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重组人骨形态发生蛋白-2/7融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和初步活性测定 总被引:7,自引:0,他引:7
构建重组人骨形态发生蛋白-2/7融合体, 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用DNA 重组技术,将编码人骨形态发生蛋白-2 (BMP-2) 成熟肽的0.36 kb 基因片段与编码人骨形态发生蛋白-7 (BMP-7) 成熟肽的0.44kb 基因片段连接,得到重组人骨形态发生蛋白-2/7 融合基因; 经测序鉴定后,将其克隆到表达载体pBV222中,转化大肠杆菌DH5α, 温度诱导表达。表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小鼠成骨样细胞增殖、分化及碱性磷酸酶活性的影响。克隆质粒转化的工程菌,经42℃诱导4~6 h 后,高效表达重组人骨形态发生蛋白-2/7, 在SDS-PAGE上出现一新的蛋白带, 分子量约29 ku,约占菌体总蛋白的20% ,表达蛋白以包涵体的形式存在,经初步纯化、裂解、复性后的BMP-2/7 蛋白具有促进成骨样细胞分化、增殖及增加碱性磷酸酶活性的作用。BMP-2/7 融合基因的构建和表达,可能提供一种全新的具有诱导成骨作用的蛋白 相似文献
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人骨形态发生蛋白-2的基因重组及其在大肠杆菌中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白2(hBMP2)。方法将包含hBMP2部分前肽和成熟肽的3′端730bpcDNA片段,插入原核表达载体pkpL3a的多克隆位点,构建成pKpL3a/hBMP2重组表达载体,转化大肠杆菌pop2136,挑选阳性克隆,经诱导表达后用SDSPAGE鉴定。结果该克隆表达的hBMP2为MW27000,表达量占菌体总蛋白10%,部分纯化后植入大鼠股部肌肉,组织学观察到肌肉内大量间充质细胞增生及骨与软骨形成。结论说明重组hBMP2具有诱导异位骨与软骨形成的生物学功能。 相似文献
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本文报道了利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组骨形态发生蛋白Ⅲ。运用PCR技术,从质粒pSP64/hBMP3中扩增出约0.33kb的hBMP3cDNA片断,然后亚克隆到表达质粒pMS316b中,在大肠杆菌中成功地高效表达出人BMP3融合蛋白,表达产物具有体内诱导导位体骨的趋势。 相似文献
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重组人骨形态发生蛋白诱导异位成骨的病理学观察 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:本文报告了重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)在小鼠肌肉内诱导异位成骨的生物学作用,方法:将大肠杆功表达的rhBMP-2成熟肽植入小鼠股部肌肉。结果:植入rhBMP-2后d1就有间充质细胞向植入区内聚集;d5出现典型的软骨细胞;d7钙化开始;d10形成雏形的骨髓腔,d14骨髓腔内出现幼稚的造血细胞;21d-30d形成大量网状骨小梁、骨单位、在骨小梁间隙出现骨髓细胞。结论:大肠杆菌中表达 相似文献
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人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达 总被引:2,自引:2,他引:2
目的:扩增、克隆人骨形成蛋白-3(hBMP-3)成熟肽cDNA基因,利用大肠杆菌表达hBMP-3成熟肽.方法:PCR方法扩增hBMP-3成熟肽cDNA基因,双脱氧终止法测序正确后,克隆入大肠杆菌表达载体pDH,受控于PRPL启动子,重组质粒pDHB-3m以大肠杆菌DH5α为宿主菌在42℃进行温度诱导.结果:扩增出hBMP-3成熟肽cDNA基因,序列测定完全正确;含重组质粒pDH-B3m的工程菌诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,分子质量为14.5ku,与预期hBMP-3成熟肽分子量大小一致,约占菌体总蛋白的28%.结论:成功扩增、克隆hBMP-3成熟肽cDNA基因,并可在大肠杆菌中得到高效表达 相似文献
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重组人骨形成蛋白—2成熟肽在大肠杆菌中的高效表达 总被引:16,自引:2,他引:14
