8-溴-7-甲氧基白杨素对Huh-7细胞系肝癌干细胞样细胞自我更新的影响

目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)抑制源自人肝细胞癌Huh-7细胞系细胞肿瘤球形成细胞即肝癌干细胞样细胞(LCSLCs)自我更新作用。方法:体外培养人肝癌Huh-7细胞系细胞,干细胞条件培养基悬浮培养法富集和扩增LCSLCs。MTT比色法测定细胞活性;肿瘤球形成法检测自我更新能力;FITC-CD133标记FCM分析CD133表达。结果:干细胞条件培养基悬浮培养6天,Huh-7细胞形成非粘附、三维生长的肝癌球体细胞即LCSLCs。与Huh-7细胞相比,BrMC抑制LCSLCs细胞活性作用更强(P<0.05),并以浓度依赖性方式减少肿瘤球数目(P<0.05),降低CD133蛋白表达(P<0.05)。结论:干细胞条件培养基悬浮培养能分离和富集LC-SLCs;BrMC具有抑制LCSLCs细胞自我更新能力作用,其作用机制与降低干细胞标记物CD133蛋白的表达相关。     

BrMC 对肿瘤相关巨噬细胞条件培养基诱导内皮细胞管结构形成的影响

目的：研究8-溴-7-甲氧基白杨素（BrMC）对肝癌干样细胞活化的 THP-1源性肿瘤相关巨噬细胞条件培养基诱导人脐静脉内皮 HUVEC-12细胞系细胞管结构形成的作用。方法：存在或缺失 BrMC 处理的SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞条件培养基孵育 THP-1源性巨噬细胞。细胞免疫荧光检测 CD68和 CD163表达。ELISA 检测 IL-10和 IL-12浓度。内皮管结构形成试验测定相应处理的肿瘤相关巨噬细胞条件培养基对HUVEC-12细胞管结构形成的影响。结果：肿瘤相关巨噬细胞 CD163高水平表达,细胞因子分泌谱为 IL-10high/IL-12low。BrMC 降低肝癌干样细胞活化的肿瘤相关巨噬细胞条件培养基 VEGF 浓度,抑制其诱导 HUVEC-12细胞管结构形成作用。结论：BrMC 逆转肝癌干样细胞活化的肿瘤相关巨噬细胞条件培养基诱导 HUVEC-12细胞管结构形成,其机制涉及减少 VEGF 分泌。     

ADFMCHR激活PPAR γ抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长

目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)激活过氧化物酶活化因子受体γ(PPARγ)抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞。台盼蓝拒染法检测细胞生长;平皿克隆形成法检测细胞锚定依赖性生长;软琼脂克隆形成法检测细胞集落形成能力。结果:细胞计数结果显示,ADFMChR延长SMMC-7721细胞倍增时间,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量依赖性。但是对预先用PPARγ阻断剂GW 9662孵育30分钟的SMMC-7721细胞,ADFMChR的生长抑制作用明显降低;平皿克隆、软琼脂克隆形成法结果显示,ADFMChR抑制SMMC-7721细胞的锚定依赖性生长能力和锚定非依赖性生长能力,而GW 9662可以降低ADFMChR对SMMC-7721细胞的增值抑制作用。结论:ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长作用,其机制与激活PPARγ有关。     

染料木黄酮对顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的增敏作用

目的: 探讨染料木黄酮增强顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞生长抑制、诱导凋亡及NF-κB表达的影响.方法: 采用MTT法、透射电镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和免疫组化技术研究染料木黄酮,顺铂,染料木黄酮与顺铂联合3组药物处理肝癌细胞后生长抑制、形态学变化、诱导凋亡和对NF-κB表达的影响.结果: MTT法证实联合组对细胞抑制作用最强,作用24 ,48 h后(A570nm: 0.497±0.030→0.295±0.098,0.791±0.042→0.312±0.019,P<0.01).镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变.流式细胞仪检测凋亡以联合组最强,细胞周期阻滞于G2/M期.免疫组化技术检测顺铂作用后NF-κB表达(64.9±5.4)%,联合组作用后(23.4±2.1)%(P<0.01).结论: 染料木黄酮通过抑制激活NF-κB表达,增强顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡.     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导白血病Jurkat细胞凋亡

