联合免疫磁珠与逆转聚合酶联反应在肝细胞癌患者外周血癌细胞检测中的应用

目的 研究联合免疫磁珠分类与巢式逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）在肝细胞癌患者外周血癌细胞检测中的应用价值。方法 分别收集肝细胞癌（45例）、肝硬化（16例）、肝炎（20例）患者及健康人（18例）的外周血，以CD15和Ber-EP4免疫磁珠富集血液中的癌细胞，用巢式RT-PCR检测其外周血甲胎蛋白（AFP）mRNA水平。结果 AFPmRNA在肝细胞癌、肝硬化和肝炎患者的检出率分别为72．1％．43．8％和25．0％，肝细胞癌组与肝硬化组和肝炎组比较的差异均有显著性意义（P〈0．05和P〈0．01）。结论 联合免疫磁珠分类与巢式RT-PCR法可提高肝细胞癌患者外周血AFPmRNA的检出率。     

原发性肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平与临床参数的关系

目的　了解肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白 (AFP)mRNA的表达水平与不同临床参数的关系。方法　采用realtimeRT -PCR技术 ,定量检测 5 6例肝细胞癌、17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化和 2 0名健康志愿者外周血AFPmRNA的表达水平。结果　 5 6例肝癌患者外周血AFPmRNA的平均表达水平为 34 6 44 .6± 9490 5 .4copies/μgRNA ,其中 2 9例为阳性 ;17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化患者和 2 0名健康志愿者外周血均未检测到AFPmRNA的表达。结论　肝癌患者外周血AFPmRNA表达水平与肝癌分期、门静脉癌栓及肝外转移密切相关 ,与肿瘤直径、数目及血清AFP水平无明显相关 ,可作为预测肝癌发生远处转移的一个可靠指标     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFP mRNA检测及意义

【目的】寻找一种敏感的方法以检测原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFPmRNA。【方法】巢式RT PCR检测外周血有核细胞成分中AFPmRNA。【结果】 49例肝癌中 17例检出AFPmRNA ,阳性率 35 % ,其中 9例证实有转移的 6例阳性 (6 7% )。 19例肝硬化、6例急性肝炎、8例慢性肝炎、5例肝良性肿瘤、6例肝内胆管癌、11例肝转移癌、13例健康对照组均为阴性。外周血细胞AFPmRNA的存在与肝内肿癌灶的数目、是否有门静脉癌栓形成、远处器官转移与肿瘤的TMN分期密切相关 ,与血清AFP浓度无关。【结论】检测肝癌患者外周血AFPmRNA ,可帮助早期发现肝癌细胞的血行播散。     

肝细胞癌患者血液AFP mRNA检测的临床意义

目的：探讨肝细胞癌患者血液甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍｒＲＮＡ检测的临床意义。方法：取９３例肝癌患者,１５例肝炎后肝硬化患者,１２例慢性肝炎患者及１０例健康人静脉血各５ｍｌ,应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测其周围静脉血中ＡＦＰｍＦＮＡ。结果：在５０个肝癌血标本中检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（５３．８％）,而对照组中未检测到１例。ＡＦＰｍＲＮＡ检出率与肝癌分期、血清ＡＦＰ浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显     

肝癌患者围手术期外周血黑色素瘤抗原-1mRNA和甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

目的 探讨肝细胞癌患者围手术期外周血MAGE-1mRNA和甲胎蛋白(AFP)mRNA表达水平其与术后转移复发的关系。方法 通过巢式RT—PCR,在围手术期检测了45例肝细胞癌患者外周血MAGE-1mRNA和AFPmRNA,并进行平均11个月的随访。同时以22例肝炎后肝硬化、11例肝血管瘤、12例肝转移癌患者和20例健康志愿者外周血标本作为对照组进行了MAGE-1mRNA和AFP mRNA的对比检测。结果 MAGE-1mRNA在12例肝转移癌患者外周血中的检出率为33．3％(4／12);肝炎后肝硬化、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。AFP mRNA在肝炎后肝硬化患者外周血中的检出率为13．6％(3／22),在肝转移癌、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。45例肝细胞癌患者外周血中,MAGE-1mRNA／AFP mRNA的检出率分别是术前42．2％(19／45)／51．1％(23／45),术后7d20％(9／45)／24．4％(11／45),术后28d15．6％(7／45)／22．2％(10／45)。统计分析提示,术后28d肝细胞癌患者外周血检出MAGE-1 mRNA／AFPmRNA预示患者近期复发。并且双标志物联合检测较单标志物检测对预测复发具有更高的敏感性。结论采用巢式RT—PCR的方法联合检测肝细胞癌患者术后28d外周血中癌特异性的MAGE-1 mRNA和肝细胞特异性的AFP mRNA有助于预测肝细胞癌患者术后的转移复发。     

