应用实时定量逆转录聚合酶链反应方法检测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα基因转录本的临床意义

急性早幼粒细胞白血病（APL）特征性染色体改变形成了t（15；17），涉及PML—RARα融合基因。由于全反式维甲酸、砷剂的使用，目前APL患者的生存期大大延长，但是缓解期的患者仍存在复发的危险性。我们利用实时定量RT—PCR方法检测了56例APL患者PML—RARα融合基因转录本的表达，以便动态观察这些患者的治疗效果，提高治愈率。现将结果报告如下。     

巢式RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的意义

目的 探讨巢式RT-PCR技术在检测急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARα融合基因的价值。 方法 采用巢式RT-PCR检测218例初诊为APL患者的PML/RARα融合基因的表达水平及在部分患者的动态变化;随机选择39例APL完全缓解(CR)的患者,分别用流式细胞术(FCM)和巢式RT-PCR监测外周血或骨髓中的微小残留病(MRD)白血病细胞。 结果 在确诊的167例APL患者中PML/RARα融合基因阳性率为90.4%(151/167);39例APL-CR患者中PML/RARα融合基因阳性率76.9%(30/39);FCM和巢式RT-PCR监测APL-CR患者MRD有很好的一致性(P＞0.05)。 结论 巢式RT-PCR对APL的诊断有高灵敏度和高特异性;对APL的疗效及预后判断有重要临床意义。     

伴PML隐匿断裂点t(15;17)(q22;q21)阴性急性早幼粒细胞白血病一例报告并文献复习

大多数急性早幼粒细胞白血病(APL)患者携带t(15;17)(q22;q12),从而导致早幼粒细胞白血病基因(PML)与RARα的融合[1,2,3,4]。PML-RARα融合基因既是分子病因又是治疗靶点。近年来,RARα基因新的伙伴基因不断被发现[5,6,7],PML-RARα除了经典型的L型、S型和V型外,其新的变异体也偶有报道[8]。最近,我们发现了一种罕见的PML-RARα融合基因变异体,由PML外显子4和RARα外显子3断裂拼接形成PML-RARα。患者对全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷治疗无效,现报告如下并对相关文献进行复习。     

急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARα融合基因首次转阴时间及其临床意义探讨

目的:为了观察和分析急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)PML/RARα融合基因首次转阴时间和首次转阴时间长短的临床意义。方法:选取我院初诊APL患者60例,按照APL临床路径行诱导缓解及缓解后巩固治疗和维持治疗;应用多重巢式PCR动态监测APL患者PML/RARα融合基因的表达水平变化,计算首次转阴时间,随访观察并评价首次转阴时间的临床意义。结果:除3例死亡和1例失访外,其余56例初诊APL患者经正规治疗后,其PML/RARα融合基因均在24至381 d之间首次转阴,平均首次转阴时间为(131±90)d。首次转阴时间在PML/RARα融合基因不同亚型之间存在差异,L型转阴时间较S型的短(P=0.032),而不同年龄、性别、危险度分层组别之间差异均无统计学意义。首次转阴后的56例患者分别随访25 d至1979 d,中位随访时间为946 d,其中1例133 d首次转阴患者维持3个月后转阳并且随后出现临床复发,其余55例患者均长期保持分子水平缓解。结论:初诊APL患者PML/RARα融合基因平均约在正规治疗后4个月首次转阴;不同基因亚型之间首次转阴时间存在差异。PML/RARα融合基因首次转阴时间可客观反映APL患者治疗后白血病细胞的消减水平,对临床治疗有提示作用,但不能作为判断预后的绝对依据;以PML/RARα融合基因动态监测微小残留病灶对分析APL复发具有重要的临床意义。     

急性早幼粒细胞白血病FLT3基因内部串联重复突变研究

目的 分析急性早幼粒细胞白血病（APL）患者骨髓细胞FLT3基因内部串联重复（ITD）突变情况。方法 采用PCR方法分析103例初发APL患者骨髓单个核细胞FLT3基因的ITD突变，分析ITD阳性患者的临床特征。结果 103例初发APL患者FLT3-ITD突变20例（19．4％）。FLT3-ITD阳性与PML-RARα融合基因短型和变异型异构体密切相关，FLT3-ITD阳性患者中PML—RARα融合基因短型16例，变异型2例，长型2例（P〈0．0001）。FLT3-ITD阳性患者外周血WBC高于FLT3-ITD阴性患者（P〈0．01），其中PML—RAR仅短型和（或）变异型伴FLT3-ITD阳性患者WBC明显高于FLT3-ITD阴性患者（P=0．015）。而PML-RARα长型伴FLT3-ITD阴性患者与阳性患者WBC比较，差异无统计学意义。FLT3-ITD阳性APL患者的诱导缓解率为90％，随访16例（2例失访），中位随访时间26（11～47）个月，均处于第1次完全缓解。结论 FLT3-ITD是APL患者常见的基因突变，其发生与PML—RARα短型和变异型相关。伴FLT3-ITD阳性PML—RARα短型和变异型与发病时WBC增高具有相关性，而对近期疗效无明显影响。     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测的临床意义

