U266细胞在组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导下凋亡观察

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法：台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymer-ase,PARP]裂解情况.结果：MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用48h的IC50为1.39μmol/L;2μmol/LMS-275作用细胞24h后,G0/G1期64.57%;36h占82.20%.瑞氏—姬姆萨染色显示细胞发生明显变化.WesternBlot检测表明MS-275作用U266细胞后,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9被裂解活化,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶发生剪切,细胞发生凋亡.结论：MS-275可抑制细胞增殖,并使细胞阻滞在G0/G1期,通过激活细胞内外2条凋亡级联信号通路诱导U266细胞凋亡.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对U266细胞增殖的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响。方法将不同浓度的MS-275以不同时间作用于U266细胞,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western Blot检测P21、Cdk4、Acetyl—histone H3及PARP等的蛋白表达。结果MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0／G1期,细胞发生明显变化。出现P21表达增加,Cdk4表达下降,同时出现PARP的裂解。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275具有抑制人骨髓瘤细胞U266增殖作用,使细胞阻滞在G0／G1期,最终诱导U266细胞凋亡。     

去甲斑蝥素对人多发性骨髓瘤细胞株U266生长调控的影响及其机制的研究

目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对多发性骨髓瘤细胞株的增殖及其凋亡的影响及其可能的机制.方法 四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2 thiahiazoyi)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测5、20、40、80、160μmol/L的NCTD对U266细胞增殖的影响;用流式细胞术检测不同浓度NCTD对细胞周期及细胞凋亡的影响,并应用半定量反转录聚合酶链反应检测survivin基因表达的变化.结果 在20～160μmol/L的浓度内,NCTD对U266细胞的增殖有抑制,抑制与NCTD的浓度呈剂量依赖关系(P<0.05).不同浓度的NCTD能诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡,使细胞明显阻滞于G2 /M 期;在NCTD作用下,U266 细胞survivin 及其机制可能与诱导凋亡、细胞周期阻滞有关.结论 NCTD能抑制U266细胞的增殖,并诱导其凋亡的机制可能与抑制survivin的表达及G2 /M 期阻滞有关.     

龙葵正丁醇提取物抗人结直肠癌SW480细胞增殖及其作用机制研究

目的探讨龙葵正丁醇提取物对人结直肠癌SW480增殖抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化,比色法检测细胞内Caspase-3活性改变。结果龙葵正丁醇提取物对人结直肠癌SW480细胞有明显的生长抑制作用,并呈现剂量依赖性。经龙葵正丁醇提取物作用后,SW480细胞周期显著改变,出现G2/M期阻滞,Caspase-3蛋白表达升高。结论龙葵正丁醇提取物能抑制人结直肠癌SW480增殖。上调Caspase-3蛋白的表达,改变细胞周期可能是其机制之一。     

黄芩提取物抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的研究

目的：探讨黄芩提取物对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法：通过对经不同浓度黄芩提取物处理过乳腺癌MCF-7细胞染色,使用流式细胞仪进行细胞周期分析。结果：各组单因素方差分析结果显示,黄芩提取物作用于乳腺癌MCF-7细胞48h后10ug/ml和20ug/ml组细胞凋亡率均明显增加,与对照组比较均有差异(P<0.05);细胞周期检测结果显示,10ug/ml和20ug/ml组细胞G0/G1期明显增加,与对照组比较均有差异(P<0.05)。结论: 黄芩提取物可以诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡发生,从而在乳腺癌细胞中产生抗肿瘤的作用。     

α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞株U937细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)细胞U937细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting检测cyclinA2和cyclinD1蛋白质表达。结果α-干扰素和(或)脂多糖组较对照组能显著地抑制U937细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05);α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素、脂多糖组能显著抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05),能够显著下调CyclinA2蛋白质表达、上调CyclinD1蛋白质表达(P<0.05)。结论α-干扰素与脂多糖对U937细胞的增殖抑制、细胞凋亡和G1期细胞的比例有协同增强作用,其机制可能与细胞周期素Cy-clinA2、CyclinD1蛋白的调节有关。     