肝癌外周血AFP mRNA的测定及意义

目的 建立一种灵敏的巢式逆转录聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）,用于检测外周血中的ＡＦＰ ｍＲＮＡ。方法 将患者分成四组：原发性肝细胞癌组３８例,慢性肝炎组９例,肝炎后肝硬化组１２例,正常对照组１０例。通过采肝素抗凝外周血、分离单个核细胞、抽提ＲＮＡ、逆转录合成ｃＤＮＡ、设计ＡＦＰ基因引物来进行巢式ＰＣＲ扩增。 结果 所有正常人外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ全部阴性,原发性肝细胞癌组的外周血中ＡＦＰ ｍＲＮ     

用nested RT-PCR法检测肝癌患者外周血癌细胞

目的：寻求一种高灵敏的检测肝癌患者外周血中癌细胞的方法。方法：采用nestedRT－PCR法检测外周血中的肝癌细胞。结果：能从2ml人外周静脉血中检测到10个左右肝癌细胞表达的人甲胎蛋白mRNA。结论：此方法特异性强，灵敏度高，可作为一种理想的临床检测手段。     

肿瘤-睾丸抗原SSX1和SSX4 mRNA在肝细胞癌中的表达

目的 检测肿瘤-睾丸抗原（CTA）SSX1和SSX4 mRNA在肝细胞癌（HCC）及外周血中的表达,探讨CTA抗原SSX1和SSX4 在HCC中表达有无特异性.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（PT-PCR）方法对35例HCC患者癌组织和相应的癌旁组织SSX1和SSX4 基因表达进行检测,对其中6例PT-PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定：HCC确诊后第2周对30例患者外周血中SSX1基因进行检测. 结果 35例HCC患者中,SSX1和SSX4 的表达率分别为77.1%（27/35）和65.7%（23/35）;癌旁组织,12例肝硬化和15例正常肝组织未检测到SSX1和SSX4 的表达.6例DNA序列测定结果显示PT-PCR产物为SSX1和SSX4 的cDXA.SSX1和SSX4 的表达与患者年龄,性别,肿瘤大小,血清甲胎蛋白（AFP）水平,乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染无相关关系（均P＞0.05）.外周血中未检测到SSX1表达.结论 SSX1和SSX4在HCC中呈高度特异性表达,是制备HCC疫苗理想的靶向分子,多种CTA联合表达为多效价疫苗治疗HCC提供了理论基础.     

肝癌组织及外周血IGF—IImRNA片段扩增的临床应用

目的：探讨外周血胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF－Ⅱ）－mRNA在肝癌诊断和判断预后中的临床价值。方法：从肝癌组织和外周血有核细胞中帛备总RNA,经随机引物和逆转录酶作用合成cRNA,再分别以RT－PCR扩增IGF－Ⅱ基因片段,分析其在肝病诊断与鉴别中的临床价值。结果：在肝癌组织和外周血中扩增出的IGF－Ⅱ基因片段大小为170bp,并与原设计相一致;30份肝癌、癌灶周围和远癌组织中,IGF－Ⅱ基因检出率分别为100．0％、53．3％和0．0％;外周血IGF－Ⅱ基因片段阳性率：肝癌患者为34．2％,肝硬化、慢性肝炎、急性肝炎和肝外肿瘤组中未见 阳性;在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中分别为14．3％、19．4％和45．5％;有伴有肝外转移的13例肝癌中全数阳性;在17例AFP＜50ng/ml的肝癌中,IGF－Ⅱ基因分析有助于肝癌的诊断、转移判别及术后复发的监测。     

