芍药苷改善睡眠作用机制研究

目的：研究四逆散冻干粉主要化学成分芍药苷改善睡眠的作用机制。方法取Wistar大鼠平分为4组（每组10只）：正常组、四逆散冻干粉组、白芍冻干粉组、芍药苷组。称取冻干粉20 g,加水溶解配成0．5 kg? L－1溶液,灌胃给药,正常组给予等体积蒸馏水。每天1次,连续7 d。用HPLC方法测定大鼠血清和脑脊液中移行成分。结果给予四逆散冻干粉主要化学成分芍药苷后,脑脊液中内源性物质峰面积约是空白脑脊液峰面积的12．5倍,表明芍药苷能明显促进脑脊液中内源性物质的分泌,从而达到改善睡眠作用,该内源性物质最终确定为5－羟色胺。结论四逆散冻干粉主要化学成分芍药苷是通过促进脑脊液中内源性物质5－羟色胺的分泌达到改善睡眠作用。     

四逆散冻干粉改善睡眠作用的药效物质基础

目的探讨四逆散改善睡眠作用的药效物质基础,为阐明其改善睡眠的作用机制提供依据。方法 Wistar大鼠随机分为正常对照、四逆散冻干粉12 g·kg-1、芍药苷87 mg·kg-1、甘草次酸39 mg·kg-1、昔奈福林38 mg·kg-1、柴胡皂苷C 42 mg·kg-1、血清移行成分配伍(昔奈福林∶芍药苷∶柴胡皂苷C∶甘草次酸=8.5∶1∶1.5∶6.5)206 mg·kg-1组,给药组ig给药,每天1次,连续7 d,于末次给药后5 h制备血清或抽取脑脊液,用HPLC测定血清和脑脊液中四逆散移行成分;或者连续ig给药7 d后,ip给予戊巴比妥钠50 mg·kg-1,用翻正反射法测定小鼠睡眠时间。结果①四逆散冻干粉连续给药7 d后血清样品中有14种移行成分,经来源认定研究认为,其中2号成分为昔奈福林,4号成分为芍药苷,12号成分为柴胡皂苷C,14号成分为甘草次酸。②四逆散冻干粉、芍药苷、甘草次酸、昔奈福林和柴胡皂苷C均可以使脑脊液中内源性物质峰面积增加,其中四逆散冻干粉组是正常脑脊液峰面积的12.5倍;血清移行成分配伍组脑脊液中内源性物质峰面积高于四逆散冻干粉组,是四逆散冻干粉组的3.2倍。③昔奈福林、芍药苷、柴胡皂苷C和甘草次酸单用对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间无明显影响,四逆散冻干粉和血清移行成分配伍均延长小鼠睡眠时间(P<0.01),且血清移行成分配伍组优于四逆散冻干粉组(P<0.01)。结论芍药苷、甘草次酸、昔奈福林和柴胡皂苷C是四逆散冻干粉给药后血清主要移行成分,可能是四逆散改善睡眠作用的物质基础。     

紫河车冻干粉改善睡眠作用及机制研究

目的 研究紫河车冻干粉改善睡眠的作用及机制。方法 利用ip氯苯丙氨酸(PCPA)法制备大鼠失眠模型,设置对照组、模型组和紫河车冻干粉低、中、高剂量(0.09、0.18、0.36 g·kg^-1)组,每天ig给药1次,连续给药7 d,对照组和模型组ig等量去离子水。通过检测体质量增长量、一般观察、翻正实验、旷场实验、强迫游泳实验、悬尾实验评价紫河车冻干粉改善睡眠的作用;利用Western blotting技术检测γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)、谷氨酸脱羧酶-65(GAD65)、γ-氨基丁酸转运体1(GAT1)蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,紫河车冻干粉低、中、高剂量组大鼠体质量增加量显著升高(P＜0.01);中、高剂量紫河车冻干粉具有显著缩短睡眠潜伏期(P＜0.05)、显著延长睡眠时间(P＜0.01)的作用;高剂量紫河车冻干粉使大鼠中央格停留时间显著延长(P＜0.01)、中央格穿格次数显著增多(P＜0.05)、站立次数和修饰次数显著增多(P＜0.01),说明高剂量紫河车冻干粉能够减轻失眠大鼠焦虑情绪,增强自发探索活动能力;高剂量紫河车冻干粉使大鼠漂浮时间缩短(P＜0.05),挣扎时间延长(P＜0.01),说明高剂量紫河车冻干粉能够减轻失眠大鼠的抑郁状态。Western blotting结果显示,与模型组相比,紫河车冻干粉处理组大鼠下丘脑组织中GABA-T的表达水平显著降低(P＜0.05),GAD65、GAT-1的表达水平显著升高(P＜0.05、0.01)。结论 紫河车冻干粉可能通过调控GABA-T、GAD65、GAT-1蛋白的表达水平,发挥改善睡眠的作用。     

