、6.37、10.74,P＜0.05),血小板计数在照后第7和14天显著增高(F=7.36、5.71,P＜0.05),淋巴细胞百分率在照后7d显著增高(F=18.43,P＜0.05);胸腺和骨髓细胞凋亡率均在照后第1、7、14、28和35天显著降低(F=3.88、14.91、14.14、39.86、5.65,P＜0.05;F=53.70、11.75、21.78、41.40、4.54,P＜0.05);脾脏细胞凋亡率在照后第1、7、14和28天显著降低(F=97.95、56.61、33.55、14.71,P＜0.05).pEGFP-c1-pprI基因重组质粒转染组小鼠肺脏和睾丸的放射病理损伤较轻并且恢复较快.结论 耐辐射奇球菌pprI基因活体电转染对BALB/c小鼠急性放射损伤具有显著的保护作用,为进一步临床应用奠定了实验基础.     

γ射线对小鼠造血功能及T细胞亚群功能的影响

目的 观察γ射线对小鼠造血功能及外周血T细胞相关细胞因子和脾脏T细胞转录因子的影响,探讨射线引起的造血功能损伤与免疫异常的相关性。方法 将50只BALB/c小鼠用随机数字表法分为两组：照射组（40只）和空白对照组（10只）,照射组小鼠予⁶⁰Co γ射线（1.0 Gy/min,5.5 min）照射,空白对照组予假照射,照射组于照射后4、8、12及20 d,空白对照组于20 d,计数小鼠外周血白细胞和血小板;骨髓病理切片观察骨髓造血组织增生情况;流式细胞微球芯片捕获技术（CBA）检测外周血中Th1/Th2/Th17细胞因子含量变化;Western blot法检测脾脏Th1/Th2、Th17/Treg细胞分化特异性转录因子T-bet/GATA-3、RORγt/Foxp3蛋白表达水平。结果 照射组小鼠外周血白细胞和血小板计数较空白对照组显著降低（t_白细胞=18.48、15.72、9.79、3.30,t_血小板=22.52、19.74、11.78、4.70,P<0.05）。照射组骨髓病理切片与空白对照组相比,骨髓增生显著低下,造血组织面积减少,被脂肪组织大量替代,巨核细胞少见,照射后8 d较20 d骨髓抑制更明显。照后8和12 d,照射组小鼠外周血Th1类细胞因子IFN-γ、TNF-α及Th2类细胞因子IL-4、IL-6含量较空白对照组明显升高,IL-17A含量照射组较空白对照组亦明显升高（t_IFN-γ=2.93、3.36,t_TNF-α=6.09、8.11、6.43、4.49,t_IL-4=4.49、3.18,t _IL-6 =5.11、8.67、6.67、8.55,P<0.05）。与空白对照组比较,照射组脾脏RORγt蛋白在照射后4、8和12 d及GATA-3、Foxp3蛋白在各时间点表达水平均降低（t_RORγt=6.79、4.31、4.47,t_GATA-3=3.88、8.06、2.84,3.23,t_Foxp3=10.00、8.06、2.89、5.93,P<0.05）。而照射组T-bet蛋白表达较空白对照组升高（t=5.64、2.75、3.56、4.65,P<0.05）。结论 5.5 Gy γ射线照射后引起小鼠骨髓造血抑制,同时导致Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群功能失衡,提示由射线引起的免疫异常可能参与骨髓造血功能的损伤。     

