变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗对唾液变形链球菌和牙菌斑的影响

目的　了解变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠唾液变链菌和牙面菌斑的影响。方法　 2 8d龄 Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为 pc DNA3 - pac组、pc DNA3 - gtf B组、pc DNA3 - pac联合pc DNA 3 - gtf B组、变形链球菌灭活全菌组、pc DNA3空载体组和 PBS液组 ,进行三次双侧颌下腺腺周注射免疫 ,建立定菌鼠模型 ,作诱龋实验 3个月。唾液变链菌计数和菌斑计分。结果　唾液变链菌菌落计数和牙面菌斑计分在 pc D-NA3与 PBS组最高 ,其次为单基因疫苗免疫组 ,联合基因疫苗和灭活全菌细胞免疫组最低 ,各组间有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论　 pc DNA3 - gtf B和 pc DNA3 - pac具有明显的免疫抑菌作用 ,联合基因疫苗免疫优于单基因疫苗     

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫性的实验研究

「目的」测定基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫原性和免疫反应性。「方法『用基因重组乳链球菌（ＨＬ１０７）、乳链球菌（ＬＭ０２３０）、变形链球菌Ｉｎｇｂｒｉｔｔ分别灌胃免疫实验动物ＢＡＬＢ／ｃ鼠,与未免疫组作对照,经酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ０测定血清及唾液中的抗变形链球菌表面蛋白ＰＡｃ的特异性ＩｇＧ和ＩｇＡ。「结果」基因重组乳链球菌组血清中抗ＰＡｃ－ＩｇＧ水平明显高于乳链球菌组（Ｐ〈０．０１）、变形     

变形链球菌亚单位疫苗SBR制备及经颌下腺免疫小鼠的抗体应答

目的:探讨变形链球菌(S.mutans)唾液结合区段(SBR)作为亚单位防龋疫苗的免疫原性,并评价经涎腺接种诱导有效免疫应答的可行性。方法:构建含S.mutansSBR基因的重组原核表达质粒pTriEx-4-SBR,用该质粒转化大肠杆菌E.coliJM109DE3,培养转化后的E.coli并诱导其表达SBR蛋白;以SBR蛋白作为亚单位防龋疫苗经颌下腺免疫BALBC小鼠,ELISA检测特异性抗体指标。结果:纯化得到的SBR蛋白与预期相符;ELISA结果表明,SBR蛋白经颌下腺免疫小鼠能够诱导血清抗SBR特异IgG(P<0.01)、唾液抗SBR特异IgGP<0.01、唾液抗SBR特异IgAP<0.01显著应答。结论:本实验所表达及纯化的SBR蛋白经涎腺接种途径可诱导明显的免疫应答。     

变形链球菌基因疫苗pcDNA3-gtfB鼻黏膜免疫家兔的实验研究

目的 观察变形链球菌防龋基因疫苗pcDNA3-gtfB经鼻腔黏膜免疫日本长耳大白兔后的免疫反应性,初步观察不同剂量质粒pcDNA3-gtfB免疫机体后的抗体效价.方法 实验分两部分,第一部分:30只日本长耳大白兔平均分为5组,每组6只,分别为:200 μg、400 μg 、600 μg pcDNA3-gtfB质粒组,400 μg pcDNA3组,灭活全菌疫苗阳性对照组.质粒组及全菌组以1:1比例添加弗氏佐剂后进行免疫,共免疫两次.第二部分:采用间接ELISA法检测血液、唾液中特异性IgG、S-IgA.结果 ①血液、唾液中抗体高峰时间为初始免疫后8~10周左右;②自免疫后1~2周,各质粒组兔血液、唾液中特异性抗GTF的IgG、S-IgA抗体水平同阴性对照组比较差异有统计学意义 (P＜0.05);③200 μg组与400 μg及600 μg组比较多时点差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ①基因疫苗pcDNA3-gtfB具有免疫反应性;②200 μg 、400 μg、600 μg的基因疫苗对于体重1.5 kg左右的兔都是有效的免疫剂量;③在本研究的条件下,400 μg、600 μg疫苗组效价优于200 μg组.     