实时逆转录荧光定量聚合酶链反应检测外周血GPC3mRNA在原发性肝癌患者中的表达及意义

目的探讨实时逆转录荧光定量聚合酶链反应（RealtimeQRT-PCR）检检测外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 mRNA（GPC3 mRNA）在原发性肝癌（HCC）患者中的表达意义。方法采用Realtime QRT-PCR技术分别检测37例HCC、21例转移性肝癌、22例肝硬化患者和35例体检健康志愿者外周血中GPC3 mRNA的水平。结果 HCC患者外周血GPC3mRNA的阳性率为91.8%（34/37）,表达水平为（1.5±0.9）×106copies/ml;转移性肝癌外周血GPC3 mRNA的阳性率为4.7%（1/21）,表达水平为5.2×103copies/ml;肝硬化患者GPC3 mRNA的阳性率为4.5%（1/22）,表达水平为2.6×103 copies/ml;体检健康志愿者外周血GPC3 mRNA无阳性表达。HCC患者手术前后血液中GPC3 mRNA的阳性率差异无统计学意义（P〈0.05）,但两者表达水平差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Realtime QRT-PCR检测外周血GPC3 mRNA是诊断早期HCC血微转移可行的实验方法。     

CK20mRNA在胃癌患者外周血中的表达及及其临床意义

目的：研究胃癌患者外周血中CK20mRNA表达以判断癌细胞有无血行播散。方法：采用巢式逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）的方法,对胃癌30例,原发性肝细胞肝癌5例、对照组（非癌肿）10例患者手术前、后不同时间外周血中肿瘤细胞的靶基因CK20mRNA进行检测。结果：对照组（非癌肿）10例及原发性肝细胞肝癌5例手术前、后外周血中CK20mRNA均为阴性表达。胃癌组30例,外周血中CK20mRNA手术前阳性表达率26．7％（8／30）,手术后48小时阳性表达率则为33．3％（10／30）。胃癌外周血中CK20mRNA的阳性表达率与细胞病理分化程度无关,与UICC病理贫苦无关,但与肝脏转移有关。结论：胃癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达可作为癌细胞血行播散的标志;有助于判断胃癌的预后;有助于鉴别原发性肝细胞肝癌和胃癌肝转移。胃癌手术中应采用“不接触肿瘤的游离技术”以养活癌细胞的播散。     

肝细胞癌中ZHX2 mRNA的表达及其临床意义的研究

[目的探讨转录抑制因子ZHX2（zinc-fingers and homeoboxes2,ZHX2）在肝细胞癌（hepatoceUu1ar carcinoma,HCC）中的表达及其与转移的关系。方法通过RT-PCR方法,检测35例HCC癌组织及相应癌旁组织和8例正常肝组织中ZHX2 mRNA的表达,并分析其与临床病理参数的关系。结果HCC癌组织中ZHX2 mRNA的表达率明显低于癌旁组织与正常肝组织（P〈0．05）。术中发现伴随转移的HCC癌组织中ZHX2 mRNA的阳性表达率明显低于无转移的HCC（P〈0．05）。ZHX2 mRNA的表达与血清甲胎蛋白（alphafetoprotein,AFP）水平呈负相关（P〈0．05）,而与年龄、性别、HBsAg感染、肿瘤直径、分化程度、是否伴随肝硬化无明显关系。结论ZHX2低表达与HCC转移密切相关,并与AFP的高表达有关。     

