塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性的研究

目的 研究选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布影响口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞对长春新碱敏感性的效应,探讨其作用机制。方法 采用MTT法分别检测塞来昔布组、长春新碱组、塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+前列腺素E2 （ PGE2）组对KB/VCR细胞的生长抑制作用,用Western印迹法检测P-糖蛋白（Pgp）、Bcl-2和Bcl-XL的表达,流式细胞术检测塞来昔布对KB/VCR细胞凋亡的影响。采用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果 塞来昔布+长春新碱组的细胞生长抑制率高于塞来昔布组、长春新碱组及塞来昔布+长春新碱+PGE2组（P<0.01）。塞来昔布+长春新碱组和塞来昔布组P-gp的表达显著低于长春新碱组及塞来昔布+长春新碱+PGE2组（P<0.01）,塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+PGE2组和塞来昔布组Bcl-2、Bcl-XL的表达显著低于长春新碱组（P<0.01）。塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+PGE2组细胞凋亡率均显著高于长春新碱组、塞来昔布组,塞来昔布+长春新碱+PGE2组细胞凋亡率显著低于塞来昔布+长春新碱组（P<0.01）。结论 塞来昔布可以通过下调P-gp的表达及促进细胞凋亡,增强长春新碱耐药株KB/VCR细胞对长春新碱的敏感性。     

塞来昔布对Tca8113细胞环氧化酶-2表达及诱导凋亡的作用

目的观察选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制、COX-2表达调节及诱导凋亡的作用。方法在Tca8113细胞中分别加入含有不同浓度塞来昔布的培养液,培养24、48、72 h后,采用MTT方法测定细胞生长抑制率,采用免疫组化方法观察COX-2蛋白在Tca8113细胞中的表达,应用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征,应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞的早期凋亡率,相对定量荧光定量PCR检测Tca8113细胞中COX-2 mRNA的表达。结果COX-2蛋白在Tca8113细胞中呈强阳性表达,塞来昔布在抑制细胞生长的同时,抑制Tca8113细胞COX-2蛋白的表达;Tca8113细胞经塞来昔布处理后凋亡细胞多见,与对照组相比,塞来昔布处理组早期凋亡细胞增多有统计学意义;塞来昔布调节COX-2 mRNA表达的作用与对照组相比无统计学意义。结论塞来昔布主要以剂量依赖的方式抑制Tca8113细胞生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2蛋白表达有关,而对COX-2基因作用较弱,其作用机制有待进一步研究。     

siRNA沉默COX-2基因对KB/VCR细胞的增殖及侵袭的影响

目的:观察siRNA沉默口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞COX-2基因后,对KB/VCR细胞增殖及侵袭能力的影响。方法:将KB/VCR细胞分为COX-2 siRNA组、阴性对照组及空白对照组,采用RT-PCR检测各组细胞COX-2 mRNA的表达,蛋白印迹法检测COX-2蛋白的表达,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,Transwell小室测定各组细胞侵袭能力的变化。结果:COX-2 siRNA组细胞的COX-2蛋白和mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。COX-2 siRNA组细胞的生长抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。COX-2 siRNA组细胞的侵袭能力也明显降低。结论:COX-2 siRNA能特异性沉默KB/VCR细胞的COX-2基因,使KB/VCR细胞生长得到抑制,并减弱其侵袭能力。     

塞来昔布抑制Tca8113细胞释放PGE_2及抑制细胞增殖的作用

目的研究选择性环氧化酶2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞生长抑制、诱导细胞凋亡与释放前列腺素E2（PGE2）的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测PGE2含量,AO/EB荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化。结果塞来昔布以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞生长及释放PGE2,其抑制PGE2释放与抑制细胞生长及诱导细胞凋亡均呈负相关,AO/EB荧光双染观察发现经塞来昔布处理24h后,细胞出现典型的凋亡变化,凋亡细胞多见。结论塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞生长及诱导细胞凋亡与其抑制PGE2释放密切相关。     

环氧化酶-2及其选择性抑制剂塞来昔布与舌鳞状细胞癌侵袭的研究进展

环氧化酶(COX)是致炎物质地诺前列酮合成过程中的重要限速酶.COX-2是环氧化酶的诱导型,参与炎症反应和肿瘤的发生.包括舌鳞状细胞痛在内的大多数恶性肿瘤均有COX-2的阳性表达.COX-2的活性增强还能提高细胞与细胞外基质蛋白的黏附能力,增强基质金属蛋白酶的表达水平,增加肿瘤细胞的侵袭力.进一步研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布与舌鳞状细胞癌侵袭之间的关系,对舌鳞状细胞癌的治疗和预后有非常重要的意义.     