四逆散冻干粉中的柴胡皂苷C对小鼠睡眠影响的实验研究

目的研究四逆散冻干粉中主要成分柴胡皂苷C对小鼠睡眠的影响。方法将小鼠随机分成3组:空白对照组、模型组和给药组,四逆散冻干粉中有效成分柴胡皂苷C 12 g.kg-1经灌胃给予给药组;空白对照组、模型组均给予同体积的蒸馏水。于末次给药前8 h禁食,给药60 min后,腹腔注射50 mg.kg-1戊巴比妥钠,观察并记录翻正反射消失至恢复时间,即睡眠时间。结果柴胡皂苷C可明显延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间,与空白组比较具有极显著性差异(P<0.01)。结论四逆散冻干粉中有效成分柴胡皂苷C可延长阈剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间,效果明显。     

四逆散冻干粉在大鼠脑脊液中主要活性成分的研究

目的 研究四逆散冻干粉脑脊液主要活性成分.方法 用HPLC方法,梯度洗脱,测定四逆散冻干粉脑脊液主要活性成分,分析时间为140 min.结果 四逆散冻干粉在连续给药7 d后,脑脊液中除戊巴比妥钠成分外,并无血中主要活性成分的进入;四逆散冻干粉在后脑脊液中成分峰面积,约是空白脑脊液峰面积的12.5倍.血清中四逆散的主要活性成分为辛弗林、芍药苷、柴胡皂甙C及甘草次酸,其均可以使脑脊液中该内源性物质峰面积,高于空白脑脊液峰面积;但不如四逆散整方作用,且混和物组(辛弗林-芍药苷-柴胡皂甙C-甘草次酸=8.5:1:1.5:6.5)增高脑脊液中内源性物质峰面积是四逆散组的3.2倍.结论 四逆散脑脊液HPLC指纹图谱特征性及专属性强,可用于四逆散冻干粉脑脊液主要活性成分的分析研究.     

四逆散冻干粉血清移行成分的分析研究

目的：研究四逆散冻干粉血清移行成分,为确定四逆散改善睡眠作用药效物质基础提供可靠的方法依据。方法：采用HPLC方法,梯度洗脱,测定了四逆散冻干粉血清移行成分。色谱条件为：HypersilC18柱（4.6mm×250mm,5μm）,流速1.0mL/min,柱温30℃,流动相A为乙腈 流动相B为0.05%磷酸水,流动相A梯度洗脱（10%～90%乙腈）,分析时间为150min。结果：四逆散冻干粉在连续给药7d后血清中出现14种移行成分。结论：四逆散血清HPLC指纹图谱特征性及专属性强,可用于四逆散冻干粉血清移行成分的分析研究。     