利用大肠杆菌系统高效表达人骨形成蛋白-2成熟肽。方法;将编码人骨形成蛋白2成熟肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pDH上,使其受控于PRPL启动子,构建成表达质粒pDHB2m,以大肠杆菌DH5α为宿主菌。对工程菌进行温度诱导表达,表达产物初步纯化后进行复性处理,用小鼠肌袋模型检测产物诱骨活性。 相似文献
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目的 克隆人软骨来源形态发生蛋白-1(CDMP-1)成熟肽编码区的基因片段。方法 用异流氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总RNA,利用RT-PCR方法扩增出人CDMP-1成熟区的基因片段(约1.0kbp),将所得基因片段插入pBluescript)质粒载体,重组质粒DNA,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 从罗骨组织直接取到总RNA,其质量与从等重量软骨 相似文献
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目的:克隆恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2全基因,并在大肠杆菌中进行表达。方法:采用PCR扩增恶性疟原虫FCC-1/HN株MSP2基因,克隆插入pUC19,并重组人表达质粒载体中,转化大肠杆菌,诱导重组质粒pBK-CMV/msp2表达MSP2蛋白抗原,对表达产物进行SDS-PAGE,dot-ELISA和Wewtern blot鉴定。结果:PCR扩增出824bpDNA片段,经酶切鉴定和部分序列测定证实为M 相似文献
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丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
应用RT-PCR和基因重组技术,从湖南地区丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清中克隆了HCV包膜蛋白基因片段(E1,E2/NS1)经与已知基因型的HCV-1,HCV-J,HCV-J6和HCV-J8进行核苷酸序列的比较分析,这些基因片段属1b型HCV基因。将克隆基因重组于表达质粒PMAL-CRI中,在大肠杆菌内进行高效表达,获得了融合蛋白MBP-E1,MBP-E2/NS1,经WestemBlot分析证实 相似文献
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人骨形成蛋白2碳端肽在大肠杆菌中的高表达及活性测定 总被引:4,自引:2,他引:4
利用基因工程技术生产人骨形成蛋白(hBMP),为其诱骨机理及临床应用研究提供前提条件。作将hBMP2 cDNA3’端732bp片段,克隆入大肠杆菌表达载体pGEX-2T,经IPTG诱导后,表达产物存在于包涵体中,将其纯化复性后,进行SDS-PAGE和FPLC分析,并作小鼠体内异位诱骨活性检测。表达的hBMP2与GST的融合蛋白Mr=51ku,占菌体总蛋白的30%,纯化、复性后,FPLC分析示尖而 相似文献
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OPG与MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达[刘继中 ,纪宗玲 ,陈苏民 ,胡蕴玉 ,李 毅 ,张晓楠 .细胞与分子免疫学杂志 ,2 0 0 2 ;18(6 ) :5 5 1 5 5 3] 目的 克隆人骨保护素 (OPG)成熟肽段编码区基因 ,并在大肠杆菌中表达 .方法 采用RT IFC ,扩增人OPG成熟肽段编码区cDNA ,并克隆入原核表达载体 pMAL c2x中 ,转化BL2 1(DE3)PlysS大肠杆菌感受态细胞 .经 0 .1mmol·L-1IPTG诱导后 ,收集菌体蛋白 ,进行SDS PAGE及Westernblot鉴定 .结果 获得人OPG成熟肽段编码区cDNA … 相似文献
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珊瑚/胶原/重组人骨形成蛋白-2复合人工骨的异位骨诱导(英文) 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:评价珊瑚/胶原/重组人骨形成蛋白-2 (rhBMP-2)复合人工骨的骨诱导活性。 方法:将珊瑚/胶原/rhBMP-2 植入大鼠背部肌肉内,以珊瑚/胶原或珊瑚/rhBMP-2 植入作对照。术后1 周和4周取材,通过组织学和计算机图像分析评价其异位诱导成骨情况。 结果:珊瑚/胶原/rhBMP-2 植入后1 周,在局部诱导软骨形成;4 周,形成含骨髓的板层骨;诱导成骨的量有明显的rhBMP-2 剂量依赖性(P< 0.001)。珊瑚/胶原或珊瑚/rhBMP-2 植入区无骨或软骨形成。 结论:珊瑚/胶原/rhBMP-2 复合人工骨具有良好的异位骨诱导活性,是一种较理想的骨移植替代材料 相似文献