外周血胰岛素样生长因子Ⅱ-mRNA对肝癌的诊断价值

目的探讨外周血胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-II）-mRNA在肝癌诊断和判断预后中的价值。方法从癌组织和外周血中制备总RNA,经随机引物和逆转录酶作用合成IGF-ⅡcDNA,再分别以RT-PCR扩增IGF-ⅡcDNA片段,分析其在肝病诊断与鉴别中的临床价值。结果肝癌组织和外周血中扩增出的IGF-Ⅱ基因片段大小为170bp,并与原设计相一致。肝癌、癌灶周围和远癌组织中,IGF-Ⅱ基因检出率分别为100%、53.3%和0。肝癌患者外周血IGF-II基因片段阳性率34.2%,在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中分别为14.3%、19.4%和45.5%,在伴有肝外转移肝癌中全数阳性,在AFP〈50ng/ml的17例中阳性6例（35.3%）;肝硬化、慢性肝炎、急性肝炎和肝外肿瘤组中未见IGF-Ⅱ基因片段阳性。IGF-Ⅱ基因标志与肝癌大小间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论外周血IGF-Ⅱ基因分析有助于肝癌的诊断、转移判别及术后复发的监测。     

Expression of β-catenin protein in hepatocellular carcinoma and its relationship with alpha-fetoprotein

This study aimed to investigate the expression of β-catenin in hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and its relationship with α-fetoprotein (AFP) in HCC. Immunohistochemistry was used to determine the expression of β-catenin in normal liver tissues (n=10), liver cirrhosis tissues (n=20), and primary HCC tissues (n=60). The relationship between β-catenin expression and clinical parameters of HCC was investigated. Real-time PCR and Western blotting were used to detect the mRNA and protein expression levels of β-catenin in the liver cancer cell line SMMC-7721 transfected with a plasmid encoding AFP, and also the mRNA and protein expression levels of β-catenin were measured in the liver cancer cell line Huh7 before and after the transfection with AFP shRNA plasmids. The results showed that β-catenin was only expressed on the cell membrane in normal liver tissues. Its localization to the cytoplasm and nucleus of cells was observed in a small proportion of cirrhotic tissues or adjacent HCC tissues, and such ectopic expression of β-catenin was predominant in HCC tissues. The abnormal expression of β-catenin was correlated with serum AFP levels, cancer cell differentiation and vascular invasion (P<0.05). Additionally, the increased expression of AFP resulted in the upregulation of β-catenin mRNA and protein levels, while knockdown of AFP with AFP shRNA led to significantly decreased β-catenin mRNA and protein levels (P<0.05). It was suggested that the abnormal expression of β-catenin is implicated in hepatic carcinogenesis and development. AFP can lead to increased expression of β-catenin, which may account for the poor prognosis of AFP-associated HCC patients.     

慢性乙肝病毒感染各阶段患者外周血单个核细胞中IL-22mRNA的表达水平及其临床意义

目的: 分析慢性乙型病毒性肝炎(CHB)、慢加急性/亚急性重型肝炎(重型肝炎)、乙肝肝硬化和乙型肝炎病毒(HBV)相关性原发性肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素22(IL-22)mRNA的表达水平及其可能的临床意义。方法: 收集20名健康对照者(健康对照组)、33例CHB中度患者(CHB中度组)、21例CHB重度患者(CHB重度组)、16例重型肝炎患者(重型肝炎组)、16例乙肝肝硬化患者(肝硬化组)和40例HCC患者(HCC组)的临床资料。RT-PCR半定量分析各组研究对象PBMCs中IL-22mRNA表达水平;Pearson相关分析法分析IL-22mRNA表达水平与临床重要检测指标的相关性。结果: CHB中度、CHB重度和肝硬化组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平均高于健康对照组(P<0.001);重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P=0.830);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平明显低于健康对照组(P<0.001)。CHB重度组患者和重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与总胆红素(TB)水平呈明显负相关关系(r=-0.383,P=0.043;r=-0.619,P=0.028);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与血清甲胎蛋白(AFP)水平呈明显正相关关系(r=0.664,P=0.000)。结论: 慢性乙肝重症化过程中,患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平低下提示肝细胞再生障碍,且IL-22mRNA表达水平与TB一样能够反映患者病情严重程度。IL-22可能对HCC的发生发展起促进作用。     

