延迟性神经元死亡与脑缺血后海马羟自由基产生和ATP含量变化的关系

短暂脑缺血后海马ＣＡ1区锥体细胞常发生延迟性神经元死亡 (ｄｅｌａｙｅｄｎｅｕｒｏｎａｌｄｅａｔｈ ,ＤＮＤ) [1 ,2 ] 。研究认为 ,脑缺血后的ＤＮＤ可能与缺血再灌注期间大量产生的氧自由基有关[3] 。本实验拟动态测定脑缺血再灌注后海马羟自由基(ＯＨ·)含量的变化 ,同时进行病理检查 ,以探讨二者之间的关系。并动态测定海马ＡＴＰ、ＡＤＰ和ＡＭＰ含量的变化。材料和方法沙土鼠前脑缺血再灌注模型脑缺血时间为 10ｍｉｎ[1 ] 。沙土鼠 ,5 0～ 6 0 ｇ ,分为假手术组、再灌注 6ｈ组、48ｈ组和 96ｈ组 ,每组 13只 ,其中 5只用于病理检查 …     

脑缺血再灌注期间海马神经元微管相关蛋白-2免疫活性的变化

短暂脑缺血后 ,马ＣＡ1区神经元的死亡多发生在缺血后 3～ 4天 ,故称之为“延迟性神经元死亡”(ｄｅｌａｙｅｄｎｅｕｒｏｎｄｅａｔｈ,ＤＮＤ) [1] 。本实验采用沙土鼠前脑缺血再灌注模型 ,观察脑缺血再灌注期间微管相关蛋白 2 (ＭＡＰ 2 )活性的变化 ,以探讨ＭＡＰ 2和ＤＮＤ的关系。材料和方法动物模型和分组　沙土鼠前脑缺血再灌注模型[2 ] 。腹腔注射戊巴比妥钠(4 0ｍｇ/ｋｇ)麻醉 ,分离沙土鼠双侧颈总动脉 ,应用无创动脉夹阻断颈总动脉血流造成脑缺血 10ｍｉｎ ,松开动脉夹恢复脑血流即为再灌注。沙土鼠随机分为 4组 :假手术组 ,再灌…     

细胞间粘附分子1、肿瘤坏死因子α转录水平在缺血再灌注大鼠脑皮质中表达的相关性

目的　研究大鼠局灶性脑缺血再灌注期细胞间粘附分子１（ Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１） 、肿瘤坏死因子α（ Ｔ Ｎ Ｆα） 在转录水平的表达规律及相关性。方法　用插线法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用逆转录聚合酶链式反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 测定缺血再灌注期 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ｍ Ｒ Ｎ Ａ、 Ｔ Ｎ Ｆαｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达变化。结果　缺血侧皮质 Ｔ Ｎ Ｆαｍ Ｒ Ｎ Ａ 在缺血后１ 小时开始显著升高,至缺血再灌注２ 小时达到高峰,持续高表达１ 周; Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ｍ Ｒ Ｎ Ａ 在缺血后２ 小时开始显著升高;至缺血再灌注１０ 小时达到高峰,持续高表达１周。二者具有密切的相关性。结论　 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 、 Ｔ Ｎ Ｆα转录水平在脑缺血再灌注早期表达升高, Ｔ Ｎ Ｆαｍ Ｒ Ｎ Ａ、 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达具有正相关性。     

颌下腺缺血再灌注后细胞凋亡与增殖的研究中国医科大学第一临床学院整形外科

我们应用几种形态学方法观察大鼠颌下腺缺血及再灌注不同时相上皮细胞的凋亡与增殖特征 ,以揭示缺血再灌注颌下腺组织损伤与修复过程中细胞凋亡和增殖与颌下腺上皮细胞丧失的关系。一、材料和方法1.材料 :增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)单克隆抗体、免疫组织化学染色ＳＦＴＭ试剂盒和二氨基联苯胺 (ＤＡＢ)呈色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司 ) ,ＡＦ试剂盒 (ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司 )。2 .实验方法 :雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 30只 ,体重 180～ 2 5 0 ｇ ,随机分为对照组 (ＣＯＮ)、缺血组 (ＩＳＣ)和缺血再灌注组 (Ｉ/Ｒ ) …     

