针刺对大鼠"足三里"穴缝隙连接蛋白Cx43表达的影响

目的:观察大鼠"足三里"穴与非经非穴处缝隙连接蛋白Cx43的表达及针刺对该表达的影响,探讨缝隙连接蛋白与穴位的可能关系.方法:20只健康成年SD大鼠随机分为非针刺组、针刺组,每组10只;应用荧光双重标记免疫组织化学方法和激光扫描共聚焦显微镜技术对"足三里"穴、非经非穴处皮肤组织Cx43进行定位、定量分析.结果:皮肤组织中Cx43主要在上皮细胞胞浆、胞膜上表达,包括皮肤表皮和部分毛囊等上皮角质形成细胞;非针刺组中穴位处Cx43的表达显著高于非经非穴处(P＜0.01),针刺组中穴位针刺后Cx43表达显著增加,与非针刺组中穴位比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论:缝隙连接蛋白及缝隙连接可能是穴位的主要组成成分,且针刺能明显增加缝隙连接蛋白在穴位处的表达.     

荧光双重标记Cx43在大鼠“足三里”表达的实验研究

目的:研究缝隙连接蛋白Cx43在大鼠“足三里”穴的表达及其与穴位、经络的可能关系。方法:20只健康成年SD大鼠随机分为非针刺组、针刺组,每组10只。应用荧光双重标记免疫组织化学方法和激光扫描共聚焦显微镜技术对成年大鼠皮肤肌肉组织的Cx43进行定位、定量分析。结果:皮肤肌肉组织中Cx43主要在表皮上皮细胞、皮下筋膜的肥大细胞中表达;非针刺组中穴位处Cx43的表达显著高于非经非穴处,两者相比有极显著性差异(P<0.01);穴位针刺后Cx43表达显著增加,与非针刺组中穴位比较有极显著性差异(P<0.01)。结论:电针可使“足三里”穴区皮肤及肌肉组织中的Cx43表达明显增加,缝隙连接蛋白及缝隙连接可能在经络活动中起重要作用。     

缝隙连接蛋白Cx43在大鼠经脉线上表达的实验研究

目的:研究缝隙连接蛋白Cx43在正常健康大鼠经脉线上的表达及其意义.方法:应用二步法免疫酶技术和ASIAS-2000自动扫描图像分析系统对大鼠多条经脉上的Cx43进行定位、定量分析.结果:缝隙连接蛋白Cx43广泛表达于表皮上皮细胞、真皮成纤维细胞、皮下筋膜的肥大细胞以及肌肉肌膜细胞的胞浆胞膜中,经统计学分析,肾经足底段、膀胱经背部段Cx43的表达显著高于邻近对照线,两者相比差异有极显著性意义(P＜0.01).结论:缝隙连接蛋白及缝隙连接与经络高度相关,由缝隙连接介导的细胞间通讯可能在经络活动中起重要作用.     

针刺对大鼠不同部位穴位Cx43表达的影响

目的:观察针刺大鼠穴位和非穴位对细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨穴位的相对特异性。方法:将20只Wistar大鼠随机分为2组,一组为针刺组,另一组为空白对照组,每组10只。对照组大鼠不做任何干预直接用空气栓塞法处死;针刺组大鼠选上肢"内关"穴,下肢"后三里"即"足三里"穴,背部"大椎"穴和腹部"关元"穴,对以上穴位、穴位旁1cm处及爪部"涌泉"穴,行手针针刺,留针30min后,空气栓塞处死。固定后,取两组大鼠穴位处及穴位旁开1cm处的组织块,涌泉穴只取穴位处,冰冻切片。采用Cx43的免疫组化染色方法染色。结果:两组大鼠各穴位处Cx43的表达均显著高于其穴位旁(均P<0.01);针刺组穴位处Cx43的表达均显著高于对照组穴位处(均P<0.01)。结论:穴位和非穴位之间Cx43的表达有显著性差异,表明穴位确实存在且有其相对特异性。     