白凤菜总黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡影响

目的 观察白凤菜总黄酮(TFG)对多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响。方法 MTT实验检测U266细胞增殖;倒置显微镜及荧光显微镜分别观察U266细胞经TFG处理24 h后细胞形态及凋亡的变化;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 TFG明显抑制U266细胞的增殖,P<0.05,且呈浓度和时间依赖性;100 μg /mLTFG作用组的U266细胞凋亡明显增加;TFG使U266细胞周期阻滞于S期。结论 TFG可抑制U266细胞增殖,可能同细胞周期的捕获和细胞凋亡的诱导相关。     

蝙蝠葛活性成分对Hela细胞株的抑制增殖作用

[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株的抑制增殖作用.[方法]应用MTT法检测蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株增殖抑制作用及其细胞毒活性;分别采用倒置显微镜、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色观察Hela细胞处理前后的形态学变化;采用流式细胞仪检测Hela细胞株的细胞周期分布相;应用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原Ki-67、细胞周期蛋白CyclinD1及候选抑癌基因Syk的表达情况.[结果]MTT比色法观察结果表明,蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的抑制增殖作用,且呈现明显的质量浓度和时间依赖性.倒置显微镜、AO/EB染色观察见,蝙蝠葛活性成分处理的Hela细胞出现一系列典型的凋亡细胞特征.流式细胞仪检测结果显示,蝙蝠葛活性成分作用后加药组出现G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期和G2/M期细胞比例则明显下降(P<0.01),将细胞阻滞在G0/G1期;免疫细胞化学观察结果表明,蝙蝠葛活性成分作用后加药组Syk表达增加,Ki-67和CyclinD1蛋白表达降低,与对照组相比较差异均有统计学意义(P<0.01).[结论]蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的生长抑制作用,并可导致G0/G1期阻滞.G0/G1细胞周期阻滞可能是蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用的机制之一.     

冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响

目的探讨冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响。方法通过PI染色,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡峰,并以RT-PCR检测p53基因的表达。结果流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后使细胞周期发生变化:G1期、S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增加,凋亡的细胞数比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加。RT-PCR检测结果显示,20μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比,HL-60细胞p53 mRNA水平显著升高,且随时间延长表现得更为明显。结论冬凌草甲素能使细胞周期发生变化和p53基因的上调,从而诱导细胞发生凋亡。     

姜黄素抗急性白血病机制研究

目的:探讨姜黄素抗急性白血病的作用机制。方法:不同浓度(0.0,6.3,12.5和25.0μmol/L)姜黄素作用急性白血病HL60细胞后,用噻唑蓝法检测姜黄素对细胞生长的抑制作用;倒置相差显微镜观察细胞的形态变化,DAPI染色后用荧光显微镜观察细胞的形态变化,caspase 3试剂盒检测其活性,流式细胞仪分析细胞周期。结果:姜黄素对HL60细胞的生长有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性,48 h的IC50为20.4μmol/L。25.0μmol/L姜黄素作用48 h后,相差倒置显微镜和荧光染色可见典型的细胞凋亡的形态改变。caspase 3酶活性检测发现,随着姜黄素浓度的增加,caspase 3酶活性也逐渐升高。流式细胞仪检测发现,姜黄素浓度为6.3,25.0μmol/L时,细胞阻滞在S期,而12.5μmol/L时,则在G2/M期。结论:姜黄素可诱导HL60细胞凋亡和周期阻滞,不同浓度姜黄素可使细胞分别阻滞在S和G2/M期,caspase 3参与其凋亡和细胞周期阻滞过程。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

丹皮酚抑制U251人脑胶质瘤细胞增殖的作用研究

目的 探讨丹皮酚(Paeonol,Pae)对人脑胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251的增殖抑制作用,用透射电镜和流式细胞仪观察Pae对U251细胞的诱导凋亡作用.结果 Pae在31.25～250 mg/L浓度范围内对U251细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的量效和时效依赖关系.诱导电镜下可见肿瘤细胞发生凋亡改变.Pae在31.25～250 mg/L浓度下均可诱导U251细胞发生凋亡,其浓度越高、作用时间越长,凋亡率越高,有明显的时效和量效关系.结论 Pae对有抑制人脑胶质瘤细胞株U251的增殖和诱导其发生凋亡的作用.     