塞来昔布对Tca8113细胞侵袭性影响的体外研究

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenease-2,COX-2)抑制剂——塞来昔布(celecoxib)对Tca8113细胞侵袭性的抑制作用。方法:用划痕实验检测Tca8113细胞的迁移能力;不同浓度的塞来昔布处理人舌鳞癌Tca8113细胞后,用MTT法检测细胞-基质黏附力的变化;用Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:10、20μmol/L的塞来昔布作用24 h后,细胞的侵袭能力分别下降了54%和73%(P<0.001),细胞-基质黏附力也明显降低(P<0.001)。结论:Tca8113细胞是高侵袭性细胞,塞来昔布对Tca8113细胞侵袭的抑制作用呈剂量依赖性。     

塞来昔布增强博来霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113杀伤作用的研究

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)增强博来霉素(bleomycin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法 用含不同浓度的塞来昔布和博来霉素培养液培养Tca8113细胞24、48、72 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,并采用金正钧法判断药物合用的相互作用;流式细胞术检测Tca8113细胞周期进程和诱导细胞凋亡的作用.结果 小剂量的塞来昔布(10 μmol/L)可增强博来霉素对Tca8113细胞的生长抑制作用,增强博来霉素阻滞Tca8113细胞周期进程的作用,其阻滞G1期细胞进入S期的作用最为明显,导致G0、G1细胞的数量增加[(60.93±0.32)%],S期[(30.57±0.78)%]、G2及M期[(8.50±0.50)%]细胞减少,同时,细胞凋亡率[(1.87±0.11)%]显著提高.结论 小剂量的塞来昔布可增强博来霉素对Tca8113细胞的毒性作用,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡.     

齐留通和塞来昔布对实验性口腔癌抑制作用的研究

目的通过局部应用5-Lox抑制剂齐留通和Cox-2抑制剂塞来昔布,研究它们对DMBA诱发的金黄地鼠口腔癌的抑制作用.方法用0.5%的DMBA石蜡油涂于地鼠左侧颊囊,每周3次,共涂6周.从第7周开始分别给地鼠左侧颊囊局部涂抹3%和6%的齐留通、3%和6%的塞来昔布及3%齐留通与3%塞来昔布的混合物,每周3次,连续18周.结果通过局部应用3%和6%的齐留通,鳞状细胞癌的发病率从76.9%分别下降到45.8%(11/24,P＜0.05)和32.1%(9/28,P＜0.01);应用3%和6%的塞来昔布分别下降到57.6%(15/26,P＞0.05)和50.0%(12/24,P＜0.05);用3%齐留通与3%塞来昔布的混合物组,鳞状细胞癌的发病率降至36%(9/25,P＜0.01).用药后齐留通组的白三烯B4水平降低;塞来昔布组的前列腺素E2水平降低;联合用药组前列腺素E2和白三烯B4同时降低.结论齐留通和塞来昔布能够抑制DMBA诱发的金黄地鼠口腔癌的发生.齐留通和塞来昔布预防肿瘤的机制可能与其抑制异常花生四稀酸代谢酯氧化酶和环氧合酶途径有关.     

塞来昔布用于下颌阻生牙拔除术后镇痛的疗效评价

目的: 评价塞来昔布对下颌阻生牙拔除术后急性疼痛的镇痛效果。方法：90例拔除下颌阻生第三磨牙的患者按随机双盲法分为塞来昔布组、布洛芬组、安慰剂组,每组30例。拔牙4 h后,分别给予塞来昔布400 mg、布洛芬400 mg、维生素C 100 mg。采用视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS),记录患者拔牙4 h后、服药24 h内的疼痛情况及不良反应,利用SPSS 13.0软件包,通过χ²检验和方差分析,比较2种药物的镇痛效果有无显著差异。 结果:塞来昔布组、布洛芬组与安慰剂组相比,在镇痛药起效时间、疼痛强度差值(PID)、疼痛缓解程度(PAR)、总疼痛强度差(SPID)、疼痛缓解总和(TOPPAR)、整体评价方面具有显著差异(P<0.05)。塞来昔布组与布洛芬组相比,镇痛效果基本相同,仅服药12 h后两者的PID有显著差异(P<0.05)。服药24 h内,在镇痛起效时间、PAR、SPID、TOPPAR、整体评价方面的差异无显著性(P>0.05)。结论：塞来昔布对下颌阻生牙拔除术后中、重度急性疼痛有明显的镇痛作用。     

