旋毛虫Ts43基因克隆和序列分析

目的：构建编码旋毛虫相对分子质量43000蛋白基因(Ts43)的原核表达载体,并对其序列进行分析。方法：应用RT—PCR方法从河南省南阳猪源旋毛虫获得旋毛虫基因Ts43,克隆人pGEMEX-1载体中构建重组质粒pGEMEX—Ts43,进行测序、同源性比较及抗原性预测分析。结果：所获基因的核苷酸序列与GenBank所登录的旋毛虫Ts43蛋白基因序列的同源性为99％。抗原性预测分析结果显示,河南省南阳猪源旋毛虫相对分子质量43000的蛋白分子上存在有4个明显抗原活性的结构域,分别位于距翻译起点第26～28、101～105、185～193、275～295个氨基酸残基的肽链上。结论：成功构建了旋毛虫相对分子质量43000蛋白抗原基因的原核表达载体。     

旋毛虫河南株TspE1基因克隆及多态性分析

目的：构建旋毛虫河南成囊前期幼虫编码相对分子质量为31000的蛋白原结构基因（TspE1）的重组质粒（pUC18－TspE1)，测定TspE1基因序列，分析旋毛虫河南株的基因多态性。方法：根据TspE1基因已知序设计合成一对引物，采用RT－PCR技术获取旋毛虫成囊前期幼虫目的基因，PCR产物经纯化后用BamHI、HindⅢ进行双酶切，定向克隆入pUC18质粒，转化在肠杆菌JM109；重组质粒用BamHI＋HindⅢ酶切有PCR扩增鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行了DNA序列测定，应用DNASIS软件进行同源性比较。结果：RT－PCR扩增获得成囊前期幼虫TspE1基因（871bp），EcoRI酶鉴定正确；筛选出7个阳性克隆，对目的基因的测序结果显示旋毛虫河南株TspE1基因有5种类型，但都与GenBank中的TspE1基因序列及其由其推测的氨基酸序列不完全相同。结论：应用RT－PCR技术手增出旋毛虫河南株成囊前期成幼虫编码相对分子质量为31000的抗原结构基因，证实TspE1基因在成囊前期幼虫已有表达，结果还提示旋毛虫河南株可能存在有基因多态性。     

旋毛虫排泄-分泌抗原重组的研究

获取旋毛虫肌幼虫排泄分泌（ＥＳ）抗原的部分结构基因并进行了克隆、鉴定和表达。首先采用ＲＴＰＣＲ技术从旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ中获取目的基因，经酶切分析后与融合表达载体ｐＥＸ３１Ｃ、ｐＥＸ３１Ｂ及非融合表达载体ｐＢＶ２２０连接，并将其转入大肠杆菌进行表达。结果：重组质粒在大肠杆菌中表达出相应的相对分子质量的重组蛋白，经纯化后的重组蛋白可与旋毛虫病猪阳性血清发生反应。提示：重组抗原可作为ＥＳ抗原的候选替代抗原     

旋毛虫排泄—分泌抗原重组的研究

获取旋毛虫肌幼虫排泄－分泌（ＥＳ）抗原的部分结构基因并进行了克隆、鉴定和表达。首先采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ中获取目的基因，经酶切分析后与金融表达载体ｐＥＸ３１Ｃ、ｐＥＸ３１Ｂ及非融合表达载体ｐＢＶ２２０连接，并将其转入大肠杆菌进行表达。结果：重组质粒在大肠杆菌中表达出相应的相对分子质量的重组蛋白，经纯化后的重组蛋白可与旋毛虫病猪阳性血清发生反应。提示：重组抗原可作为ＥＳ抗原的候选     

Magainin-Aurein杂合肽基因的合成与克隆

目的:构建抗菌肽Magainin-Aurein杂合肽基因,并将M-A杂合肽基因克隆到载体pUC18上.方法:根据已报道的抗菌肽Magainin-2和Aurein1.2基因的氨基酸序列,推导出其cDNA序列,采用基因片段合成结合PCR扩增的策略,分别获得大量完整的Magainin-2和Aurein1.2基因片段.将两者连接为杂合基因并克隆到载体pUC18上.结果:构建了M-A杂合肽基因重组质粒,经PCR扩增、酶切和DNA测序分析表明,杂合肽基因的DNA序列及阅读框完全正确.结论:pUC18-M-A重组质粒构建成功,为进一步亚克隆到表达载体并进行高效表达打下基础,并为其他抗菌肽杂合肽的制备提供了参考.     