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测PML/RARα融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断中的应用价值。方法应用常规细胞遗传学分析28例APL患者的染色体核型,同时用FISH法检测PML/RARα融合基因。结果 28例初诊的APL患者254例常规核型分析检出t(15;17)(q22;q12);2例患者核型正常;另1例未检出t(15;17),核型分析结果为涉及15和17号染色体的复杂异常;FISH检测所有病例均存在PML/RARα融合基因。结论 FISH法行PML/RARα融合基因检测特异性和敏感性好,是诊断APL的可靠方法。     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测及临床意义

急性早幼粒细胞性白血病(APL)是一组累及 17号染色体上的维甲酸受体α基因,其中t(15;17)(q22;q21)易位后形成的早幼粒细胞性白血病(PML)/维甲酸受体α(RARα)融合基因在APL中的重视率最高,占90%以上[1].本研究以34例形态学诊断为APL患者和2例疑似APL患者为对象,采用筑巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者PML/RARα融合基因,并追踪观察部分患者PML/RARα融合基因的动态变化,探讨其在诊断、疗效评估及预测预后中的意义.     

急性早幼粒细胞白血病患儿PML／RARα融合基因罕见型2例

目前认为急性早幼粒细胞白血病（APL ）属于急性髓细胞白血病（AML ）的特殊类型［1］,由于 APL 细胞存在 t （15;17）（q22;q21）,该易位使第15号染色体长臂2区2带的早幼粒细胞白血病基因（PML）和第17号染色体长臂2区1带的维甲酸受体‐α（RARα）基因形成 PML ／RARα融合基因,该基因在产生过程中因断裂点不同及 mRNA 的剪切、拼接不同会产生不同的异构体并在 APL 发病中起到重要作用［2］。本院收治2例APL 患儿出现新的 PML ／RARα融合基因变异体,现报道如下。     

急性早幼粒细胞白血病治疗的远期疗效观察

目的观察急性早幼粒细胞白血病（APL）治疗的远期疗效。方法对初诊APL患者用全反式维甲酸（ATRA）诱导缓解治疗，完全缓解（CR）后给予3～4个疗程巩固联合化疗，达分子生物学缓解后用ATRA和巯嘌呤（6-MP）＋甲氨蝶呤（MTX）交替维持治疗2年，在完成巩固治疗后及随后的4～5年用筑巢式RT—PCR检测PML—RARα融合基因定期监测微量残留病。结果共81例APL患者，75例（92．6％）达到CR，早期死亡（ED）率6．6％，ED患者确诊时外周血白细胞计数及早幼粒细胞比例明显高于CR者（P〈0．05）。65例（80．2％）患者接受了诱导缓解后巩固化疗，60例（92．3％）患者在3个疗程化疗后PML—RARα融合基因转阴，3例（4．6％）患者第4疗程结束后PML—RARα融合基因转阴。中位随访21．2（8．0～64．0）个月，血液学复发6例，复发率9．2％。Kaplan—Meier分析5年总生存（OS）率（86．6±4．6）％。65例接受了诱导缓解后巩固化疗的患者，5年无复发生存（RFS）率为82．7％。COX回归分析表明白细胞增高（〉10×10^9／L）为影响患者OS的惟一不利因素。结论经系统治疗80％以上的APL可望获得长期无复发生存。     

RNA干扰技术应用于急性早幼粒细胞白血病治疗的实验研究进展

急性早幼粒细胞白血病（APL）是常见的血液系统肿瘤.几乎所有APL患者均伴有特异性的染色体t（15;17）（q22;q21）易位,并形成特征性的早幼粒细胞白血病/维甲酸受体α（PML/RARα）融合基因.RNA干扰（RNAi）技术具有转录后基因沉默效应,可特异性地抑制癌基因、癌相关基因或突变基因的过度表达,因此在疾病的基因治疗方面得到广泛关注.目前,RNAi技术治疗APL可选择的靶点主要有①PML/RARα融合基因;②APL细胞与正常细胞之间的差异基因;③涉及APL髓外复发、出血及其并发症的基因.现就近年来RNAi技术应用于APL治疗的实验研究进展作一综述.     

