伊马替尼对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖及顺铂、紫杉醇敏感性的影响

目的:探讨伊马替尼对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖和对顺铂、紫杉醇敏感性的影响及其作用机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法检测细胞增殖率、Hoechst33342染色检测细胞凋亡;采用免疫荧光测定伊马替尼处理前后人卵巢癌细胞株SKOV-3 p-PDGFRβ的表达情况.结果:伊马替尼可以诱导SKOV-3细胞凋亡,对其增殖抑制作用与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),并显著提高了SKOV-3细胞对顺铂、紫杉醇的敏感性(P<0.05); PDGF-BB可促进PDGFRβ发生磷酸化,伊马替尼在体外阻断了SKOV-3细胞p-PDGFRβ的表达,p-PDGFRβ可能是伊马替尼的主要作用靶点.结论:伊马替尼对SKOV-3细胞有明显杀伤作用,并显著增强该细胞株对顺铂、紫杉醇的敏感性;伊马替尼可在体外阻断SKOV-3细胞PDGFRβ的磷酸化,这可能是其影响细胞增殖的主要途径之一.     

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的：探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用。并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法：利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变。结果：免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比（81.5%)和凋亡细胞百分比（11%）增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强。结论：野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强。     

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响

目的：探讨应用RNAi技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法：构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivinmRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝（Myr）检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：SKOV3-siRNA组细胞survivinmRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低（P〈0．05）。结论：下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。     

Raf激酶抑制蛋白增强卵巢癌细胞的化疗敏感性

摘 要　目的：探讨Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）对卵巢癌SKOV-3细胞化疗敏感性的影响。方法：以脂质体法将含有人全长RKIP基因的真核表达质粒pcDNA3.1-ssRKIP转染入SKOV-3细胞中,Western blotting检测SKOV-3细胞中RKIP蛋白的表达。不同浓度顺铂作用转染后的SKOV-3细胞,MTS法观察RKIP基因转染对顺铂处理后SKOV-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测RKIP基因转染对顺铂诱导SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：pcDNA3.1-ssRKIP转染的SKOV-3细胞RKIP表达明显升高。不同浓度顺铂处理细胞24、48、72 h后,RKIP基因转染细胞增殖抑制率显著高于对照细胞（P<0.05）。用2.5 μg/ml顺铂作用SKOV-3细胞24 h后,RKIP转染细胞的凋亡率为（10.86±0.73）%,明显高于未转染细胞的（4.27±0.67）%和空质粒转染细胞的（4.02±0.43）%（P<0.01);在无顺铂作用情况下,RKIP转染细胞的凋亡率为（3.11±0.78）%,仍然高于未转染细胞的（1.51±0.13）%和转染空质粒细胞的（1.97±0.46）%（P<0.01)。细胞周期检测结果显示,RKIP转染细胞G0/G1期的比例下降,S期的比例增加,转染的SKOV-3细胞发生S期阻滞。结论：RKIP基因的转染可以增加卵巢癌SKOV-3细胞对化疗药物顺铂的敏感性。     

安罗替尼在宫颈癌HeLa/DDP细胞中的作用及逆转顺铂耐药性机制研究

目的:探究安罗替尼对HeLa/DDP(宫颈癌顺铂耐药细胞)细胞增殖和凋亡的影响及其逆转顺铂耐药的机制。方法:不同浓度顺铂及安罗替尼处理HeLa/DDP细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测P-gp的表达水平差异。结果:顺铂对HeLa/DDP细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量及时间依赖性。安罗替尼对HeLa/DDP细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性。安罗替尼、安罗替尼联合顺铂可以抑制HeLa/DDP细胞增殖(P<0.05)。流式细胞术结果发现安罗替尼组及安罗替尼联合顺铂组细胞凋亡率均升高(P<0.05)。安罗替尼联合顺铂显著抑制细胞增殖,诱导凋亡。Western Blot提示安罗替尼联合顺铂组与对照组和顺铂组及安罗替尼单药组相比,P-gp蛋白表达上调(P>0.05)。结论:安罗替尼可抑制宫颈癌HeLa/DDP细胞增殖,诱导凋亡;安罗替尼联合顺铂抑制细胞增殖、诱导凋亡作用更显著;安罗替尼可增加宫颈癌HeLa/DDP顺铂耐药株对顺铂的敏感性,逆转耐药性,但不能介导耐药相关蛋白P-gp表达下调。     