严重烧伤后调节性T细胞免疫活性变化及其与患者预后的关系

目的 探讨严重烧伤后患者外周血调节性T细胞(Treg)免疫活性的变化规律,并探讨其在MODS和患者不良预后中的临床意义. 方法对106例烧伤总面积(TBSA)≥30%的患者进行动态观察.试验分组:(1)按烧伤面积将患者分为三组:Ⅰ组41例(TBSA 30%～49%),Ⅱ组34例(TBSA 50%～69%),Ⅲ组31例(TBSA 70%～99%);(2)根据MODS诊断标准,将患者进一步分为MODS组(21例)和非MODS组(85例);(3)根据MODS患者的预后情况,将其分为死亡组(16例)和生存组(5例);同时设正常对照组.分别于伤后1,3,7,14,21 d采集患者外周静脉血,采用免疫磁性分离系统对外周血CD4+CD25+Treg进行分离纯化,采用流式细胞术检测Treg表面分子T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)的表达情况,ELISA法检测Treg孵育液上清中IL-10的分泌水平. 结果 (1)与正常对照组比较,严重烧伤患者各烧伤面积组CD4+CD25+Treg表面分子CTLA-4表达水平及IL-10分泌水平均明显增强(P＜0.01),烧伤患者各组间差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01);(2)严重烧伤患者伤后不同时相点CTLA-4阳性表达水平及IL-10分泌水平均明显升高,MODS组CTLA-4阳性表达率及IL-10分泌水平在伤后3～21 d显著高于非MODS组(P＜0.01);(3)MODS患者死亡组CTLA-4阳性表达率及IL-10分泌水平在伤后3～21 d均显著高于生存组(P＜0.05或＜0.01). 结论严重烧伤后CD4+CD25+Treg表面分子表达及细胞因子分泌在不同烧伤面积、是否并发MODS及是否生存等不同组间存在显著差异,CD4+CD25+Treg可通过分泌抑制性细胞因子参与严重烧伤后机体免疫失衡、诱发多脏器功能障碍发生甚至最终造成患者死亡的病理过程.     

转录因子ROR γt对妊娠期哮喘模型小鼠Th17/Treg平衡的调节作用

目的观察妊娠期哮喘模型小鼠Th17细胞相关细胞因子和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)的表达变化,探讨地塞米松(DXM)对小鼠气道炎症和Th17细胞分泌功能的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为健康妊娠(HP)组、妊娠期哮喘(AP)组和地塞米松(DXM)组,每组10只。AP组和DXM组于实验当天(0d)和7、14d时分别给予OVA/Al(OH)3混悬液腹腔注射致敏,HP组仅给予单纯等量生理盐水(NS)。3组小鼠合笼交配至妊娠成功。于21d起,连续7d对AP组和DXM组给予50g/L OVA雾化激发(1次/d,40min/次);DXM组于雾化吸入OVA前30min给予1mg/kgDXM腹腔注射;HP组仅给予单纯等量NS进行雾化激发。各组小鼠于末次激发24h后进行气道反应性检测,结果以相应浓度乙酰胆碱(Mch)激发下增强的呼吸间歇(Penh)值与基线值的百分比[Penh值(%)]来表示;分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及分类计数;取肺组织行病理学观察;采用流式细胞仪检测外周血Th17和Treg细胞的比例并计算Th17/Treg比值;ELISA法测定外周血IL-17、IL-23、IFN-γ和RORγt含量,RT-PCR法检测前述因子在肺组织中的表达,Western blotting检测肺组织中RORγt的表达。结果雌性BALB/c小鼠以OVA致敏后气道反应性增加,BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞(Eos)、淋巴细胞(Lym)和中性粒细胞(Neu)比例增加,肺组织病理学改变符合哮喘的特征。外周血标本中,AP组Th17细胞显著升高,Treg细胞显著降低(P<0.05),Th17/Treg比值上升。DXM组Th17和Treg细胞变化趋势与AP组相同,Th17/Treg比值高于HP组,但低于AP组(P<0.05)。分别在肺组织和外周血标本中检测蛋白和mRNA表达水平,结果显示,AP组IL-17、IL-23及RORγt含量均高于HP组及DXM组(P<0.05),IFN-γ含量低于HP组及DXM组(P<0.05)。AP组肺组织RORγt蛋白的表达(61.27%±3.11%)明显高于DXM组(37.51%±1.93%,P<0.01)和HP组(22.39%±0.86%,P<0.01),后两者比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。相关分析表明,AP组肺组织RORγt蛋白表达量与Eos、Lym和Neu细胞绝对值呈显著正相关(r=0.879、0.759、0.802,P<0.01),与外周血IL-17含量、肺组织IL-17mRNA表达水平亦呈正相关(r=0.696、0.863,P<0.01)。结论 Th17细胞分泌功能及RORγt表达上调参与了妊娠期哮喘的发生发展。DXM干预在改善哮喘症状的同时可降低RORγt表达,使Th17分化和增殖功能受抑。     

