人类白细胞抗原单倍体不合造血干细胞移植后自然杀伤性细胞和T淋巴细胞杀伤抑制性受体表达的研究

目的研究人类白细胞抗原（HLA）单倍体不合的造血干细胞移植后自然杀伤性细胞（NK细胞）和T淋巴细胞杀伤抑制性受体重建的规律。方法2004—04～2004—12对北京大学血液病研究所借助三色和四色荧光标记技术，用流式细胞仪对应用该所GIAC方案（即G：粒细胞集落刺激因子＋I：强免疫抑制＋A：抗胸腺细胞球蛋白＋C：外周血与骨髓联合）进行HLA单倍体不合造血干细胞移植的24例患者（移植前、移植后＋30、＋60、＋90、＋120、＋180d）及其供者外周血NK细胞及T细胞上杀伤免疫球蛋白类受体（KIR），包括CD158a（KIR2DL1）、CD158b（KIR2DL2）、CD158e（K11t3DL1）和Lectin样受体（CD94／NKG2A）的表达进行了测定。结果根据移植后NK细胞上受体重建规律不同可以分为两组：第1组在移植后＋30d，与供者表达水平相比，病人受体表达明显升高（CD94，P=0．013；CD94：NKG2A，P〈0．0001；CD158e，P=0．063），随后逐渐下降，至＋180d时重建为供者水平（CD158e、CD94）或仍明显高于供者水平（CD94：NKG2A、P=0．001）；第2组在移植后＋30d，与供者表达水平相比，病人受体表达明显降低（CD158a，P=0．016；CD158b，P〈0．003），随后逐渐升高，至正常供者水平。移植后患者外周血T淋巴细胞上杀伤抑制性受体的表达规律与NK细胞第1组相近，在＋30和（或）60d时，所有KIR及CD94：NKG2A的表达均明显高于正常供者水平，其后逐渐下降，＋180d时降至正常供者水平（CD158a、CD158a／CD158b及CD158e）或仍明显高于供者水平（CD94／NKG2A，CD158b）。结论移植后NK细胞上KIR受体的低表达及CD94：NKG2A的高表达可能是移植后早期NK细胞杀伤功能低下的主要影响因素；而移植后T细胞上KIR及CD94：NKG2A的高表达可能有利于移植后的移植物抗宿主疾病（GVHD）及移植物抗白血病（GVL）效应分离。     

炎症性肠病患者杀伤细胞抑制性受体的表达及临床意义

杀伤细胞抑制性受体(killer cell inlaibitory receptors,KIR)主要表达在自然杀伤(NK)细胞和CD8+ T细胞,以及少量CD4+ T细胞,可特异地与HLA-Ⅰ类分子结合,传递负反馈信号,抑制NK细胞和T细胞的生物学活性[1-2].KIR基因参与了许多疾病的发生,如器官移植排斥反应、自身免疫性疾病和产前子痫等[1-2].本研究分析了炎症性肠病(IBD)患者外周血和肠黏膜固有层内NK和T细胞KIR的表达,包括CD158a(KIR 2DL1)、KIR-NKAT2(KIR 2DL3)和NKB1(KIR3DL1),并探讨其在疾病发生过程中的作用.     

慢性丙型肝炎患儿外周血NK细胞抑制受体的表达及其临床意义

目的检测慢性丙型肝炎(CHC)患儿外周血中NK细胞抑制受体的表达水平,并探讨其意义。方法选取2015年1月至2018年1月我院收治的CHC患儿135例,检测其血清中CD158b、CD159e及NKG2D表达水平,分析三项指标在不同肝纤维化分组中的表达水平及与肝纤维化程度相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析三者诊断晚期肝纤维化的效能。结果肝功能正常患儿CD158b、CD159e及NKG2D水平分别为(13.7±5.3)%、(13.1±4.8)%、(78.4±5.9)%,明显低于肝功能异常患儿(15.9±5.0)%、(21.5±5.6)%、(95.1±3.5)%,均P0.05;CD158b与CD159e及NKG2D均呈正相关(r=0.195、0.387,P=0.023、0.000),CD159e与NKG2D呈现正相关(r=0.493,P0.001);CHC患儿血清CD158b、CD159e及NKG2D水平随肝纤维化程度增加而升高,相关性显示,CD158b、CD159e及NKG2D与肝纤维化程度呈正相关(r=0.332、0.465、0.275,均P0.05);CD158b、CD159e及NKG2D诊断严重肝纤维化均有一定价值,联合检测诊断效能高于任一单一指标检测。CD158b、CD159e及NKG2D在伴有肝硬化及未接受抗病毒治疗患儿中表达水平升高。结论 CD158b、CD159e及NKG2D在CHC肝纤维化患儿体内水平较高,三者联合检测有助于严重肝纤维化的早期的诊断。     