旋毛虫Ts87抗原的免疫组化定位研究

为了确定旋毛虫Ts87抗原在虫体上的分布及其是否属于旋毛虫排泄分泌(ES)抗原,借助激光扫描共聚焦显微镜,采用免疫组化和Western Bloting等方法进行研究。结果表明:旋毛虫幼虫皮质层富含Ts87蛋白,而且Ts87抗原是旋毛虫排泄分泌抗原中的组分。     

河南猪株旋毛虫分子鉴定

目的：通过分析河南猪株旋毛虫18SrRNA基因同源性序列,对旋毛虫进行分子鉴定及分类。方法：收集旋毛虫成虫,提取总RNA,反转录合成cDNA,经特异引物扩增获得18SrRNA基因片段,将此目的基因与pMD18-T载体进行连接,转化大肠杆菌感受态细胞。阳性克隆经酶切鉴定后进行序列测定及分析。结果：河南猪株旋毛虫与亲缘关系较近虫株Trichinellanativa（AY487254.1）的同源性达99%。结论：河南猪株旋毛虫归属于T.nativa。     

幽门螺杆菌外膜蛋白cagL基因的克隆、表达及其对IL-8 mRNA表达的影响

目的:克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)NCTC11637菌株cagL基因,并探讨其对IL-8 mRNA表达的影响.方法:设计cagL引物,应用PCR扩增目的基因片段,TA克隆后测序分析, 用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体cagL-PET28a(+)转化E.coli BL-21(DE3),IPTG诱导表达, 镍亲和层析纯化,SDS- PAGE及蛋白质印迹鉴定表达蛋白.纯化蛋白与细胞GES-1共培养,提取细胞总RNA,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达.结果:测序分析表明cagL编码成熟肽的碱基序列为654 bp,编码217个氨基酸,与基因库公布的其他H.pylori菌株的基因序列同源性为96%～98%,氨基酸同源性为 97%～99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域;表达蛋白的相对分子质量约为32 000,蛋白质印迹检测融合蛋白具有良好的抗原活性;重组蛋白作用于GES-1细胞后,可诱导细胞因子 IL-8 在 mRNA 水平上的表达.结论:CagL蛋白可刺激GES-1细胞IL-8 mRNA的表达.     

糖基转移酶基因sisZ在大肠杆菌中的克隆与表达

目的:从西索霉素产生菌中克隆出表达西索米星的糖基转移酶基因sisZ。方法:采用PCR法从伊纽小单孢菌(Micromonospora inyoensis)的染色体扩增参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ,然后先后装载到克隆载体pUC18和表达载体pET-30a上。结果和结论:成功从伊纽小单孢菌扩增出参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ。其开放阅读框长1176bp,编码含391个氨基酸(41690D)的多肽链,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中实现表达。基因sisZ的碱基序列与gntZ(M.echinospora)的碱基序列的同源性高达94%。预测的SisZ蛋白序列与GntZ的同源性为98%。     

丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-a基因的克隆和表达

目的:从丝瓜籽中克隆HIV整合酶抑制剂luffin-a基因,并构建其表达载体.方法:根据报道的cDNA序列,用RT-PCR的方法从未成熟的丝瓜籽中克隆luffin-a基因,T-A克隆后鉴定核苷酸序列.构建表达载体pET-44a( )-luffin-a,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达.用透析法对包含体复性;SDS-PAGE鉴定luffin-a表达产物,用MTT法分析其生物学活性.结果:克隆的luffin-a基因与国外报道的核苷酸序列同源性为99.73%,其所编码的氨基酸序列完全一致.经SDS-PAGE分析:luffin-a主要存在于包含体中.MTT法测定:复性后蛋白具有与蓖麻毒素A链相似的细胞毒性.结论:本研究成功地构建了luffin-a的表达系统,所表达蛋白经复性后具有生物学活性.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。