补肺益肾组分方联合针刺对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺小血管的影响

目的?观察补肺益肾组分方联合针刺不同治疗时期对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺小血管的影响。方法?将240只大鼠随机分为空白对照组（空白组）、模型组、补肺益肾组分方组（组分方组）、针刺组、补肺益肾组分方联合针刺组（联合组）和氨茶碱组，每组40只。1~12周采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型。13~20周组分方组、针刺组、联合组及氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方、针刺、补肺益肾组分方联合针刺和氨茶碱干预，空白组和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）灌胃，停止干预后继续观察至第28周，分别在第14、16、20、24和28周取材。观察不同治疗时期血管壁厚度占血管外径百分比（WT%）、管壁面积占血管总面积百分比（WA%）及管腔面积占血管总面积百分比（LA%）的变化，检测肺组织中血管内皮生长因子（VEGF）和内皮素-1（ET-1）表达，并采用R值综合评价法对各指标进行综合评价。结果?与空白组比较，模型组14~28周WT%、VEGF、ET-1均升高，16~28周WA%升高、LA%降低（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，氨茶碱组14、24、28周WT%降低，16~24周VEGF降低，16、28周ET-1降低，16、24、28周R综合降低；组分方组14~28周WT%降低，16、20周WA%降低、LA%升高，14~24周VEGF降低，16~28周ET-1降低，R综合第16、24、28周降低；针刺组14~28周WT%、R综合降低，20周WA%降低、LA%升高，14、20周VEGF降低，20、24周ET-1降低；联合组14~28周WT%、VEGF降低，16、20、28周WA%和ET-1降低、LA%升高，16~28周R综合降低（P<0.05，P<0.01）。与针刺组比较，组分方组16周VEGF、ET-1降低，28周R综合降低；联合组16周VEGF降低，ET-1、R综合24周升高，28周降低（P<0.05，P<0.01）。与氨茶碱组比较，组分方组14、20周VEGF降低，20、24周ET-1、R综合降低；针刺组16周VEGF、ET-1升高，14、20周VEGF降低，20、24周ET-1降低，20、28周R综合降低；联合组14、20周VEGF降低，20、24周ET-1、R综合降低（P<0.05，P<0.01）。综合所有时间点显示，与模型组比较，各治疗组R综合均降低（P<0.01）；与氨茶碱组比较，组分方、针刺及联合组R综合降低（P<0.05，P<0.01）。结论?补肺益肾组分方、针刺及其联合治疗可明显改善COPD肺组织肺血管重构，针刺起效早，组分方及其联合针刺作用时间长，以联合为优。     

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病大鼠右心室重构的影响和远后效应

目的评价调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠右心室重构的影响和远后效应。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,每组20只。除对照组外其余各组采用香烟暴露联合细菌感染法制作COPD模型8周,于第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱灌胃至第20周。于第20、32周分批取材,观察大鼠心肌组织超微结构,计算右心肥大指数(RVHI)和心肌组织细胞因子的表达。结果第20、32周时,各给药组及对照组大鼠RVHI均低于模型组(P<0.01);补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组大鼠RVHI较氨茶碱组显著降低(P<0.05或P<0.01)。第20、32周时,模型组大鼠肌节长度较对照组缩短(P<0.05),补肺健脾组较模型组增长(P<0.01)。第20、32周时,模型组大鼠心脏组织细胞因子表达高于其余各组(P<0.01);补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组大鼠内皮素-1(ET-1)表达较氨茶碱组明显降低(P<0.01)。结论调补肺肾三法可改善COPD右心室重构并有明显远后效应,其中以补肺健脾方和补肺益肾方尤为显著,其作用机制可能与调节细胞因子有关。     

健脾益肾化痰方通过VEGF/PI3K/AKT/FOXO1诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞自噬的实验研究北大核心CSCD