大剂量γ射线照射对小鼠免疫系统损伤远期影响的研究

目的 探讨亚致死剂量6Gyγ射线一次性全身照射小鼠免疫细胞对脂多糖刺激反应性的远期影响.方法 将实验小鼠分为假照射组和照射组,假照射组不接受照射,照射组给予6 Gyγ射线照射.照射后10周,分别将假照射组和照射组小鼠按组别腹腔注射脂多糖(20 mg/kg),对照组注射等量的生理盐水.分别于24 h和1 h后取材,进行外周血白细胞计数及CD4、CD8、B220细胞比例检测.取脾脏和胸腺称重,计算脏器指数.冲洗单侧股骨进行有核细胞计数.结果 与假照射刘照组小鼠相比,照射对照组小鼠的CD4细胞比例显著升高(t=2.940,P＜0.05),CD8和B220细胞比例显著下降(t=6.485和4.351,P均＜0.01).照射+脂多糖1h组小鼠的CD4 (t=2.510,P＜0.05)、CD8(t=2.862,P＜0.05)和B220(t=7.074,P＜0.01)细胞比例较假照射+脂多糖1h组小鼠显著降低,差异有统计学意义.与假照射+脂多糖24 h组小鼠相比,照射+脂多糖24 h组小鼠单侧股骨有核细胞计数显著升高,差异有统计学意义(t=2.078,P＜0.05).结论 6 Gyγ射线一次性全身照射后10周,小鼠免疫系统尚未完全恢复;与假照射组相比,在接受脂多糖刺激后照射组小鼠胸腺指数和外周血中CD8和B220细胞比例未见显著变化.辐射对小鼠免疫系统损伤的远期影响有待进一步研究.     

白血病与骨髓增生异常综合征患者Th17、白细胞介素21及白细胞介素1β水平变化研究

目的 探讨急性髓系白血病(AML)与骨髓增生异常综合征(MDS)患者Th17、白细胞介素21(IL-21)及白细胞介素1β(IL-1β)水平的变化。方法 将自2016年1月至2020年12月河北医科大学第一医院收治的20例AML患者纳入AML组,30例MDS患者纳入MDS组。将MDS组中难治性贫血原始细胞增多(MDS-RAEB)患者纳入MDS-RAEB亚组(n=15),难治性贫血(MDS-RA)患者纳入MDS-RA亚组(n=15)。另选取同期于我院体检的20例健康者纳入对照组。比较各组研究对象外周血及骨髓单个核细胞Treg细胞、Th17细胞比例。采用Pearson相关性分析对AML、MDS患者Th17细胞与Treg细胞的相关性进行分析。观察各组研究对象外周血白细胞介素17(IL-17)、IL-21、IL-1β、转化生长因子β(TGF-β)水平差异。结果 与对照组比较,AML组和MDS组外周血及骨髓单个核细胞Treg细胞、Th17细胞比例明显升高,且MDS组高于AML组,差异有统计学意义(P<0.05)。MDS-RA亚组外周血及骨髓单个核细胞Treg细胞、Th17细胞比例高于MDS...     

羊栖菜多糖复方制剂抗辐射作用的实验研究

目的 研究羊柄菜多糖复方制剂对γ射线照射小鼠的抗辐射作用.方法 将小鼠分为空白对照组、模型对照组及羊栖菜多糖复方制剂低[0.692g/(kg·d)]、中[2.075g/(kg·d)]、高[4.150g/(kg·d)]3个剂量组,以方格星虫提取物为阳性对照组,每天灌胃给药1次,灌胃2周后用60Co γ射线进行1次全身照射.测定小鼠外周血白细胞(WBC)、血小板和血细胞计数,以及脾指数(TI)、胸腺指数(SI)、骨髓有核细胞计数(BMWC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量等指标.结果 3个剂量组小鼠与模型组比较,WBC均有上升趋势,但仅中剂量组在照后第14天与模型组差异有统计学意义(P＜0.05).3个剂量组TI均明显高于模型组(P＜0.05),SI和BMNC仅中、高剂量组明显高于模型组(P＜0.05),SOD低、中剂量组明显高于模型组(P＜0.05),MDA中、高剂量组低于模型组(P＜0.05或P＜0.01).结论 羊栖菜多糖复方制剂能有效提高小鼠的抗辐射能力.     