应用荧光定量PCR检测肝细胞癌微小转移

目的：探讨甲胎蛋白（AFP）-mRNA在肝细胞癌（HCC）患者外周血中的表达和临床意义。方法：采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-PCR）方法,检测25例HCC患者外周血中AFP-mRNA的表达。结果：HCC患者外周血中AFP-mRNA表达率显著高于肝炎和肝硬化患者（P〈0.01）。HCC患者外周血中AFP-mRNA表达与患者的肝外转移可能相关,与患者的临床分期、肿瘤直径、数目、血清AFP水平无明显相关（P〉0.05）。结论：AFP-mRNA可作为血液循环中肝癌细胞的标志物。     

Immunohistochemical study of transferrin receptor expression in hepatocellular carcinoma]

By means of immunohistochemical technique ABC, using monoclonal anti-transferrin receptor (TFR) antibodies WuT9 and OKT9, TFR expression in 30 cases of hepatocellular carcinoma (HCC) and in 6 cases of organs and tissues of normal human bodies was studied. It was revealed that large amount of TFR were expressed in liver cancer cells, but not in the surrounding mesenchymal cells as demonstrated by intense immunostaining in cancer nests, and even not in the surrounding mesenchyma of those HCC patients with negative AFP in their serum. In normal human body, only small amount of TFR in limited sites was found without free antigen in blood stream. Thus, it followed that TFR as a structural antigen of HCC was expressed with higher relative specificity than AFP, and TFR may be considered a tumor marker and therapeutic target of HCC.     

血清GP73作为原发性肝癌肿瘤标志物的来源探究

目的探究血清GP73作为原发性肝癌的肿瘤标志物的可行性。方法采用SYBR Green qPCR法对103例原发性肝癌（PHC）、13例肝硬化、49例肝炎和50例健康人群外周血单核细胞GP73 mRNA的相对表达量进行检测,同时检测分析8份正常肝组织和8份肝癌组织的GP73 mRNA相对表达水平。对7例病理确诊为PHC的肝组织和1例正常肝组织、1例肝硬化肝组织中GP73的表达进行免疫组化分析。采用ELISA法检测血清GP73水平和利用电化学发光法血清中AFP水平。结果外周血有核细胞GP73 mRNA含量四组间差异无统计学意义（F=3.013,P=0.055）。肝癌组织GP73mRNA表达量（12.64）显著高于正常肝组织（1.00）。GP73免疫组化结果显示,正常肝组织中GP73少量在肝实质细胞胆小管处表达。肝硬化组织中GP73在肝细胞胞浆中弱阳性表达,但在肝细胞胞浆的两侧靠近胆小管位置呈颗粒状浓集;胆管柱状上皮也呈强阳性着色。PHC患者肝组织GP73在肿瘤细胞胞浆呈强阳性着色,且在胆管上皮细胞靠近腔缘一侧呈深棕色颗粒状分布。肝癌组中血清GP73水平显著高于肝炎组及健康对照组（χ^2=62.541,P=0.000）。通过ROC曲线确定诊断肝癌的GP73临界值为113.2μg/L,和AFP的临界值为13.3μg/L时,GP73和AFP单项检测的敏感度分别为68.0%和56.3%,特异度分别为94.8%和91.8%。结论 PHC患者血清高表达的GP73可能是在癌变的肝细胞胞浆中合成随后分泌入血。血清GP73在诊断PHC时阳性检出率显著高于AFP,且ROC曲线提示灵敏度和特异度均优于AFP。     

RT-PCR法检测肝癌患者周围和肝静脉血AFP mRNA及其临床意义

目的：通过对外周静脉因和肝静脉血AFPmRNA表达检测的比较，旨在寻找一种比较好的监测肝癌细胞转移的方法，并了解肝癌细胞在体内的转移机制。方法：抽取肝癌患者外周及肝静脉血，采用RT－PCR方法检测AFPmRNA，比较二者的阳性率。结果：在肿瘤直径＞5cm的肝癌患者，其外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性（P＝0．618），而在直径＜5cm的肝癌患者，其二处血AFPmRNA表达差异有显著性（P＝0．028）。结论：肝癌直径＜5cm的患者，直接检测肝静脉血能更准确地反映肝癌细胞肝内播散的情况。肝癌直径＞5cm的患者中，外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性，这部分患者的外周血AFPmRNA可代表其肝静脉血中AFPmRNA的状况。