目的:观察健脾益肾化痰方含药血清对肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖、凋亡、自噬及SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白的影响,探讨健脾益肾化痰方通过上述蛋白诱导肺鳞癌细胞SK-MES-1自噬的可能作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、32.2 g/kg健脾益肾化痰方组,各组分别灌胃生理盐水或药物,连续7 d后收集血清;采用CCK-8法测定人肺鳞癌细胞株的存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3脂质体转染干预肺鳞癌细胞后自噬发生情况;Western Blot法检测对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞Beclin1蛋白和LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白表达的影响。结果:32.2 g/kg健脾益肾化痰方含药血清各浓度组均能够有效抑制肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖,其抑制率与药物浓度呈正相关;与正常对照组相比,32.2 g/kg健脾益肾化痰方16%含药血清组使SK-MES-1细胞凋亡率明显增高(P<0.05);8%、16%含药血清组自噬小体显著增多(P<0.05);16%含药血清组SK-MES-1细胞内自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ表达显著上调(P<0.01);FOXO1蛋白表达显著上调,VEGFR、PI3K、AKT蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:健脾益肾化痰方含药血清能够诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞发生自噬,其作用机制可能是通过调节VEGF/PI3K/AKT/FOXO1信号通路,上调SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3蛋白表达,促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ有关。     

补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠肺脏Jagged1/notch1通路的影响

目的:评价补肺益肾方联合舒肺贴对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期大鼠肺脏Jagged1/notch1通路的影响。方法:大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、舒肺贴组、补肺益肾组、补肺益肾联合舒肺贴组和氨茶碱组。采用熏烟和细菌感染制备COPD模型。分别于第0,8,20周观察肺功能,第20周检测肺jagged1、notch1mRNA和蛋白表达。结果:模型对照组大鼠肺潮气量(tidal volume,VT)、呼气峰流速(peak expiratory flow,PEF)及肺脏Jagged1、Notch1基因及蛋白表达降低(P0.01)。各治疗组VT、PEF、Jagged1、Notch1基因和蛋白较模型对照组升高,以联合组升高明显(P0.05)。结论:补肺益肾联合舒肺贴可调控肺组织Jagged1、Notch1基因及蛋白表达,参与细胞分化过程,作用优于单独使用补肺益肾方或舒肺贴。     

补肺健脾方联合茚达特罗格隆溴铵治疗老年慢性阻塞性肺疾病疗效研究

目的:探讨补肺健脾方联合茚达特罗格隆溴铵对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者疗效及对磷脂酰肌醇激酶3/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路和炎症因子的影响。方法:选择老年COPD稳定期患者122例,运用随机数字表法分为两组,各61例。对照组给予茚达特罗格隆溴铵治疗,观察组给予补肺健脾方联合茚达特罗格隆溴铵治疗,两组疗程均为8周。比较两组治疗疗效,治疗前后肺功能、COPD评估测试(CAT)问卷评分、6 min步行距离(6MWT)、血清PI3K、血清Akt水平、PI3K/Akt蛋白表达,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-8(IL-8)和白介素-15(IL-15)水平。结果:观察组治疗总有效率高于对照组。治疗后,两组FEV1、PEF、FEV1/FVC和6MWT高于治疗前,而CAT评分、血清PI3K、血清Akt水平、PI3K/Akt蛋白表达灰度值、TNF-α、IL-8、IL-15水平低于治疗前,差异有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,两组FEV1、PEF、FEV1/FVC和6MWT高于对照组,而CAT评分、血清PI3K、血清Akt水平、PI3K/Akt蛋白表达灰度值、TNF-α、IL-8、IL-15水平低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:补肺健脾方联合茚达特罗格隆溴铵对老年COPD稳定期患者疗效较好,患者肺功能明显改善,生活质量、运动耐力明显提高,且PI3K/Akt信号通路表达下调,细胞炎症反应降低。     