尾吊、噪声及其复合因素对大鼠免疫功能的影响

目的研究尾吊、噪声以及两种因素复合对大鼠免疫功能的影响。方法大鼠30°尾吊21 d、噪声2h及尾吊(21 d)+噪声(2 h)复合处理后,测定大鼠体重、胸腺重、脾重、白细胞及其分类,流式细胞术、Griess法分别测定T淋巴细胞亚群和血清NO含量。结果与对照组相比,尾吊组与尾吊+噪声复合应激组大鼠体重显著下降(P0.01),外周血白细胞数、中性粒细胞数及其百分比显著增加(P0.01),而淋巴细胞百分比显著下降(P0.05),尾吊+噪声复合应激组大鼠T淋巴细胞数和Th亚群数增加(P0.05),Th/Tc比显著升高(P0.01),各处理组大鼠血清NO含量均显著降低(P0.01)。结论尾吊明显影响大鼠体重、外周血免疫细胞含量和分布以及血清NO含量,噪声对尾吊大鼠淋巴细胞亚群的变化有协同效应。     

粒细胞集落刺激因子对急性辐射损伤小鼠中枢及外周血淋巴细胞亚群重建的影响

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性辐射损伤小鼠中枢及外周血淋巴细胞亚群重建的影响.方法 雌性BALB/c小鼠60只经6 Gy照射后随机分为照射组、G-CSF+照射组.G-CSF+照射组小鼠给与重组人G-CSF 100μg·kg-1·d-1皮下注射,连续14 d,照射组小鼠给与等体积磷酸盐缓冲液(PBS)皮下注射,连续14 d,另设空白对照组小鼠20只.照后7、14、21和28d颈部脱臼处死小鼠,取出胸腺制成单个核细胞悬液,使用流式细胞仪检测胸腺CD4+CD8+、CD4+CD8-、CD4-CD8+、CD4-CD8-细胞亚群的比例.使用全血细胞计数仪进行外周血白细胞计数及淋巴细胞绝对值测定,流式细胞仪检测照后14、28、60 d外周血淋巴细胞亚群比例,CCK-8法检测脂多糖(LPS)、刀豆蛋白A(ConA)刺激后脾脏淋巴细胞增殖指数.结果 照后7 d胸腺CD4+CD8+细胞比例降至最低,14 d出现反弹,21 d再次下降,以后逐渐恢复.照后28 d G-CSF+照射组CD4+CD8+细胞比例恢复正常并高于照射组(t=12.22,P＜0.05).照后21 d G-CSF+照射组CD4-CD8+细胞比例亦明显高于照射组(t=3.77,P＜0.05).照后7 d外周血白细胞及淋巴细胞绝对值降至最低,照后14和60 d,G-CSF+照射组CD3+CD8+T细胞比例明显高于照射组(t=4.31,5.78,P＜0.05),但两组间CD3+CD4+T细胞比例在各时间点无明显差异.G-CSF+照射组B淋巴细胞比例在照后14 d明显低于照射组(t=7.3,P＜0.05),但很快恢复,照后28和60 d两组B淋巴细胞比例差异无统计学意义.照后14 d,G-CSF+照射组脾脏淋巴细胞对LPS、ConA刺激的增殖指数分别为照射组的4.37和2.98倍.结论 G-CSF可促进照后胸腺细胞亚群的恢复,提高外周血淋巴细胞数量,调节外周血淋巴细胞亚群比例,提高淋巴细胞增殖功能,促进急性辐射损伤后中枢及外周免疫重建.

