哈巴苷及哈巴俄苷对肾上腺素损伤血管内皮细胞的保护作用

目的将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分成对照组、肾上腺索损伤组（Adr组）、哈巴苷干预组及哈巴俄苷干预组,Adr组及药物干预组分别加入10μg/ml肾上腺素,药物干预组分别加入0．1mmol／L的哈巴苷及哈巴俄,用四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞活力;取细胞上清液,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量,酶联免疫吸附法（ELISA）测定E-选择素含量。结果与对照组相比,Adr组细胞活力降低,细胞LDH漏出增加、E-选择索和MDA含量增加（P均〈0．05）;哈巴苷及哈巴俄苷均可抑制Adr引起的细胞活力降低,减少细胞LDH漏出、降低E-选择素和MDA含量。结论哈巴苷及哈巴俄苷能对抗Adr引起的损伤,保护血管内皮细胞。     

Diplacone对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的采用同型半胱氨酸(Hcy)孵育体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,后用Diplacone加以干预,观察Diplacone对HUVEC的影响,探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用。方法先用不同浓度的Hcy预处理HUVEC,选出Hcy的最适损伤浓度(2 mmol/L)和时间(12 h),在HUVEC培养基中加入不同浓度Diplacone预处理2 h后加入2 mmol/L Hcy作用12 h,通过MTT法检测细胞活性变化,Hoechst33342核染色检测细胞核损伤程度,Western blot检测与细胞损伤有关的血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和P-选择素的表达水平,以此衡量Diplacone对Hcy诱导的HUVEC损伤的保护作用。结果与对照组相比,2 mmol/L Hcy组细胞活性显著降低(P0.01),10μmol/L以内Diplacone具有明显的剂量依赖性抑制2 mmol/L Hcy诱导的HUVEC活性损伤并抑制Hcy所致的VCAM-1和P-选择素的表达升高(P0.01)。结论 Diplacone对Hcy所致的HUVEC内皮损伤具有保护作用。     

同型半胱氨酸对内皮细胞tPA影响的实验研究

目的观察同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）组织型纤溶酶原激活物（tPA）抗原含量的影响。方法将体外培养的HUVEC分为5个实验组0、10、50、200、500μmol／L浓度Hcy组和上述各Hcy共同培养组，培养24h后，酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中的tPA抗原含量。结果与单纯培养基组（0μmol／L Hcy）相比，10μmol／L Hcy组（生理浓度组）tPA含量明显增高（P〈0．05）。超生理剂量Hcy时，tPA含量依赖性地下降，但与对照组无明显区别（P〈0．05）。而与生理浓度Hcy相比，当Hcy浓度达到500μmol／L时，tPA抗原合成明显减少（P〈0．05）。加入叶酸后，可以减弱Hcy抑制tPA抗原合成的作用，500μmol／LHcy共同培养组与单纯Hcy组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论高Hcy可以减少内皮细胞tPA抗原的分泌，可能降低纤溶系统的活性。生理浓度的Hcy可以增加内皮细胞tPA抗原的分泌，可能提高纤溶系统的活性。     

同型半胱氨酸对内皮细胞凋亡及JNK表达的影响

目的了解同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对内皮细胞凋亡及JNK表达的影响。方法用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后,TUNEL方法检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞磷酸化JNK的表达。结果随着Hcy浓度的升高,细胞凋亡数目明显增加,各组细胞磷酸化JNK的表达也逐步增强,且具有显著性正相关。结论Hcy能引起内皮细胞凋亡及磷酸化JNK表达的增强。     

葛根素对同型半胱氨酸损伤内皮细胞的影响

目的探讨葛根素对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的保护作用。方法建立同型半胱氨酸（homocysteine，Hey）诱导的人脐静脉内皮细胞株（ECV304细胞）损伤模型，通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同浓度鹞根素对ECV304细胞增殖的影响。结果HCY明显抑制ECV304细胞增殖，葛根素浓度为10-500μ/ml时，细胞活力较模捌组有明显改善；其中当葛根素浓度为100μg／ml时细胞活力最好（P〈0．001）；但与正常组比较仍有显著性差异（P〈0．001）。当葛根索浓度为20mg／ml时，细胞活力较模型组低。结论葛根索在一定浓度范围对内皮细胞有保护作用。     

