罗格列酮对人脐静脉内皮细胞NO和PI3K/PKB/eNOS信号通路的影响

目的:观察罗格列酮对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)表达的影响,探讨罗格列酮改善内皮功能的信号转导机制.方法:首先观察罗格列酮对内皮细胞NO影响的时效和量效关系,然后加用eNOS和PKB信号阻断剂进行干预.用Griess重氮化反应法检测NO浓度,RT-PCR方法检测PI3K,PKB及eNOSmRNA的表达,Western免疫印迹方法检测PKB,eNOS总蛋白和PKB丝氨酸473(PKB-Ser473),eNOS丝氨酸1177(eNOS-Ser1177)的磷酸化表达.结果:罗格列酮呈剂量和时间依赖性地升高内皮细胞NO浓度,不同浓度的罗格列酮培养内皮细胞均能升高PI3K mRNA表达和PKB-Ser473,eNOS-Ser1177磷酸化,但对PKB和eNOS表达均无影响;eNOS阻断剂L-NAME能完全阻断罗格列酮培养的内皮细胞NO浓度的升高,PI3K阻断剂LY294002能阻断罗格列酮诱导的NO产生和PKB,eNOS的磷酸化.结论:罗格列酮能通过激活PI3K/PKB/eNOS信号通路而增强内皮细胞NO的浓度,改善内皮功能.     

罗格列酮对人脐静脉内皮细胞NO和P13K／PKB／eNOS信号通路的影响

目的：观察罗格列酮对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）一氧化氮（nitric oxide，NO）浓度和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，P13K）和蛋白激酶B（protein kinaseB，PKB）表达的影响，探讨罗格列酮改善内皮功能的信号转导机制。方法：首先观察罗格列酮对内皮细胞NO影响的时效和量效关系，然后加用eNOS和PKB信号阻断剂进行干预。用Griess重氮化反应法检测NO浓度，RT-PCR方法检测P13K，PKB及eNOSmRNA的表达，Western免疫印迹方法检测PKB，eNOS总蛋白和PKB丝氨酸473（PKB-Ser473），eNOS丝氨酸1177（eNOS-Ser1177）的磷酸化表达。结果：罗格列酮呈剂量和时间依赖性地升高内皮细胞NO浓度，不同浓度的罗格列酮培养内皮细胞均能升高P13K mRNA表达和PKB-Ser473，eNOS-Ser1177磷酸化，但对PKB和eNOS表达均无影响；eNOS阻断剂L-NAME能完全阻断罗格列酮培养的内皮细胞NO浓度的升高，P13K阻断剂LY294002能阻断罗格列酮诱导的NO产生和PKB，eNOS的磷酸化。结论：罗格列酮能通过激活P13K／PKB／eNOS信号通路而增强内皮细胞NO的浓度，改善内皮功能。     

替罗非班对大鼠急性心肌梗死再灌注后无复流的影响

目的 研究替罗非班对大鼠急性心肌梗死再灌注后无复流的影响,探讨其改善无复流的可能机制.方法 SD大鼠40只随机分为假手术组(Sham组)、急性心肌梗死再灌注组(AMI/R组)和替罗非班组(Tiro组).采用垫扎球囊法结扎冠状动脉左前降支60 min,再灌注120 min,复制急性心肌梗死再灌注无复流模型.硫黄素S、伊文斯蓝、TTC染色分别评估大鼠心肌无复流、缺血及梗死范围；紫外分光光度计测定心肌一氧化氮合酶(NOS)活性；Wstern blotting测定缺血区心肌内皮型NOS(eNOS)、丝氨酸1177磷酸化eNOS (p-eNOS ser1177)及血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达.结果 与Sham组比较,AMI/R组大鼠心肌eNOS活性降低,iNOS活性增高(P＜0.01),p-eNOS ser1177表达增加,VE-cadherin表达减少(P＜0.05);与AMI/R组比较,Tiro组大鼠心肌eNOS活性增高,iNOS活性降低,p-eNOS ser1177、VE-cadherin表达增加(均P＜0.05),无复流及梗死范围明显缩小(P＜0.01).结论 替罗非班可缩小无复流及梗死范围,其机制可能与保护微血管内皮结构和功能完整性有关.     