蛞蝓冻干粉对慢性支气管炎的改善作用研究

目的:研究蛞蝓冻干粉对慢性支气管炎的改善作用。方法:运用二氧化硫(SO2)刺激法复制小鼠慢性支气管炎模型,观察蛞蝓冻干粉的止咳作用;采用气管段酚红法观察蛞蝓冻干粉的祛痰作用;运用气管内注入脂多糖(PLS)法复制大鼠慢性支气管炎模型,采用喷雾致喘法观察蛞蝓冻干粉的平喘作用;取气管及肺组织,观察大体标本的情况,然后切片并行HE染色,观察蛞蝓冻干粉对慢性支气管炎模型大鼠肺部炎症病理改变的影响。结果:高、中剂量蛞蝓冻干粉能显著延长慢性支气管炎小鼠的咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数(P<0.05);使小鼠的气管段酚红排泄量显著增加(P<0.05);能显著延长慢性支气管炎大鼠的引喘潜伏期(P<0.05);使大鼠气道内分泌物减少,气管上皮层基本完整,气管壁和腺体层变薄,黏膜下炎性细胞浸润减轻,支气管外周淋巴滤泡小。结论:蛞蝓冻干粉能显著减轻慢性支气管炎的咳、痰、喘症状,改善炎症病理损害,对慢性支气管炎有较好的治疗作用。     

甘草改善睡眠作用的药效物质基础研究

目的：研究甘草改善睡眠作用的药效物质基础。方法取Wistar大鼠30只,平均分为3组,分别为正常对照组、甘草冻干粉组、甘草次酸组。称取冻干粉20 g,加水溶解配成0.5 kg· L－1溶液,灌胃给药,正常组给予等体积蒸馏水。每天1次,连续7 d。用HPLC方法测定大鼠血清和脑脊液中移行成分。结果通过分析比较,确定甘草改善睡眠作用的药效物质基础是血清中甘草的移行成分甘草次酸。甘草次酸可使脑脊液中内源性物质的峰面积高于空白脑脊液峰面积,前者约是后者的8.6倍。结论甘草主要化学成分甘草次酸能明显促进脑脊液中内源性物质的分泌,从而达到改善睡眠作用。     

褪黑素胶囊改善睡眠功能实验研究

目的 研究褪黑素胶囊对小鼠睡眠改善功能.方法 通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验,观察褪黑素胶囊对小鼠睡眠功能的影响.结果 褪黑素胶囊无直接睡眠作用,能显著延长戊巴比妥钠睡眠时间、协同戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用、对巴比妥钠睡眠潜伏期无明显影响.结论 褪黑素胶囊具有改善睡眠的功效.     

四逆散对创伤后应激障碍所致睡眠障碍大鼠海马超微结构的影响

目的研究中药复方四逆散对创伤后应激障碍大鼠海马超微结构的影响。方法按照随机数表法将SD雄性大鼠随机分为5组,每组10只:空白对照组、模型组、阴性对照组、阳性对照组、实验组。除空白对照组外,其余4组动物均复制应激模型。模型组和空白对照组的大鼠饮食正常。于造模前1 h,阴性对照组的大鼠灌胃0.9%Na Cl;阳性对照组的大鼠灌胃盐酸帕罗西汀溶液4.2mg·kg^-1;实验组的大鼠灌胃四逆散水煎液2.41 g·kg^-1。灌胃容积10m L·kg^-1,每日灌胃1次,连续给药7 d。造模结束后,各组大鼠立即进行心脏灌注,采集海马组织,于30000倍电镜下观察并比较各组大鼠海马CA1、CA3区超微结构的差异性。结果空白对照组的海马CA1和CA3区的神经元细胞器丰富,线粒体圆形或长杆状,线粒体嵴结构清晰,粗面内质网呈条索样分布,核糖体丰富,高尔基复合体常见。模型组与空白对照组比较,细胞器明显损伤,细胞质结构空旷,线粒体肿胀,线粒体膜及嵴结构消失,粗面内质网池样扩张,提示幽闭电击对大鼠海马区神经元内细胞器产生明显损伤。阴性对照组与模型组比较,变化与其相似,提示0.9%Na Cl灌胃对大鼠没有明显的应激影响;而阳性对照组和实验组的海马区神经元细胞质内细胞器结构明显恢复,2组结构基本相似,提示盐酸帕罗西汀和四逆散均能明显改善PTSD大鼠海马区神经元细胞器结构。结论四逆散可以明显改善创伤后应激障碍大鼠海马CA1和CA3区神经元细胞器结构。     