调补肺肾法对COPD大鼠JAK/STAT信号转导的影响及远后效应

目的:评价调补肺肾3种方法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾法)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠JAK/STAT信号转导的影响及远后效应.方法:大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,采用香烟暴露联合反复细菌感染法制备COPD大鼠模型.于第9周对照组、模型组给予生理盐水,其余组分别给予相应药物灌胃,于第20,32周分批取材,观察肺组织病理,p-JAK2,p-STAT1,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达及JAK2和SOCS3 mRNA表达.结果:第20,32周时,模型组JAK2 mRNA和p-JAK2,p-STAT1,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达较对照组升高(P＜0.01),3个中药(补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方)组及氨茶碱组较模型组显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).模型组SOCS3 mRNA较对照组升高(P＜0.01),3个中药组及氨茶碱组较模型组明显升高(P＜0.01),3个中药组明显高于氨茶碱组(P ＜0.05,P＜0.01).与第20周比较,第32周补肺健脾组JAK2mRNA和p-JAK2,p-STAT3,p-STAT5蛋白表达均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),补肺益肾组p-STAT3降低(P＜0.01),益气滋肾组p-STAT3,p-STAT5降低(P ＜0.05,P＜0.01),氨茶碱组上述指标均无显著性差异.结论:调补肺肾3法可明显减轻COPD肺组织损伤,且具有良好的远后效应,可能与调控JAK/STAT信号转导有关,其中补肺健脾方在降低p-JAK2,p-STAT3,p-STAT5表达方面,补肺益肾方在降低p-STAT3,益气滋肾方在降低p-STAT3,p-STAT5表达方面具有良好的远后效应.     

补肺益肾方联合运动改善慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌功能及对PKA-CREB通路的影响

目的观察补肺益肾方联合运动康复对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠骨骼肌结构和功能的影响，并从PKA-CREB通路方面初步探讨其机制。方法将72只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺益肾组、运动组、补肺益肾联合运动组（简称联合组）、氨茶碱组，每组12只。采用香烟暴露联合细菌感染方法制备COPD稳定期大鼠模型，空白组、模型组给予生理盐水灌胃，补肺益肾组给予补肺益肾方［11.61 g生药/（kg·d），每天2次］灌胃，运动组置实验跑台跑步（8 m/min，20 min/次，每天1次），联合组给予两者联合，氨茶碱组给予氨茶碱［54 mg/（kg·d），每天2次］灌胃。用BL420生物信号采集系统记录大鼠股四头肌肌肉收缩力；光镜下观察肺组织和股四头肌组织病理变化，电镜下观察股四头肌肌细胞超微结构变化；qPCR方法检测股四头肌PKA、CREB、FOXO1、Atrogin-1和MuRF1 mRNA表达；Western Blot法检测股四头肌中PKA、CREB、pCREB蛋白表达。结果与空白组比较，模型组大鼠肺组织大量炎症浸润，肺泡断裂融合，肺泡腔增大，股四头肌肌节肌丝排列紊乱，线粒体减少，骨骼肌收缩力降低（P<0.01），股四头肌中PKA、CREB mRNA和蛋白表达降低（P<0.01），FOXO1、Atrogin-1和MuRF1 mRNA表达升高（P<0.01）；与模型组比较，各干预组肺组织和股四头肌病理损伤不同程度减轻，联合组改善显著，各干预组肌肉收缩力升高（P<0.01），PKA mRNA表达升高，CREB mRNA表达除补肺益肾组外均升高（P<0.01），FOXO1、Atrogin-1、MuRF1 mRNA表达降低（P<0.01），各干预组PKA、CREB和pCREB蛋白表达升高（P<0.01）；与氨茶碱组比较，联合组肌肉收缩力及PKA mRNA表达升高（P<0.01），Atrogin-1 mRNA表达降低（P<0.01），补肺益肾组和运动组CREB mRNA降低、FOXO1 mRNA升高（P<0.01），补肺益肾组PKA、CREB和pCREB蛋白表达降低（P<0.01），运动组PKA蛋白表达降低（P<0.01）；联合组较补肺益肾和运动组PKA和CREB mRNA表达升高（P<0.01），FOXO1、Atrogin-1和MuRF1 mRNA表达降低（P<0.01），PKA蛋白表达升高（P<0.01），较补肺益肾组CREB，pCREB蛋白表达升高（P<0.01）。结论补肺益肾方、运动康复及其联合均可减轻肺组织和股四头肌病理损伤，缓解大鼠骨骼肌功能障碍，以联合尤为显著，其机制可能与调控PKA-CREB通路调节蛋白合成分解平衡有关。     