依那普利抑制同型半胱氨酸致血管内皮损伤的保护作用

目的 探讨依那普利对同型半胱氨酸（Hcy）引起的血管内皮细胞损伤的保护作用。 方法 取大鼠主动脉内皮细胞，培养并传代备用，进行血管内皮细胞药物保护实验。分为正常对照组（正常组）:不加Hcy及依那普利；损伤组:给予Hcy 2000 μmol/L；干预组:在给予Hcy 2000 μmol/L的同时再给予依那普利，依那普利的浓度不同又分为干预A、B、C、D和E组，其依那普利的浓度依次为10，20,40,80和160 nmol/L。内皮细胞的鉴定利用因子VIII间接免疫荧光；利用光学仪器进行血管内皮细胞形态学观察；测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）的活性；利用CCK8试剂检测各组血管内皮细胞活力；利用细胞计数板测定活细胞百分率。 结果 :① Hcy损伤组血管内皮细胞呈现出细胞损伤形态学改变；② 各组细胞LDH活性与正常对照组(100%)比较分别为:损伤组细胞LDH活性为（157 ± 17）%，干预C组（依那普利浓度40 nmol/L）细胞活性为（126 ± 7）%。干预C组较损伤组LDH活性显组降低（P<0.01）;③血管内皮细胞活力:正常组细胞活力定为 100%，损伤组为（52 ± 6）%，干预C组为（75 ± 6）%。干预C组细胞活力较损伤组相比细胞活力显著升高（P<0.01）；④ 活细胞百分率测定，与正常对照组[（98 ± 1）%]比较，损伤组活细胞比例[（72 ± 4）%]显著降低（P<0.01）；干预C组活细胞比例为(87 ± 3)% 较损伤组显著增加（P<0.01）。 结论 依那普利可改善Hcy对血管内皮细胞的损伤，具有保护作用。     

通心络胶囊对同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨通心络对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为对照组、同型半胱氨酸组、通心络组和阿托伐他汀组,处理48 h后,采用MTT法观察内皮细胞的增殖情况;以荧光定量逆转录聚合酶链反应方法比较各组间超氧化物歧化酶(SOD)mRNA表达水平;检测细胞培养液的SOD活性和丙二醛含量.结果 Hcy组细胞活力较对照组明显降低(P＜0.05),通心络组和阿托伐他汀组细胞活力较Hcy组均明显改善(P＜0.05).Hcy组SOD mRNA表达水平显著低于对照组 (P＜0.05);通心络和阿托伐他汀组SOD mRNA表达水平均显著高于Hcy组(P＜0.05).Hcy组SOD活性较对照组显著下降(P＜0.05),丙二醛水平较对照组显著增加(P＜0.05).通心络组和阿托伐他汀组SOD活性均较Hcy组明显增加(P＜0.05),而丙二醛水平显著减少(P＜0.05).结论 通心络对同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关.     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

为探讨同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响，采用400umol／L同型半胱氨酸作用于培养的人脐静脉内皮细胞，以^35S-Na2SO4为示踪物标记细胞合成的蛋白聚糖，通过离子交换层析，凝胶过滤层析分离蛋白聚糖。结果发现，实验组培养液中总蛋白聚糖降低，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及硫酸软骨素-硫酸皮肤素蛋白聚糖含量也降低，但其百分含量未见改变。细胞层中蛋白聚糖未见明显变化。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞的氧化应激损伤和白细胞介素-8分泌的影响

同型半胱氨酸(Hcy)是近年来确认动脉粥样硬化的一项独立的新的危险因素.本实验模拟在高浓度Hcy的环境下,观察血管内皮细胞氧化应激毒性损伤相关指标,并了解白细胞介素-8的分泌情况,进一步探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制.     

高血压伴高同型半胱氨酸患者血管内皮细胞损伤的相关标志物水平变化观察

目的分析高血压伴高同型半胱氨酸(Hcy)患者血管内皮细胞损伤及血栓前状态的相关标志物水平变化的临床诊断价值。方法选取我院收治的高血压伴高Hcy患者80例为观察组,选择同期Hcy水平正常的原发性高血压患者60例为对照组,选择同期门诊体检健康者40例为正常组。比较三组研究对象的血管内皮细胞损伤及血栓前状态的相关标志物的水平情况。结果观察组患者Hcy、血栓调节蛋白(TM)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血管性假性血友病因子(v WF)、血小板α颗粒膜蛋白-140(GMP-140)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)水平明显高于对照组与正常组(均P 0. 05),而叶酸、维生素B12及组织型纤溶酶原激活物(t-PA)水平明显低于对照组与正常组(均P 0. 05)。结论高血压伴高Hcy患者的Hcy、TM、hs-CRP、v WF、GMP-140、PAI-1、FIB、D-D水平较高,而叶酸、维生素B12、t-PA水平较低。     

