测定淋巴细胞增殖的MTS和XTT比色法的建立

目的建立用新型四唑氮盐MTS和XTT做比色分析测定淋巴细胞增殖效应的方法.方法分别用MTS、XTT结合PMS,对小鼠脾淋巴细胞密度和增殖进行比色测定,选择最佳实验条件,并将这两种方法与3H-TdR掺入法和MTT法比较.结果用MTS和XTT比色分析法测定小鼠脾淋巴细胞的增殖,在0.5～4×109/L的范围内,所获光吸收(A)值与细胞密度呈良好的相关性.最佳细胞密度为2×109/L,最佳反应时间为6h,最佳PMS的终浓度为1×10-4mol/L.两种比色法与3H-TdR掺入法的结果相一致,且两种新方法较MTT法灵敏.结论MTS和XTT比色分析法可代替3H-TdR掺入法和MTT法,用于测定淋巴细胞的增殖效应.     

小鼠白细胞介素3活性检测影响因素的初步研究

<正> 白细胞介素3(Interleukin 3,IL_3)是近年来发现的淋巴因子之一。关于小鼠白细胞介素3活性检测目前有四种方法:(1)20-α羟基类固醇脱氢酶法;(2)鼠骨髓细胞集落形成试验;(3)鼠骨髓细胞H_3-TdR掺入法;(4)IL_3生长依赖株32D增殖~3H-TdR掺入法。这些检测方法以32D依赖株~3H-TdR     

Semaphorin 3A过表达对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探讨semaphorin 3A(Sema 3A)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法:构建Sema 3A过表达载体,以脂质体转染法转染HUVECs,过表达效果以qPCR和Western blot法验证;待测细胞以200μmol/L H_2O_2处理4 h;qPCR法检测炎性细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平以相应比色法检测;细胞活力以MTT法检测;流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及Bcl-2水平以Western blot法检测。结果:Sema 3A过表达能显著增加H_2O_2诱导的HUVECs凋亡、炎性细胞因子分泌以及LDH和MDA含量,同时显著抑制SOD活性和细胞活力;Sema 3A对未经H_2O_2处理的HUVECs没有损伤效应,即其对HUVECs的损伤具有H_2O_2依赖性。结论:Sema 3A能显著加重H_2O_2诱导的HUVECs损伤,在氧化应激所致的内皮细胞损伤过程中发挥促进作用。     

NAG微量酶反应比色法在IL-2活性检测中的应用

本文研究了NAG微量酶反应比色法在IL-2活性检测中的应用,结果表明IL-2活性测定所用的CTLL-2细胞浓度与OD值呈直线关系(r=0.964715)。本文还探讨了NAG法在IL-2活性测定中CTLL-2细胞浓度,培养时间对检测效果的影响。本法与~3H—TdR掺入法和MTT法相比有较好的一致性。     

人红细胞对LAK细胞DNA合成和IL-2受体表达影响的研究

本文用~3H-TdR掺入法、APAAP免疫染色法和MTT法研究人红细胞(RBC)对LAK细胞DNA合成、IL-2受体(IL-2R)表达及杀伤活性的影响。人RBC对LAK细胞DNA合成有抑制作用,对LAK细胞IL-2R表达和杀伤活性有促进作用。随RBC浓度增加,抑制作用和促进作用均明显加强。     

大鼠趋化素样因子对成肌细胞促增殖作用的研究

目的 探讨大鼠趋化素样因子1和2（rCKLF1，2）对成肌细胞的增殖促进作用。方法 构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体，并瞬时转染293T细胞，收获培养上清，分别以^3H-TdR掺入和MTT比色法，分析rCKLF1和rCKLF2对小鼠肌母细胞系C2C12和原代肌卫星细胞增殖的促进作用，结果 成功地构建了rCKLF1和rCKLF2的真核表达质粒，并在SV40转化的293T细胞中瞬时表达rCKLF1和rCKLF2，瞬时转染上清能够使C2C12细胞的^3H-TdR的掺入值增加2倍或3倍，MTT比色法分析表明，rCKLF1和rCKLF2的转染上清，对Wistar大鼠乳鼠肌卫星细胞具有增殖促进作用。结论 rCKLF1和rCKLF2能够促进骨骼肌细胞的增殖，为进一步探讨CKLF家族分子在骨骼肌细胞增殖分化中的作用提供了实验依据。     