苦参碱对KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用

目的　观察中药苦参的提取物苦参碱对口腔上皮癌KB细胞及其多药耐药细胞KBv200的凋亡诱导作用。 方法　MTT法观察苦参碱对体外培养的KB及KBv200细胞存活率的影响。吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色检 测二者细胞凋亡率。流式细胞术分析苦参碱对细胞周期的影响;扫描电镜观察苦参碱作用后的细胞形态学变化。 结果　苦参碱质量浓度在0·50、1·00、1·50、2·00 mg/ml时,均有抑制KB及KBv200增殖的作用,双荧光染色及流式细 胞术提示苦参碱可诱导KB及KBv200细胞凋亡,使细胞生长停滞在S期;扫描电镜观察发现不同质量浓度的苦参 碱作用24 h后,细胞出现体积缩小、细胞质空泡化、细胞核碎裂等凋亡现象。结论　苦参碱对KB及KBv200细胞有 增殖抑制作用,可诱导KB及KBv200细胞凋亡,其机制可能与其导致细胞S期阻滞有关。     

MMP－2 siRNA促进口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡作用的研究

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP－2）siRNA对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的作用。方法：采用MMP－2 siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测MMP－2表达,MTT检测细胞活性,Annexin－V单染检测细胞凋亡。结果：MMP－2 siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中MMP－2 mRNA表达。MMP－2干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组（P＜0．01）,且细胞凋亡率高于阴性对照组（P＜0．01）。结论：MMP－2干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

莲房原花青素对人口腔表皮样癌(KB)细胞生长及形态的影响

目的 观察体外应用莲房原花青素(LSPC)对人口腔表皮样癌(KB)细胞生长的抑制作用及形态学上的影响。方法 采用体外细胞培养技术、噻唑蓝显色(MTT)法观察LSPC对KB细胞生长的抑制作用；倒置显微镜、HE染色法、透射电镜研究用药前后细胞形态的变化。结果 LSPC对KB细胞有很好的抑制作用，在一定浓度范围内呈剂量效应关系且只有较小的细胞毒性，细胞形态发生明显的变化。结论 LSPC可抑制KB细胞生长且使KB细胞形态发生明显的变化。     

口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中的SP细胞含量分析

目的探讨两种口腔鳞状细胞癌细胞系KB和Tca8113中的侧群细胞的含量,寻找口腔鳞癌肿瘤干细胞存在的依据。方法采用有限稀释法对口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113细胞株经Hoechst 33342/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染色后,采用流式细胞仪测定,分析两细胞株中侧群细胞的含量。结果口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中具有不同的表型,即侧群细胞和非侧群细胞。在体外培养中,KB和Tca8113细胞株中侧群细胞含量分别为0.6%和2.3%。经维拉帕米阻断后,侧群细胞含量均明显降低,分别降为0和0.1%。结论 KB和Tca8113细胞株中均存在侧群细胞,但含量较少。     

Synergistic effects of verapamil on pingyangmycin-induced cytotoxicity and apoptosis in KB cells