艾灸对功能性消化不良大鼠SCF、Cx43表达的影响

目的探讨艾灸对功能性消化不良大鼠SCF、足三里穴局部Cx43蛋白表达的影响。方法建立功能性消化不良大鼠模型,进行艾灸足三里穴和足三里穴旁开对照点,采用免疫印迹法(Western blot)分别检测各组大鼠胃窦SCF及穴位、穴位旁开对照点局部Cx43蛋白的表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠胃窦SCF及穴区局部Cx43蛋白水平显著降低(P0.01);与模型组比较,艾灸穴位组SCF及Cx43蛋白表达量高于模型组(P0.05),艾灸非穴组SCF及Cx43蛋白表达量无显著差异(P0.05);与艾灸非穴组相比,艾灸穴位组SCF及Cx43蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论艾灸干预能够显著升高FD大鼠胃窦SCF及足三里局部Cx43蛋白表达水平,改善胃动力,调节胃肠道活动。     

针刺对急性脑梗死大鼠海马区Cx43蛋白表达的影响

目的观察针刺对缺血再灌注大鼠海马区缝隙连接蛋白Cx43蛋白表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、非穴位针刺组及针刺组。采用改良的线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型,模型组、非穴位针刺组及针刺组内分设4个亚组,即缺血再灌注30 min组、缺血再灌注60 min组、缺血再灌注180 min组、缺血再灌注360 min组,每组10只。针刺组电针大鼠顶中线和顶旁线;非穴位针刺组取患侧肋下髂嵴上10 mm的固定点作为针刺点;模型组不予任何处理。采用免疫组化法测Cx43蛋白表达情况。结果针刺组不同时间脑缺血再灌注后行为障碍(Bederson’s)评分与非穴位针刺组和模型组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。模型组、针刺组和非穴位针刺组不同时间脑缺血再灌注后海马Cx43灰度值与正常组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。针刺组不同时间脑缺血再灌注后海马Cx43灰度值与模型组和非穴位针刺组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论针刺可以阻断Cx43的过度表达,干预大脑神经元缺血再灌注损伤,在缺血性脑损伤中发挥神经保护作用。     

沉默穴位Cx43的表达后针刺镇痛的实验研究

目的：研究沉默痛经大鼠穴位局部Cx43的表达对针刺效应的影响和针刺治疗原发性痛经大鼠的镇痛机制。方法：利用己烯此酚造成原发性痛经的大鼠模型，应用RNAi技术沉默穴位局部Cx43的表达。将50只雌性大鼠随机平均分为5组：正常组（对照），模型组（己烯雌酚），针刺组（己烯雌酚＋针刺），针刺＋干扰组（己烯雌酚＋针刺＋pSilencer—Cx43-shRNA）和针刺＋干扰对照组（己烯雌酚＋针刺＋pSilencer—Con—shRNA）。末次注射催产素后，观察痛经大鼠30min的扭体数。半定量RT—PCR和免疫组织化学检测大鼠子宫内膜催产素（OTR）和加压素（VPR）mRNA和蛋白的表达。结果：①干扰组穴位处的Cx43显著低于针刺组（P〈0．05），针刺组和干扰对照组之间无明显差别（P〉0．05）。②与模型组、干扰组比较，针刺组能显著延长痛经大鼠的扭体潜伏期，减少扭体数。③与正常组比较，模型组OTR和VPR mRNA和蛋白水平显著增高（P〈0．05）。与模型组比较，针刺组和干扰对照组的OTR和VPR mRNA和蛋白水平显著降低（P〈0．05）。模型组和干扰组之间OTR和VPR mRNA和蛋白水平无显著性差异（P〉0．05）。结论：局部注射Cx43特异性shRNA真核表达载体有效地沉默了穴位Cx43的表达，并显著地影响了针刺效应，表明Cx43可能与针刺疗效有密切关系。针刺通过调节子宫内膜OTR和VPR的表达来有效治疗原发性痛经．     

