正常骨髓基质细胞促进残留耐药Jurkat细胞凋亡的研究

目的探讨正常骨髓基质细胞对残留耐药Jurkat细胞凋亡的促进作用及其可能机制。方法体外分离培养急性淋巴细胞白血病患者和健康供者骨髓基质细胞(BMSCs),分别模拟白血病和正常骨髓造血微环境,并与获得柔红霉素(DNR)耐药的Jurkat细胞(Jurkat/DNR细胞)共培养。绘制悬浮培养和与BMSCs共培养4d的Jurkat/DNR细胞的增殖曲线,并检测悬浮培养及共培养14、1、0d的Jurkat/DNR细胞的caspase3/7活性和bcl-2、bax、DAPK1 mRNA表达情况。结果与骨髓基质细胞共培养比较,悬浮培养的Jurkat/DNR细胞生长受到明显抑制。共培养41、0d后,Jurkat/DNR细胞caspase3/7活性升高,且共培养10d的活性高于共培养4d(P<0.05)。共培养4、10d后,Jurkat/DNR细胞bcl-2表达增加,共培养14、1、0d后,死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)表达增加(P<0.05)。而bax表达在各时间点间差异无统计学意义(P>0.05)。结论正常骨髓基质细胞能促进Jurkat/DNR凋亡,其机制可能与过表达的DAPK1诱导Jurkat/DNR细胞凋亡和bcl-2转录下调c、aspase3/7活性升高有关。     

靶向表皮生长因子受体抑制剂耐药机制的研究进展

异常表达的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)引起的细胞信号通路持续活化在维持细胞恶件表型和肿瘤进展中占有重要地位,为靶向EGFR抑制剂治疗肿瘤提供了依据.     

骨髓基质细胞及其辐射残留损伤

骨髓微环境特别是基质细胞对骨髓的造血起着重要的调控和支持作用。基质细胞与细胞外基质协同作用,并通过分泌众多细胞因子和表达多种粘附因子形成了一个调控造血细胞增殖和分化的网络体系。基质细胞以其较大的辐射抗性对造血系统辐射残留损伤的恢复发挥重要的作用。     

大剂量甲孕酮治疗晚期耐药乳腺癌的效果评价

1 临床资料 25例晚期乳腺癌患者,年龄48(35～70)岁.转移部位:骨转移17例,肺转移8例,胸壁软组织7例,胸腔积液5例,肝转移5例,骨髓转移3例,脑转移2例.     

热疗联合柔红霉素对CD34+CD38-白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察热疗联合柔红霉素(DNR)对CD34+ CD38-急性髓白血病KG1a细胞增殖的抑制作用和对其凋亡的影响.方法 免疫磁珠分离KG1a细胞中的CD34+ CD38- 细胞,以DNR作用48h后抑制50%CD34+ CD38- 细胞生长的药物浓度(IC50)作为后续实验的工作浓度.将CD34+CD38- 细胞分为对照组、热疗组(40℃、42℃)、化疗组和热化疗组(40℃、42℃).热疗、热化疗组在恒温水浴箱(40℃或42℃)hu加热60min,化疗组、热化疗组以IC50浓度的DNR处理48h.MTT法检测DNR对CD34+CD38- KG1a细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及42℃条件下细胞内DNR平均荧光强度的变化;甲基纤维素培养体系分析42℃条件下细胞的克隆形成能力.结果 KG1a细胞中分离出的CD34+CD38- 细胞纯度达95%以上,DNR的IC50为0.40μg/ml.热疗组、化疗组、热化疗组CD34+CD38-细胞增殖均明显受抑,且抑制作用随温度升高而增强(P<0.05).热疗组、化疗组及热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著增加,且随温度升高凋亡率增加(P<0.05),热化疗组较化疗组及相同温度热疗组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05).42℃热化疗组细胞内的DNR荧光强度(6.74±0.58)明显高于对照组(0.26±0.05)及化疗组(2.08±0.14,P<0.05).42℃热疗组、化疗组、42℃热化疗组细胞的集落形成率明显低于对照组,且42℃热化疗组明显低于42℃热疗组和化疗组(P<0.05).结论 热疗能增强DNR抑制CD34+ CD38- KG1a细胞增殖的作用,使细胞凋亡增多.     