脐血NK细胞的杀伤活性及其影响因素

目的探讨脐血NK细胞的杀伤活性及其影响因素。方法对成人脐血及外周血NK细胞的活化和抑制性受体、细胞毒性颗粒、胞内细胞因子的表达进行检测。结果脐血NK细胞与成人外周血NK细胞的大部分指标均无差异,但脐血NK细胞的NKG2A、CD94表达明显升高,而颗粒酶B表达则较低。结论脐血NK细胞抑制性受体NKG2A/CD94表达升高,颗粒酶B降低是脐血NK细胞活性低于外周血NK细胞的主要原因。     

肝细胞癌患者外周血NK细胞频率及受体表达

目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血NK细胞频率、功能及受体表达的变化,并分析其在HCC患者中表达特点。方法用流式细胞术检测36例HCC患者、34例乙型肝炎肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者的外周血NK细胞频率及其受体CD158a、CD158b、NKG2D、NKP30、NKP44、NKP46的表达情况,用IL-12刺激外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、流式细胞术检测NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α的能力,并用流式细胞毒性分析法检测NK细胞对K562细胞的杀伤效率,对2组NK细胞频率、受体及功能进行分析和比较。结果 2组患者NK细胞的频率差异无统计学意义(P0.05)。CD56dimNK细胞的活化性受体NKG2D、NKP30表达在HCC组高于LC组(P0.05)。在IL-12刺激下HCC组CD56brightNK细胞IFN-γ、TNF-α表达率、CD56dimNK细胞IFN-γ表达率均低于LC组(P0.05)。HCC组NK细胞对K562的杀伤比例高于LC组(P0.05)。结论 HCC组NK细胞分泌细胞因子能力低于LC组,但杀伤功能强于LC组,可能与其表面活化性受体高表达有关。     

汉族健康人群KIR分布对异基因造血干细胞移植供者选择的影响

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）在中国人群中的分布规律及其对异基因造血干细胞移植供者选择的影响。方法采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）分型技术检测了79例汉族人群中KIR的基因型分布、74例异基因造血干细胞移植供受者对KIR及HLA基因型。结果KIR2DL1的基因分布频率为100％,KIR2DL2为20％,KIR2DL3为100％,KIR3DLI为94．81％。95．9％的供者携带与异基因造血干细胞移植关系密切的三组KIR受体。结论汉族人群具有独特的KIR分布规律,KIR2DL1、KIR3DL1是在中国人群异基因造血干细胞移植中起主要作用的KIR受体。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体3DL1(KIR3DL1)阳性NK细胞在慢性HIV-1感染中的作用研究