目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-5-hydroxy-7-methoxychrysin,BrMC)诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用。方法:体外培养Jurkat细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。二氯荧光素二乙酯(2'7'-dichlorofluoresein diacetate,DCFH-DA)荧光探针FCM检测细胞活性氧。结果:BrMC以剂量依赖方式诱导annexinⅤ阳性细胞和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.05)。BrMC促进细胞活性氧生成,10 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)预孵育能有效阻断Jurkat细胞活性氧生成,并减弱其诱导细胞凋亡效应。结论:BrMC具有诱导Jurkat细胞凋亡作用,其作用与促进细胞活性氧生成有关。     

8-溴-7-甲氧基白杨素通过上调Bim诱导肺癌A549细胞凋亡

目的:探讨8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡作用及分子机制。方法:流式细胞术(PI染色)分别检测白杨素及BrMC处理后的细胞凋亡。蛋白印迹法检测BrMC对Bim蛋白表达以及N-乙酰半胱氨酸对BrMC介导Bim表达的影响。siRNA沉默Bim基因后流式细胞仪检测BrMC对细胞凋亡影响。结果:BrMC对A549细胞的凋亡作用较白杨素更强。经BrMC(10μmol/L)处理后,Bim蛋白水平呈时间依赖性增加。siRNA干扰后,BrMC诱导的A549细胞凋亡率明显降低。结论:BrMC通过上调Bim诱导肺癌A549细胞的凋亡。     

基于EphA1/EphrinA1反馈环的表达探讨BrMC调控子宫腺肌病的机制

目的:探究肝配蛋白A受体1(EphA1)及其配体(EphrinA1)在子宫腺肌病(AM)患者相关组织中的表达情况,并观察8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)处理对子宫腺肌细胞的影响。方法:采用HE染色对AM患者子宫肌层异位内膜组织、非异位内膜组织及子宫肌瘤患者正常内膜组织的形态学变化进行观察;采用免疫组织化学染色检测3种组织中EphA1与EphrinA1表达情况;分离并培养子宫腺肌细胞,分别使用浓度为2.5、5、10μmol/L BrMC的培养基处理细胞,采用MTT法检测不同处理时间后细胞存活率,处理培养48 h后收集细胞,采用TUNEL染色与Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;采用细胞划痕实验检测细胞迁移;采用RT-qPCR和Western blot检测细胞中EphA1、EphrinA1 mRNA与蛋白的表达水平。结果:AM患者异位和非异位子宫内膜组织中EphA1、EphrinA1表达水平均高于对照组(P<0.05);经鉴定发现成功分离子宫腺肌细胞,波形蛋白与α-平滑肌肌动蛋白均表达;经不同浓度BrMC处理后,与对照组比较,各处理组子宫腺肌细胞存活率下降,凋亡率增...     

8-溴-7-甲氧基白杨素增强三氧化二砷对白血病U937细胞毒性

目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素增强三氧化二砷(Arsenic Trioxide,ATO)对急性单核细胞白血病U937细胞毒性作用.方法:MTT比色法检测细胞毒性,流式细胞仪(FCM)测定细胞凋亡率,Western blot分析Bax和Bcl-XL蛋白表达.结果:2.0 ?M BrMC和ATO联合处理U937细胞的毒...     

甘草黄酮诱导肝癌ＳＭＭＣ-７７２１细胞凋亡及其对相关蛋白ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达的影响

目的:探讨甘草黄酮(GF9)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GF9对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,Hoechst染色法和电镜观察GF9诱导细胞凋亡的形态变化,流式细胞仪检测GF9诱导的细胞凋亡率,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白survivin和pro-caspase-3表达水平的变化.结果:GF9可抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈时间剂量效应;400 μmol/L GF9可诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;随着GF9作用时间的延长,survivin和pro-caspase-3表达下调.结论:GF9能诱导SMMC-7721细胞凋亡,这可能与GF9能够引起抑制凋亡蛋白survivin的下调有关.     

