运用双重免疫组织化学方法研究骨性关节炎关节软骨细胞的胶原表型

目的 :研究原发性骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)关节软骨中软骨细胞的胶原表型。方法 :运用抗Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体 ,对OA关节软骨标本分别进行Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原双重免疫组织化学染色。结果 :在原发性OA关节软骨的深层和钙化层软骨细胞中 ,存在Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原的共同分布现象。同一个簇聚软骨细胞团中不同细胞的胶原表型也各不相同。结论 :原发性OA关节软骨细胞在疾病环境中发生进一步分化 ,在不同的分化阶段细胞的胶原表型不同 ,其中早期肥大软骨细胞能够同时合成Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原。     

异种异体半月板移植延缓关节软骨退行性变的研究

目的:探讨异种异体半月板移植对延缓关节软骨退变的作用。方法:对15只成年新西兰兔的后肢左、右膝均进行内侧半月板全切。在15只兔的左膝进行猪半月板组织成型后所得的异种异体内侧半月板移植,以其已切除内侧半月板的右膝作为对照。分别于术后6周、12周、24周择期处死动物,观察各组兔膝关节软骨的大体病理表现、组织病理Mankin评分改变,并用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原单克隆抗体免疫组织化学染色法观察关节软骨中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的表达情况。结果:兔内侧半月板全切组膝内侧胫骨平台和内侧股骨髁软骨破坏严重,有大量骨赘形成,呈骨性关节炎表现。异种异体半月板移植在短期内对关节软骨具有明显保护作用,但随着术后24周移植半月板被破坏,关节软骨出现退变,但与同期的半月板切除膝相比,关节软骨退变较轻。结论:异种异体半月板移植短期内对关节软骨有保护作用;异种异体半月板移植可延缓关节软骨退行性变。     

异种异体和同种异体半月板移植术后兔半月板和关节软骨中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原表达和免疫排斥研究

目的 :研究同种异体半月板移植和异种异体半月板移植后 ,移植半月板和关节软骨中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原表达和免疫排斥反应发生的情况。方法 :切除 30只成年新西兰白兔的内侧半月板造成半月板缺失的动物模型。A组进行同种异体内侧半月板移植。B组取猪半月板组织修剪成同兔内侧半月板形态和尺寸相同的异种异体半月板植入物 ,进行兔内侧半月板的异种异体移植。分别在术后第 6周、12周、2 4周取实验动物的半月板、关节软骨进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的单克隆抗体的免疫组织化学染色 ,并取外周血进行补体依赖性微量淋巴细胞毒实验 (CDMT) ,用放射免疫法检测血清中IL - 2和IL - 6的含量 ,了解是否发生免疫排斥反应。结果 :同种异体半月板移植后 ,关节软骨和移植半月板的情况良好 ,但术后第 2 4周 ,异种异体移植物部分被吸收 ,关节软骨出现损伤。两组中各时段移植半月板中的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况无明显差异 ,术后第 12周 ,两组关节软骨中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况相似 ,但术后第 2 4周 ,异种异体半月板组的关节软骨开始有异常Ⅹ型胶原表达。同种异体和异种异体半月板移植组均未发现致命的免疫排斥反应发生。结论 :用猪的半月板组织塑形后移植替代兔内侧半月板组织 ,半年后移植物被溶解吸收 ,同种异体?     

口服Ⅱ型胶原诱导免疫耐受对大鼠类风湿性关节炎和创伤性骨性关节炎的影响

目的 :探讨应用口服Ⅱ型胶原诱导免疫耐受对创伤性骨性关节炎的影响。材料和方法 :应用切断大鼠膝关节内侧副韧带和内侧半月板的方法制备大鼠膝关节骨性关节炎的动物模型 ,以关节软骨组织学和组织化学染色以及T淋巴细胞转化实验为观察指标 ,观察口服Ⅱ型胶原对其病程发展的影响 ,并以经典的大鼠胶原引发关节炎症的类风湿性关节炎模型为对照。结果 :在创伤性骨性关节炎时 ,大鼠的T淋巴细胞增殖程度受到口服Ⅱ型胶原的抑制 ,从一个侧面反映针对Ⅱ型胶原的自家免疫可能参与了病变的发生和发展过程。但是 ,从病理改变来看 ,口服Ⅱ型胶原却不能抑制OA的发展 ,因此 ,创伤性骨性关节炎虽然在病变发生和发展过程中可能有免疫因素的参与 ,但是 ,相比RA ,这种参与不是主要的 ,OA的发病过程仍然是由于机械因素导致关节软骨破坏 ,在此基础上逐步发展起来的。口服Ⅱ胶原不能减轻OA的发病程度 ,因此不能应用口服Ⅱ型胶原的方法来治疗OA。     