Abstract：

Objective To investigate the effects of recombinant human granulocyte colonystimulating factor(G-CSF) on central and peripheral lymphocyte subset reconstitution after a sublethal dose of irradiation. Methods Sixty female BALB/c mice were given a 6.0 Gy γ-ray total body irradiation (TBI) and randomly divided into 2 equal groups. The mice in G-CSF + TBI group were injected subcutaneously with recombinant human G-CSF 100 μg·kg-1·d-1 for 14 d and the mice in TBI group were injected subcutaneously with the same volume of phosphate buffered solution (PBS) once daily for 14 d. 7,14,21, and 28 d later the mice were killed and their thymus were taken out to prepare of the mononuclear cell suspension to analysis the percentage of thymic CD4 + CD8 + double positive, CD4 +CD8 - single positive, CD4 - CD8 + single positive and CD4 - CD8 - double negtive cells by flow cytometry. Peripheral blood samples were collected from the caudal vein twice a week, and the white blood cell(WBC) counts and absolute number of lymphocytes were assessed by automatic hemocyte analyzer. 14,28, and 60 d later blood samples were collected from angular vein to examine the peripheral lymphocyte subsets by flow cytometry. Cell counting kit-8 was used to detect lipopolysaccharide (LPS) or concanavalin A (ConA) stimulated splenic lymphocyte proliferation. Results The percentage of thymic CD4 + CD8 +double positive cells decreased 7 d after irradiation, rebounded at 14 d, decreased again at 21 d, and then got a permanent recovery. 28 d after irradiation the percentage of thymic CD4 + CD8 + double positive cells in the G-CSF + TBI group recovered to normal and was significantly higher than that of the TBI group (t =12. 22, P < 0. 05). 21d after irradiation the percentage of thymic CD4-CD8 + single positive cells of the G-CSF + TBI group was significantly higher than that of the TBI group (t = 3.77, P < 0. 05). The peripheral WBCs and lymphocytes decreased to the lowest levels 7 d after irradiation and then gradually increased, however, WBCs and lymphoeytes of the G-CSF + TBI group began to recover earlier and faster than the TBI group. The proportion of CD3 + CD8 + T cells of the G-CSF + TBI group was significantly higher than that of the TBI group 14 and 60 d after irradiation (t =4. 31,5.78, P <0.05). But there was no significant difference in the proportion of CD3 + CD4 + T cells between the two groups. The proportion of B lymphoeytes of the G-CSF + TBI group was significantly lower than that of the TBI group 14 d after irradiation(t =7.30, P <0.05), but it recovered quickly, and there were no significant differences in the proportion of B lymphoeytes between the two groups 28 and 60 d after irradiation. The proliferation indexes of splenic lymphocytes in response to LPS and ConA in the G-CSF + TBI group were 4. 37 and 2.98 times higher than those in the TBI group 14 d after irradiation. Conclusions G-CSF could accelerate the recovery of central and peripheral lymphocyte subsets, raise the absolute number of lymphocytes, and enhance their proliferative function, which contributes to the central and peripheral immune reconstitution after acute irradiation.     

γ射线照射后小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其意义

目的 观察γ射线照射对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)亚群的影响,探讨辐射诱发的免疫损伤作用机制.方法 C57BL/6小鼠经6 Gy γ射线照射后1～28 d取胸腺、脾脏称重并计算脏器系数,测量外周血WBC总数,流式细胞仪检测外周血和脾脏CD4+T细胞、Tregs细胞亚群的变化.结果 照射后1 d,胸腺和脾脏系数即明显下降,7 d降至最低,至照后28 d仍未恢复到对照组水平.WBC于照后1～7 d持续降至最低,14 d开始恢复,至28 d仍显著低于对照组.外周血CD4+T细胞在照后1 d-过性降低后逐渐增高,照后28 d基本接近对照水平;脾脏CD4+T细胞在照后7 d虽略有降低,但在14和28 d基本维持在对照水平.外周血Tregs细胞在照后1 d即开始升高,7 d达峰值,14和28 d仍明显高于对照组;脾脏Tregs于照后1 d即显著增至最高,而后缓慢降低,至照后28 d出现有统计学意义的降低(t=2.731,P＜0.05).结论 小鼠经6 Gy γ射线全身照射后胸腺和脾脏免疫组织严重受损,免疫细胞数量减少;而具有免疫抑制作用的Tregs细胞比例照后明显增高,揭示该亚群与辐射所致的小鼠免疫功能受抑和免疫调节失衡密切相关.