L1210／DDP细胞交叉耐药性及耐药机制的初步研究

目的观察小鼠淋巴细胞白血病顺铂耐药细胞亚系（L1210／DDP）与其它抗癌药物的交叉耐药性及对耐药机制进行初步研究。方法用拒染法测定细胞对不同抗癌药物的敏感性，用无火焰原子吸收光谱仪、谷胱甘肽还原酶循环法和微孔滤膜碱洗脱技术分别测定细胞内铂离子浓度、总谷胱甘肽含量、谷胱甘肽s-转移酶活性以及细胞DNA链间交联效应。结果L1210／DDP对卡铂有明显的交叉耐药性，对丝裂霉素、噻替派具有部分交叉耐药性，对阿霉素和5-氟尿嘧啶等无交叉耐药性。L1210／DDP细胞内的铂离子浓度和DNA链间交联指数明显低于L1210细胞，总谷胱甘肽含量、谷胱甘肽s-转移酶活性明显高于L1210细胞。结论L1210／DDP细胞亚系对DDP的结构类似物卡铂具有明显的交叉耐药性，其耐药机制与降低细胞内铂离子浓度、升高总谷胱甘肽含量和谷胱甘肽s-转移酶活性、降低DNA链间交联效应有关。     

乳腺癌细胞雌激素受体非配体依赖性激活对来曲唑耐药的机制研究

目的 研究雌激素受体(ER)转录调节变化在乳腺癌细胞对来曲唑耐药中的作用及其机制.方法 以来曲唑耐药细胞(MCF-7-LR-1、MCF-7-LR-2)和对照细胞(MCF-7-Aro、MCF-7-T)为研究对象.通过Western blotting检测ER和磷酸化ER[pER(Ser118)]在两组细胞中的表达水平.通过染色质免疫共沉淀(ChIP)方法检测雌二醇(E2)处理前后细胞中ER与X盒结合蛋白1(XBP-1)增强子和三叶因子1(TFF-1)启动子区的结合情况.通过Real-time qRT-PCR比较XBP-1和TFF-1mRNA的表达,以及雌激素反应性基因CA2、GJA1、PGR、CTSD mRNA的表达.结果 与对照细胞相比,来曲唑耐药细胞中pER(Ser118)水平显著增加,但ER表达水平并无明显变化.ChIp结果表明,与对照细胞相比,MCF-7-LR-2细胞中ER在非配体激活条件下(未加E2处理)及配体激活条件下(10nmol/L E2处理45min)与XBP-1增强子区及TFF-1启动子区的结合均显著增加.qRT-PCR结果表明,与未经E2处理的MCF-7-Aro细胞相比,耐药细胞中XBP-1和TFF-1表达均显著增加;与MCF-7-T细胞相比,耐药细胞中CA2和GJA1表达增高,PGR和CTSD的表达降低.结论 在来曲唑耐药的乳腺癌细胞中,ER以配体非依赖方式激活,pER(Ser118)水平增加,从而促进相关靶基因的转录,该机制在乳腺癌细胞对来曲唑耐药的过程中发挥重要作用.     

应用基因芯片技术筛选曲古菌素A诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP差异表达的凋亡基因

目的 应用基因芯片技术筛选曲古菌素A(TSA)处理顺铂耐药肺癌细胞株A549/CDDP后的凋亡相关基因的表达变化,筛选TSA治疗顺铂耐药肺癌的靶分子.方法 TSA处理A549/CDDP细胞24h,以未经TSA处理的A549/CDDP细胞作为对照组,提取两组细胞总RNA并反转录为cDNA,采用NimbleGen全基因组表达芯片检测基因表达情况,以NimbleScan 2.5软件结合GO分析比较TSA处理组与对照组基因表达谱的变化,从差异表达基因中筛选出与凋亡和增殖相关的基因.结果 与对照组相比,共筛选到TSA上调的凋亡相关基因85个以及下调的细胞增殖和生长相关基因43个.GO分析发现,这些基因的分子功能主要是调节细胞凋亡和细胞对化学刺激的抵抗作用,以及参与细胞生长、增殖、细胞生物质量维持等生物过程.TSA不仅激活了线粒体凋亡通路,而且激活了死亡受体相关凋亡通路,下调了与细胞耐药相关的基因BAG3和ABCC2.结论 TSA改变了A549/CDDP细胞中凋亡和增殖基因的表达,这些基因可能在TSA治疗顺铂耐药肺癌中发挥了重要作用.     