HSP70和iNOS表达在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

为探讨热休克蛋白 70 (ＨＳＰ70 )和诱导型一氧化氮合酶 (ｉＮＯＳ)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注中的作用 ,我们用免疫组化方法 ,对肾脏缺血大鼠模型的ＨＳＰ70和ｉＮＯＳ进行了检测。材料和方法　健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 81只 ,体重 (2 37.2± 16 .6 ) ｇ ,雌雄不限。随机分为对照组 (ＣＯＮ)、缺血再灌注组(ＩＲ)、缺血预处理后缺血再灌注组(ＩＰＣ) ,每组 2 7只。ＩＰＣ组连续 3次左肾血管蒂缺血 5ｍｉｎ后再灌注 5ｍｉｎ ,再缺血 1ｈ ,然后再灌注 0、2、6ｈ取标本 ;ＩＲ组在切除右肾 30ｍｉｎ后 ,左肾缺血 1ｈ ,取标本时间同ＩＰＣ组…     

大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤对钾氯协同转运蛋白2表达的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤对钾氯协同转运蛋白2( KCC2)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,体重250～300 g,随机均分为假手术组(S组)和缺血-再灌注组(IR组).IR组采用大脑中动脉栓塞2h,再灌注3、24、48 h的方法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,S组除不插入栓线外,其余步骤相同.采用免疫组化法测定大鼠海马和皮质KCC2的表达,用HE染色观察脑组织形态学改变.结果 与S组比较,再灌注后IR组大鼠大脑皮质和海马KCC2表达下调(P＜0.05).与再灌注3h比较,再灌注24、48 h IR组皮质KCC2表达明显增多(P＜0.05).结论 大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤降低海马和皮质KCC2的表达.     

腺苷对离体心脏再灌注后炎性因子TNF-αmRNA、ICAM-1mRNA表达的影响

本文采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌注模型 ,以半定量反转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)技术 ,观察心肌缺血再灌注 (ＩｓｃｈｅｍｉａＲｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ,Ｉ/Ｒ )后炎性因子ＴＮＦ ａｍＲＮＡ和ＩＣＡＭ 1ｍＲＮＡ的表达及腺苷的作用。　　材料和方法　选择Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠 2 2只随机分为三组。空白组 (Ｓ)无Ｉ/Ｒ。对照组 (Ｃ)缺血 1ｈ再灌 3ｈ。腺苷预治疗组 (Ａ)缺血前泵入 6 6 8μｇ腺苷 ,然后缺血 1ｈ再灌 3ｈ。监测左室收缩压(ＬＶＳＰ)、左室舒张末压 (ＬＶＳＤＰ)、心率(ＨＲ)及冠脉流出量 (ＣＦ) ,并计算其恢复百分率。…     

不同剂量纳洛酮后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨不同剂量纳洛酮后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法 成年sD大鼠88只,体重270～330 g,随机分为4组(n=22):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和不同剂量纳洛酮后处理组(N_(1,2)组).除S组外,其它3组均采用阻断右侧大脑中动脉90 min、再灌注24 h的方法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型.N_(1,2)组于再灌注即刻分别腹腔注射纳洛酮1、10 mg/kg,S组和m组给予等容量生理盐水.分别于再灌注2、24 h时测定大鼠神经功能障碍评分(NDS);再灌注24 h时测定脑梗死面积和脑组织微管相关蛋白2(MAP2)的表达水平和脑组织血浆容量、徽血管直径和长度.结果 与S组相比,IR组、N_(1,2)组NDS评分均升高,脑梗死面积增大,脑组织MAP2表达水平下调,缺血侧脑组织血浆容量降低,微血管直径和长度减小(P<0.05);与IR组相比,N_2组NDS评分降低,脑梗死面积减小,脑组织MAP2表达水平上调,缺血侧脑组织血浆容量升高,微血管直径和长度增大(P<0.05),N_1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与N_1组相比,N_2组NDS评分降低,脑梗死面积减小,脑组织MAP2表达水平上调,缺血侧脑组织血浆容量升高,微血管直径和长度增大(P<0.05).结论 纳洛酮后处理可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性.     