Abstract：

Objective To observe the effect of γ-ray irradiation on CD4 + CD25 + regulatory T cells (Tregs),and to investigate the mechanism of immune injury induced by irradiation.Methods The thymus and spleen of C57BL/6 mice were taken and weighted 1-28 d after γ-ray irradiation,and the organ coefficients were calculated.The amount of mouse peripheral WBC measured,CD4 + T cells and Tregs in peripheral and splenic were analyzed by flow cytometry.Results Coefficients of mouse thymus and spleen decreased significantly 1 d post irradiation,and reached to the bottom at 7 d.Coefficients did not recover to control level 28 d after radiation.Peripheral WBC continuously decreased and reached the bottom at 7 d,and did not recover to control level up to 28 d postirradiation.Peripheral CD4 + T lymphocyte temporally reduced at 1 d,while it increased at 7 d,and it approached to control level at 28 d after radiation.Splenic CD4 + T cells slightly reduced at 7 d however,they basically maintained as the same level as control 14 d and 28 d after radiation.Peripheral Tregs ascended at 1 d and reached the peak at 7 d,and reduced at 14 d and 28 d postirradiation,although they still were significantly higher than those of control group.At the same time,splenic Tregs increased significantly and achieved peak value at 1 d,and then gradually decreased and reached the minimum at 28 d after irradiation,which were significantly lower than those of control group( t =2.731,P ＜ 0.05).Conclusions Mouse thymus and spleen were injured severely,and the number of immunocytes decreased after 6 Gy whole body γ-ray irradiation.However,Tregs with immunosuppressive action increased significantly postirradiation,revealing that Tregs were closely correlated with immune function depression and immunomodulation imbalance induced by ionizing radiation.     

HIF-1α及Th17/Treg在非酒精性脂肪性肝病患者外周血中表达及临床意义

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Th17/Treg细胞水平变化情况。方法选取自2016年8月至2018年4月河北北方学院附属第一医院收治的79例NAFLD患者为NAFLD组,另选取同期健康体检者50例为健康组。比较两组外周血HIF-1α和Th17/Treg细胞水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线对HIF-1α和Th17/Treg细胞水平应用于NAFLD患者中的诊断效能进行分析。结果 NAFLD组外周血HIF-1α水平高于健康组,两组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。NAFLD组外周血Th17、Treg在总CD4+T淋巴细胞中的比值以及Th17/Treg水平较健康组高(P <0. 05)。经ROC曲线分析可得:联合检测外周血HIF-1α、Th17、Treg以及Th17/Treg细胞水平诊断NAFLD的曲线下面积、敏感性、特异性均高于各项指标单独检测(P <0. 05)。结论 NAFLD患者外周血HIF-1α、Th17/Treg细胞水平均存在明显高表达,联合检测有利于早期诊断NAFLD。     

大鼠急性肺损伤病理变化的形态计量研究

目的 用体视学方法定量研究大鼠经胸部撞击复合内毒素所致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型的组织病理学特点及变化规律. 方法 12只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、ALI致伤1,2,7d组,每组3只.各组取肺组织行HE染色,分别测试肺实质百分比、肺泡间隔厚度、肺泡截面积及肺泡腔内炎性细胞计数. 结果 ALI致伤1,2d组肺泡腔内炎性细胞计数分别为(13.08 ±6.60)个、(26.81±16.86)个,正常对照组为(0.89±0.78)个,致伤组均较对照组明显增加(P＜0.01).ALI致伤1,2,7d组肺实质百分比分别为(23.77±3.91)％、(27.32±5.95)％、(44.57±6.46)％,正常对照组为(19.44±2.48)％,致伤组均较对照组明显增加(P＜0.01).ALI致伤1,2,7d组肺泡间隔分别为(3.50±2.18) μm、(7.67±7.14) μm、(17.23±13.08) μm,正常对照组为(2.87±1.75) μm,致伤组均较对照组逐渐增厚(P＜0.05).ALI致伤1,2,7d组肺泡截面积分别为(1 653.90±950.77)μm2、(1 328.15±802.30) μm2、(1 055.20±1 002.75) μm2,正常对照组为(1 641.30 ±906.60)μm2,致伤组均较对照组逐渐减少(P＜ 0.05). 结论 大鼠经胸部撞击后复合静脉注射内毒素可建立病理形态上符合ALI的动物模型.通过体视学方法定量检测可反映ALI的组织病理学特点及变化规律.