硅橡胶植入对关节软骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的观察植入硅橡胶对兔关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法18只成年新西兰大白兔,每只动物右膝为实验组,在膝关节滑车处植入硅橡胶;左膝为对照组,膝关节滑车处造成关节软骨缺损后不植入硅橡胶.分别于术后4周、24周和48周取材,采用原位杂交的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,同时运用免疫组织化学的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白的合成.结果实验组中关节软骨可见Ⅱ型前胶原mRNA和胶原蛋白的稳定表达.Ⅰ型前胶原mRNA从术后4周起即有表达,且随时间延长而表达增加.但Ⅰ型胶原染色仅在24周时方开始呈现阳性.Ⅲ型前胶原的mRNA则在各期均未探测到,但从24周起Ⅲ型胶原染色呈阳性.对照组关节软骨在术后4周时即可见到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白同时表达,且对照组中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白表达均呈减少趋势.结论(1)前胶原mRNA的表达早于胶原分泌.Ⅰ型前胶原mRNA表达在实验组中比对照组晚,而且实验组中Ⅰ型前胶原mRNA的表达时间较长,容易观察到阳性的表达信号,所以Ⅰ型前胶原mRNA可以成为早期骨关节炎(OA)的分子标志物.(2)Ⅲ型前胶原mRNA由于表达时间可能较短,所以即使在实验组有Ⅲ型胶原蛋白分泌,但不易查到有Ⅲ型前胶原mRNA的表达,因此Ⅲ型前胶原mRNA不是一个合适的早期OA的分子标志物.(3)硅橡胶植入对关节软骨的胶原合成有一定影响,但对关节软骨的影响小于对照组.硅橡胶植入修补关节软骨缺损可延缓骨关节炎的发病过程.     

骨软骨组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因表达的检测

目的：用原位杂交法研究骨和软骨组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因的表达。方法：以与Ⅰ型、ⅡＡ型和ⅡＢ型胶原ｍＲＮＡ特异性互补的寡核苷酸序列为探钍,用末端转移酶将地高辛标记于３′-末端,在兔胫骨近端组织切片上进行Ｎｏｒｔｈｅｎ原位杂交,检测关节软骨、骺板和新生骨小梁区三种胶原基因的表达情况。结果：关节软骨和骺板区均检测到软骨细胞中有ⅡＢ型胶原基因表达,新生骨小梁区检测到成骨细胞中有Ⅰ型胶原基因表达。结论：本实验方     

骨性关节炎兔关节软骨、关节液细胞因子IL-1β和TNF-α变化的研究

目的:通过观察骨性关节炎兔关节软骨和关节液中细胞因子的连续动态改变,深入探讨骨性关节炎发生发展的过程和发病机制。方法:15只成年新西兰大白兔(30个膝关节)随机分为2组,实验组(12只,24个膝关节)和对照组(3只,6个膝关节)。采用内侧副韧带切断术和内侧半月板切除术建立骨性关节炎模型,实验组分别在术后第1、2、3、4周处死兔并取材。对照组在第4周处死兔并取材。采用墨汁染色的方法观察软骨损伤情况,使用光镜和扫描电镜观察关节软骨组织学的连续动态变化;采用酶联免疫吸附法测定关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果:骨性关节炎模型兔关节软骨损伤随时间延长而加重,光镜和电镜的检查结果均显示关节软骨随时间延长而逐渐被破坏;关节液中IL-1β和TNF-α的表达明显升高,IL-1β表达在2周时达到峰值,TNF-α在1周时明显升高,2周时有所下降,3周时又升高,4周时下降,但仍处于较高水平。结论:在兔骨性关节炎模型中,随着时间延长关节软骨损伤进行性加重,关节液中IL-1β和TNF-α水平呈高表达,但并未随软骨损伤的进行性加重而不断升高。     

运用双重免疫组织化学方法研究骨性关节炎关节软骨细胞的胶原表型

目的 :研究原发性骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)关节软骨中软骨细胞的胶原表型。方法 :运用抗Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体 ,对OA关节软骨标本分别进行Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原双重免疫组织化学染色。结果 :在原发性OA关节软骨的深层和钙化层软骨细胞中 ,存在Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原的共同分布现象。同一个簇聚软骨细胞团中不同细胞的胶原表型也各不相同。结论 :原发性OA关节软骨细胞在疾病环境中发生进一步分化 ,在不同的分化阶段细胞的胶原表型不同 ,其中早期肥大软骨细胞能够同时合成Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原。     