目的了解杀伤细胞免疫球蛋白样受体3DL1(KIR3DL1)阳性自然杀伤细胞(NK细胞)在急性和慢性1型艾滋病病毒(HIV-1)感染中的作用。方法用流式技术检测急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1受体在NK细胞的表达,CD38、HLA-DR在NK细胞的共表达,及NK细胞分泌CD107a和TNF-α的水平。结果 1)急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK细胞比例与正常对照者相当,但是慢性感染者KIR3DL1+NK细胞数量与病毒载量成反比(r=-0.439,P=0.009)。2)急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK细胞共表达CD38和HLA-DR的比例均显著高于正常对照(P 0.000 1),且其总NK以及KIR3DL1+NK、KIR3DL1-NK细胞共表达CD38和HLA-DR的水平与HIV-1病毒载量均成正比、与CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数及CD4/CD8细胞比值均成反比(P均0.05)。3)急、慢性感染者和正常对照分泌CD107a的KIR3DL1+NK细胞比例均低于其各自的KIR3DL1-NK细胞(P 0.01)。急、慢性感染者KIR3DL1+NK细胞分泌CD107a的水平与正常对照相当,但是KIR3DL1-NK细胞分泌CD107a的水平均小于正常对照者,差异有统计学意义(急性:P=0.016;慢性:P=0.045)。4)急、慢性感染者和正常对照者分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的KIR3DL1-NK细胞比例与KIR3DL1+NK细胞相当,且急、慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK细胞分泌TNF-α的水平与正常对照相当。慢性HIV-1感染者总NK包括KIR3DL1+和KIR3DL1-细胞分泌TNF-α的水平与病毒载量、CD4细胞计数均呈负相关性(P均0.05)。结论慢性HIV-1感染者KIR3DL1+NK和KIR3DL1-NK细胞均参与抑制病毒复制,可能与其分泌的TNF-α有关。然而CD38和HLA-DR在KIR3DL1+NK和KIR3DL1-NK细胞共表达上调可不利于抑制病毒复制。     

慢性病毒性肝炎肝内CD8＋T细胞中NKG2D分子的表达和功能

自然杀伤（NK）细胞受体NKG2D是C型促凝集素受体家族的一员。它表达于所有的NK细胞和CD8＋T细胞的一个亚群。NKG2D与其配体结合后可直接激活NK细胞并可作为CD8＋T细胞的辅助刺激因子。然而,近来的报道证明,NKG2D在慢性炎症反应中具有直接激活T细胞的作用。本文的目的在于研究NKG2D在慢性病毒性肝炎患者循环中和肝内CD8＋T细胞上的表达形式及其功能。     

小鼠肝脏自然杀伤细胞分离纯化及受体表达分析

目的:建立一种有效分离纯化小鼠肝脏自然杀伤细胞(NK细胞)的方法,并对其表面几种NK细胞受体(NKP46、NKG2D、NKG2A/C/E和Ly49A/C/I)的表达进行分析。方法:首先利用Percoll不连续密度梯度离心分离小鼠肝脏淋巴细胞,进一步经CD5(Ly-1)磁珠阳性分选清除CD3 DX5 T细胞,最后利用CD49b(DX5)磁珠阳性分选肝脏NK(CD3-DX5 )细胞。分离后的细胞经台盼蓝染色检测细胞存活率,流式细胞术检测肝脏NK细胞纯度及几种NK细胞受体的表达百分率。结果:不连续密度梯度离心能有效分离出肝脏淋巴细胞,CD5(Ly-1)磁珠清除CD3 DX5 T细胞后再用CD49b(DX5)磁珠阳性分选出肝脏NK(CD3-DX5 )细胞,纯度可达到(94.8±1.0)%,存活率为92%~95%。NK细胞受体NKP46、NKG2D、NKG2A/C/E和Ly49A/C/I在小鼠肝脏NK细胞上的表达百分率分别为(97.9±0.7)%、(93.2±1.7)%、(57.2±0.9)%和(63.3±1.9)%。结论:成功建立了一种有效分离纯化小鼠肝脏NK细胞的方法,掌握了正常小鼠肝脏NK细胞上几种重要受体的表达情况,为进一步在病毒性肝炎小鼠模型中进行肝脏NK细胞功能学研究及受体基因芯片分析奠定了基础。     