内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对同型半胱氨酸致人血管内皮细胞损伤的拮抗作用

目的探讨内皮抑素(ENDO)-血管内皮细胞抑制因子(VEGI)重组腺病毒对同型半胱氨酸(Hcy)致人血管内皮细胞损伤的拮抗作用。方法应用内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子融合蛋白重组腺病毒(Ad-hENDOVEGI151)转染Hcy损伤的人血管内皮细胞ECV304,用免疫印迹法检测受染细胞融合蛋白的表达,用自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,用台盼蓝染色法计算细胞存活率,用ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达。结果制备的重组腺病毒具有较高的转基因效率,Ad-hENDO-VEGI151重组腺病毒能够在ECV304细胞中表达41 kDa大小的融合蛋白,Hcy(0.1~1.0 mmol/L)呈浓度依赖性地增加细胞LDH漏出量和降低细胞存活率,重组腺病毒能够有效地拮抗Hcy对人血管内皮细胞的损伤作用(P0.05)。结论内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对Hcy致人血管内皮细胞损伤有拮抗作用,为治疗高同型半胱氨酸血症等疾病提供新的思路。     

叶酸对同型半胱氨酸损伤内皮细胞的保护作用及可能机制

为探索叶酸治疗高同型半胱氨酸血症的可能机制 ,将培养兔主动脉内皮细胞加入兔天然低密度脂蛋白后分为 6组 :对照组、叶酸组、四氢喋呤组、同型半胱氨酸组、叶酸同型半胱氨酸组和四氢喋呤同型半胱氨酸组。以不同时间内脂质过氧化程度、一氧化氮生成量及一氧化氮合酶的活性为检测指标。结果发现 ,叶酸同型半胱氨酸组和四氢喋呤同型半胱氨酸组相似 ,皆显示出对同型半胱氨酸损伤内皮细胞各项作用的拮抗效应 ,脂质过氧化程度降低、一氧化氮的生成量明显增加 (P <0 .0 1,与同型半胱氨酸组相比 ) ,一氧化氮合酶活性增高 (++)。此结果提示叶酸具有和四氢喋呤同样的效应 ,可能通过对一氧化氮系统的保护作用拮抗同型半胱氨酸和低密度脂蛋白对内皮细胞的协同损伤作用。     

同型半胱氨酸对内皮细胞及脂质过氧化的影响

为观察同型半胱氨酸对内皮细胞,内皮细胞一氧化氮系统及脂质过氧化的影响,在培养兔主动脉内皮细胞中加入兔天然低密度脂蛋白后分为七组;对照组不加任何药物,叶酸组;四氢喋呤ＢＨ４）组,一氧化氮供体药ＳＩＮ－１组,同型半胱氨酸组;同型半胱氨酸加叶酸组和同型半胱氨酸加四氢喋呤组。     

红景天苷通过抑制内质网应激减少高同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的研究红景天苷对高同型半胱氨酸诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)预处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC),再使用1 mmol/L Hcy与不同浓度红景天苷共同作用HUVEC。24 h后,MTT法检测细胞存活率。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的基因表达水平,Western blot检测Bip、CHOP蛋白表达水平、PKR内质网激酶(PERK)及内质网核信号转导蛋白1α(IRE1α)磷酸化水平。结果与正常对照组比较,Hcy组细胞存活率降低,Bip和CHOP的基因和蛋白水平升高,PERK和IRE1α的磷酸化水平升高(P0.05)。与Hcy组比较,高浓度红景天苷(300μmol/L)与Hcy共同作用后细胞存活率升高,Bip和CHOP的基因和蛋白表达水平下降,PERK和IRE1α的磷酸化水平下降(P0.05)。结论红景天苷对高同型半胱氨酸诱导的HUVEC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激信号通路的活化有关。     