补肺益肾组分方Ⅲ联合针刺对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织胶原和蛋白酶的影响

目的 评价补肺益肾组分方Ⅲ、针刺及其联合在不同时间点对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织胶原和蛋白酶的影响。方法 将240只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氨茶碱组、补肺益肾组分方Ⅲ组(组分方组)、针刺组、补肺益肾组分方Ⅲ联合针刺组(联合组)。1～12周制备COPD大鼠模型，13～20周分别给予相应干预，停止干预后继续观察至28周结束。分别于14、16、20(即治疗2、4、8周)及24、28周(即停止干预4、8周)检测大鼠肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1含量及ColⅠ、ColⅢ蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠肺组织中MMP-2、MMP-9、ColⅠ和ColⅢ均升高，TIMP-1降低(P<0.01),并随疾病进程加重。与模型组比较，组分方组第16～24周ColⅠ和ColⅢ降低，16～28周TIMP-1升高，20～28周MMP-2降低(P<0.05,P<0.01);针刺组第16～24周ColⅠ和ColⅢ降低，16～20周TIMP-1升高，仅第20周MMP-2、MMP-9降低(P<0.05,P<0.01);联合组第16～28周ColⅢ降低、...     

舒尼替尼、保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病合并糖尿病小鼠肺血管重构的影响

目的探讨舒尼替尼、保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并糖尿病小鼠肺血管重构的影响及其是否通过调节低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)在肺组织的表达而发挥作用。方法将40只ob/ob小鼠随机分为4组:对照组、模型组、保肺定喘汤组和舒尼替尼组,每组10只。除对照组外,各组小鼠在自制熏烟箱内被动吸烟14周,并在第1、14天于气道内滴入脂多糖。造模结束后舒尼替尼组予苹果酸舒尼替尼胶囊30mg/(kg·d)灌胃,保肺定喘汤组予保肺定喘汤9.3g/(kg·d)灌胃,均干预2周。于第0、14、16周检测空腹血糖水平。肺组织HE染色,观察气道重构并测量小气道基底膜单位长度的管壁面积(WAt/Pbm),肺血管重构并测量管壁厚度与血管外径比(WT%)、管壁面积与血管总面积比(WA%);Masson染色观察支气管周胶原沉积并测量小气道基底膜单位长度的胶原面积(WAc/Pbm);CD31/α-SMA/DAPI免疫荧光染色观察肺血管平滑肌层变化。酶联免疫吸附测定法检测肺组织匀浆HIF-1α及VEGF含量。实时荧光定量PCR法检测肺组织HIF-1α、VEGF mRNA相对表达水平。结果与对照组比较,模型组第16周空腹血糖水平差异无统计学意义(P0.05),WAt/Pbm、WAc/Pbm、WT%及WA%均增大(P0.01),肺血管平滑肌层明显增厚,肺组织HIF-1α、VEGF蛋白表达和mRNA表达均增加(P0.01)。与模型组比较,舒尼替尼组第16周空腹血糖水平降低(P0.01),保肺定喘汤组差异无统计学意义(P0.05);保肺定喘汤组及舒尼替尼组WAt/Pbm、WAc/Pbm、WT%及WA%均减小(P0.01,P0.05),肺血管平滑肌层重构均有所减轻,肺组织HIF-1α、VEGF蛋白表达和mRNA表达均减少(P0.01,P0.05)。结论舒尼替尼、保肺定喘汤可通过下调肺组织HIF-1α、VEGF表达进而减轻COPD合并糖尿病小鼠肺血管重构。     