富血小板血浆应用于关节软骨修复治疗膝关节骨性关节炎的研究进展

关节软骨变性、丢失以及软骨损伤等造成的骨性关节炎严重影响患者生活质量,骨性关节炎以膝关节炎症最常见,同时在老年人中膝骨性关节炎最为常见。目前临床早期常以减少关节负重,药物对症治疗,关节镜下清理,症状严重者多以关节截骨、关节置换等为主要手段。由于人群预期寿命延长,患者量增多,造成了巨大的社会经济负担。富血小板血浆可释放多种生长因子,已在临床多个学科应用,但未推广。富血小板血浆体内外实验表明有促进软骨修复功能,本文就富血小板血浆生物学机制、关节软骨修复及关节注射富血小板血浆治疗膝关节炎进行探讨。     

口服Ⅱ型胶原诱导免疫耐受对大鼠类风湿性关节炎和创伤性骨性关节炎的影响

目的 :探讨应用口服Ⅱ型胶原诱导免疫耐受对创伤性骨性关节炎的影响。材料和方法 :应用切断大鼠膝关节内侧副韧带和内侧半月板的方法制备大鼠膝关节骨性关节炎的动物模型 ,以关节软骨组织学和组织化学染色以及T淋巴细胞转化实验为观察指标 ,观察口服Ⅱ型胶原对其病程发展的影响 ,并以经典的大鼠胶原引发关节炎症的类风湿性关节炎模型为对照。结果 :在创伤性骨性关节炎时 ,大鼠的T淋巴细胞增殖程度受到口服Ⅱ型胶原的抑制 ,从一个侧面反映针对Ⅱ型胶原的自家免疫可能参与了病变的发生和发展过程。但是 ,从病理改变来看 ,口服Ⅱ型胶原却不能抑制OA的发展 ,因此 ,创伤性骨性关节炎虽然在病变发生和发展过程中可能有免疫因素的参与 ,但是 ,相比RA ,这种参与不是主要的 ,OA的发病过程仍然是由于机械因素导致关节软骨破坏 ,在此基础上逐步发展起来的。口服Ⅱ胶原不能减轻OA的发病程度 ,因此不能应用口服Ⅱ型胶原的方法来治疗OA。     

IL1,TGFβ和BMP在骨性关节炎的关节软骨中的表达

采用免疫组织化学染色技术，检测白细胞介素１（ＩＬ１），转化生长因子β（ＴＧＦβ）和骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）在骨性关节炎的关书软骨中的表达。结果显示：（１）ＩＬ１与ＴＧＦβ在病损的关节软骨表浅层细胞中表达，ＴＧＦβ还在病损的关节软骨中由发生族集的软骨细胞表达。（２）在关节软骨病损达软骨下骨部位，ＢＭＰ，ＴＣＦβ和ＩＬ１在新生的软骨组织的一些细胞中表达。我们的结果提示，ＩＬ１，ＴＧＦβ和ＢＭＰ以自分泌和（或）旁分泌的形式，在骨性关节炎的病理过程中起重要作用，涉及关节软骨的病损及修复。     