针刺麻醉行甲状腺手术常用穴位的形态学研究

目的:探讨针麻行甲状腺手术常用穴位扶突穴、合谷穴及内关穴的感觉传入及其与甲状腺感觉传入在颈脊神经节的汇聚与整合,揭示针麻行甲状腺手术的形态学基础。方法:①实验用成年雄性Wistar大鼠24只,随机分为合谷穴、内关穴、扶突穴和甲状腺4组(每组6只),将辣根过氧化物酶(HRP)分别注入上述穴区及甲状腺内,观察穴位和甲状腺的感觉传入。②雄性Wistar大鼠18只随机分为甲状腺-扶突穴组、合谷-甲状腺组、内关-甲状腺组(每组6只),分别将荧光素碘化丙啶(PI)、双苯甲亚胺(Bb)注入上述3个穴位和甲状腺,观察穴位和甲状腺的传入感觉在脊神经节的汇聚及神经节细胞的分支投射。③雄性Wistar大鼠24只随机分为正常组、针刺组(每组12只),手针针刺以上穴位及"足三里"和非穴位,用免疫组织化学方法观察穴区局部缝隙连接蛋白43(Cx 43)表达。结果:①HRP结果显示,3个穴位与甲状腺的感觉传入在C 3-C 5脊髓节段存在汇聚与重叠。②扶突穴注入PI、甲状腺注入Bb,合谷穴注入PI、甲状腺注入Bb,内关穴注入PI、甲状腺注入Bb后,3组出现的单标记神经元分布的部位部分不同,但均在C 3-C 6的脊神经节观察到双标记神经元。③免疫组化染色结果显示,不同穴位针刺组Cx 43表达均高于正常对照组(P<0.05);各穴位处Cx 43的表达显著高于非穴位处(P<0.05);非穴位处针刺后Cx 43表达的变化与非针刺非穴位组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:扶突穴、合谷穴、内关穴及甲状腺的传入投射在颈脊神经节存在汇聚与分支投射,为针麻行甲状腺手术提供了新的形态学依据,同时也证实穴位针刺可以调节穴位局部缝隙连接蛋白的表达以影响局部细胞间的信息交流。     

Connexin 43在银杏叶提取物抗大鼠脑缺血损伤中的作用

目的通过体内体外实验研究缝隙连接蛋白43(Cx43)与EGb761脑缺血神经保护作用的关系,探讨银杏叶制剂EGb761治疗脑缺血的机制。方法在大鼠原代神经细胞中转染荷载Cx43-shRNA的慢病毒,干扰Cx43蛋白表达,同时给予EGb761 200μg/mL处理观察Cx43的表达以及EGb761对Cx43蛋白表达的影响。建立大鼠脑缺血模型,腹腔给予EGb761 50、100 mg/kg,使用HE染色,TTC染色,免疫组化和westernblot方法检测大鼠脑组织细胞的形态变化和大鼠海马Caspase-3,TUNEL阳性细胞,Cx43,p-Cx43蛋白的表达变化。结果 EGb761给药可以减少脑缺血大鼠脑组织梗死面积,显著性抑制脑缺血大鼠海马Caspase-3表达和TUNEL阳性凋亡细胞数目,显著性抑制大鼠海马神经细胞p-Cx43的表达水平。体外培养的大鼠神经细胞转染Cx43-shRNA慢病毒,给予EGb761处理,处理前后神经细胞Cx43/p-Cx43蛋白表达未见明显变化。结论 EGb761可以减轻脑缺血缺氧引起的细胞损伤,其神经保护作用与抑制缺血引起的缝隙连接蛋白Cx43的表达和激活有关。     

针刺调控偏头痛大鼠三叉神经脊束核中星形胶质细胞缝隙连接蛋白43抑制干扰素-γ的抗炎镇痛机制

目的:观察针刺对偏头痛大鼠三叉神经脊束核(TNC)中星形胶质细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平的影响，探讨针刺治疗偏头痛的可能机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、假针刺组，每组11只。采用硝酸甘油颈背皮下注射法(10 mg/kg)制备偏头痛大鼠模型。针刺组针刺双侧“率谷”“阳陵泉”,假针刺组针刺双侧非穴点Ⅰ、非穴点Ⅱ,20 min/次，1次/d,连续9 d。检测大鼠足底机械痛阈值(PWMT)、甩尾潜伏期(TFL)观察疼痛反应；ELISA法检测大鼠TNC中IFN-γ的含量；Western blot法检测大鼠TNC中Cx43和IFN-γ蛋白的表达量；免疫荧光双标法检测大鼠TNC中GFAP、Cx43的共表达情况及神经元核抗原(NeuN)、IFN-γ受体R(IFN-γR)的共表达情况。结果:造模后第3、5、7、9天，与空白组比较，模型组PWMT、TFL明显降低(P<0.01);与模型组和假针刺组比较，针刺组PWMT、TFL明显升高(P<0.01)。与空白组比较，模型组TNC中Cx43蛋白表达水平升高(P&...