补肺益肾方对COPD大鼠气道黏液高分泌及肺组织Notch3，HES1的影响

目的:观察补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌及Notch信号通路相关蛋白Notch3,HES家族发状分裂相关增强子1(HES1)的影响,探讨其作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺益肾方组和氨茶碱组,每组12只。第1~12周,采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染方法制备COPD稳定期大鼠模型;第13~20周,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组给予相应药物灌胃(补肺益肾方组3.7 g·kg^-1·d-1,氨茶碱组54 mg·kg^-1·d-1)。第20周灌胃结束后取材,观察肺组织病理,检测大鼠肺功能,肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),黏蛋白5AC(MUC5AC)和肺组织Notch3,HES1,MUC5AC mRNA与蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠肺功能显著降低(P<0.05,P<0.01),平均肺泡数显著降低(P<0.01),肺泡平均截距显著升高(P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著升高(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,补肺益肾方组和APL组肺功能和肺病理损伤显著改善(P<0.05,P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著降低(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肺益肾方抑制COPD大鼠气道黏液高分泌,其机制与调控Notch3,HES1蛋白有关。     

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病稳定期模型大鼠肺胶原和蛋白酶调节作用的R值综合评价

目的采用R值综合评价法多指标综合评价调补肺肾三法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠肺胶原和蛋白酶的调节作用。方法采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型,于实验第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱灌胃治疗至第20周,于实验第20、32周检测大鼠肺胶原和蛋白酶的9个指标,包括Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)积分光密度(IOD)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)IOD、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)IOD,MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA。建立R值综合评价法,并以此对肺胶原和蛋白酶的调节作用进行综合评价。结果第20、32周及综合20、32周,调补肺肾三法和氨茶碱对肺胶原和蛋白酶综合9指标的纠正强度显著(P0.01)。第20、32周,综合纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱,且第32周补肺健脾、补肺益肾的纠正强度较氨茶碱显著,补肺益肾的纠正强度较本组第20周显著(P0.05)。综合20、32周,综合纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱,且补肺健脾和补肺益肾纠正强度较氨茶碱显著(P0.05或P0.05)。结论调补肺肾三法对COPD稳定期大鼠肺胶原和蛋白酶的综合调节作用显著,且具有较好的远后效应,以补肺健脾、补肺益肾效果更佳。     

调补肺肾三法治疗慢性阻塞性肺疾病大鼠疗效及远后效应

目的:评价调补肺肾(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)三法治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠的疗效和远后效应。方法:大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,采用香烟熏吸联合细菌感染法制作COPD稳定期模型,于第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱至第20周。于第20、32周分批取材,观察大鼠肺功能和肺组织形态学变化。结果:模型组潮气量(TV)、呼气峰流速(PEF)和50%潮气量呼气流量(EF50)较对照组显著降低(P0.01),病理损伤严重。第20、32周时,3个中药组上述指标均较模型组明显改善(P0.05,P0.01)。第20周时,3个中药可明显减轻肺组织病理损伤,表现在改善大鼠支气管壁增厚、支气管狭窄、肺泡破裂和融合、肺小动脉壁增厚(P0.05,P0.01),并在32周仍有显著疗效(P0.05,P0.01)。结论:调补肺肾三法治疗COPD稳定期大鼠具有良好的疗效和远后效应。     