Wnt3a在人骨性关节炎软骨中的表达及相关性研究

目的 Wnt3a参与Wnt经典通路信号的传递,而Wnt通路又参与关节软骨及软骨细胞的发生。本实验目的是检测Wnt3a在骨性关节炎（OA）中的表达及发病风险的相关性。方法 40例人类关节软骨标本,10例正常关节软骨标本（取自外伤、肿瘤截肢术患者）,30例膝OA关节软骨标本（取自膝OA患者）.将取下的软骨标本分为四组：正常关节软骨组、轻度软骨退变组、中度软骨退变组、重度软骨退变组。根据Mankin关节软骨病理评分标准分别打分,按评分结果分组：正常关节软骨标本5份（A组）,OA软骨轻度退变标本6份（B组）,OA软骨中度退变标本13份（C组）,OA软骨重度退变标本16份（D组）。对四组切片行Wnt3a相关染色,根据免疫反应积分IRS打分法进行评分,采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。统计分析Wnt3a在正常组与非正常组的差异性、表达程度及软骨退变程度的相关性。结果 Wnt3a在三组人膝骨性关节炎软骨呈现一致的高表达,其表达的平均值分别为：3.33±0.516（B组,轻度）,4.85±1.68（C组,中度）,9.44±2.31（D组,重度）。正常组（A组,表达均值和标准差0.0±0.0）与中度、重度退组两两比较,轻度组与中度、重度组,中度与重度组比较显示一致的显著性差异。Wnt3a表达值与其相应的Mankin病理评分呈显著正相关（B组皮尔森相关系数=0.74,P=0.047;C组皮尔森相关系数=0.81,P=0.000 36;D组皮尔森相关系数=0.94,P=2.75e-08）,即关节软骨中Wnt3a的表达与原发性膝骨关节炎（OA）发生与发展程度呈显著的正相关。结论 1在膝骨性关节炎软骨中Wnt3a表达升高;2Wnt3a表达与骨性关节炎关节软骨退变程度呈正相关,可作为OA病程进展的监测指标。     

关节软骨的结构与生物力学的关系及MR成像

软骨的疾病，特别是由软骨退变所致的骨关节炎越来越引起人们的重视。软骨退变由其生物化学成分变化开始，引起组织形态及生物力学的变化。针对关节软骨的生物化学成分、组织学形态特点、生物力学机制和骨性关节炎的生物力学机制及其MRI的现状进行综述。     

核心蛋白聚糖对骨性关节炎中软骨修复作用的形态学研究

目的 利用形态学方法,初步探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)对骨性关节炎中软骨修复的作用.方法 选取SD大鼠制作骨关节炎模型,将DCN和转化生长因子(TGF)注射进关节腔,通过大体观察和组织学观察,利用国际软骨修复协会(International Cartilage Repair Society,ICRS)评分...     

骨髓间充质干细胞复合Ⅱ型胶原修复关节软骨缺损的组织学观察

目的 观察向软骨方向诱导分化的自体骨髓间充质千细胞(BMSCs)复合Ⅱ型胶原修复兔关节软骨缺损的质量.方法 扫描电镜观察Ⅱ型胶原结构.24只新西兰大白兔体外分离BMSCs,进行原代、传代培养,倒置显微镜观察.取第3代BMSCs,软骨诱导培养液培养14 d,调整细胞浓度为5×106/ml,与Ⅱ型胶原复合培养1周备用,并观察细胞在支架材料中的生长情况.于膝关节股骨滑车处制作一个直径为4 mm的圆柱形软骨缺损区,右侧植入复合培养1周的自体BMSCs和Ⅱ型胶原组织(实验组);左侧单纯植入Ⅱ型胶原(胶原对照组);另取12只,左右侧均不植入任何材料(空白对照组).术后2,4,8,12周取材,大体和组织学观察检测修复软骨的质量. 结果 Ⅱ型胶原呈网架状结构,孔隙大小在40～300μm之间,BMSCs在其中生长良好,软骨基质大量形成.实验组修复的关节面光亮、平整,镜下表现为透明样软骨,软骨细胞排列规律,与宿主软骨整合好;胶原对照组以纤维组织修复为主,与宿主软骨整合差;空白对照组未能修复软骨缺损.组织学评分实验组明显优于两对照组(P<0.05). 结论 自体BMSCs复合Ⅱ型胶原修复软骨缺损质量好,长期疗效需要进一步的观察.     

家犬化脓性关节炎关节软骨的MRI改变与软骨生化研究

目的:探讨家犬关节软骨早期化脓性关节炎的MRI表现及组织生化学的变化。材料和方法:4个犬膝关节为正常对照,36个犬膝关节内注入金葡菌悬液,分别于注入菌液3～31天不同时段对患病关节行T1WI,T2WI,质子密度加权,脂肪抑制T2WI扫描,测量关节软骨的信号及厚度。分别制成病理大切片行甲苯胺兰染色,且行软骨蛋白多糖含量测定。结果:注入菌液7天后关节软骨信号明显升高,19天后关节软骨厚度开始减小。各期软骨甲苯胺兰染色改变结果与蛋白多糖含量改变结果相一致。结论:化脓性关节炎早期软骨MRI表现是单纯的信号改变。关节软骨MRI信号和形态的改变能反映生物化学的变化。     

关节软骨的结构与生物力学的关系及MR成像

软骨的疾病,特别是由软骨退变所致的骨关节炎越来越引起人们的重视.软骨退变由其生物化学成分变化开始,引起组织形态及生物力学的变化.针对关节软骨的生物化学成分、组织学形态特点、生物力学机制和骨性关节炎的生物力学机制及其MRI的现状进行综述.     

抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对体外培养关节软骨细胞代谢的影响

采用关节软骨细胞培养和同位素标记的方法观察抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对软骨细胞代谢的影响,结果示抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对家兔关节软骨细胞DNA和胶原合成都有明显的抑制作用,认为抗Ⅲ型胶原抗体可能协同抗Ⅱ型胶原抗体参与关节软骨损伤的自家免疫反应。     

关节置换治疗膝骨性关节炎临床疗效

目的探讨关节置换治疗膝骨性关节炎的临床疗效。方法选取自2013年1月至2016年12月北京市垂杨柳医院收治的膝骨性关节炎患者118例为研究对象,采用随机数字表法将患者随机分为牵引复位组(n=59)和关节置换组(n=59)。牵引复位组进行常规牵引和手法复位治疗,关节置换组给予关节置换治疗。比较两组症状体征缓解时间、住院时间,治疗前后患者疼痛评分、活动度、屈曲挛缩评分、关节稳定性评分及总有效率。结果关节置换组症状体征缓解时间、住院时间短于牵引复位组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前疼痛评分、活动度、屈曲挛缩评分、关节稳定性比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后关节置换组各项评分均优于牵引复位组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。关节置换组膝骨性关节炎治疗总有效率为98.3%(58/59),明显高于牵引复位组的80.0%(46/59),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论关节置换治疗膝骨性关节炎可有效改善患者临床症状,缩短疗程,减轻疼痛,改善关节活动度,提高关节稳定性。     

软骨Ⅱ型胶原的制备及其毒理学评价

各种原因造成的关节软骨损伤是临床常见病 ,日常生活和创伤均可导致关节软骨损伤 ,进而引发骨关节炎、关节功能障碍等[1 ,2 ] 。Ⅱ型胶原 (ＣⅡ )是关节软骨的主要成分 ,是软骨细胞的细胞外间质 ,可影响细胞的形态 ,控制细胞的迁移、增殖 ,诱导细胞的分化[3] 。因此 ,笔者研制了ＣⅡ ,使其作为安全的医用生物材料 ,为以后用于软骨缺损修复的研究和产品开发奠定基础。材料与方法一、ＣⅡ的制备从新鲜屠宰的猪关节中切取透明软骨 ,脱脂 ,捣碎 ,然后分别用 4ｍｏｌ Ｌ的盐酸胍去除蛋白多糖 ,再用胃蛋白酶酶解 ,氯化钠 (ＮａＣｌ)盐析后用醋酸溶…     

膝关节股骨外髁髁间侧壁软骨Ⅰ、Ⅲ型胶原和IL-1α、IL-1Ra分布的研究及其临床意义

目的 :观察分析成人股骨外髁髁间侧壁软骨组织IL - 1α、IL - 1Ra和I、Ⅲ型胶原分布特点。方法 :对 14例患者行膝前交叉韧带重建术、髁间窝成形时所取的股骨外髁髁间侧壁软骨标本进行免疫组化染色 ,观察软骨细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及IL - 1α、IL - 1Ra分布。结果 :Ⅰ型胶原见于软骨表层 ,Ⅲ型胶原分布于整个软骨表层和中间层。IL - 1α和IL - 1Ra分布一致 ,仅限于软骨表层。结论 :(1)股骨外髁髁间侧壁软骨与典型的正常负重区透明软骨不同。这可能是此区软骨的特征性表现 ,但不排除退变可能。 (2 )股骨髁间侧壁软骨作为正常软骨的移植来源 ,提供软骨细胞和骨软骨进行自体移植以修复软骨损伤时应该慎重。     

异种异体和同种异体半月板移植术后兔半月板和关节软骨中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原表达和免疫排斥研究