基于分子网络研究四逆散抗抑郁症作用的潜在生物学机制

目的 基于分子网络研究四逆散治疗抑郁症的潜在生物学机制。方法 借助于中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）数据库筛选四逆散的活性成分,筛选条件为口服利用率、药物相似性和血脑屏障透过率,并挖掘四逆散活性成分靶点和抑郁症的治疗靶点。利用韦恩图找到活性成分靶点和疾病靶点的交集靶点,对应相应成分定义为四逆散抗抑郁的有效成分。利用String在线数据库进行交集靶点蛋白质-蛋白质相互作用网络的预测,并利用DAVID数据库进行交集靶点KEGG信号通路的富集分析。最后使用Cytoscape 3.6软件进行活性成分-靶点网络及有效成分-靶点-信号通路的构建和拓扑分析。结果 筛选出了四逆散107个有效成分和28个重要的抗抑郁症靶点。四逆散抗抑郁症的重要靶点显著富集于神经活性配体-受体相互作用、5-羟色胺能突触、多巴胺能突触、逆行内源性大麻素信号传导、钙信号通路等10个信号通路中。结论 本研究从分子网络的角度初步揭示了四逆散治疗抑郁症的潜在作用机制,其主要的生物学机制可能与以神经活性配体-受体相互作用为中心的信号通路有关。     

四逆散对蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝炎的研究

目的 研究四逆散对蛋氨酸-胆碱缺乏（methionine-choline-deficient,MCD）饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝炎的作用及机制。方法 通过MCD饮食诱导小鼠非酒精性脂肪肝炎模型,并同时预防性给药普罗布考及四逆散4周,HE染色观察各组小鼠肝组织病理改变;检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）、含量以及肝脏组织TG、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果 四逆散高剂量组小鼠血清ALT、AST均有下降,血清中TG含量升高,且肝脏TG含量降低;病理观察显示四逆散高剂量组小鼠肝细胞内脂肪空泡减少,炎性细胞浸润减少;同时肝组织SOD活力增加,MDA含量降低。结论 高剂量四逆散对MCD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝炎有预防作用,其主要通过调节血清和肝脏TG的分布,增加肝组织抗氧化能力,减少体内过氧化物损害来实现。     

四逆散改善Mdr2-/-小鼠胆汁淤积性肝纤维化作用

目的 研究四逆散对Mdr2(Abcb4)基因缺陷(Mdr2^-/-)小鼠胆汁淤积性肝纤维化的缓解作用,并探究其作用机制。方法 C57BL/6J小鼠作为对照组;C57BL/6J背景的Mdr2^-/-小鼠作为模型小鼠,设模型组和四逆散低、高剂量(按生药量计为3.12、6.24 g·kg^-1)组。四逆散组连续3周ig给予四逆散水提物,每天1次,对照组给予纯水。试剂盒法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸水平;取肝脏、脾脏称质量,计算肝脏、脾脏系数;结合小鼠肝组织HE染色,Masson染色,纤连蛋白(Fibronectin)、细胞角蛋白19(CK19)的免疫组化染色,明确四逆散对Mdr2^-/-小鼠肝纤维化及胆汁淤积的影响。基于小鼠肝脏转录组学测序技术,挖掘四逆散改善Mdr2^-/-小鼠肝损伤的作用靶点,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝纤维化[fibronectin(Fn1)、胶原蛋白1(Col1a1)、角蛋白19(krt19)]、炎症[白细胞介素-1β(Il1β)、Il6、肿瘤坏死因子-α(Tnfα)、一氧化氮合成酶(Inos)]、细胞焦亡[凋亡相关斑点样蛋白(Pycard)、Il18]、胆汁酸合成[细胞色素P450家族成员7A1(Cyp7a1)]及转运[胆盐输出泵(Abcb11)、ATP结合盒转运蛋白(Abcc3)、钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(Slc10a1)]相关基因的转录水平。结果 与模型组比较,四逆散高剂量显著降低血清总胆汁酸的水平(P＜0.05);明显缓解了Mdr2^-/-小鼠肝脏中央静脉及胆管周围炎性细胞的浸润和胶原纤维的沉积,并显著抑制胆管反应的发生。转录组学及qRT-PCR结果共同表明,四逆散下调Mdr2^-/-小鼠肝脏纤维化、炎症、细胞焦亡相关基因的转录(P＜0.05);同时,四逆散下调胆汁酸合成关键限速酶调控基因Cyp7a1和调控胆汁酸向肝内转运的基因Slc10a1的转录,并上调调控胆汁酸外排的基因Abcb11、Abcc3的转录。结论 四逆散能缓解Mdr2^-/-小鼠胆汁淤积性肝纤维化,机制可能与其调控炎症反应、细胞焦亡以及胆汁酸的合成和转运有关。     