硅橡胶植入对关节软骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的观察植入硅橡胶对兔关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法18只成年新西兰大白兔,每只动物右膝为实验组,在膝关节滑车处植入硅橡胶;左膝为对照组,膝关节滑车处造成关节软骨缺损后不植入硅橡胶.分别于术后4周、24周和48周取材,采用原位杂交的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,同时运用免疫组织化学的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白的合成.结果实验组中关节软骨可见Ⅱ型前胶原mRNA和胶原蛋白的稳定表达.Ⅰ型前胶原mRNA从术后4周起即有表达,且随时间延长而表达增加.但Ⅰ型胶原染色仅在24周时方开始呈现阳性.Ⅲ型前胶原的mRNA则在各期均未探测到,但从24周起Ⅲ型胶原染色呈阳性.对照组关节软骨在术后4周时即可见到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白同时表达,且对照组中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白表达均呈减少趋势.结论(1)前胶原mRNA的表达早于胶原分泌.Ⅰ型前胶原mRNA表达在实验组中比对照组晚,而且实验组中Ⅰ型前胶原mRNA的表达时间较长,容易观察到阳性的表达信号,所以Ⅰ型前胶原mRNA可以成为早期骨关节炎(OA)的分子标志物.(2)Ⅲ型前胶原mRNA由于表达时间可能较短,所以即使在实验组有Ⅲ型胶原蛋白分泌,但不易查到有Ⅲ型前胶原mRNA的表达,因此Ⅲ型前胶原mRNA不是一个合适的早期OA的分子标志物.(3)硅橡胶植入对关节软骨的胶原合成有一定影响,但对关节软骨的影响小于对照组.硅橡胶植入修补关节软骨缺损可延缓骨关节炎的发病过程.     

膝关节股骨外髁髁间侧壁软骨Ⅰ、Ⅲ型胶原和IL-1α、IL-1Ra分布的研究及其临床意义

目的 :观察分析成人股骨外髁髁间侧壁软骨组织IL - 1α、IL - 1Ra和I、Ⅲ型胶原分布特点。方法 :对 14例患者行膝前交叉韧带重建术、髁间窝成形时所取的股骨外髁髁间侧壁软骨标本进行免疫组化染色 ,观察软骨细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及IL - 1α、IL - 1Ra分布。结果 :Ⅰ型胶原见于软骨表层 ,Ⅲ型胶原分布于整个软骨表层和中间层。IL - 1α和IL - 1Ra分布一致 ,仅限于软骨表层。结论 :(1)股骨外髁髁间侧壁软骨与典型的正常负重区透明软骨不同。这可能是此区软骨的特征性表现 ,但不排除退变可能。 (2 )股骨髁间侧壁软骨作为正常软骨的移植来源 ,提供软骨细胞和骨软骨进行自体移植以修复软骨损伤时应该慎重。     

骨软骨组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因表达的检测

目的：用原位杂交法研究骨和软骨组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因的表达。方法：以与Ⅰ型、ⅡＡ型和ⅡＢ型胶原ｍＲＮＡ特异性互补的寡核苷酸序列为探钍,用末端转移酶将地高辛标记于３′-末端,在兔胫骨近端组织切片上进行Ｎｏｒｔｈｅｎ原位杂交,检测关节软骨、骺板和新生骨小梁区三种胶原基因的表达情况。结果：关节软骨和骺板区均检测到软骨细胞中有ⅡＢ型胶原基因表达,新生骨小梁区检测到成骨细胞中有Ⅰ型胶原基因表达。结论：本实验方     