目的 :研究同种异体半月板移植和异种异体半月板移植后 ,移植半月板和关节软骨中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原表达和免疫排斥反应发生的情况。方法 :切除 30只成年新西兰白兔的内侧半月板造成半月板缺失的动物模型。A组进行同种异体内侧半月板移植。B组取猪半月板组织修剪成同兔内侧半月板形态和尺寸相同的异种异体半月板植入物 ,进行兔内侧半月板的异种异体移植。分别在术后第 6周、12周、2 4周取实验动物的半月板、关节软骨进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的单克隆抗体的免疫组织化学染色 ,并取外周血进行补体依赖性微量淋巴细胞毒实验 (CDMT) ,用放射免疫法检测血清中IL - 2和IL - 6的含量 ,了解是否发生免疫排斥反应。结果 :同种异体半月板移植后 ,关节软骨和移植半月板的情况良好 ,但术后第 2 4周 ,异种异体移植物部分被吸收 ,关节软骨出现损伤。两组中各时段移植半月板中的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况无明显差异 ,术后第 12周 ,两组关节软骨中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况相似 ,但术后第 2 4周 ,异种异体半月板组的关节软骨开始有异常Ⅹ型胶原表达。同种异体和异种异体半月板移植组均未发现致命的免疫排斥反应发生。结论 :用猪的半月板组织塑形后移植替代兔内侧半月板组织 ,半年后移植物被溶解吸收 ,同种异体?     

Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型关节炎症及血清抗体的动态变化

目的:制备Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型(CIA模型)并观察其关节炎症和血清中抗体的变化规律.方法:于第0天和第10天分2次多点皮内注射牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂以诱导大鼠CIA模型,应用足爪肿胀容积测定仪动态观察关节肿胀度,采用0～7级关节炎评分法进行关节炎评分,应用组织病理学、X线影像学动态观察踝关节组织的病理变化,应用ELISA方法动态检测血清中多种抗体.结果:CIA模型大鼠免疫后第12天即出现踝关节肿胀,第23天达高峰,持续至第72天(动物处死);X线检查显示:免疫后第30天,软组织明显肿胀,踝关节骨骼结构排列紊乱,间隙不清,可见囊性骨吸收和骨侵蚀;第60天后踝关节骨骼结构排列更加紊乱,骨质疏松和新骨形成并存,提示侵蚀性慢性关节炎.组织病理学观察显示,第72天踝关节滑膜炎性细胞浸润、滑膜增生,关节软骨及骨破坏,显示较明显的慢性关节炎症.血清中总IgG,IgM型类风湿因子(RF),IgG型RF和Ⅱ型胶原抗体于免疫后第15天均明显升高,以后维持在较高水平.结论:应用牛Ⅱ型胶原成功制备大鼠CIA模型,免疫后第12天即加强免疫之后即出现关节炎症的病理变化,至少可持续至第72天.     

Ⅱ型胶原海绵修复兔膝关节软骨缺损的MRI与组织学对比分析

目的 建立兔膝关节软骨损伤动物模型,评估白行研制的Ⅱ型胶原海绵修复关节软骨缺损的效果。 方法 根据既往方法研制成Ⅱ型胶原,利用胶原的自发荧光特性测试其孔径大小;将材料移植到软骨缺损动物模型上,以随机分组对照的方式进行动物实验。通过MRI联合组织病理学HE、番红O、天狼猩红偏振光染色及新生软骨面积测定、Ⅱ型胶原免疫组化染色观察软骨缺损修复状况。 结果 Ⅱ型胶原海绵自发荧光分层扫描显示其孔径为(93.26±38.40) μm,较接近最通软骨生长的孔径。通过横向比较动物实验同一时相点各组MRI对照组织学结果可以看出,Ⅱ型胶原海绵组在6周时首先出现零星、孤立的软骨信号,而番红O染色和免疫组化的结果证实新生的软骨同时具有一定的分泌糖胺多糖和Ⅱ型胶原基质的功能。天狼猩红偏振光测定结果显示,Ⅱ型胶原海绵组新生软骨面积远高于对照组(P＜0.01)。 结论 通过改进方法提取纯化的Ⅱ型胶原,无论组织病理还是MRI的结果均显示对兔膝关节软骨缺损的修复有显著效果。