龙葵提取物对荷lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白及凋亡的影响

[目的]观察龙葵氯仿及正丁醇提取物对荷lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白、细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达的影响。[方法]建立lewis肺癌模型,64只C57BL/6J小鼠随机分成模型组、环磷酰胺组、龙葵氯仿和正丁醇提取物高、中、低剂量组,给药15d后处死,剥离肿瘤组织,称重,计算肿瘤生长抑制率;TUNEL染色法检测细胞凋亡;免疫组织化学法检测PCNA、p53、p21和Bax、Bcl-2。[结果]龙葵氯仿及正丁醇提取物对荷瘤小鼠肿瘤增殖有一定抑制作用,其中氯仿提取物中剂量组和正丁醇提取物高剂量组的抑瘤率分别为38.93%和32.14%（P〈0.01或P〈0.05）。龙葵氯仿及正丁醇提取物可降低荷瘤小鼠肿瘤组织PCNA和P53阳性细胞表达率,分别为29.7%-58%和32%-56%,并提高P21阳性细胞表达率（20%-32%）（P〈0.01或P〈0.05）。荷瘤小鼠肿瘤组织细胞的凋亡率均不同程度升高（15%-38%）（P〈0.01或P〈0.05）。Bax阳性细胞表达率均有不同程度升高（11%-41%）,Bcl-2阳性细胞表达率则均有不同程度降低（23%-37%）（P〈0.01或P〈0.05）,并可不同程度上调荷瘤小鼠肿瘤组织Bax/Bcl-2的比值。[结论]龙葵正丁醇及氯仿提取物有一定抑制lewis肺癌的生长作用,其作用机制可能与对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白（PCNA、p53、p21）表达的影响、上调肿瘤组织Bax蛋白的表达、下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax/Bcl-2的比值;促进肿瘤组织的细胞凋亡等相关。     

热化放三联因子对Hela细胞杀伤效应的实验研究

本文以体外培养的宫颈癌Hela细胞系为模型,以细胞克隆形成实验及细胞周期相分布测定为指标,观察了高温、顺铂及放射线对细胞的杀伤效应。结果表明:①从细胞克隆形成实验所得存活分数(SF)证明热化或热放二联因子较热、化、放任何单一因子对细胞的杀伤效应大,且热化优于热放。热化放三联因子应用时,杀伤作用更大。②从流式细胞仪测定的细胞周期时相分布表明,Hela细胞周期时相对热化因子较敏感,剂量小时,S+G_2/M增殖期细胞增加,呈激惹反应;剂量大时,S+G_2/M增殖期细胞减少,呈抑制反应。热放组于24小时无明显改变,96小时S+G_2/M增殖期细胞呈轻度增加现象。     

用流式细胞光度术测定冬凌草甲素和博莱霉素A_5合用对艾氏腹水癌细胞周期移行的影响

用流式细胞光度术(FcM)测定了冬凌草甲素和博莱霉素A_5联合应用对艾氏腹水癌细胞增殖周期的影响。发现冬凌草甲素可阻滞细胞M→G_1或M→G_1和G_2→M的进程,导致G_2→M%的增加,博莱霉素A_2阻断G_2→M的进行,使G_2%增加,合用后G_2 M%的构成比随时延长而大于单用组,这些现象有利于博莱霉素A_5等对M,G_2敏感时相的细胞杀伤。     

顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株细胞毒性的实验研究

目的：研究顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株(OS-732)细胞毒性的影响，探讨热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机理。方法：OS-732细胞株分别经不同温度的热疗、不同浓度顺铂化疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h，采用体外细胞毒性试验(MTT法)、流式细胞仪(FCM)分析及电子显微镜观察其对细胞毒性和细胞周期的影响，以及诱导细胞凋亡的情况。结果：41℃、43℃、45℃热疗对OS-732细胞株有明显的细胞毒性作用。在37℃恒温条件下，细胞株单独与不同浓度的顺铂作用1h，随着顺铂浓度的升高，其细胞毒性作用明显增加。43℃热疗 顺铂共同作用1h，其细胞毒性作用进一步增加，细胞毒性指数最高达72．37％；FCM分析显示对细胞周期有明显的影响，S期细胞比例明显增加，G2与M期细胞比例明显减少。43℃热疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h均出现凋亡细胞峰(亚G1峰)，细胞凋亡比例最高达56．47％；透射电镜观察有典型的细胞凋亡特征性变化。结论：顺铂热化疗有明显的增强OS-732细胞株的细胞毒性作用。43℃热疗、43℃热疗 顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡。43℃热疗诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。     

PTEN体外转染对乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响

目的探讨外源野生型PTEN基因对人乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法利用脂质体介导法将重组质粒pBP-wt-PTEN导入人乳腺癌细胞ZR-75-1中,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果经嘌呤霉素筛选得到稳定表达细胞株;重组质粒pBP-wt-PTEN稳定转染可明显抑制ZR-75-1细胞的体外增殖,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个较为明显的凋亡峰。结论转染外源性野生型PTEN基因可使ZR-75-1细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。     

丝裂霉素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡的研究

目的:研究丝裂霉素对胆囊癌细胞凋亡的影响。方法:在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的丝裂霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测胆囊癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期的变化。结果:在丝裂霉素作用下,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞仪测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高,分别与对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05);同时,S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升。结论:丝裂霉素可诱导胆囊癌细胞发生凋亡,并可使胆囊癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制。     

曲古菌素A对Molt-4细胞细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:本研究旨在探讨曲古菌素A(TSA)对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用及TSA高效低毒的抗肿瘤特性。方法:应用细胞培养、PI单标流式细胞术和DNA Ladder等方法初步探讨TSA对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用。结果:在一定浓度范围内,TSA能以浓度依赖性诱导Molt-4细胞S期及G2期阻滞。TSA以浓度依赖性方式诱导Molt-4细胞凋亡,随着TSA的浓度的升高,细胞凋亡率也显著增高。TSA的各实验组的凋亡率和对照组的凋亡率相比均有显著性差异,P<0.01。经200 nmol/L的TSA处理后,Molt-4细胞凋亡率增高,且呈时间依赖性效应关系。TSA在显著诱导Molt-4细胞凋亡的浓度范围内对正常人外周血单个核细胞(NPBMNC)无明显的诱导凋亡作用。结论:TSA有明确的诱导Molt-4细胞周期阻滞和诱导Molt-4细胞凋亡的能力,并且这种作用呈浓度和时间依赖性,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系Molt-4生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一,与NPBMNC相比较,TSA能够选择性诱导Molt-4细胞凋亡。     

咖啡酸苯乙酯对大肠癌细胞HCT116细胞周期和cyclin D1表达的影响

目的探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester, CAPE)对体外培养的大肠癌细胞HCT116细胞周期和cyclin D1表达的影响.方法以人大肠癌细胞株HCT116为研究对象,PI染色、流式细胞仪检测CAPE处理24 h后细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR检测CAPE处理24、48 h 后cyclin D1表达的变化.结果 2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理HCT116细胞24 h后,G0/G1期细胞百分率上升,S期细胞百分率下降,呈剂量依赖性.2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理HCT116细胞24、48 h后cyclin D1蛋白和mRNA表达均降低,呈剂量和时间依赖性.结论 CAPE诱导HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与其下调cyclin D1表达有关.