白血病骨髓基质细胞黏附介导HL-60细胞耐药的实验研究

目的探索白血病骨髓基质细胞黏附对HL-60细胞的耐药效应及可能机制。方法分离、培养骨髓基质细胞,然后与HL-60细胞共培养,分为白血病基质组、正常骨髓基质组和HL-60细胞悬浮培养组,分别加入基质细胞条件培养液或用血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)抗体或纤维连接素(Fn)抗体预处理骨髓基质层,去甲氧基柔红霉素(IDA)作用24 h,MTT法检测HL-60细胞活力,流式细胞仪检测HL-60细胞周期。结果白血病骨髓基质组、正常骨髓基质组HL-60细胞活力明显高于悬浮培养组,白血病骨髓基质组高于正常骨髓基质组;与骨髓基质细胞共培养后,HL-60细胞G0/G1期比例增高,白血病骨髓基质组与正常骨髓基质组间无显著性差异;VCAM-1、Fn单抗处理骨髓基质层后,HL-60细胞活力下降,而基质细胞条件培养液却无影响。结论白血病骨髓基质细胞黏附能促进HL-60细胞耐药,直接的细胞接触可能是其启动条件,部分通过诱导HL-60细胞出现G0/G1期阻滞。     

血卟啉单甲醚-PDT对骨髓基质细胞及K562白血病细胞杀伤效应的初步研究

目的:对比研究血卟啉单甲醚(HMME)-PDT对骨髓基质细胞及白血病K562细胞的杀伤效应。材料与方法:实验选用白血病K562细胞株及原代培养骨髓基质细胞,光敏剂为血卟啉单甲醚(HMME),KTP激光(532nm)作为照射光源,MTT法检测细胞杀伤效应。结果:在照光剂量为10J/cm2、HMME浓度为10μg/m     

RNA干扰对HT29细胞PIDD蛋白表达及细胞耐药性影响的研究

目的观察氟尿嘧啶（5-FU）刺激后PIDD蛋白在结肠癌HT29细胞中分布的改变,以及小干扰RNA（siRNA）干扰PIDD蛋白前后,HT29细胞耐药性的变化。方法用siRNA干扰HT29细胞内PIDD蛋白的表达,用5-FU刺激HT-29细胞。West-ern blotting法检测干扰前后细胞PIDD的表达,并比较5-FU刺激后干扰与未干扰HT-29细胞内PIDD在细胞中分布的变化。MTT比色法检测siRNA干扰前后细胞对5-FU的敏感性,并计算各组细胞的IC50值。结果未受5-FU刺激前,PIDD蛋白主要分布于细胞质中;受5-FU刺激后,PIDD蛋白迁移至细胞核。siRNA干扰后细胞中PIDD表达总量有所下降,胞质及胞核中的表达均降低,受5-FU刺激后PIDD的表达也未见升高,迁移至胞核的PIDD也未增加。MTT检测证明5-FU对转染组（PIDD-360转染12h后的HT29细胞）的IC50值为0.23&#177;0.06μg/ml,与正常组（未作处理的HT29细胞,IC50为2.71&#177;0.70μg/ml）和对照组（阴性对照试剂转染12h后的HT29细胞,IC50为2.78&#177;1.03μg/ml）比较显著降低（P〈0.05）。结论经siRNA干扰PIDD蛋白后,HT29细胞的耐药性明显下降,推测其机制与胞核中PIDD降低导致的NF-κB活性降低,细胞凋亡增多有关。     

肺癌耐药分子机制研究进展

肺癌化疗疗效差异与肿瘤的耐药密切相关,目前研究认为多种基因及分子通路参与调控肺癌细胞对化疗药物的耐药性。对肺癌耐药分子标志物的研究可预测药物治疗敏感性,对肺癌耐药的反转研究有重要意义。     

化疗栓塞后肝细胞癌细胞凋亡和耐药基因表达的改变

目的：研究肝细胞癌患者经动脉化疗栓塞（ＴＡＣＥ）治疗后肿瘤的细胞凋亡与耐药基因表达的情况及两者的关系。方法：经病理证实的肝细胞癌９８例,单纯手术５７例,４种介入治疗后Ⅱ期手术切除４１例,用流式细胞集资检测细胞凋亡,用链霉亲合素－生物素酶复合免疫组化检测各标本中Ｐｇｐ。结果：肿瘤细胞凋亡率和Ｐｇｐ阳性百分数在单纯手术组和介入Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ各组分别为１．７７％、６．１％、８．７％、１３．３％、１５．７     