iNOS及其在组织创伤后的表达

一氧化氮(nitric oxide,NO) 是目前公认的一种信息传递分子,在各类疾病和急性损伤中的作用日益受到人们的关注.由于NO化学性质活泼,不易准确定量测定,因而其合成酶一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)成为近年各类疾病和急性损伤研究的热点.NOS因基因定位于不同的染色体上,可分为3种亚型:神经型NOS(neuronal NOS,nNOS,又称Ⅰ型NOS)、诱导型NOS(inducible NOS,iNOS,又称Ⅱ型NOS)、内皮型NOS(endothelial NOS,eNOS,又称Ⅲ型NOS),其中nNOS和eNOS又被称为组成型NOS (constitutive NOS,cNOS).     

涎腺粘液表皮样癌VEGF和NOS的表达及其相关性

目的研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（induciblenitric oxide synthasei,NOS）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）在涎腺粘液表皮样癌的表达及其相关性;研究一氧化氮（nitric oxide,NO）和VEGF的相互作用及在促肿瘤生长中的作用机制。方法应用免疫组化方法检测30例涎腺粘液表皮样癌标本VEGFi、NOS和eNOS的表达及分布。结果 30例涎腺粘液表皮样癌组织中,表达iNOS的为70%,表达eNOS的为80%,表达VEGF的占66.67%;VEGF与iNOS的表达具有明显相关性（P〈0.05）,VEGF与eNOS的表达无明显相关性（P〉0.05）。结论 VEGF与iNOS在涎腺粘液表皮样癌中的表达具有明显相关性i,NOS在VEGF促血管生成过程中起重要作用。     

卡托普利对SHR大鼠eNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)在高血压发展进程中,卡托普利对SHR内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的改善作用。方法 以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠为空白对照,SHR为模型进行分组实验,7～24周龄SHR灌服卡托普利(3.375 g/(kg·d)),后停药观察至32周龄。测量血压、左室质量指数(left ventricular mass index, LVMI)、主动脉舒张功能、血清亚硝酸根离子(NO₂^-)含量、iNOS、eNOS mRNA以及蛋白含量变化。结果 (1)不同周龄的SHR左室质量指数、血清NO₂^-浓度均高于WKY,主动脉的舒张度均显著低于WKY。(2)mRNA表达含量变化：与WKY相比,不同周龄的SHR的心肌和动脉eNOS和iNOS mRN...     

内皮型一氧化氮合酶活性的调节与心血管疾病的研究进展

内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)是合成一氧化氮(nitiric oxide,NO)起主要作用的酶,eNOS和NO在调节血管壁结构和功能中有重要作用,参与心血管疾病的病理生理过程。eNOS活性的改变除了常见的磷酸化途径外,还涉及乙酰化、谷胱甘肽化、蛋白质间的相互作用等机制,笔者将简要阐述eNOS的基本结构和功能、eNOS活性的调节途径及其在心血管疾病中的研究进展。     

青光眼患者小梁网中一氧化氮合酶的表达

目的 检测正常人和急性闭角型青光眼(acute angle-closure glaucoma,AACG)患者小梁网中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelia nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨小梁网中的一氧化氮合酶的变化及与青光眼的关系.方法 取5例正常人及15例AACG患者小梁网组织标本,应用免疫组织化学方法检测小梁细胞eNOS和iNOS的表达,并采用计算机图像分析系统对检测结果进行分析.结果 正常人的小梁网组织标本有eNOS的表达,阳性细胞分布均匀,iNOS呈弱阳性或不表达.AACG患者小梁网组织标本中,eNOS和iNOS均呈阳性表达,iNOS主要分布在邻管组织和Schlemm管.iNOS阳性表达比正常对照组增强(P＜0.05),而eNOS阳性表达比正常对照组减弱(P＜0.01).结论 AACG患者小梁网细胞eNOS表达减少而iNOS表达增多且主要分布在邻管组织、Schlemm管,提示一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)在青光眼发病中起重要作用,是导致或加重青光眼的因素之一.     