变形链球菌表面蛋白PAc功能区基因重组质粒的亚克隆构建

将变形链球菌pac基因待表达部分克隆人哺乳动物表达质粒中构建成将用作DNA免疫防龋研究的重组质粒。用PCR扩增出pac基因的2个高度保守区域,扩增产物以pGEM-T为载体进行亚克隆后,再克隆至高效哺乳动物表达质粒pCI构建成重组体,重组质粒pCIA-P经限制性酶切分析及DNA测序分析证实克隆构建正确。对含pac基因重要抗原决定簇区域的成功克隆为DNA免疫防龋研究完成了重要准备。     

纳米基因防龋疫苗的构建及其免疫大鼠的实验研究

目的:制备pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米基因防龋疫苗,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备两种pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米颗粒载体系统,经鼻粘膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白B的特异IgG抗体滴度及唾液中针对葡聚糖结合蛋白B的特异SIgA抗体滴度。与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB及未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较。结果:该载体系统经鼻免疫SD大鼠所产生的血清及唾液中针对GbpB的IgG和SIgA抗体滴度远大于未免疫组和空白壳聚糖纳米颗粒组,而与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB组抗体滴度相当。且维持的抗体滴度更稳定和持久。结论:成功构建了以葡聚糖结合蛋白B基因为免疫原的纳米基因防龋疫苗,并获得较好的免疫效果。     

抗变形链球菌鸡卵黄抗体抑制变形链球菌产酸能力研究

目的：通过对抗变形链球菌Ⅰ、Ⅲ型鸡卵黄抗体（IgY）影响变形链球 菌产酸能力的实验研究，探索抗变形链球菌鸡卵黄抗体防龋的机制。方法：用含不同浓度抗变形链球菌鸡卵黄抗体的TS培养基厌氧培养变形链球菌S.mutans MT6R(血清C型、遗传I型）、远缘链球菌S.Sobrinus6715（血清g型，遗传Ⅲ型）及其混合菌株，用数值式酸度计检测培养基上清液的pH值。数据作方差分析。结果：抗变形链球菌Ⅰ、Ⅲ型鸡卵黄抗体能抑制各实验组细菌培养基pH值的下降，经方差分析，实验组pH值随着特异抗体浓度的增加而上升，其最佳抑制浓度为1：2，此时与对照组比较有非常显著的差异，当抗体浓度为1：32时，其pH值与对照组无显著差异（P＞0．05）。结论：抗变形链球菌鸡卵黄抗体可以有效抑制变形链球菌利用糖产酸的能力。     

变形链球菌表面蛋白编码基因载体质粒pMD-pac构建

目的：获取变形链球菌国内临床株表面蛋白PAC编码基因pac并构建载体质粒,为构建植物表达基因载体做前期准备。方法：以国内检出率最高的变形链球菌临床分离株（血清c型）的基因组DNA为模板,通过PCR扩增获取表面蛋白PAc编码基因pac;通过T-A克隆构建中间载体pMD18-pac质粒,对其分析鉴定。结果：目的基因成功的连接到中间载体上。结论：获取的目的基因经测序和比对表明,其与变形链球菌表面蛋白的相关编码基因在核苷酸序列和蛋白同源性上都很高,可以作为抗原基因进一步研究。     

pLXSN-EGFP逆转录病毒载体的构建及体内外表达的研究

目的构建携带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒载体,观察该报告基因在动物体内外表达情况以及对靶细胞生物特性的影响。方法以质粒pEGFP-C1为模板进行PCR反应,获得增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因片段,定向插入逆转录病毒载体pLXSN获得重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP,转染PA317包装细胞后收集具有感染能力的病毒颗粒,转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP作为报告基因在体内外的表达情况以及对靶细胞生物特性的影响。结果成功克隆携带有EGFP基因的逆转录病毒载体,该载体经包装细胞包装后可有效转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2并在体内外稳定表达,对靶细胞及其所成肿瘤的生长无抑制。高表达GFP的靶细胞形态变得细长,FACS检测约有98%的细胞表达GFP,体外培养6个月荧光强度没有明显的衰减,而低表达GFP的靶细胞形态无变化,FACS检测有30.7%细胞表达GFP。结论该载体可在体内外成功表达,对靶细胞的生长无明显抑制,高表达GFP的靶细胞有一定形态上的变化;使用GFP作为报告基因,检测到的病毒载体转染率比实际偏低。     