益肾通淋方对良性前列腺增生大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的观察益肾通淋方对良性前列腺增生(BPH)大鼠前列腺PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响,探讨其作用机制。方法采用去势联合丙酸睾酮注射方法建立BPH模型,对照组行假手术。将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组和益肾通淋方高、低剂量组,每组12只。于去势第8日开始灌胃给药,每日1次,连续28d。末次给药后1h,大鼠麻醉取前列腺,计算前列腺指数,HE染色观察前列腺组织病理形态,Western blot和RT-PCR分别检测前列腺PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白和m RNA的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠前列腺明显增生,PI3K、Akt和m TOR磷酸化蛋白及m RNA表达均显著升高,PI3K/Akt/mTOR信号通路激活;益肾通淋方干预后,模型大鼠前列腺指数下降,腺体变少,腺腔扩张,前列腺增生明显缓解,同时PI3K、Akt和m TOR蛋白磷酸化水平降低,m RNA表达显著下调。结论益肾通淋方能有效改善BPH大鼠前列腺增生,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

补肺益肾组分方对PM2.5诱发慢性阻塞性肺疾病加重模型大鼠上皮-间质转化的影响

目的 观察PM2.5及补肺益肾组分方对慢性阻塞性肺疾（COPD）大鼠上皮-间质转化（EMT）的作用，并探讨其作用机制。方法 将50只健康SD大鼠随机分为：空白组、COPD组、大气颗粒物（PM2.5）组、补肺益肾组分方组（组分方组）和氨茶碱组，每组10只。除空白组外采用香烟熏吸联合反复克雷伯杆菌感染制备COPD大鼠模型，除空白组和COPD组外以大气实时浓缩PM2.5对其进行全身暴露。自暴露第1天起，组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方[6.48 mg/（kg·d）]或氨茶碱[54 mg/（kg·d）]灌胃，其余各组给予生理盐水，1次/天，持续8周。检测大鼠最大呼气中期流速（MMEF）和功能残气量（FRC）；免疫组化法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（COL Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（COL Ⅲ）表达；Western Blot检测肺组织E-钙黏附蛋白（E-cad）、N-钙黏附蛋白（N-cad）、α-SMA、COL Ⅰ、Smad家族成员（Smad）4、p-Smad2/3表达；ELISA法检测血清和肺组织匀浆中TGF-β1水平。结果 与空白组比较，COPD组MMEF及E-c...     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠VEGF，VEGFR2，IL-4，ET-1的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR2),白细胞介素(IL)-4,内皮素-1(ET-1)及核转录因子-κB(NF-κB)的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为5组,每组10只,组别为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(10,20,40 g·kg~(-1)·d~(-1))。以烟熏合并脂多糖(LPS)气管滴注的方法制备COPD大鼠模型。成功造模后,治疗组灌胃给药,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水。光镜观察大鼠肺血管的病理变化,并测定肺血管壁厚度。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆液中IL-4的含量,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测ET-1 mRNA表达;免疫组化检测肺组织VEGF,ET-1及VEGFR2的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清,BALF及肺组织匀浆液中IL-4含量均显著降低(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组IL-4含量均有程度不等的上升(P0.01)。与正常组比较,模型组肺组织ET-1 mRNA表达量显著升高(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组肺组织ET-1 mRNA表达量均显著降低(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠肺组织中的VEGF,VEGFR2表达增多,ET-1蛋白表达显著上升(P0.01),与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组VEGF,VEGFR2表达降低,ET-1蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:二陈汤加味可能通过提升IL-4的含量,抑制VEGF,VEGFR2及ET-1的蛋白表达,从而减轻COPD大鼠肺组织炎症及肺血管重构的进程,减缓COPD及其并发症的进展。     