丁苯酞减轻H2O2诱导的人脐静脉和脐动脉内皮细胞氧化损伤

目的探讨丁苯酞(NBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的血管内皮细胞(人脐静脉和脐动脉)氧化损伤的保护作用及发生机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人脐动脉内皮细胞(HUAECs)。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选合适的H_2O_2剂量建立两种细胞的氧化应激损伤模型。在加入H_2O_2前2 h,分别用两种剂量的丁苯酞(5和10μmol/L)预孵育细胞,用MTT法检测细胞活力,罗丹明123检测线粒体膜电位,Annexin V/PI双染法检测凋亡细胞,Fura-4/AM检测细胞内游离钙。结果 H_2O_2刺激可导致HUVECs和HUAECs细胞活力下降,线粒体膜电位下降,细胞内游离钙增多,细胞凋亡率上升(P0.05)。丁苯酞可改善H_2O_2诱导的上述变化。结论丁苯酞可通过减轻H_2O_2造成的氧化损伤来保护血管内皮细胞。     

H2O2和NO对滑膜成纤维增殖反应的影响

采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法研究过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）和一氧化氮（ＮＯ）对兔滑膜成纤维细胞（ＳＦ）增殖反应的影响。结果表明，在使用亚适ＳＦ浓度（５×１０＾７细胞／Ｌ）时，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法检测结果一致，Ｈ２Ｏ２和亚硝基铁氰化钠（ＮＯ供体）在低浓度时促进ＳＦ增殖反应，而在高浓度时抑制其增殖反应，提示Ｈ２Ｏ２和ＮＯ对ＳＦ增殖反应具有双向调节作用。     

白介素1对大鼠肾小球上皮细胞增殖和合成含硫酸根物质的影响

本文用~3H-TdR、~(35)S-Na_2SO_4双核素标记法,观察了人单核细胞IL-1对大鼠肾小球上皮细胞(GEC)增殖和细胞层~(35)SO~(2-)_4掺入量的影响。结果示:IL-1促进GEC增值作用明显(p<0.05),对细胞层~(35)SO~(2-)_4掺入量有显著促进作用(P<0.01)。提示IL-1在某些伴上皮细胞增殖的肾小球疾病中起重要作用。     

Wnt/β-Catenin对低氧诱导绿色荧光蛋白小鼠神经干细胞体外增殖的影响

目的:体外观察低氧对绿色荧光蛋白(GFP)小鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响,并探讨Wnt/β-catenin通路在此过程中的作用。方法:经低氧(3±2)%O_2和常氧205O_2培养GFP小鼠海马组织NSCs,通过NSCs克隆形成率检测、BrdU掺入法和四唑盐比色法(MTT)法检测细胞增殖情况;脂质体介导法将NSCs转染β-catenin,通过免疫细胞化学染色、Western印迹法检测β-catenin表达情况,MTT法检测转染β-catenin后低氧对NSCs增殖的影响。结果:低氧组细胞克隆球形成率、BrdU阳性细胞数量、NSCs增殖活性、NSCs内β-catenin表达均显著高于常氧组;转染β- catenin的NSCs经低氧培养后,NSCs增殖活性明显高于未转染组。结论:体外低氧培养能促进NSCs增殖和NSCs内β-catenin表达;增加NSCs中β-catenin表达能促进低氧培养下NSCs的增殖。表明Wnt/β-catenin通路具有促进低氧诱导NSCs增殖的作用。     

MTT colorimetric assay detects mitogen responses of spleen but not blood lymphocytes

In an effort to simplify methods for assessing mitogen stimulation of blood lymphocytes, the MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) colorimetric assay was compared with the conventional tritiated thymidine deoxyriboside (3H-TdR) incorporation assay. Although able to detect mitogen responses by mouse and rat spleen cells, the MTT assay did not reliably measure blood mononuclear cell responses in mouse, rat or man. The 3H-TdR incorporation assay was effective in every case. Modifications of the MTT assay procedure did not rectify this disparity, which was caused in part by high MTT optical density readings by unstimulated cells. The inability of the MTT assay to detect mitogen responses by blood cells seems to reflect a species-independent physiologic property of these cells.     

测定淋巴细胞转化和鼠白细胞间素2活性的新方法——MTT比色分析法

细胞增殖通常用~3H-Tdr掺入法或活细胞计数法进行测定。由于前者使用放射性同位素易污染环境并且需要昂贵的仪器,而后者易受主观因素的影响误差较大,因此两者的应用都有一定局限性。最近Mosmann根据活的增殖细胞能代谢MTT[3-(4,5-di-methylthiazol-2-y1)2,5-diphenyl te-trazollum bromide]产生MTT甲 (for-     

一氧化氮在脂多糖抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

本研究采用MTT 法,3 H-TdR 掺入实验、分光光度计测量和免疫组织化学的方法,观察了脂多糖对离体培养SD 大鼠血管平滑肌细胞殖增、DNA 合成、一氧化氮产量和一氧化氮合酶表达的影响。结果发现,脂多糖可明显抑制血管平滑肌细胞的增殖和DNA 合成,推测该效应可能是通过iNOS-NO-cGMP 通路实现的。     

抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的 研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能.观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用.方法 以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能.利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量.结果 加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制.不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑.结论 1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞.1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应.     