黄芩苷对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察黄芩苷对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞的保护作用。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(EAhy926)分成对照组、ox-LDL组、黄芩苷组和不同浓度的黄芩苷(25、50和100 mg/L)+ox-LDL组,培养24 h。采用CCK-8检测细胞活力,ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果与ox-LDL组相比,50、100 mg/L黄芩苷+ox-LDL组细胞存活率明显升高(P0.05),细胞培养上清中TNF-α和IL-6水平均明显下降(P0.05),Bax/Bcl-2比值降低(P0.05)。结论黄芩苷对预防内皮细胞损伤的保护功能可能是通过抑制炎症因子,减少细胞凋亡,增强细胞活性实现的。     

甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对内皮细胞的损伤作用

目的　观察甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对内皮细胞的损伤作用。方法　将 18只新西兰白兔 ,随机分为甲硫氨酸组 (9只 )和对照组 (9只 )。分别喂予添加 3%甲硫氨酸的饲料和普通颗粒饲料 ,第 16周末 ,取血和留取主动脉进行指标测定。结果　甲硫氨酸组血清甲硫氨酸和同型半胱氨酸浓度显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,血浆内皮素和血管性血友病因子浓度显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,而血浆一氧化氮含量和动脉一氧化氮合酶活性显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,主动脉尚未剥脱的和明显损伤的内皮细胞血管性血友病因子表达均明显少于对照组。结论　短期喂食甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症 ,即使尚未引起明显的内膜增厚和脂质沉着 ,对血管内皮细胞的功能和结构也有显著的损伤作用。     

上调SIRT1减少同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 研究同型半胱氨酸处理对血管内皮细胞中SIRT1表达的影响,并探讨上调血管内皮细胞中SIRT1表达对同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡的影响.方法 建立同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡模型,通过CCK8试剂盒检测细胞活性,通过流式细胞仪检测细胞凋亡,通过qPCR法检测mRNA表达和通过免疫印记法检测蛋白表达.结果...     

同型半胱氨酸对高糖培养的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸（HCY）对高糖培养的血管内皮细胞产生活性氧和细胞间黏附分子-1（IcAM-1）mRNA表达的影响。方法体外培养人血管内皮细胞（ECV-304）,实验性模拟糖尿病的高HCY状态,随机分为4纽：正常对照组、高糖（HG）组、同型半胱氨酸（HCY）组和高糖加同型半胱氨酸（HG＋HcY）组。分别在培养12h、24h、48h进行相关的实验和检测。应用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶（s0D）活力和丙二醛（MDA）水平。用RT-PCR法测定（ICAM-1）mRNA表达的影响。结果与正常对照组相比,HG组和HCY组SOD活力明显降低（P〈O．01）,而MDA含量明显升高（P〈0．01）,ICAM-1mRNA表达上调且这种改变在HG组和HCY组更明显（P〈O．01）,并随时间延长有明显增加的趋势。结论HCY可能通过氧化应激机制上调ICAM-1的表达,从而损伤内皮细胞,加重糖尿病血管病变的发生、发展。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞骨架的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对内皮细胞形态及细胞骨架肌动蛋白的影响,并探讨骨架变化与内皮损伤的关系.方法:将体外培养的ECV-304内皮细胞株随机分为正常对照组、低剂量Hcy组、中剂量Hcy组和高剂量Hcy组.倒置相差显微镜观察各组培养24 h的内皮细胞的形态变化;并用Rhodamine-Phalloidin标记纤维状肌动蛋白(F-actin),Alexa flour 488-DnaseⅠ标记球状肌动蛋白单体(G-actin),激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察各组内皮细胞骨架肌动蛋白的不同变化.结果:正常对照组内皮细胞基本为梭形,呈典型的鹅卵石样外观;各Hcy组内皮细胞形态则明显不同,随着Hcy浓度的增加,胞体出现收缩,细胞变圆、渐至不规则,且轮廓增强,细胞间隙增大,甚至坏死脱落.LSCM下发现,正常对照组内皮细胞F-actin在周边形成致密周围带,胞质内有部分应力纤维;随着Hcy浓度的递增,外周致密带逐渐出现断裂、甚至消散;胞质内应力纤维变短、增粗,最终消失.而G-actin正常时仅局限在核周,在受到不同浓度Hcy作用后,明显向外周扩散,且荧光强度增大.结论:内皮细胞骨架肌动蛋白的形态变化与重排,可能是Hcy损伤内皮细胞的重要机制之一.