DC-CIK共培养在AL化疗后免疫治疗中的应用及其对NKG2D表达的影响

目的观察树突状细胞(DC)—细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养用于急性白血病(AL)化疗后免疫治疗的疗效,及其对自然杀伤(NK)细胞表面活化受体NKG2D表达的影响。方法 31例AL患者经诱导治疗骨髓达完全缓解后,给予DC-CIK共培养治疗。治疗前后检测外周血中T细胞亚群表达、血清IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ水平及外周血中NKG2D的表达。结果所有患者治疗结束后骨髓均处于完全缓解状态;DC-CIK共培养治疗后,CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD5+6/CD1+6高于治疗前(P均<0.05);血清IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ水平高于治疗前(P均<0.05);外周血单个核细胞中NKG2D阳性表达率为25.41%±8.47%,高于治疗前的8.07%±2.02%(P<0.05)。结论 DC-CIK共培养用于AL化疗后的免疫治疗效果较好,能更有效地清除微小残留病灶,提高外周血中NKG2D的表达,纠正AL细胞对自体NK细胞的免疫编辑作用。     

Expression of HLA-C-specific natural killer cell receptors (CD158a and CD158b) on peripheral blood mononuclear cells after allogeneic bone marrow transplantation

We investigated the expression of natural killer cell receptors (NKRs) for HLA-C on peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in 23 allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT) patients to analyse the role of NKRs in alloresponse concerning graft-versus-host disease (GVHD). CD158a expression was low and there was little change in the expression after allo-BMT. Also, there was no difference in the proportion of CD158a+/CD3- after allo-BMT. In contrast, the proportion of CD158b+/CD3- cells, mainly NK cells, increased in the early stage (< 2 months) after allo-BMT and then gradually decreased (3.3 +/- 2.6% before BMT vs. 15.4 +/- 8. 6% in the early stage after BMT, 8.5 +/- 4.9% during the period 3-6 months after BMT and 7.0 +/- 3.0% > 6 months after BMT; P < 0.05). However, CD158b expression on CD3+ T cells increased 3 months after allo-BMT (1.1 +/- 1.1% before BMT vs. 5.1 +/- 7.7% during the period 3-6 months after BMT and 3.0 +/- 2.4% > 6 months after BMT, P < 0. 05). The highest percentages of CD158 expression in patients without chronic GVHD (cGVHD) and those with cGVHD were compared. The percentage of CD158b+/CD3+ cells and also that of CD158b+/CD8+ cells were significantly increased in patients with cGVHD compared with those in patients without cGVHD (2.6 +/- 2.0% vs. 8.0 +/- 11.2% and 2.3 +/- 1.5% vs. 8.3 +/- 11.7% respectively; P < 0.05). The exact clinical relevance of these CD158b-expressing cells is not clear. However, there is an interesting possibility that CD158b-expressing cells play some role in the regulation of GVHD after allo-BMT.     

重型再生障碍性贫血CD4+ CD25+调节性T细胞的变化

应用流式细胞术检测重型再生障碍性贫血（SAA）患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4^＋CD25kighT细胞的数量。结果10例初治SAA患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4＋T细胞的（6．23±1．82）％,明显低于正常对照组（9.20＋2．95）％（P〈0．01）,CD4^＋CD25^highT细胞比例为（1．02±0．11）％,亦明显低于正常对照组（1．43±0．41）％;10例造血恢复SAA患者CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4^＋CD25^hishT细胞比例分别为（8．92±1．22）％和（1．41±0．64）％,与正常对照组无明显差异（P〉0．01）。认为CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD25^highT细胞水平与SAA密切相关。     

1型糖尿病患者外周血中CD4^＋CD25^＋与CD8^＋CD28^-调节性T细胞水平的研究

流式细胞仪检测1型糖尿病（T1DM）患者外周血CD4^＋CD25^＋与CD8^＋CD28^-调节性T细胞的水平,发现其外周血CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞水平[（2．02±0．43）％]显著低于2型糖尿病（T2DM）组[（6．79±1．75）％]和健康对照（NC）组[（7．84±1．45）％],而CD8^＋CD28^-调节性T细胞水平三组间无差异。     