急性化脓性膝关节炎关节软骨病损的MRI表现

目的：探讨急性化脓性膝关节炎关节软骨损伤的MRI表现。方法：分析16例急性化脓性膝关节炎患者的MRI表现,重点观察关节软骨改变,与关节镜手术或关节切开手术所见对照。结果：16例病变关节的关节软骨MRI均清楚显示,其中4例关节软骨MRI表现正常（0级）,12例见软骨信号异常和（或）软骨变薄、软骨表面不光滑改变（Ⅰ～Ⅱ级）,其中出现软骨局部全层缺如者2例（Ⅲ级）,与手术对照具有较好的一致性。同时,MRI可发现软骨下骨水肿、关节周围软组织肿胀及关节积液等改变。结论：MRI能够准确评价急性化脓性膝关节炎关节软骨的病损部位、程度,对临床治疗有重要的指导意义。     

抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对体外培养关节软骨细胞代谢的影响

采用关节软骨细胞培养和同位素标记的方法观察抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对软骨细胞代谢的影响,结果示抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对家兔关节软骨细胞DNA和胶原合成都有明显的抑制作用,认为抗Ⅲ型胶原抗体可能协同抗Ⅱ型胶原抗体参与关节软骨损伤的自家免疫反应。     

正常及骨性关节炎关节软骨的胶原表型

关节软骨覆盖于滑膜关节内骨质的表面 ,具有负重、缓冲和减小摩擦的作用。关节软骨损伤后自身难以修复 ,对正常的运动功能产生严重影响。关节软骨独特的结构是其正常生理功能得以实现的基础。而胶原则是构成关节软骨结构性框架的主要成分。本文重点介绍正常关节软骨中胶原的种类、分布和作用 ,以及骨性关节炎 (ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ,ＯＡ)关节软骨细胞胶原表型的变化。1　关节软骨的基本成分关节软骨属于透明软骨 ,由相对少量的软骨细胞和丰富的细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)构成 ,不含血管、神经和…     

Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型关节炎症及血清抗体的动态变化

目的:制备Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型(CIA模型)并观察其关节炎症和血清中抗体的变化规律.方法:于第0天和第10天分2次多点皮内注射牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂以诱导大鼠CIA模型,应用足爪肿胀容积测定仪动态观察关节肿胀度,采用0～7级关节炎评分法进行关节炎评分,应用组织病理学、X线影像学动态观察踝关节组织的病理变化,应用ELISA方法动态检测血清中多种抗体.结果:CIA模型大鼠免疫后第12天即出现踝关节肿胀,第23天达高峰,持续至第72天(动物处死);X线检查显示:免疫后第30天,软组织明显肿胀,踝关节骨骼结构排列紊乱,间隙不清,可见囊性骨吸收和骨侵蚀;第60天后踝关节骨骼结构排列更加紊乱,骨质疏松和新骨形成并存,提示侵蚀性慢性关节炎.组织病理学观察显示,第72天踝关节滑膜炎性细胞浸润、滑膜增生,关节软骨及骨破坏,显示较明显的慢性关节炎症.血清中总IgG,IgM型类风湿因子(RF),IgG型RF和Ⅱ型胶原抗体于免疫后第15天均明显升高,以后维持在较高水平.结论:应用牛Ⅱ型胶原成功制备大鼠CIA模型,免疫后第12天即加强免疫之后即出现关节炎症的病理变化,至少可持续至第72天.     