甜茶甙和木糖醇对变形链球菌合成水不溶性胞外多糖的对比研究

目的比较不同浓度甜茶甙和木糖醇对变形链球菌产酸及合成水不溶性胞外多糖的能力是否有差异。方法采用二倍稀释法,将甜茶甙和木糖醇稀释为6个浓度,以TTY液体培养基作为阴性对照组,加入变形链球菌液,厌氧培养24h后,蒽酮法测定水不溶性胞外多糖的含量。结果随着甜茶甙溶液浓度的升高,变形链球菌合成水不溶性胞外多糖的能力降低（P〈0．01）;对照组合成水不溶性胞外多糖的能力高于甜茶甙组和木糖醇组（P〈0．01）。结论甜茶甙和木糖醇均能抑制变形链球菌合成水不溶性胞外多糖。     

蜂胶对变形链球菌产酸的影响

目的探讨北京蜂胶提取物对变形链球菌产酸的影响。方法以TPY液体培养基为溶剂,分别配制5g/L和1·25g/L水溶性蜂胶溶液,1·5625g/L醇溶性蜂胶溶液,1·6g/L洗必泰液体培养基,并以空白液体培养基作为对照,加入变形链球菌培养48h后离心,用乳酸分析仪测定培养基中乳酸含量并进行比较。结果醇溶性蜂胶溶液和水溶性蜂胶溶液皆可使乳酸值降低,蜂胶各组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0·05)。5g/L水溶性蜂胶溶液降低乳酸值的作用明显大于1·25g/L水溶性蜂胶溶液(P<0·05)。醇溶性蜂胶溶液和5g/L水溶性蜂胶溶液与洗必泰3组降低乳酸值的作用比较差异均无统计学意义(P>0·05)。结论北京蜂胶提取物影响变形链球菌的代谢,使变形链球菌代谢产酸减少。     

Construction and in vitro Expression of Streptococcus Mutans Surface Protein Encoding DNA Vaccine

Since carieshasbeen verified etiologically to be aninfectious disease,efforts have been directed at themicrobiological and immunological researches in orderto identify the major cariogenic microorganism andpracticable antigens.Itishoped thatwith theantigensthey could construct effective anti- caries vaccine sothatcaries disease could be stopped in the key link ofmicrobiological mechanism.Streptococcus mutans(S.mutans) has been targeted by many researchersbecause of its obvious association with…     

甜茶护齿含片对变形链球菌黏附与产酸影响的研究

目的 研究甜茶护齿含片对口腔致龋变形链球菌的黏附与产酸的影响,探讨甜茶护齿含片的护齿机制.方法 采用二倍稀释法将甜茶护齿含片研磨成粉末,并配制5个浓度组,检测不同浓度甜茶护齿含片对变形链球菌黏附抑制效果,及其对致龋菌、变形链球菌产酸能力的影响,并设1%蔗糖TTY液体培养基作为对照.厌氧培养48 h后用分光光度计测OD值...     

LuxS基因缺失对变形链球菌蛋白表达的影响

目的通过双向电泳技术对比研究变形链球菌标准株与LuxS突变株菌体总蛋白质的表达差异,为进一步研究LuxS信号系统对变形链球菌致龋毒力的调控机制奠定基础。方法提取变形链球菌标准株及LuxS突变株的菌体总蛋白质,采用双向电泳技术对比研究两者蛋白质的表达差异,找出差异蛋白点。结果与标准株菌体总蛋白2-DE图谱相比较,LuxS突变株菌体总蛋白2-DE图谱中有61个斑点的蛋白质表达量发生了改变:36个点蛋白质表达量升高,25个点蛋白质表达量降低。结论变形链球菌标准株与LuxS突变株菌体总蛋白存在明显的差异,表现为2-DE图谱蛋白斑点染色的深浅不同,提示LuxS突变株菌体总蛋白发生了量的变化。     