N-myc下游调节基因2在七氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价N-myc下游调节基因2(NDRG2)在七氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性成年SD大鼠48只,体重280～320 g,采用随机数字表,将大鼠随机分为3组(n=16):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(Sev组).采用大脑中动脉阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.大鼠吸入2％七氟醚lh,每天1次,连续5d行七氟醚预处理.Sev组于七氟醚预处理结束后24h制备局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24h时行神经功能评分,随后处死大鼠,取脑组织,测定脑梗死体积百分比,采用Western Blot法测定缺血半暗带区NDRG2和活化的Caspase-3的表达,采用免疫组织荧光测定缺血半暗带区NDRG2的表达及定位.结果 与S组比较,I/R组和Sev组脑梗死体积百分比升高,神经功能评分降低,脑组织缺血区半暗带NDRG2和活化的Caspase-3表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组脑梗死体积百分比降低,神经功能评分升高,脑组织缺血区半暗带NDRG2和活化的Caspase-3表达下调(P＜0.05).Sev组核内NDRG2阳性染色较I/R组减浅.结论 七氟醚预处理可能通过抑制脑组织NDRG2的表达、活性和细胞凋亡,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

Box-siRNA预先给药对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探讨B细胞淋巴瘤相关X蛋白基因-双链RNA（Bax-siRNA）对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法SD大鼠66只，体重290～310g，随机分成3组：假手术组（S组，n=6）、局灶性脑缺血再灌注组（C组，n=30）、局灶性脑缺血再灌注＋Bax—siRNA组（B组，n=30）。C组、B组行大脑中动脉阻断，阻断1h再开放，制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，B组在缺血前即刻、16、24h水压法尾静脉注射Bax-siRNA 2．5mg／kg（用PBS稀释至10ml），C组给予等量PBS，S组只作切口，不作缺血再灌注。B组、C组分别于再灌注1、5、11、23、47h各处死6只大鼠，S组实验后23h处死大鼠，断头取脑，计算脑梗塞体积比，用RT-PCR法测定脑缺血半影区Bax mRNA表达水平。结果B组、C组再灌注11h时脑梗塞体积比达到高峰，再灌注23h时B组、C组脑梗塞体积比均高于S组（P〈0．01）；与C组比较，B组脑梗塞体积比缩小（P〈0．05）。S组和B组Bax mRNA无表达，C组再灌注23h时Bax mRNA表达强于S组。结论Bax-siRNA预先给药可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

缺血后处理联合远隔缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨缺血后处理联合远隔缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠86只,体重270～330 g,随机分为5组,假手术组(Ⅰ组,n=19)仅实施手术,不行缺血再灌注;缺血再灌注组(Ⅱ组,n=19)阻断右侧大脑中动脉缺血1.5 h,再灌注24 h制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型;Ⅲ组(n=16)再灌注前脑缺血30 s,再灌注30 s,重复3次;Ⅳ组(n=16)再灌注前右侧股动脉缺血5 min恢复灌注;V组(n=16)再灌注前行缺血后处理及远隔缺血后处理.于再灌注2和24 h时行神经功能缺损评分(NDS评分);再灌注24 h时断头取脑,测定脑梗死面积,检测脑组织微管相关蛋白2(MAP2)的表达水平;股静脉注射异硫氰酸,右旋糖酐,断头取脑,行共聚焦扫描,以对侧作为对照.结果 与l组比较,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅵ组和V组NDS评分和缺血侧脑梗死面积百分比明显升高,缺血侧脑组织MAP2表达水平、血浆容量、微血管直径和长度明显降低(P<0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组和V组NDS评分和缺血侧脑梗死面积百分比明显降低,缺血侧脑组织MAP2表达水平、血浆容量、脑微血管直径和长度明显增加(P<0.05).结论 缺血后处理联合远隔缺血后处理可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,其效果与两者单独应用时相似.     