骨性关节炎兔关节软骨、关节液细胞因子IL-1β和TNF-α变化的研究

目的:通过观察骨性关节炎兔关节软骨和关节液中细胞因子的连续动态改变,深入探讨骨性关节炎发生发展的过程和发病机制。方法:15只成年新西兰大白兔(30个膝关节)随机分为2组,实验组(12只,24个膝关节)和对照组(3只,6个膝关节)。采用内侧副韧带切断术和内侧半月板切除术建立骨性关节炎模型,实验组分别在术后第1、2、3、4周处死兔并取材。对照组在第4周处死兔并取材。采用墨汁染色的方法观察软骨损伤情况,使用光镜和扫描电镜观察关节软骨组织学的连续动态变化;采用酶联免疫吸附法测定关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果:骨性关节炎模型兔关节软骨损伤随时间延长而加重,光镜和电镜的检查结果均显示关节软骨随时间延长而逐渐被破坏;关节液中IL-1β和TNF-α的表达明显升高,IL-1β表达在2周时达到峰值,TNF-α在1周时明显升高,2周时有所下降,3周时又升高,4周时下降,但仍处于较高水平。结论:在兔骨性关节炎模型中,随着时间延长关节软骨损伤进行性加重,关节液中IL-1β和TNF-α水平呈高表达,但并未随软骨损伤的进行性加重而不断升高。     

滑膜软骨瘤病的MRI诊断

目的 探讨滑膜软骨瘤病的MRI特征.方法 搜集经病理证实的26例滑膜软骨瘤病MRI影像资料,分析其MRI表现.结果 滑膜软骨瘤病的MRI表现为关节滑膜肥厚、关节内悬垂体及游离体、关节腔积液和骨性关节炎改变.26例中,Milgram病理分期Ⅰ期5例,3例表现为关节滑膜的不规则结节状肥厚,2例滑膜均匀肥厚,2例增强扫描肥厚的滑膜及结节明显强化;Ⅱ期9例,Ⅲ期12例,表现为既有关节滑膜的结节状肥厚,又有关节内悬垂体和游离体的形成,悬垂体呈中等T1、中等T2信号,增强扫描呈明显强化或环形强化,游离体于T1WI及T2WI上呈低信号,表现为大小不一、数目不等、形态不同的圆形、卵圆形钙化或骨化结节影,其中11例游离体中央呈短T1信号,脂肪抑制序列PDWI上呈低信号,增强扫描无明显强化.10例继发骨性关节炎改变.结论 滑膜软骨瘤病具有典型的MRI特征,当游离体钙化或骨化时可明确诊断,对较早期病变的诊断亦具有重要价值.     

组织工程软骨移植物修复兔关节软骨缺损

目的　观察组织工程软骨移植物修复兔关节软骨缺损的效果。　方法　经软骨起源诱导后的兔骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),与牛Ⅰ型胶原及人纤维蛋白相混合制成组织工程软骨移植物。60只5个月龄的日本大耳白兔均分为软骨移植物组、单纯载体对照组和空白对照组,观察各组修复兔股骨髁关节软骨全层缺损的效果。　结果　软骨移植物组12周时已形成正常厚度的软骨层及完整的软骨下骨板,O'drilscoll组织学评分18.22±2.45,Ⅱ型胶原含量97.9%,甲苯胺蓝变色反应表明其与周围正常软骨无明显区别,为透明软骨组织修复。而对照组12周时为纤维软骨修复,后期为纤维组织和板层骨修复。　结论　该组织工程软骨移植物作为软骨移植的替代物是可行的。     

大鼠低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达

目的　检测低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达。方法　用RT PCR的方法检测大鼠梗阻性低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达的改变。结果　与正常对照组相比 ,低顺应性膀胱组逼尿肌层中Ⅲ型胶原蛋白基因的表达明显上调 ,Ⅰ型胶原蛋白基因的表达上调。结论　膀胱组织肌层内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达上调与梗阻后低顺应性膀胱的形成存在一定的关系。     