Relationship of gastric motility with vasculopathy in rats at early stage of type 2diabetes mellitus

目的 研究胃组织一氧化氮( nitric oxide,NO)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)与可溶性内皮细胞蛋白C受体(soluble endothelial cell protein C receptor,sEPCR)的变化情况,探讨早期糖尿病胃动力异常与胃血管病变的关系.方法 25只SPF级雄性SD大鼠分为正常对照组(NC组,n=10)、糖尿病组(DM组,n=15).高糖高脂饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型.12周后应用单光子发射断层显像仪(SPECT)技术测定胃半排时间与胃排空速率,采用酶联免疫法测血清sEPCR,硝酸还原酶法测定胃组织NO含量,免疫组织化学方法测定胃组织eNOS免疫阳性染色密度.结果 DM组大鼠胃半排时间(30.82±12.56) min、NO( 30.82±12.56) μmol/L、eNOS平均光密度(0.36±0.15)均明显低于NC组(P＜0.05),血清sEPCR( 129.45 ±4.83) μg/L明显高于NC组(P＜0.01).结论 2型糖尿病大鼠早期胃动力加快,血管内皮功能受损,血管病变可能是胃动力障碍的始动因素.     

黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响

目的探讨黄芩茎叶黄酮(flavonoids from stem and leaf ofscutellaria baicalensis georgi,SSF)对大鼠永久性慢性脑缺血引起记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响。方法雌性sprague-dawley(SD)大鼠双侧颈总动脉永久结扎2个月制备慢性脑缺血记忆障碍模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫组化测定海马细胞中胆碱乙酰转移酶(chloine acetyltransferase,ChAT)、神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达来探讨黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响。结果与假手术组相比,脑缺血模型组大鼠的学习记忆能力显著降低,找到平台的游泳路程显著延长;海马细胞中ChAT和eNOS蛋白表达显著降低;nNOS和iNOS蛋白表达显著增加。然而,17.5、35.0和70.0 mg/kg SSF灌胃给脑缺血大鼠38 d均能不同程度地改善学习记忆能力障碍,明显缩短大鼠找到平台的游泳路程;增加海马细胞中ChAT和eNOS蛋白的表达;抑制海马细胞中nNOS和iNOS蛋白的表达。结论 SSF对大鼠脑缺血性记忆障碍具有明显的改善作用,其作用机制可能与调节脑内ChAT和一氧化氮合酶的异常变化有关。     

cNOS介导心肌缺血／再灌注损伤机制的研究

目的：通过研究心肌缺血/再灌注时结构型一氧化氮合酶（ constitutive nitric oxide synthase ,cNOS）活性的变化及cNOS活性与P38激活的关系,来揭示心肌缺血/再灌注损伤中cNOS所发挥的作用。方法实验分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血给溶剂组和缺血给药组。采用NOS试剂盒检测cNOS活性,生物素转化法检测P38巯基亚硝基化,免疫印迹检测P38磷酸化水平。结果心肌缺血/再灌注时cNOS活性显著增加,同时P38巯基亚硝基化和磷酸化水平均显著升高。内皮型一氧化氮合酶（ endothelial nitric oxide synthase ,eNOS）和神经型一氧化氮合酶（ neuronal nitric oxide synthase ,nNOS）抑制剂则阻止缺血/再灌注引起的P38巯基亚硝基化和磷酸化水平升高。结论心肌缺血/再灌注中cNOS活性增强,大量产生的NO使P38巯基亚硝基化并活化,从而介导心肌凋亡。     

涎腺腺样囊性癌VEGF和NOS的表达及其相关性

目的研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（induciblenitric oxide synthase,iNOS）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）在涎腺腺样囊性癌中（sal-ivary adenoid eystic carcinoma,SACC）的表达及其相关性;研究一氧化氮（nitric oxide,NO）和VEGF的相互作用及在促肿瘤生长中的作用机制。方法应用免疫组化方法检测32例涎腺腺样囊性癌标本VEGF、iNOS和eNOS的表达及分布。结果 32例涎腺腺样囊性癌组织中,表达iNOS的为68.75%,表达eNOS的为78.13%,表达VEGF的占62.5%;VEGF与iNOS的表达具有明显相关性（P〈0.05）,VEGF与eNOS的表达无明显相关性（P〉0.05）。结论VEGF与iNOS的表达具有明显相关性,iNOS在VEGF的生成和发挥过程中起重要作用。     