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大肠杆菌L-天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达 总被引:3,自引:1,他引:2
用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因(AnsB)两侧序列互补的寡核苷酸E1,E2作引物,以大肠杆菌野生株CPU210009的染色体DNA为模板,通过PCR扩增得到约1.2kb的DNA片段,将此片段插入pKK233-2的tac启动子下游,转化不同的大肠杆菌宿主菌株,结果表明以CPU210009为宿主菌时,转化子的酶表达量最高,重组L-天门冬酰胺酶占菌体总蛋白48.3%,发酵液酶活力达400IU/ml;比活为48IU/mg蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的重组L-天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同,均为140KD。 相似文献
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人重组骨形态发生蛋白—2和β转化生长因子在诱导成骨中的 … 总被引:4,自引:1,他引:3
对人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨的协同作用进行探讨。方法:210只BALB/c小鼠随机分为3组,每组70只,试验侧均位于右后肢,设立rhBMP-2/牛松质骨载体,单纯牛松质骨载体为对照组,分别于术后12h-21d共11个时间占才,观察其诱导成骨过程。结果rhBMP-2/TGF-β/牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖,分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于rhBMP-2牛松质骨载体 相似文献
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一种新的睾丸特异核孔蛋白基因特性的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的通过筛选人睾丸特异基因及对其结构和功能的研究,为阐明精子发生与成熟提供新的线索。方法采用筛选人睾丸表达文库、快速扩增cDNA5′末端、Northern印迹分析、荧光原位杂交(FISH)以及基因重组等技术。结果(1)获得一新的长度为2209bp的cDNA,编码700个氨基酸,将该基因命名为BS-63。Gen-Bank注册号为U64675。(2)BS-63N端具有核孔蛋白的特征性结构元件“XFXFG”或“FG”以及与Ras相关核蛋白(Ran)结合的典型特征。(3)Northern印迹分析显示,BS-63基因有6.0和8.5kb两种转录形式,其中6.0kb为睾丸组织特异性转录本。(4)FISH显示,BS-63基因定位于2q11.2~12。(5)BS-63cDNA在大肠杆菌中获得高效表达,SDS-PAGE显示,表达蛋白的相对分子质量约为80000。(6)体外功能实验表明,该表达蛋白可被蛋白激酶C及细胞周期依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化。结论BS-63可能是一种新的睾丸特异核孔蛋白。 相似文献
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rhBMP—2 cDNA转染的NIH—3T3细胞对小鼠急性放射损伤的基因治疗 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)cDNA转染的NIH-3T3细胞对小鼠经6.5Gy,7.0Gyγ射线全身照射引起的放射损伤的基因治疗作用及其机理。 相似文献
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观察0.587和0.712kbCPSIcDNA片段分别与PSV2载体的重组质粒pSV2-CPS505和pSV2-CPS507在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实,两种重组的表达质粒转染的7402人癌细胞和NIH/3T3细胞能有效地表达CPSI,CPSI基因的非翻译区顺序与其高度组织特异性无关。这些体系的建立为体外生产CPSI抗原和天然CPSI蛋白提供了细胞模型和实验依据,对深入了解CPSI的表 相似文献
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目的:探讨骨形成蛋白(BMP)对人骨肉瘤细胞的作用及意义。方法:将重组人BMP2基因的反义核酸逆转录病毒表达载体pDOR-AB用脂质体导入BMP生的骨肉瘤细胞O S-9901,观察骨肉瘤细胞OS-9901的BMP表达、增殖活性、肿瘤撸制基因nm23display structure 相似文献