细胞间粘附分子1,肿瘤坏死因子α转录水平在缺血再灌注大 …

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再澡注期细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）在转录水平的表达规律及相关性。方法 用插线法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定缺血再灌注期ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＴＮＦαＲＮＡ的表达变化。结果 缺血侧皮质ＴＮＦαｍＲＮＡ在缺血后１小时开始显著升高,至缺血再灌注２小时达到高峰,持续高表达１周;ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ     

脂氧素A4对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响

目的 探讨脂氧素A4对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,体重200～250 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(I/R组)和脂氧素A4组(L组).采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,阻断右侧大脑中动脉缺血2 h后行再灌注.L组缺血即刻右侧侧脑室注射脂氧素A4 100 ng,S组和I/R组右侧侧脑室注射等容量生理盐水5 μl.于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,静脉注射2%伊文斯蓝4 ml/kg,1 h后处死大鼠取脑,测定右侧脑水含量和伊文斯蓝含量,检测脑皮质基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达.结果 与S组比较,I/R组和L组神经功能缺陷评分、脑水含量和伊文斯蓝含量升高,脑皮质MMP-9表达上凋(P＜0.05或0.01);与I/R组比较,L组神经功能缺陷评分、脑水含量和伊文斯蓝含量降低,脑皮质MMP-9表达下调(P＜0.01).结论 脂氧素A4可降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,促进局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能恢复,其机制与抑制MMP-9表达上调有关.     

电针预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元pSTAT3蛋白表达的影响

目的 评价电针预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元磷酸化信号转导及转录激活因子3(pSTAT3)蛋白表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠45只,体重280 ～ 320 g,采用随机数字表法,将其随机分为假手术组、局灶性脑缺血再灌注组和电针预处理组(n=15).局灶性脑缺血再灌注组采用线栓阻塞颈总动脉和颈外动脉24 h恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.电针预处理组电针刺激百会穴30 min,处理后24h时制备模型,再灌注24 h时进行神经行为学评分,随后处死大鼠取脑测定脑梗死体积,计算脑梗死体积百分比,采用免疫荧光染色和Westem blot法检测缺血半暗带皮质神经元pSTAT3蛋白的表达.结果 与假手术组比较,局灶性脑缺血再灌注组和电针预处理组神经行为学评分降低,脑梗死体积百分比增加,皮质神经元pSTAT3蛋白表达上调(P＜0.05);与局灶性脑缺血再灌注组比较,电针预处理组神经行为学评分升高,脑梗死体积百分比减少,皮质神经元pSTAT3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 电针预处理通过上调皮质神经元pSTAT3蛋白的表达减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

当归注射液保护鼠脑缺血再灌流自由基损伤的研究

对ＳＣ大鼠随机分为：对照组；缺血３０ｍｉｎ再灌流６０ｉｎ组，，治疗组，采和结扎４根血管的方法，造成大鼠完全性血再灌注模型。以ＳＯＤ／ＭＤＡ，ＰＧＦ１０／ＴＸＺＢ２，超微结构观察等指标，实验结果发现，当归注射液有明显保护鼠脑作用，当归注射液治疗组ＳＯＤ／ＭＤＡ，ＰＧＦ１０／ＴＸＢ２值与缺血３０ｍｉｎ再灌注６０ｍｉｎ组比较有显著差异（Ｐ〈０．０１）。且从超微结构上证实，对鼠脑缺血再灌流后脑组织有保护作     

肾缺血再灌注损伤时血小板衍化生长因子的表达及意义

20 0 0年 1月至 2 0 0 1年 3月 ,我们在建立肾缺血再灌注损伤动物模型的基础上 ,采用免疫组化方法检测血小板衍化生长因子 (ＰＤＧＦ Ａ)在肾脏的表达 ,观察其变化规律和作用 ,现报告如下。材料与方法　 1.动物实验 :雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 78只。体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ。分为 3组 :肾缺血再灌注损伤组 (实验组 )4 8只 ,切除右肾 ,左肾蒂夹闭 45ｍｉｎ后松开 ;假手术组 15只 ,暴露左右肾蒂即关腹 ;对照组 15只 ,单纯切除右肾。术后 1、3及 7ｄ处死动物 ,免疫组化ＳＰ法对各时相点标本分别行ＰＤＧＦ Ａ检测。一抗为兔抗鼠ＰＤＧＦ Ａ抗体。用…     