坎地沙坦酯对急性心肌梗死大鼠血管内皮功能的干预影响

目的:研究坎地沙坦酯(candesartan cilexetil,CAN)对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠血管内皮功能的干预。方法:将大鼠随机分为AMI组、CAN组和假手术组,干预2周后处死,检测血压(blood pressure,BP)、血一氧化氮(nitric oxide,NO)、血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性、离体胸主动脉条片舒缩功能。结果:与假手术组比较,AMI组血清NO含量、NOS活性降低,胸主动脉内皮依赖性舒张(endothelium-dependent diastole,EDD)功能减退,血浆AngⅡ含量升高,差异有统计学意义(P=0.000 4)。经CAN干预后血清NO含量、NOS活性升高达假手术组水平,胸主动脉EDD显著改善(P=0.0009),同时血浆AngⅡ含量升高,各组BP并无明显变化。结论:CAN在不影响BP的前提下显著改善大鼠AMI后的血管内皮功能。     

一氧化氮在阿托伐他汀钙抗动脉粥样硬化中的作用

目的：观察一氧化氮（nitric oxide,NO）气体信号通路体系对他汀类降脂药物阿托伐他汀钙的抗动脉粥样硬化作用的影响。方法：雄性SD大鼠60只随机分为：正常对照组（Control组）,高脂饮食组（HF组）,阿托伐他汀钙（atorvastatin,ATV）组（ATV组）,阿托伐他汀钙+ N’-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐（N’-nitro-L-arginie methyl ester,L-NAME）组（ATV+ L-NAME组）。在给予高脂饮食后,继续ATV和ATV联合L-NAME各治疗13～15周。观察主动脉弓的病理变化;测定各组血脂水平;测量NO、总一氧化氮合酶（total-nitric oxide synthase,T-NOS）活力、内皮性一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）以及eNOS的信使核糖核酸（eNOSmRNA）水平。结果：与Control组相比,HF组及ATV+L-NAME组大鼠主动脉弓均出现显著的动脉粥样硬化病理损害,HF组血脂水平变化明显（P<0.05）,血清NO、eNOS水平、T-NOS活力及降主动脉eNOSmRNA表达水平明显下降（P<0.05）。与HF组比较,ATV组主动脉粥样硬化病变较轻,血脂含量明显下降（P<0.05）,血清NO、eNOS水平、T-NOS活力以及降主动脉eNOSmRNA表达水平明显增高（P<0.05）。与对照及ATV组别比较,ATV+L-NAME组大鼠血脂均升高明显（P<0.05）,而血清 NO、eNOS含量及T-NOS活力均明显下降（P<0.05）。结论：ATV提高了大鼠血清NO体系的含量和活性,阻断大鼠NO通路后使ATV的抗动脉粥样硬化作用明显减弱。     

早期2型糖尿病大鼠胃动力变化与胃血管病变的关系

目的研究胃组织一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)与可溶性内皮细胞蛋白C受体(soluble endothelial cell protein C receptor,sEPCR)的变化情况,探讨早期糖尿病胃动力异常与胃血管病变的关系。方法 25只SPF级雄性SD大鼠分为正常对照组(NC组,n=10)、糖尿病组(DM组,n=15)。高糖高脂饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型。12周后应用单光子发射断层显像仪(SPECT)技术测定胃半排时间与胃排空速率,采用酶联免疫法测血清sEPCR,硝酸还原酶法测定胃组织NO含量,免疫组织化学方法测定胃组织eNOS免疫阳性染色密度。结果 DM组大鼠胃半排时间(30.82±12.56)min、NO(30.82±12.56)μmol/L、eNOS平均光密度(0.36±0.15)均明显低于NC组(P<0.05),血清sEPCR(129.45±4.83)μg/L明显高于NC组(P<0.01)。结论 2型糖尿病大鼠早期胃动力加快,血管内皮功能受损,血管病变可能是胃动力障碍的始动因素。     