急性脑梗死病人T淋巴细胞亚群的临床研究

目的探讨急性脑梗死病人T淋巴细胞亚群CD4 ,CD8 ,CD4 /CD8 的临床意义。方法应用流式细胞仪测定30例发病72h内急性脑梗死病人及健康体检者正常(对照组)血清中CD4 ,CD8 ,CD4 /CD8 水平,并根据神经功能缺损标准将脑梗死组分为轻、中、重3型,分析CD4 ,CD8 ,CD4 /CD8 与脑梗死轻重的关系。结果与正常对照组相比,急性脑梗死组中度、重度病人CD3 ,CD4 ,CD4 /CD8 显著降低,CD8 显著升高,而轻型脑梗死组变化不明显。结论急性脑梗死后病人免疫功能发生紊乱,并与其病情轻重有关,中度、重度脑梗死急性期病人存在显著的细胞免疫功能低下。     

不同转移潜能肝癌细胞株中CD标志物的表达差异及意义

目的探讨不同转移潜能的肝癌细胞株中几种CD标记物的表达差异及其意义,为进一步利用CD分子标志物分离多潜能肝癌干细胞奠定基础。方法常规培养三种不同转移潜能的肝癌细胞株HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1,胰酶消化获得单细胞悬液后,经流式抗体染色,通过流式细胞仪分析三种肝癌细胞株中CD133、CD90、CD44、CD34、CD24的表达差异及意义。结果 CD133+细胞在HepG2细胞株仅占0.1%,而在MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中表达也较低;CD90+、CD44+、CD90+CD44+表达水平随细胞转移潜能的增加呈递增趋势(P<0.05)。CD44+CD24+在HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中的阳性表达率分别为0.05%、10.3%和0.3%(P<0.05);三者中均无CD34+和CD133+CD90+细胞表达。结论 CD90和CD44与肝癌细胞的转移潜能有一定的相关性,可能成为潜在的肝癌肿瘤干细胞标记物。     

芦笋颗粒在肿瘤治疗中的作用（附42例报告）

目的了解芦笋颗粒在放化疗中的免疫作用。方法42例确诊肺癌的患者在放疗及化疗治疗中加服芦笋颗粒，其中放疗治疗组20例，并同时设对照组观察血常规及CD3CD．CD8CD4／CD8，及NK细胞活性改变。结果服芦笋颗粒组的免疫指标及血常规改变明显较对照治疗组好。结论芦笋颗粒能够增强体质，对抗放化疗的毒副反应，调整免疫功能。     

免疫功能失调与急性冠脉综合征发病关系的研究

目的 观察急性冠脉综合征(ACS)患者免疫功能变化情况,探讨其与斑块稳定性之间的关系.方法 急性冠脉综合征(ACS)组、稳定型心绞痛(SA)组及正常对照组3组病例于清晨空腹抽取静脉血,采用流式细胞术测定外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD4+T细胞和CD8+T细胞表达百分比,采用ELISA方法测定外周血中细胞因子转化生长因子β(TGF-β)、白介素-10(IL-10)水平.常规检测血糖及血脂水平.结果 ACS组外周血中Treg表达百分比显著低于SA组和对照组(P<0.05),ACS组CD4+/CD8+T细胞表达百分比的比值显著高于SA组和对照组(P<0.05).ACS组的TGF-β、IL-10水平显著低于SA组和对照组 (P<0.05).结论 急性冠脉综合征患者体内存在效应性T细胞和调节性T细胞之间的失衡,免疫调节功能紊乱参与了动脉粥样斑块的发生发展过程.     

急性脑梗死患者T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+ 和C反应蛋白变化及其意义的研究

目的 探讨急性脑梗死患者T淋巴细胞亚群CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋和C-反应蛋白（CRP）变化及其意义。方法 应用流式细胞仪测定36例发病72 h内急性脑梗死患者及正常对照组血清中CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋及CRP水平,并根据神经功能缺损标准将脑梗死组分为轻、中、重三型,将脑梗死组根据年龄分为老年组和非老年组,分析CD4^＋、CD8^＋和CRP与脑梗死轻重的关系。结果 与正常对照组相比急性脑梗死组中、重型CD4^＋、CD4^＋/CD8^＋明显降低,CD8^＋、CRP明显升高,而轻型脑梗死组变化不明显;中、重型脑梗死随着病情加重CD4＋明显减低。结论 炎症反应参与了急性脑梗死的发病过程,急性脑梗死后患者免疫功能发生紊乱,并与其病情轻重有关。