索拉非尼诱导的耐药性肝癌细胞的生物学特征分析

目的 探讨索拉非尼对肝癌细胞Huh-7、PLC/PRF/5以及原代细胞T1115、T1224的影响及索拉非尼耐受型细胞的生物学特征.方法 通过长时间10 μmol/L索拉非尼处理建立索拉非尼耐药细胞模型,采用MTS法和克隆形成实验测定不同浓度索拉非尼处理对不同细胞的增殖影响.采用Western blot检测细胞内p-AKT、p-STAT3以及干性相关基因(Nanog、Sox2、Oct4)的表达情况;采用RT-PCR检测多药耐药基因ABCC1的表达,并通过划痕实验和Transwell实验检测索拉非尼耐药细胞和亲本对照细胞的迁移能力的变化情况.结果 索拉非尼对肝癌细胞系和原代细胞的增殖抑制作用随着索拉非尼浓度的提高而增强,并且索拉非尼能够有效地下调p-AKT、p-STAT3的表达.成功建立了PLC/PRF/5索拉非尼耐药细胞株模型,并发现耐药细胞相对于亲本细胞的增殖能力显著下降,但迁移能力显著增强.进一步实验结果表明耐药细胞株高表达ABCC1、Nanog、Sox2和Oct4.结论 索拉非尼能够有效地抑制肝癌细胞的生长,其耐受型细胞具有更强的迁移能力,并且具有干细胞样特征.     

吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 探讨吲哚-3-甲醇(13C)对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的I3C(100、150、200、250、300、350 μmol/L)处理细胞48 h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白.结果 I3C能够抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250 μmol/L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol/L时,大量细胞凋亡.I3C浓度高于200 μmol/L时CytC、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,且随着I3C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加.结论 I3C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖并诱导其发生凋亡.     

Replication-incompetent Adenovirus Vector-mediated MDA-7/IL-24 Selectively Induces Growth Suppression and Apoptosis of Hepatoma Cell Line SMMC-7721

In order to investigate the effect of replication-incompetent adenovirus vector expressing MDA-7/IL-24 on tumor growth and apoptosis of human hepatocellular carcinoma （HCC） cell line SMMC-7721 and normal liver cell line L02, the recombinant replication-incompetent Ad.mda-7 virus vector was constructed and infected into the HCC cell line SMMC-7721 and normal liver cell line L02. RT-PCR was performed to examine the expression of MDA-7 mRNA. The concentrations of MDA-7/IL-4 in culture superuatants were determined by using ELISA. MTT and Hoechst staining assay were applied to observe the inhibitory and killing effects of MDA-7 on the HCC cells. By using flow cytometry, the apoptosis, cell cycle and proliferation of SMMC-7721 and L02 cells were measured. The results showed recombinant replication-incompetent virus expressing MDA-7/IL-24 was constructed successfully, and RT-PCR revealed that it could mediate the high expression of the exogenous gene MDA-7/IL-24 in SMMC-7721 and L02 cells. The expression of MDA-7/IL-24 proteins in the culture superuatant was detectable by ELISA. Ad.mda-7 infection induced apoptosis and growth suppression in SMMC-7721 cells and an increased percentage of HCC cells in the GyM phase of the cell cycle, but not in L02 cells. It was concluded that mda-7/IL-24 gene, mediated with replication-incompetent adenovirus vector, could selectively induce growth suppression and apoptosis in HCC cell line SMMC-7721 but without any toxic side-effect on normal liver line L02.     

白介素-8对SKOV3细胞系卵巢癌干样细胞特性的影响

目的:研究白介素-8(IL-8)能否促成人卵巢癌SKOV3细胞系细胞肿瘤干细胞样细胞特性.方法:用添加或未添加重组人IL-8(rhIL-8:10.0 ng/mL)的干细胞条件培养基处理SKOV3细胞.肿瘤球形成和琼脂集落形成试验测定球形成率和集落形成率.蛋白质印迹分析肿瘤干细胞标志蛋白CD133和CD44表达水平.结果:rhIL-8(10.0 ng/mL)显著地增高SKOV3细胞肿瘤球形成率和琼脂集落形成率.此外,rhIL-8(10.0 ng/mL)上调SKOV3细胞CD133和CD44蛋白表达.结论:rhIL-8具有促进SKOV3细胞肿瘤干细胞样细胞特性作用.     

联合索拉非尼与TRAIL对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的:研究多激酶抑制剂甲苯磺酸索拉非尼(SOR)是否具有增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析亚二倍体(sub-G1)细胞百分率。比色法测定细胞Caspase-3活性。AO/EB双染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态。结果:SOR(5μmol/L)和TRAIL(100ng/mL)以及两者合用作用48小时HT-29细胞的sub-G1百分率分别是4.65%±2.33%、5.29%±2.80%和42.6.50%±4.65%;HT-29细胞的Caspase-3的活性分别是培养基组的1.24、1.37和9.51倍。两者合用展示出细胞核染色质固缩和碎裂的典型凋亡细胞形态。结论:亚细胞毒性浓度的SOR具有增强TRAIL诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。