OBJECTIVES: Previous studies have shown that pingyangmycin (PYM; bleomycin A5) can induce two distinct modes of cell death (necrosis, apoptosis). At high concentrations, PYM can be considered as an apoptosis mimetic drug. In this study, we explored the possibility that the membrane-modifying agent verapamil might affect the transport function of PYM through the plasma membrane, resulting in inducing apoptosis of tumor cells at low concentration of PYM. METHODS: Cytotoxicity, flow cytometry and DNA fragmentation assays were used to detect the interaction of verapamil and PYM in human oral carcinoma cell line KB cells. RESULTS: Our results indicated that verapamil can enhance the cytotoxicity of PYM against KB cells with the non-toxic doses (P<0.05). The cell viability at a concentration of 500 microg ml-1 of PYM was 35+/-2% compared with control and 10 microg ml-1 verapamil decreased the cell viability lower to 28+/-1%. In addition, because of the synergistic effect of verapamil, KB cells apoptosis was found to be induced when treated with a lower concentration of PYM (50 microg ml-1) for 24 h by flow cytometry and DNA fragmentation assays. CONCLUSIONS: Verapamil was found to enhance PYM-induced cytotoxicity and apoptosis in KB cells. The responsiveness of PYM might be explained by the effective accumulation of PYM by verapamil in KB cells mediated by the inhibition of PYM efflux function of the cells.     

吸烟个体血清在具核梭杆菌侵入 KB 细胞及分泌 MMP-1中的作用

目的：探讨慢性牙周炎患者中吸烟个体血清在具核梭杆菌（Fn）侵入 KB 细胞及在侵入过程中对 KB 细胞分泌基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的作用。方法：提取慢性牙周炎吸烟个体10例（Y 组）、慢性牙周炎非吸烟个体10例（N 组）、牙周健康非吸烟个体5例（H 组）的血清。分别将各组血清200、400、800μl 添加至 Fn 感染 KB 细胞模型,作用24 h 后计数细菌菌落。用人酶联免疫吸附测定试剂盒检测各组上清液中 MMP-1的浓度。用单因素方差分析进行数据分析。结果：3组800μl血清引起 Fn 侵入 KB 细胞的侵入率（％）分别为12．59±1．27、8．03±0．075和7．99±0．14（P ＜0．05）,KB 细胞分泌 MMP-1的浓度（μg/L）分别为400．04±21．02、252．57±18．89、262．47±35．29（P ＜0．05）。200μl 和400μl 血清组与 N 组、H 组比较, Fn 侵入率及 KB 细胞 MMP-1分泌量无统计学差异（P ＞0．05）。结论：较高剂量吸烟个体血清有利于 Fn 侵入 KB 细胞并促进KB 细胞分泌 MMP-1。     

Kinetics of KB and HEp-2 cell responses to an invasive,cytolethal distending toxin-producing strain of Actinobacillus actinomycetemcomitans

The periodontal pathogen Actinobacillus actinomycetemcomitans produces cytolethal distending toxin (CDT), a complex multicomponent toxin that arrests the growth of many types of eukaryotic cell. The kinetics of the effects of CDT-containing extracts, from an invasive strain of this bacterium, were examined on epithelial-like cells routinely used in invasion studies. Both KB and HEp-2 cells were exquisitely sensitive to the effects of the CDT with TD50 of 30 and 300 pg of total bacterial protein, respectively. Initial cell morphology changes were relatively rapid, occurring within the first 13 h of exposure. CDT-treated KB cells increased in size to 4-5 times the size of untreated controls. Cytotoxicity was irreversible when attached cells were incubated, for a minimum of 120 min, with nanogram quantities of CDT-containing extract. As cultures aged, the cells became more resistant to the effects of the CDT-containing extracts. These findings have important implications for understanding the ability of A. actinomycetemcomitans to invade and multiply in epithelial cells.     

NS-398对Tca8113细胞体外增殖的抑制作用

目的:探讨环氧合酶-2抑制剂NS-398对Tca8113细胞的生长抑制作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法,观察NS-398对Tca8113细胞生长的抑制作用,检测NS-398与Tca8113细胞间的时-效关系和量-效关系;通过流式细胞仪(FCM)研究NS-398对Tca8113细胞周期的影响和作用,采用SAS8.1统计软件包进行数据处理,均数比较采用t检验和重复测量方差分析。结果:含0、25、50、75、100、125、150、200μmol/LNS-398的Tca8113细胞培养液,在分别培养48、72、96、120h后,随着作用时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用也增强。NS-398在浓度150μmol/L作用96h后,抑制作用明显(药物浓度:P<0.05;时间:P<0.001),NS-398可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的大量增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,阻滞细胞生长于G0/G1期(P<0.001)。结论:NS-398可抑制Tca8113细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;这种作用可能与阻止细胞周期进展有关,NS-398可能在口腔鳞癌治疗中发挥重要作用。