一步法RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因

目的：建立一步法RT—PCR检测APL患者PML—RARα融合基因的实验方法。方法：用特异引物一步法RT—PCR检测PML—RARα融合基因,并作灵敏度试验。结果：本方法的灵敏度可达到1：10^3水平。对25例APL患者检测PML—RARα融合基因,阳性率为100％,并可检测出PML—RARα融合基因各种融合方式。结论：一步法RT—PCR检测PML—RARα融合基因有很好的灵敏度和特异性,操作简便、快速,特别适用于临床检测。     

急性早幼粒细胞白血病PML维甲酸受体α融合基因定量检测的应用价值

目的探讨早幼粒细胞白血病PML维甲酸受体α融合基因(PML-RARα)定量检测在急性早幼粒细胞白血病诊断、治疗中的临床应用价值。方法采用实时定量聚合酶链反应对12例急性早幼粒细胞白血病患者初诊、治疗后完全缓解及复发时PML-RARα进行定量检测,分析不同阶段其变化程度,并与同阶段细胞形态学、染色体分析进行比较。结果 12例急性早幼粒细胞白血病患者初发时PML-RARα均为阳性,完全缓解阶段转为阴性或定量结果呈逐渐下降趋势,当复发时PML-RARα再次并早于细胞形态学和染色体分析出现阳性,且定量结果明显高于初发阶段。结论 PML-RARα定量检测可为急性早幼粒细胞白血病诊断、治疗及提示复发提供可靠的依据。     

急性早幼粒细胞白血病的分子生物学研究进展

非随机染色体异常在人类白血病的发生中起着重要作用。九十年代以来,用分子生物学方法已发现急性早幼粒细胞白血病(APL)中的特征性染色体易位t(15;17)导致17号染色体上的维甲酸受体α(RARα)基因和15号染色体上的早幼粒细胞白血病(PML)基因发生融合,形成PML-RARα基因,该基因可能在APL 的发生机制中起着重要作用,也可能与维甲酸对APL 的特异治疗作用有关。     

骨髓细胞形态学诊断早期急性早幼粒粒细胞白血病1例并文献复习

<正>急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性粒细胞白血病的一种亚型,其特征是15号染色体上的早幼粒细胞白血病基因(PML)与17号染色体上的维甲酸受体α基因(RARα)发生易位。该融合基因的转录导致PML/RARα融合蛋白通过与RAR元素的相互作用阻断参与骨髓细胞分化的关键基因的表达。PML/RARα融合蛋白抑制PML和RARα的正常功能,抑制细胞凋亡^[1]。临床上APL发病常较为凶险,早期弥散性血管内凝血(DIC)死亡率高,     

鲍氏威酸诱导急性早幼粒白血病细胞分化与PML/RARα关系的研究

目的：研究鲍氏威酸（BC4）诱导不同融合基因PML／RARα基因型的急性早幼粒白血病（APL）细胞分化的能力及对APL细胞分化相关基因c-myc的表达影响，探讨鲍氏威酸诱导分化作用的机制。方法：采用RT-PCR检测APL细胞PML／RARα的基因型；运用骨髓干、祖细胞集落培养技术分析各基因型APL细胞分别在生理盐水（NS）对照组，鲍氏威酸（BC4）组，全反式维甲酸（ATRA）组培养体系中增殖与分化能力，测定各组集落与丛的形成率，形态分化率，NBT还原率以及粒细胞吞噬率，培养前后各组APL细胞c-myc表达阳性率。结果：与NS对照比较，BC4和ATRA均使PML-RARα^＋组APL细胞丛形成率明显增高（P〈0.01），而集落形成率无明显变化（P〉0．05），3项细胞分化指标增高（0．01〈P〈0．05），c-myc表达阳性率降低（P〈0．05）；BC4对PML／RARα^＋（L型）诱导分化作用强于PML-RARα^＋（S型）APL，BC4对部分ATRA治疗后复发耐药病例有诱导分化能力。BC4及ATRA对PML／RARα^＋APL细胞的各项诱导分化指标无明显改变。结论：BC4对APL具有诱导分化作用，下调c-myc基因表达，其诱导分化能力与PML／RARα^-基因型有关，并能诱导部分ATRA耐药细胞分化     