四逆散对应激性肝郁小鼠的保护作用机制研究

目的利用小鼠拘束应激负荷模型评价四逆散汤剂的疏肝解郁作用,并通过检测应激性激素水平以及和肝脏炎症、氧化水平的变化探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠拘束应激肝郁模型,测定血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬酸氨基转移酶（AST）、皮质酮（CORT）水平,检测肝组织激素受体（GR）基因表达水平、抗氧化能力指数（ORAC）、丙二醛（MDA）水平、一氧化氮（NO）水平、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）的活性。结果与模型组相比,四逆散能显著降低应激小鼠血浆ALT和AST水平,并能降低拘束负荷小鼠血浆CORT水平和肝组织NO及MDA水平,提高ORAC水平、SOD及GSH—Px活性。结论四逆散的疏肝解郁作用可能与缓解应激负荷引起的肝损伤有关,其保护机制与抑制应激负荷引起的炎症发生以及氧化损伤作用有关。     

四逆散加味治疗小儿肝旺脾虚型厌食症40例疗效观察

目的 观察四逆散加味治疗小儿肝旺脾虚型厌食症的临床疗效.方法 将80例患儿随机分为2组,各40例,治疗组给予四逆散加味,对照组给予葡萄糖酸锌口服液.观察2组患儿临床疗效及患儿食欲恢复时间.结果 治疗组总有效率92.5％,对照组65.0％,2组比较差异有统计意义(P＜0.05).治疗组1周及2周食欲改善效果明显优于对照组,2组比较差异有统计意义(P＜0.05).结论 四逆散加味治疗肝旺脾虚型小儿厌食症疗效确切.     

Sini Powder extract produces antidepressant-like effects in a chronic social defeat stress model of depression in tree shrews

Sini Power (SP) is a famed traditional Chinese formula that has long been used to treat depression. Here, we investigated the effects and possible mechanisms of SP extract on an established model of depression: chronic stressed tree shrew, which mimics the human condition of social stress. The animals were divided into 4 groups. Except for the naïve group, the other animalswere subjected to daily social defeat stress for 5 weeks, and during the last 4 weeks treated with SP extract (3.6 g/kg/d), fluoxetine (15 mg/kg/d), and vehicle, respectively. The results showed that SP extract could reverse body weight loss to a certain extent and reduce the levels of urine/serum cortisol that were initially increased by chronic social defeat. In addition, SP extract increased hippocampus norepinephrine concentrations. Our data suggested that SP extract had positive effects on the main depression symptoms in the chronic stressed tree shrew model and that it may be used to help control hypothalamic-pituitary-adrenal axis hyperactivity.     

四逆汤治疗甲状腺功能减退症的血清代谢组学研究

目的 利用血清代谢组学鉴定甲状腺功能减退症(甲减)相关的代谢变化,评价四逆汤治疗甲减的作用。方法 将24只大鼠分为假手术组、模型组和四逆汤治疗组,采用甲状腺切除诱导甲减模型,给予4周相应的治疗后,取大鼠血清进行超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOFMS)分析,结合模式识别分析各组间代谢物差异,评价四逆汤的治疗作用。结果 血清代谢组学分析鉴定了9种甲减相关的生物标志物,涉及三羧酸循环、苯丙氨酸代谢、鞘脂代谢和磷脂代谢,同时数据显示四逆汤对甲减有改善治疗作用。结论 四逆汤能够通过调节失衡的三羧酸循环、苯丙氨酸代谢和磷脂代谢而发挥治疗甲减的作用。