肺瘤平膏及其联合不同类别药物对肺转移微环境中PI3K/AKT/NF-κB表达的研究

观察肺瘤平膏及其联合不同类别药物(塞来昔布、环磷酰胺)对肺转移微环境中PI3K/AKT/NF-κB表达的影响,揭示中药干预时间对肺转移微环境中关键分子的作用优势。建立Lewis肺癌移植瘤小鼠模型,分别在肺瘤平膏干预14,21,28 d收集肺组织,并通过免疫组化、Western blot法检测PI3K,AKT,NF-κB的表达。14 d时,与对照组比较,各组PI3K表达无明显差别,塞来昔布(CLB)组、肺瘤平膏+环磷酰胺(FLP+CTX)组、肺瘤平膏+塞来昔布(FLP+CLB)组均可明显抑制AKT蛋白表达(P<0.05),其中FLP+CLB组抑制AKT蛋白表达具有优势;FLP+CLB组可抑制NF-κB蛋白表达(P<0.05)。21 d时,与对照组比较,肺瘤平膏(FLP)组及FLP+CTX组可抑制PI3K表达(P<0.05),FLP+CLB组抑制PI3K表达的效果最佳(P<0.001);仅有FLP+CLB组可以明显抑制AKT蛋白表达(P<0.01);FLP+CTX组抑制NF-κB蛋白表达的效果最佳(P<0.001)。28 d时,与对照组比较,FLP+CLB组可抑制PI3K,AKT表达(P<0.001)。肺瘤平膏联合塞来昔布在调控肺转移微环境PI3K/AKT/NF-κB分子表达方面具有优势。     

肺心汤对低氧性肺动脉高压模型大鼠低氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子的影响

目的探讨肺心汤对低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)模型大鼠低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响及其治疗HPH的作用机制。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肺心汤组和硝苯地平组,每组10只。采用常压间断缺氧法复制HPH大鼠模型。除正常对照组外,其余各组均置于自制的有机玻璃缺氧舱中饲养,每天缺氧8h,持续14天后,正常对照组及模型组以30mL/kg蒸馏水灌胃;肺心汤组及硝苯地平组以相应药物灌胃(28g/kg、20mg/kg),均每天1次,连续灌胃14天,且在给药同时继续间断缺氧14天。末次给药后次日行平均肺动脉压力(mean pulmonary arter ypressure,mPAP)检测、肺小动脉形态学检测,测定肺动脉管壁面积/管总面积比值(WA%);分别采用免疫组织化学及原位杂交技术检测HIF-1α和VEGF的蛋白及mRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组mPAP、WA%、HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,肺心汤组mPAP、WA%、HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA表达明显减少(P<0.01,P<0.05)。结论肺心汤通过降低HIF-1α的表达而下调其靶基因VEGF的表达,部分逆转肺血管平滑肌重塑可能是其治疗HPH的作用机制之一。     

调补肺肾三法调节慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠T淋巴细胞亚群的R值综合评价

目的 采用R值综合评价法多指标综合评价调补肺肾三法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠T淋巴细胞亚群的调节作用.方法 采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD模型,于第9周分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方及氨茶碱至第20周.于第20、32周测定外周血和肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD4+ CD25+表达.采用R值综合评价法,对调补肺肾三法调节COPD稳定期T淋巴细胞亚群进行综合评价.结果 第20、32周及综合20、32周,调补肺肾三法和氨茶碱对外周血和肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群各指标均具有较显著的综合纠正作用(P＜0.01).综合20、32周,各治疗方案对外周血T淋巴细胞亚群的纠正强度依次为补肺健脾、氨茶碱、补肺益肾、益气滋肾;对肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群纠正强度依次为补肺健脾、氨茶碱、益气滋肾、补肺益肾,其中补肺健脾的纠正强度较补肺益肾显著(P＜0.05).结论 调补肺肾三法和氨茶碱对COPD稳定期大鼠外周血和肺脏局部T淋巴细胞亚群均具有明显的调节作用,并具有良好的远后效应,以补肺健脾方尤为显著.     