基层医院革兰阴性杆菌1309株的耐药性变迁

目的：分析革兰阴性杆菌的耐药变迁,避免临床抗生素的滥用。方法：回顾分析临床分离的1 309株革兰阴性杆菌的分布及耐药性变迁。结果：革兰阴性杆菌主要来源于伤口分泌物、中段尿液和呼吸道的痰液,以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌为主,细菌对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星耐药率低,对氨苄青霉素、哌拉西林和一、二代头孢菌素类耐药率高,细菌耐药率呈逐年上升趋势。结论：革兰阴性杆菌对常用抗生素的耐药性呈上升趋势,医院应加强对其耐药性的监测,减少耐药菌株的产生。     

黄芩苷对血液肿瘤的作用机制及逆转耐药的研究进展

近年来,血液系统肿瘤尤其白血病、淋巴瘤的发病率逐渐上升,且经过传统的化疗或放疗后不少患者出现原发病的复发、难治,临床治疗上极具挑战,因此拓展治疗领域、探索新的治疗药物非常有必要。目前不少研究显示天然中药在肿瘤的治疗方面有其独特优势,抗肿瘤谱广,本文就黄芩苷在血液肿瘤的作用机制和逆转耐药的功能及分子机制研究进展做一综述。     

应用基因表达谱芯片技术研究膦甲酸钠处Jurkat细胞后的差异表达基因

目的 筛选膦甲酸钠处理人T淋巴细胞系Jurkat细胞后的差异表达基因。方法 应用基因表达谱芯片技术对膦甲酸钠处理的Jurkat细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行检测。结果 Jurkat细胞经膦甲酸钠处理后,所检测的1152条目的基因中,有94条产生差异表达,其中38条基因表达增强,56条基因表达降低。结论 应用基因表达谱芯片成功筛选了膦甲酸钠处理淋巴细胞后差异表达基因,为进一步阐明膦甲酸钠的免疫调节机制及深人了解膦甲酸钠用于治疗病毒性肝炎的药理作用机制提供依据。     

环孢素A体内外逆转白血病细胞耐药性的观察

目的：进一步了解环孢素Ａ（ＣＳＡ）体内外逆转白血病细胞耐药性的机理，阐明其量效关系。方法：采用高压液相法测定白血病患者体内ＣＳＡ的血药浓度，并同时在体外采用溴化四氮唑蓝（ＭＴＴ）法比较ＣＳＡ的逆转作用。结果：在一定剂量范围内，ＣＳＡ的逆转作用与其浓度成正相关，但ＣＳＡ大于１ｍｇ／Ｌ时，本身对白血病细胞具有一定的杀伤作用。结论：提示我们在临床应用中，应在患者能耐受的情况下，尽可能地加大ＣＳＡ的用量，     

丁香醛连氮测定饮水中余氯的机理探讨

丁香醛连氮是测定饮水中余氯的新试剂，但其反应产物的稳定性差，重现性不好，因而限制其推广应用。通过可见光光度分析，紫外分光光度分析，红外光谱分析及核磁共振波谱分析，基本搞清了丁香醛连氮与余氯的反应机理和过程，反应产物不稳定是由于产物与反应物之间的相互转化。随着时间的推移，反应产物大部又转化为反应物－丁香醛连氮。从而为提高反应产物的稳定性，增加方法的实用性，提供了依据。     

人淋巴瘤Raji/DEX耐药细胞株的建立及其耐药机制

目的建立人淋巴瘤耐药细胞株Raji/地塞米松(DEX)并对其耐药机制进行探讨。方法分别采用噻唑蓝还原法(MTT)确定Raji细胞的半数抑制浓度(IC50)值,DEX浓度递增和持续作用的方法体外诱导Raji细胞的耐药性并检测其耐药指数,Western blot法检测人核转录因子p65(NF-κBp65)蛋白。结果历时3个月后建成的细胞株Raji/DEX增殖速度减慢,体积变小,且对DEX低度耐药,耐药指数为1.7(P<0.05);Raji/DEX的NF-κBp65蛋白表达显著高于Raji亲本细胞(P<0.05)。结论成功建立Raji/DEX耐药细胞株。NF-κBp65蛋白表达增强可能是淋巴瘤细胞产生获得性耐药的主要机制之一。