Twist下调影响卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性的研究

目的:探讨Twist对卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性及细胞增殖凋亡的影响。方法:通过Western blot筛选细胞株,构建小干扰RNA,qPCR筛选Twist-siRNA,将构建成功的Twist-siRNA逆转录于上皮性卵巢癌细胞株A2780中,通过CCK-8细胞术及流式细胞术,研究下调Twist对卵巢癌细胞株的增殖、凋亡及对化疗药物顺铂的影响。结果:选择人卵巢癌细胞株A2780,引入小干扰RNA后,Twist表达降低;细胞的增殖能力下降,凋亡增加（P＜0.05）,差异有统计学意义。si-Twist组相比对照组Twist基因的表达量明显降低, 且呈现一定的顺铂浓度依懒性差异(P<0.05）。结论:下调Twist可抑制卵巢癌细胞A2780的增殖,促进其凋亡;下调Twist卵巢癌细胞A2780对顺铂的敏感性增加。     

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的:探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用,并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系.方法:利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变.结果:免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比(81.5%)和凋亡细胞百分比(11%)增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强.结论:野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强.     

吉非替尼获得性耐药细胞株对不同化疗药物的敏感性分析

目的 探讨吉非替尼获得性耐药细胞株对不同化疗药物的敏感性,为分子靶向治疗失败的患者选择化疗方案提供临床前的依据.方法 体外培养人肺腺癌细胞株PC9和吉非替尼获得性耐药株PC9/G,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定PC9和PCg/G细胞对不同药物的敏感性以及细胞的增殖抑制率;采用流式细胞仪检测药物对PC9和PCg/G细胞凋亡的影响及P-170蛋白的表达;采用基因芯片技术分析PC9和PC9/G细胞的表达基因谱差异;采用Western blot法检测PC9和PC9/G细胞中总Akt、磷酸化Akt和整合素β1的表达.结果 MTT和凋亡检测的结果 表明,与PC9细胞相比,吉非替尼获得性耐药细胞株PC9/G对顺铂的耐药指数为5.4,细胞凋亡减少,联合LY294002后对顺铂的敏感性显著增加(P＜0.05).PC9/G细胞对多西紫杉醇较PC9细胞更为敏感,培美曲塞对两株细胞的IC50及凋亡影响的差异无统计学意义(P＞0.05).PC9/G细胞中P-170蛋白的表达水平为5.32,与PC9细胞(7.18)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).基因芯片分析显示,PC9/G细胞中,整合素β1及DNA修复基因的表达上调,有丝分裂期基因表达下调.PC9/G细胞中总Akt、磷酸化Akt及整合素β1的蛋白表达水平分别为1.32、1.82和1.59,PC9细胞巾总Akt、磷酸化Akt及整合素β1的蛋白表达水平分别为0.83、0.87和0.57.结论 在吉非替尼获得件耐药细胞株中存在P13K的表达上调及激活、整合素β1及DNA修复基因的表达上调,其表达土调与顺铂耐药相关;表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗失败的患者在选择化疗方案时应避免使用铂类药物,可选择给予多西紫杉醇或培美曲塞治疗.     

吉非替尼与紫杉醇联合对卵巢癌细胞凋亡影响的观察

目的:探讨吉非替尼联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:吉非替尼单独或联合紫杉醇作用卵巢癌HO8910细胞,以蛋白质印迹法检测EGFR下游信号磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和细胞核增殖抗原(PCNA),以MTT法检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布和凋亡。结果:吉非替尼单用在0.25～4.00μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性抑制卵巢癌HO8910细胞增殖,1.0μmol/L浓度单独作用24h则细胞周期主要分布于G1期,p-Akt、p-ERK和PCNA蛋白水平下降,72h时细胞凋亡增加,与对照组比较,差异均有统计学意义,P<0.05。吉非替尼与紫杉醇合用不仅能更显著的抑制细胞增殖,而且凋亡细胞显著增加(P<0.05),与对应浓度单用紫杉醇比较,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:吉非替尼与紫杉醇合用能显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖、诱导凋亡,两种药物合用具有协同作用。     