伴有ETV6缺失、PML/RARα阴性的急性早幼粒细胞白血病一例报道

急性早幼粒细胞白血病（APL）是一种特殊的急性白血病亚型,95%以上的APL患者有典型的染色体易位t（15;17）,该文报道1例PML/RARα融合基因阴性但存在ETV6缺失的APL患者。患者成功治疗两年半后,再次出现白细胞及血小板异常,怀疑复发给予化学治疗无效,最终根据骨髓细胞学及骨髓活组织检查诊断该例发生了骨髓增生异常综合征（MDS）。该例提示ETV6缺失与患者先后发生APL、MDS可能有一定关系;APL成功治疗缓解后再次发病,是复发还是新发其他血液疾病,也应认真分析鉴别。     

Survivin基因在NB4细胞株细胞和急性早幼粒细胞白血病细胞表达及其抗凋亡作用与临床意义

为了检测survivin基因在APL细胞中的表达率并探讨其表达与临床的相关性，本研究采用RT-PCR方法检测PML／RARα和survivin mRNA表达。结果显示：NB4细胞经过ATRA处理后，survivin mRNA表达随着时间的延长而逐渐下降，在72小时几乎检测不到survivin mRNA表达。36例初发、复发APL患者骨髓单个核细胞均有PML／RARα融合基因表达，其中survivin mRNA阳性表达24例（占67％），阴性表达12例（占33％）；22例缓解期APL患者骨髓单个核细胞PML／RARα融合基因表达均为阴性，其中survivin mRNA阳性表达8例（占36％），阴性表达14例（占64％）；初发、复发组、PML／RARa基因长型阳性组与缓解组相比，survivin mRNA表达阳性率均明显增高（两者P值均〈0．05），而与急性白血病组相比survivin mRNA表达阳性率均明显减低（两者P值分别〈0．05，〈0．001）。36例初发、复发APL患者，无论survivin mRNA表达阳性或阴性，用ATRA治疗都能达到完全缓解；临床上并发DIC和严重感染的4例APL患者的survivin mRNA表达皆为阳性（其中1例死亡），而survivin mRNA表达阴性患者临床症状均较轻，只有轻微的皮肤粘膜出血、发热和乏力等症状。2例APL患者经用ATRA治疗后外周血象以及骨髓象诱导分化症象不明显者，其survivin mRNA表达均为阳性。结论：APL患者骨髓单个核细胞survivin基因阳性表达率较其它类型急性白血病明显减低，survivin基因表达与临床有一定的相关性。     

荧光聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα的临床价值

实时定量逆转录聚合酶链反应是目前最精确地检测急性白血病微小残留病的方法,对急性早幼粒细胞PML／RARα融合基因表达量的测定及动态变化监测,取得PML／RARα融合基因的表达拷贝数,对临床治疗、预防复发、延长患者生存期,最终治愈白血病具有重要的指导意义。     

急性早幼粒细胞白血病的诊疗现状和进展

急性早幼粒细胞白血病（APL）是急性髓系白血病（AML）中的一个特殊亚型,约占成人AML 的10％～15％。不同于其他肿瘤, APL的发病率并不随年龄的增长而增高,说明其发生受制于基因水平。 APL患者通常具有特殊的t（15,17）染色体易位,从而使15号染色体上的PML基因与17号染色体上的RARα基因形成融合基因。该融合基因的形成导致了白细胞成熟障碍分化阻滞,最终导致APL的发生。     

RARα—PLZF在t（11;17）（q23;q21）APL发病中的作用

绝大多数急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia,APL)病人具有非随机染色体t(15:17),该易位使15号染色体上的早幼粒细胞白血病（PML）基因与位于17号染色体上的维甲酸受体α（RARα）基因融合,表达PML－RARα融合蛋白,病人对全反式维甲酸（ATRA）治疗敏感。变异型t(11;17)(q23;q21)APL对ATRA不敏感,是一种独特的APL类型,患者产生的t(11:17)(q23;q21)使11号染色体上的早幼粒细胞白血病锌指（PLZF）基因与位于17号染色体上的RARα基因融合^[3],而且与经典APL不同的是,所有病人体内同时表达PLZF－RARα和RARα－PLZF二种融合蛋白,其独特的发病机制引起了广泛关注。通过对融合基因及其蛋白结构和功能的分析并借助转基因动物研究,现已基本明确RARα－PLZF融合蛋白在t(11;17)(q23;q21)APL发病中起重要作用,进一步阐明融合基因在血液系统恶性肿瘤发病中是不可空缺的。本文就这一领域的研究现状作一综述。