柯萨奇B组病毒3型VPI基因疫苗免疫效果的研究

目的为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。方法以带有CVB。P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板,用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA,插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,构建成重组质粒。经大量扩增纯化后,肌肉注射免疫BALB／c小鼠3次,用CVB3毒株攻击小鼠,取血及脾细胞检测其免疫效果。结果小鼠经3次免疫后,虽未测出明显免疫应答指标,但诱导了T、B细胞的免疫记忆反应,免疫组鼠在CVB3毒株攻击后,迅速诱导产生了强烈的二次免疫应答。结论CVB3VP1基因疫苗对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。     

S79株腮腺炎减毒活疫苗保护作用持久性研究

目的评估S79株腮腺炎减毒活疫苗对临床腮腺炎病例保护效果的持久性。方法收集国家传染病预防控制系统2004年9月至2005年3月广州市腮腺炎报告病例,按照性别、年龄和居住地(居委或村)为每个病例设置1个对照,从广州市儿童预防接种管理信息系统获取既往S79疫苗免疫信息,计算S79疫苗的保护效果及其95%可信限。结果有469对病例及其对照纳入研究,1剂(相对于0剂)S79减毒腮腺炎疫苗提供86.0%(95%CI:77.2%～91.5%)的保护,接种1剂疫苗4年内的保护效果(96.7%,95%CI:92.6%～98.5%)高于12年内(53.0%,95%CI:35.1%～66.0%)。结论1剂S79腮腺炎减毒活疫苗对临床腮腺炎存在有效的保护效果,保护作用在接种后第5年迅速下降。     

减毒鼠伤寒沙门菌防龋疫苗的免疫防龋效果

【目的】采用减毒鼠伤寒沙门菌S .typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)防龋疫苗经不同途径免疫定菌大鼠 ,观察其对变形链球菌在大鼠牙面黏附、龋病发生的影响等免疫防龋效果。【方法】将 5 0只大鼠随机分组 ,经口服、皮下、黏膜下途径免疫 ,接种变形链球菌并给予致龋饲料。对各组大鼠口腔中变形链球菌的定居菌落进行计数、黏附率计算 ,收集大鼠颌骨标本 ,根据Keyes评分标准作龋齿计分统计。【结果】口服活菌苗 S typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)组变形链球菌数为(3 4± 1 4)× 10 4 CFU ;磨牙龋齿Keyes计分总和为 30 7± 6 0 ,均明显低于其它组 (P <0 0 5 )。【结论】口服S typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)活菌苗可抑制变形链球菌黏附于牙面 ,并能减少龋病发生 ,具有较好的防龋效果。     

口服轮状病毒活疫苗预防轮状病毒肠炎效果评价

目的评估口服轮状病毒活疫苗对本地对婴幼儿轮状病毒肠炎的预防效果。方法选择2007年5—8月在本院预防保健科定期预防接种的6个月～3岁健康婴幼儿1248例,分为两组。口服轮状病毒活疫苗742例为服苗组,未服该疫苗506例为对照组。服疫苗2个月后连续观察1年,观察轮状病毒肠炎发生情况。同时对2007—2008年在本院确诊的轮状病毒肠炎患儿进行回顾性调查,把发病前2个月～1年内口服过轮状病毒活疫苗者36例列为服苗发病组,按同性别、同年龄（月龄差异不超过2个月）、同喂养方式配对选择病例72例为对照发病组,比较两组住院天数。结果服苗组轮状病毒肠炎发病率为0.9%,明显低于对照发病组的5.5%（P〈0.05）;在回顾性调查轮状病毒肠炎病例中,服苗发病组住院天数为（4.33&#177;0.86）d,明显少于对照发病组的（5.61&#177;1.07）d（P〈0.05）。结论口服轮状病毒活疫苗能有效预防轮状病毒肠炎,能明显缩短轮状病毒肠炎患儿病程,应在本地区大力推广。