不同细胞移植修复兔全层关节软骨缺损的比较研究

目的 :比较软骨细胞、骨髓基质细胞及成纤维细胞对全层关节软骨缺损的修复作用。材料和方法 :取幼兔的软骨细胞、骨髓基质细胞及成纤维细胞 ,共 3种有生成软骨潜力的细胞进行体外分离培养 ;以聚乳酸 (PLA)为载体 ,将培养的原代细胞植入PLA支架上 ,形成细胞 -PLA复合物。于 2 8只成年新西兰大白兔的股骨滑车关节面上造成直径 4 5mm、深 3 0mm的全层关节软骨缺损 ,将 3种细胞 -PLA复合物分别植入关节软骨缺损处。植入细胞 -PLA复合物为实验组 ,单纯植入PLA支架为对照组。术后 6周、12周观察缺损修复情况及新生组织类型。结果 :软骨细胞移植组为软骨样组织修复 ,分界明显 ,甲苯胺兰及Ⅱ型胶原染色阳性 ;软骨下骨部分重建 ;细胞排列紊乱。骨髓基质细胞移植组为软骨样组织修复 ,分界不明显 ,甲苯胺兰及Ⅱ型胶原染色阳性 ;软骨下骨重建良好 ,软骨下潮线恢复 ;细胞排列趋于正常。成纤维细胞移植组为纤维组织修复 ,甲苯胺兰及Ⅱ型胶原染色阴性 ;软骨下潮线消失。对照组为纤维组织修复。结论 :软骨细胞、骨髓基质细胞移植修复软骨缺损明显优于成纤维细胞及对照组。骨髓基质细胞与软骨细胞移植组的修复结果无统计学差异 ,但骨髓基质细胞修复组织的细胞排列有序 ,软骨下骨重建良好 ,与周围组织融合密切 ,更接近正?     

实验性肝纤维化肝内Ⅰ、Ⅲ型胶原及PⅢP的免疫组化研究

利用免疫组化ＡＢＣ法研究正常及ＣＣｌ４实验性肝纤维化大鼠肝内，Ⅰ、Ⅲ型胶原及ＰⅢＰ的分布，并对部分切片进行了图像定量分析。结果表明在正常肝脏，Ⅰ、Ⅲ型胶原在分布上一致，ＰⅢＰ在汇管区显著少于Ⅰ、Ⅲ型胶原（Ｐ＜０．００１），在肝窦周围显著多于Ⅰ、Ⅲ型胶原（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），提示汇管区以成熟胶原为主，在肝窦周围以新合成胶原为主。在肝纤维化时，胶原纤维分布于变性、坏死的肝细胞之间，呈“干枝挂果”样，肝窦周围的胶原随着纤维化的进展而减少。纤维隔来源于非实质细胞，肝细胞可能不参与胶原合成。     

Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型腰骶部移行椎X线诊断(附32例分析)

目的:旨在提高对腰骶部移行椎的认识程度及诊断水平。方法:对32例Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型腰骶部移行椎患者的X线及临床资料进行分析。结果:腰椎骶化25例,骶椎腰化7例,其中Ⅱa型13例,Ⅱb型13例,Ⅲa型2例,Ⅳ型4例。X线见病变椎横突与骶骨翼骨性融合或形成假关节;移行椎下方椎间隙变窄或形成;合并骶髂关节炎、致密性骨炎、椎间盘突出及一些发育畸形。结论:要对腰骶部移行椎引起足够重视,而X线检查是重要的检查手段,有助于临床诊断及脊柱手术定位。     

DTI监测膝关节早期骨性关节炎软骨退变的应用进展

膝关节骨性关节炎(OA),一般以关节镜作为关节软骨损伤的金标准;但是关节镜下所见关节软骨形态学的改变,已经是骨性关节炎较为晚期阶段,临床干预疗效不佳.怎样利用MRI对膝关节早期OA软骨退变进行检测一直是临床非常关心的问题.磁共振扩散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)测量能同时检测膝关节软骨组成及胶原结构细微变化,具有无创、可重复性好等优点.近年来,DTI在骨性关节炎早期检测方面已有初步的研究成果.本文对DTI的原理、DTI对正常软骨及早期OA的研究进展及存在问题进行综述.     

软骨下骨异常代谢和软骨退变的相互作用研究进展

正骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是一种以关节软骨退行性变和继发性骨质增生为特征的慢性关节病。多发于负重比较大的膝关节髋关节脊柱以及远端指间关节等部位。病变几乎累及关节周围的所有组织,包括关节软骨、软骨下骨、关节囊、滑膜和周围的肌腱韧带等。对于该病的病因还没有完全明确。过去研究主要集中在软骨的退变方面。近年来的研究发现软骨下骨的改变在骨性关节炎的起病和进展中发挥重要作用[1]。鉴于软骨下骨异常代谢和软骨退变对骨关节炎的影响,现在此基础上就软骨下骨异常代谢和软骨退变二者之间的相互作用研究进展