A rapid colorimetric assay for the determination of IL-2-producing helper T cell frequencies

Interleukin 2 (IL-2) activity is tested in conditioned media by assessing its ability to support proliferation of selected IL-2 dependent T cell lines, conventionally measured by [3H]thymidine incorporation. Here, we compare this [3H]thymidine uptake test for measuring IL-2 activity with a rapid and sensitive colorimetric method which is based on the ability of viable cells to cleave 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT). The sensitivity of the colorimetric method was dependent on the indicator cell line used, being greatest with the cytotoxic T cell line 16 (CTLL-16). The colorimetric method is at least as sensitive as [3H]thymidine uptake tests, does not rely on radioactivity, and is ideally suited to screen large numbers of individual samples for IL-2 activity. The latter point was demonstrated by calculating IL-2-producing helper T cell frequencies in heterogeneous murine lymphocyte populations: in this assay, splenic T cells were clonally expanded under limiting dilution conditions and supernatants conditioned by these in vitro growing T cell clones were tested for IL-2 activity with the colorimetric method. This allowed us to obtain reliable estimates of the frequency of progenitor cells of IL-2-producing T cell clones in various populations.     

NOD8对H2O2诱导的人肝细胞凋亡的影响

 目的:探讨NOD8对H2O2诱导的人肝细胞L02凋亡的影响。 方法: pEGFP-C2 及pEGFP-NOD8重组质粒经JetPRIME介导转染L02细胞;用H2O2诱导细胞凋亡。实验分为pEGFP-C2组、pEGFP-C2+H2O2组和pEGFP-NOD8+H2O2组。采用MTT法检测细胞活性,Western blotting检测细胞NOD8的蛋白表达,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法检测细胞caspase-3活性。 结果: 通过MTT检测不同浓度（0.2～2 mmol/L）H2O2刺激6 h后的细胞活性,确定1 mmol/L H2O2为诱导细胞凋亡的剂量。Western blotting检测结果显示,转染pEGFP-NOD8质粒的细胞NOD8蛋白表达明显增加。Hoechst 33342染色法观察发现,pEGFP-C2+H2O2组有较多细胞出现强蓝色荧光细胞核,细胞凋亡较多,而pEGFP-NOD8+H2O2组细胞凋亡明显减少。流式细胞术分析显示,pEGFP-C2+H2O2组的细胞凋亡率明显升高,pEGFP-NOD8+H2O2组的细胞凋亡率则显著下降。pEGFP-C2+H2O2组细胞的caspase-3活性明显升高,而pEGFP-NOD8+H2O2组细胞的caspase-3活性显著下降。 结论: NOD8可抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡,其作用机制可能与NOD8抑制细胞的caspase-3活性有关。     

幽门螺旋杆菌对大鼠和人胃粘膜细胞株增殖的影响

本工作观察了幽门螺旋杆菌菌体超声粉碎提取物对大鼠胃粘膜细胞株ＲＧＭ１和人胃腺癌细胞株ＢＧＣ－８２３增殖的影响。结果显示Ｈｐ提取物对两种细胞增殖的影响不一：在ＲＧＭ１细胞,Ｈｐ提取物作用使ＭＴＴ比色法ＯＤ值和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值明显降低,在ＢＧＣ－８２３细胞,Ｈｐ提取物作用使ＭＴＴ比色法ＯＤ值和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值明显增高。表明Ｈｐ提取物抑制大鼠胃粘膜细胞株增殖而促进人胃腺癌细胞株增殖。提示细胞的状     

S-亚硝基谷胱苷肽对糖基化终产物诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增生的影响

为探讨脂溶性NO前体药物S 亚硝基谷胱苷肽 (S nitrosoglutathione ,GSNO)对糖基化终产物 (advancedglycosyla tionendproducts ,AGEs)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增生的影响 ,利用体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,用MTT法、同位素掺入法及细胞计数法测定其增殖率的变化 ,观察不同浓度的AGEs对血管平滑肌细胞的增殖的影响以及不同浓度的GSNO对AGEs作用的预防和逆转作用。MTT法测定的OD值、3 H 胸腺嘧碇核苷 (3 H TDR)掺入量、细胞计数均显示AGEs可以使血管平滑肌细胞数明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;而用GSNO干预后 ,AGEs的上述作用被明显抑制 (P <0 0 5 )。提示NSNO可以抑制AGEs诱导的血管平滑肌细胞的增殖