调补肺肾3法调控COPD大鼠肺脏炎症信号通路的R值综合评价研究

前期研究已证实,调补肺肾(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)3法能够调控慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺脏炎症信号通路,从而减轻炎症反应,为综合评价调补肺肾3法对炎症信号通路的综合调节作用,本研究采用R值综合评价法对其进行综合评价.将大鼠随机分为空白、模型、补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱6组,采用香烟熏吸联合细菌感染制备COPD大鼠模型,第9～ 20周给予相应药物灌胃,停药至第32周以观察远后效应,第20,32周分2批取材,检测指标:①连接蛋白/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路:JAK2 mRNA和STAT-1,STAT-3,STAT-5,JAK-2蛋白;②核转录因子kappa B(NF-κB)通路:Smad2 mRNA和I-κB,NF-κB及TGF-β1蛋白;③过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)及抗氧化通路:SOD,PGE mRNA和PPARγ蛋白.经多指标R值综合评价法分析显示,第20,32周及综合20,32周,调补肺肾3法和氨茶碱对JAK/STAT通路5指标、NF-κB通路4指标和PPARγ及抗氧化通路3指标均具有较显著的综合纠正强度.综合20,32周,对JAK/STAT通路纠正强度依次为补肺健脾、益气滋肾、补肺益肾、氨茶碱,其中补肺健脾作用尤为显著;对NF-κB通路的纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱,其中补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾的纠正强度均较氨茶碱显著;对PPARγ及抗氧化通路纠正强度均依次为补肺益肾、益气滋肾、补肺健脾、氨茶碱.总之,调补肺肾3法对COPD肺脏炎症信号通路具有较好的纠正作用及远后效应,补肺健脾方在JAK/STAT,NF-κB信号通路方面占优势,而补肺益肾方和益气滋肾方在调节PPARγ及抗氧化通路方面略占优势.可见,R值综合评价法不仅能评价药物的综合疗效,而且能够得出多种研究药物优劣顺序及药物主要作用靶点.     

补肺益肾组分方Ⅲ联合运动康复对慢性阻塞性肺疾病大鼠的影响北大核心CSCD

目的基于起效时间和效应探讨补肺益肾组分方Ⅲ联合运动康复对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的影响。方法240只大鼠随机分为空白组(Control)、模型组(Model)、补肺益肾组分方Ⅲ组(ECC-BYFⅢ)、运动康复组(ER)、补肺益肾联合运动康复组(ECC-BYFⅢ+ER)、氨茶碱组(APL),每组40只。1~8周采用香烟联合细菌感染法复制COPD大鼠模型,9~16周给予相应干预处理,分别于第10、12、16、20、24周检测肺功能、炎症因子及肺组织病理等。结果与Control组比较,Model组肺功能下降、肺组织病理损伤、炎症反应明显(P<0.05,P<0.01)。与Model组比较,ECC-BYFⅢ组第10~24周IL-6表达及支气管壁厚度(Wt)降低,第12~24周IL-10、单位面积平均肺泡数(MAN)升高,第16~24周肺功能最大呼气中段流速(MMEF)、CD4^(+)/CD8^(+)升高(P<0.05,P<0.01);ER组10~24周IL-6、Wt降低,IL-10升高,第16~24周平均肺泡截距(MLI)降低、MAN升高(P<0.05,P<0.01);ECC-BYFⅢ+ER组第10~24周MLI、Wt、IL-6、TNF-α均降低,IL-10、CD4^(+)升高,第12~24周呼气中期流速(EF50)、MAN升高,FRC降低,第16~24周TV、CD4^(+)/CD8^(+)升高(P<0.05,P<0.01);APL组第10-24周Wt、IL-6、TNF-α降低,12~24周MLI降低、MMEF升高,第16周CD4^(+)/CD8^(+)升高(P<0.05,P<0.01)。与APL组比较,ECC-BYFⅢ+ER组第16周TNF-α降低,ECC-BYFⅢ+ER组第12、20、24周IL-10升高,第24周IL-6降低(P<0.05,P<0.01)。与ER组比较,ECC-BYFⅢ和ECC-BYFⅢ+ER组第24周IL-6降低,ECC-BYFⅢ+ER组12~20周IL-10升高(P<0.05,P<0.01)。结论各方案干预COPD大鼠均具有较好的效应,其中联合干预在改善肺功能、病理损伤及调节炎症免疫方面均起效早、持续时间长,且改善炎症优于运动康复,改善炎症免疫优于氨茶碱。