沉默ATF5对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响的研究

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。     

索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的探讨索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法采用MTT法,检测不同浓度索拉非尼(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0μmol/L)作用人卵巢癌SKOV-3细胞24、48、72 h的抑制率;Hoechst染色法观察药物处理后细胞凋亡情况;应用索拉非尼与紫杉醇不同给药方式作用于SKOV-3细胞,流式细胞仪检测药物处理后细胞周期和凋亡率变化。结果索拉非尼对SKOV-3细胞增殖具有明显抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且呈剂量和时间依赖性;索拉非尼主要使SKOV-3细胞周期阻滞在S期,与紫杉醇联合给药后S期及G2/M期均有延长,且凋亡率较高(P<0.05)。结论索拉非尼对SKOV-3细胞增殖有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,紫杉醇序于索拉非尼给药时细胞凋亡率更高。     

ING4基因表达上调对卵巢上皮性癌OVCAR细胞顺铂耐药性的影响

目的：探讨ING4基因在表达上调的卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系OVCAR细胞中对顺铂耐药性的影响。方法：脂质体介导的ING4-Ad及相应阴性对照片段转染人卵巢癌细胞OVCAR,实验分为3组：转染组、阴性对照组、空白对照组。实时荧光定量PCR技术检测3组细胞中ING4基因的表达;采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定各组细胞增殖抑制率和绘制细胞生长曲线,集落形成实验测定细胞生长能力,检测3组细胞对顺铂的敏感性,及不同浓度顺铂和作用不同时间后3组细胞生长的抑制率和凋亡率及细胞周期变化。结果：转染组、阴性对照组及空白对照组OVCAR细胞中ING4的表达量分别为66.76±11.40、1.28±0.09、1.22     

紫杉醇脂质体对卵巢癌细胞生长抑制作用的实验研究

目的分析紫杉醇脂质体对卵巢癌SKOV-3细胞的生长抑制作用,观察药物作用的时间-浓度关系,探究药物作用机制。方法应用不同剂量紫杉醇脂质体对SKOV-3细胞进行处理,通过MTT检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡作用及其对细胞周期的阻滞状态,Western blot分析Bcl-2基因蛋白表达情况。利用SPSS 13.0对数据进行统计学分析。结果紫杉醇脂质体对SKOV-3细胞有明显的剂量-时间依赖效应。紫杉醇与紫杉醇脂质体均可将SKOV-3细胞阻滞在G2/M期,且随药物浓度增加,凋亡细胞所占比例逐渐增加。通过Western blot方法发现,紫杉醇脂质体作用后SKOV-3细胞Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达明显上调,Bax/Bal-2比例明显上调。结论紫杉醇以脂质体为转运载体后,并未改变其对卵巢癌SKOV-3细胞的抑制作用及作用周期,具有较好的临床应用前景。     

雷帕霉素联合紫杉醇对SGC-7901增殖影响的研究

目的：研究雷帕霉素联合紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测经雷帕霉素、紫杉醇和雷帕霉素＋紫杉醇作用后人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-la（hypoxia-inducible{actor-1alpha,HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）蛋白表达,两因素析因设计方差分析法进行统计分析。结果：雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞增殖抑制率分别为（25．43±1．98）％、（27．28±3．34）％和（53．64±1．99）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可抑制细胞增殖,联合作用对细胞增殖抑制率影响极显著,F-57．471,P〈0．001;两药联合指数〉1．15,雷帕霉素和紫杉醇具有协同作用。雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞凋亡率分别为（16．25±1．86）％、（21．80±3．12）％和（38．60±3．78）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可诱导细胞凋亡,两药联用细胞凋亡率显著增加,P=O．0163;雷帕霉素和紫杉醇具有协同诱导SGC-7901细胞凋亡作用。紫杉醇处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达量分别为0．598±0．089和0．4204±0．091,VEGF蛋白表达下降,P=0．001;而HIF_1a蛋白表达无明显变化,P=0．434。雷帕霉素处理细胞后,HIF-1d及VEGF蛋白相对表达量分别为0．416±0．034和0．376土0．022,表达均显著下降,P值分别为0．016和0．001;而两药联合处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达分别为0．209±0．027和0．156±0．015,均显著降低,F值分别为18．322和25．525,P值均为0．001。2种药物对SGC-7901细胞HIF-1aTYcVEGF蛋白表达抑制起到了显著的协同作用。结论：雷帕霉素联合紫杉醇可显著抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,2种药物具有协同抗肿瘤作用。     