反复热性惊厥过程中γ-氨基丁酸B受体对一氧化氮/一氧化氮合酶体系的调节作用

目的:探讨γ-氨基丁酸B受体(γ-aminobutyric acid B receptor,GABABR)对热性惊厥(febrile seizure,FS)大鼠一氧化氮(nitric oxide,NO)/一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)体系表达的影响.方法:将21 d龄SD大鼠随机分为对照组、FS组、FS+巴氯芬(baclofen)组和FS+法克罗芬(phaclofen)组.采用热水浴诱导大鼠FS,隔日诱导1次,共10次.采用分光光度计法测定大鼠血浆中NO含量;用原位杂交方法观察神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)mRNA表达情况;用免疫组化方法观察nNOS蛋白表达情况.结果:FS+baclofen组NO含量低于FS组[(19.02±9.31)μmol/L比(40.03±9.12)μmol/L],同时nNOS蛋白和mRNA表达也较FS组减弱;而FS+phaclofen组NO含量高于FS组[(66.46±8.15)μmol/L比(40.03±9.12)μmol/L],同时nNOS蛋白和mRNA表达也较FS组增强.结论:反复热性惊厥过程中,GABABR的改变可影响NO/NOS体系的表达.     

胰岛素抵抗大鼠主动脉内皮功能的机制探讨

目的 探讨胰岛素抵抗(insulin resistant，IR)大鼠主动脉内皮功能的变化及其机制。方法 SD大鼠高果糖(high fructose，HF)饲养8周制备IR模型，采用血管环灌流实验观察血管收缩和舒张功能的变化，同时测定主动脉一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase，NOS)的活性和血清一氧化氮(nitric oxide，NO)的含量。结果 (1)高果糖组离体主动脉对乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)的舒张反应明显减弱，对新福林(L-Phenylephrine，PE)的收缩反应明显增强。(2)两组大鼠离体主动脉对硝普钠(sodium nitropmsside，SNP)的舒张反应差异无显著性。(3)高果糖组主动脉：NOS活性明显降低，尤以组织型一氧化氮合酶(constitutive nitric oxide synthase，cNOS)下降明显，同时血清NO显著降低。结论 胰岛素抵抗大鼠主动脉内皮功能异常，其可能机制一方面与cNOs的活性降低、NO释放减少有关，另一方面与高胰岛素血症有关。     

维格列汀对大鼠动脉内皮舒张功能的影响及其机制研究

目的:探讨维格列汀对大鼠血管舒张功能的影响及其可能的机制。方法:将雄性SD大鼠分为对照组和维格列汀组[6mg/(kg·d)],每组10只,连续干预6周。血管张力测定仪检测大鼠胸主动脉和肠系膜动脉的内皮依赖性舒张功能,酶标仪检测一氧化氮(nitric oxide,NO),Western blot和RT-PCR检测内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白水平和m RNA水平。结果:重复测量方差分析提示,胸主动脉和肠系膜动脉由乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)诱导的内皮依赖性舒张在处理组间有统计学差异(F=25.388,P=0.001;F=15.713,P=0.005),在不同ACh浓度间有统计学差异(F=664.954,P=0.000;F=440.579,P=0.000),处理因素与浓度因素有交互作用(F=5.905,P=0.002;F=8.446,P=0.000),对照组和维格列汀组胸主动脉的最大舒张程度分别为(84.20±1.21)%和(92.18±1.02)%(t=5.167,P=0.000),肠系膜动脉的最大...     

eNOS/NO通路与冠脉介入治疗术后再狭窄的相关性研究

<正>冠心病的早期筛查和急性冠脉事件的风险预警对冠心病的早期治疗、延缓冠心病的发展进程和降低死亡率具有深远的意义。经皮冠状动脉介入治疗术（简称冠脉介入术）是目前临床最常用的治疗冠心病的重建血运方法之一,可较大程度地提高患者的生存率~[1]。内皮一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）是一氧化氮（NO）生物合成中的主要限速酶~[2]。血管和心脏的正常生理功能维持与心肌和血管内皮中e NOS的充分表达密切相关。     

电针对大鼠不稳定膀胱逼尿肌及膀胱颈氮能神经递质的影响

目的:观察电针治疗对大鼠不稳定膀胱模型下尿路组织氮能神经递质的影响。方法:制作大鼠不稳定膀胱模型,电针会阳、中膂俞7d后,采用免疫组织化学法检测大鼠膀胱逼尿肌、膀胱颈平滑肌神经源性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide syn-thase,eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)阳性细胞并计数。结果:不稳定膀胱模型其膀胱逼尿肌、膀胱颈平滑肌中氮能神经递质明显下降,而电针治疗则可促进氮能神经递质的生成和分泌。结论:电针促进膀胱组织中氮能神经递质的生成和分泌可能是电针治疗改善不稳定膀胱功能的主要机制之一。