氯化铁致兔大脑中动脉脑缺血模型的建立

本研究旨在利用化学法刺激兔大脑中动脉 (ＭＣＡ)建立兔ＭＣＡ血栓型局灶性脑缺血模型 ,并以溶栓药物进行动脉内溶栓治疗实验 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.实验动物 :新西兰兔 36只 ,重2 .0～ 2 .5ｋｇ ,随机分 3组 :Ａ组 :假手术组 ,12只 ,除不滴加氯化铁外 ,其余手术步骤同其他组 ;Ｂ组 :血栓模型组 ,12只 ,将氯化铁敷与兔左侧ＭＣＡ表面 30ｍｉｎ ;Ｃ组 :尿激酶 (ＵＫ)治疗组 ,12只 ,血栓形成后 3ｈ颈总动脉内给ＵＫ 85 0 0Ｕ/ｋｇ体重。2 .脑缺血模型的制备 :( 1)取新西兰兔 1只 ,以 3%戊巴比妥钠 30ｍｇ/ｋｇ体重腹腔麻醉。固…     

异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TLR4和MyD88表达的影响

目的 评价异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)表达的影响.方法 雄性成年SD大鼠54只,体重250～300 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)仅分离血管,不留置线栓;脑缺血再灌注组(IR组)采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h;异氟醚预处理(IP组)吸入2%异氟醚,1h/d,连续5 d,处理结束后24 h时制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24 h时进行神经功能缺陷评分,然后每组处死3只大鼠,测定脑梗死体积.分别于再灌注24、48和72 h时,处死5只大鼠,取右侧大脑缺血部位额叶皮质,采用Western blot法测定TLR4、MyD88和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,IR组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,IR组TLR4、MyD88和NF-κB的表达均上调,IP组MyD88和NF-κB的表达上调(P＜0.05);与IR组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,TLR4、MyD88和NF-κB的表达均下调(P＜0.05).结论 异氟烷预处理可通过抑制脑组织TLR4和MyD88的表达,减轻炎性反应,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

大鼠全脑缺血再灌注细胞凋亡的观察

本实验采用大鼠全脑缺血再灌注模型，观察缺血后不同时间点的神经元凋亡，以研究大鼠全脑缺血再灌注后脑组织的形态学改变。材料与方法一、动物分组健康、雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４３只，体重２００～２５０ｇ，随机分成七组；假手术组（Ａ组，ｎ＝５），缺血组：分成缺血１０分钟组Ｂ组、缺血６小时组Ｃ组（各组ｎ＝５），缺血再灌注组：缺血１０分钟再灌注１天组Ｄ组、２天组Ｅ组、４天组Ｆ组、７天组Ｇ组（各组ｎ＝７）。二、脑缺血模型的制备采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ法［１］，制备大鼠全脑缺血模型。假手术组只分离出翼小孔、双侧颈总动…     

丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注低氧诱导因子-1和热休克蛋白70的影响

目的 观察丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注后低氧诱导因子(HIF-1)和热休克蛋白70(HSP70)的影响,探讨丙泊酚脑保护作用机制.方法 32只雄性sD大鼠,随机均分为四组,采用可逆性大脑中动脉内线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,采用免疫组化法检测HIF-1和HSP70.HE染色,光镜观察细胞形态学改变.结果 大鼠局灶性脑缺血-再灌注后大脑皮质和海马区出现神经细胞的坏死和凋亡改变,HIF-1和HSP70的表达均增加,给丙泊酚后神经细胞的肿胀、坏死、凋亡明显减少,HIF-1和HSP70蛋白的表达受到明显抑制.结论 丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护机制与减少HIFll、HSP70的表达有关.