地塞米松联合顺铂对肺腺癌 A549 细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）联合顺铂（cisplatin,DDP）在体外对肺腺癌2,549细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞。MTF法检测DDP和DEX对A549细胞增殖的影响。流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。Westernblot检测DEX和DDP对A549细胞内VDR表达水平的影响。结果：地塞米松≥500nmol／L浓度时对A549细胞有一定的增殖抑制作用（P〈0．05）;〈500nmol／L浓度时对A549细胞无明显抑制作用（P〉0．05）;DDP浓度在0．3125-10ug／ml范围内对A549细胞增殖有明显的抑制作用,并呈浓度及时间依赖性（P〈0．05）。流式细胞仪检测到DDP＋DEX组的G．期细胞比例下降,s期比例上升（P〈0．05）,且细胞凋亡数目增加（P〈0．05）。Westernblot观察到DDP＋DEX组VDR表达水平明显升高（P〈0．05）。结论：DEX可能通过上调A549细胞内VDR表达水平,与顺铂协同促进细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞,进而提高顺铂化疗敏感性。     

米非司酮增加子宫内膜癌细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的：探讨米非司酮作用于人子宫内膜癌HEC-1-B细胞后对顺铂敏感性的影响及可能的作用机制。方法：体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,经不同浓度的米非司酮和顺铂单药或联合作用后,用四甲基偶氮唑蓝比色法（Mr丌法）测定细胞增殖活性作用、流式细胞仪检测细胞周期、免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bel-2和增殖相关抗原Ki-67蛋白的表达。结果：1．25mg／L和2．5mg／L的米非司酮对HEC-1-B细胞的增殖无明显影响,其与1．0—4．0mg／L顺铂联合作用后,明显增强顺铂对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用（P〈0．05）。1．25mg／L和2．5mg／L米非司酮和2．5mg／L顺铂联合作用组与单用2．5mg／L顺铂组比较,HEC-1-B细胞G1期比率明显增高、S期比率明显下降（均P〈0．05）。细胞的Bcl-2和Ki-67蛋白的表达水平明显下降（P〈0．05）。结论：米非司酮能增强顺铂对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用。其作用机制可能与阻滞细胞周期和调控凋亡相关基因的表达、促进细胞凋亡有关。     

Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV-3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响

目的探讨Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响。方法采用MTT法检测Genistein单用及合用顺铂对细胞增殖的影响,流式细胞仪分析Genistein及Genistein联合顺铂对细胞周期和凋亡的影响。结果Genistein对SKOV3细胞增殖表现出浓度依赖性的抑制作用,并显著提高了其对顺铂的敏感性(P<0.05);0.625～5μg/ml顺铂与2.5～10μg/mlGenistein合用基本表现为协同作用。5、10μg/mlGenistein均可将细胞阻滞于G2/M期并诱导一定程度的凋亡,10μg/mlGenistein还可进一步的干扰S期进程;当顺铂与Genistein合用时,两种药物在干扰SKOV3细胞周期和诱导凋亡方面表现为显著的协同效应。结论Genistein能够抑制耐药卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并显著增强该细胞对顺铂的敏感性。     

Vasohibin-1重组腺病毒对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响

[目的]研究内源性血管生成抑制因子vasobihin．1对人卵巢癌SKO~．3细胞体外增殖能力的影响。[方法]体外培养SKOV-3细胞,用vasohibin-1重组腺病毒感染SKOV．3细胞,采用蛋白质印迹法检测SKOV．3细胞中vasohibin．1蛋白的表达水平,应用CCK-8法检测不同时间点vasohibin-1重组腺病毒对SKOV．3细胞增殖的抑制能力。[结果]感染48h后,在SKOV-3细胞中vasohibin．1蛋白表达量与对照组相比显著性增加（P〈0．05）：25MOIvasohibin-1重组腺病毒感染SKOV．3细胞24h时．过表达组与阴性对照相比,两者之间没有统计学差异（P10．065）;余各组间相比差异均具有统计学意义（P〈0．05）,且抑制能力随MOI增大而增加（P〈0．05）,随时间的延长而增加（P〈0．05）。[结论]Vasohibin．1过表达能够抑制SKOV-3细胞的增殖能力。并具有浓度和时间依赖性,可为卵巢癌的治疗提供新思路。