异丁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡的作用及其机制

研究异丁司特 (ibudilast) 对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (eosinophil, EOS) 凋亡的作用及其机制。采用卵白蛋白致敏法制备豚鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) 并进行白细胞计数及分类计数, TUNEL技术原位检测EOS凋亡, RT-PCR技术检测EOS的Fas mRNA表达, 酶联免疫吸附 (ELISA) 法测定BALF中粒细胞-巨噬细胞刺激因子 (GM-CSF) 及白介素-5 (IL-5) 的含量。结果表明, 异丁司特可明显减少哮喘豚鼠的白细胞总数和EOS数目; 在异丁司特剂量组, EOS凋亡细胞明显增多, Fas mRNA的表达显著增强, BALF中GM-CSF、IL-5含量显著降低, 与模型组比较有显著性差异。因此, 异丁司特抑制哮喘豚鼠气道EOS数目的增加、诱导EOS凋亡、增强Fas mRNA的表达、降低GM-CSF、IL-5含量可能是其拮抗哮喘的重要机制。     

黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶和白细胞介素-5表达的影响

目的：探讨黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶（p38 MAPK）和白细胞介素-5（IL-5）表达的影响。方法：应用鸡卵清蛋白（OVA）腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入复制大鼠哮喘模型。40只大鼠随机分成5组：正常对照组,哮喘模型组和黄芪注射液低、中、高剂量组（2.5、5.0、10.0mL/kg）。分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、原位分子杂交方法和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-5含量、肺组织IL-5 mRNA和磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察BALF中炎症细胞计数、分类以及肺组织病理学变化。结果：哮喘模型组大鼠BALF中炎症细胞计数、IL-5含量和肺组织中IL-5 mRNA及磷酸化p38 MAPK表达均较正常对照组显著增加（P〈0.01）;黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低（P〈0.01）,肺组织病理学损伤程度明显减轻,黄芪注射液低、中、高剂量组之间差异无统计学意义。肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与BALF中嗜酸性粒细胞（EOS）计数和IL-5、IL-5 mRNA含量之间分别呈显著正相关（r=0.62、0.69、0.74,P〈0.01）。结论：p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程。黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制p38 MAPK的磷酸化活化、降低炎症介质释放、减轻炎症细胞浸润有关。     

银杏内酯B协同地塞米松对小鼠哮喘模型气道炎症和辅助T细胞亚群的影响

目的：探讨银杏内酯B协同地塞米松对支气管哮喘气道变应性炎症及辅助T细胞亚群的作用。方法：40只BALB/c小鼠随机分成正常对照组、哮喘对照组、地塞米松组、银杏内酯B组和联合干预组,每组8只。除正常对照组外,其余4组均造成哮喘模型,地塞米松组、银杏内酯B组和联合干预组给予相应的药物。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,行白细胞（WBC）及嗜酸性粒细胞（EOS）计数;应用EUSA法测定BALF中IFN-γ和IL-4水平。结果：BALF中WBC及EOS计数：3个用药组较哮喘对照组明显减少（P〈0．01）,联合干预组减少的程度大于地塞米松组、银杏内酯B组（P〈0．05或P〈0．01）。3个用药组小鼠BALF上清中IFN—γ和IL-4水平与哮喘对照组比较,银杏内酯B组、地塞米松组和联合干预组BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分别增高和降低（P〈0．05或P〈0．01）,而联合干预组增高和降低的程度大于地塞米松组、银杏内酯B组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：银杏内酯B能减轻小鼠哮喘模型BALF中炎性细胞浸润,并减少IL-4的水平;银杏内酯B与激素具有协同抗炎作用;同时具有更好的调节Th亚群失衡的作用。     

CpG ODN对小鼠哮喘模型气道炎症及信号转导子和转录激活子6（STAT6）表达的影响

目的：研究寡核甘酸免疫刺激序列（CpG oligonucleotides,CpG ODN）对急性支气管哮喘小鼠气道炎症及信号转导子和转录激活子6（STAT6）表达的调控作用。方法：将32只雄性BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松干预组和CpG ODN干预组,建立急性哮喘气道炎症模型。对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞总数、嗜酸粒细胞（EOS）分类计数;取左叶肺组织切片做HE染色观察气道和肺组织炎症改变;用免疫组织化学法检测气道上皮组织中STAT6表达。结果：哮喘组小鼠BALF中细胞总数、EOS绝对值显著高于对照组（P〈0．05）,地塞米松组和CpG ODN组上述炎症细胞计数比哮喘组明显减少（P〈0．05）。HE染色示地塞米松组和CpG ODN组小鼠肺组织炎症程度较哮喘组减轻。STAT6在气道上皮细胞表达,哮喘组气道上皮细胞中STAT6表达较对照组增强,地塞米松组和CpG ODN组STAT6表达与哮喘组比较有明显减少（P〈0．05）,较对照组增加。支气管上皮细胞STAT6蛋白表达与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关（r=0．748）,而地塞米松组和CpG ODN组之间的作用无统计学差异（P〉0．05）。结论：应用地塞米松和CpG ODN均可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症,CpG ODN可能通过下调肺组织中STAT6蛋白的过度表达,从而抑制依赖于STAT6/IL-4通路的急性气道炎症,减轻哮喘的症状。     

PTEN在哮喘大鼠肺部的表达及地塞米松的干预

目的：研究哮喘大鼠PTEN的表达和地塞米松（DXM）对其表达的影响。方法：24只体重（200±10）g的SPF级雄性SD大鼠,随机分为3组：正常对照组、哮喘组、地塞米松组。对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-13浓度;采用免疫组化法和Western blot法分别检测PTEN的表达及各组大鼠肺组织PTEN量的变化。结果：正常对照组、地塞米松组支气管PTEN蛋白的表达分别为7.87±0.80、1.80±0.23,均高于哮喘组（0.92±0.23,均为P〈0.01）,其主要表达细胞是支气管上皮细胞;哮喘组大鼠BALF中IL-13表达明显升高,明显高于正常对照组;地塞米松组BALF中IL-13量明显下降,与哮喘组比有统计学意义。哮喘组大鼠支气管PTEN蛋白与BALF中的IL-13浓度呈显著负相关（r=-0.675,P〈0.01）。结论：气道上皮细胞是PTEN主要表达细胞,哮喘大鼠PTEN蛋白表达明显减少,PTEN能减少Th2因子的表达;DXM可以促进PTEN的表达,可能为其抑制哮喘气道炎症形成的重要作用机制。     

异丁斯特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡的作用及机制

目的：研究异丁斯特（Ibudilast）对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞（eosinophil,EOS）凋亡的作用及机制。方法：Hartley豚鼠,随机分为正常对照组、哮喘模型组、异丁斯特10、20、30mg／kg组及地塞米松（DXM）给药组。采用卵白蛋白致敏法制备豚鼠哮喘模型。给药后,收集支气管肺泡灌洗液（BLAF）并进行白细胞计数及分类计数;TUNEL技术原位检测EOS凋亡;逆转录．多聚酶链反应（ImPCR）技术检测EOSFasmRNA的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法测定BLAF中粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）及白介素-5（IL-5）的含量。     

槲皮素对哮喘大鼠白介素5和白介素6表达的影响

目的研究槲皮素对大鼠哮喘模型白介素(IL)-5和IL-6表达的影响,探讨其治疗哮喘的机制。方法 48只大鼠随机分为6组,分别为正常对照组(对照组),哮喘模型组(模型组),地塞米松组及槲皮素低、中、高剂量组,建立大鼠鸡卵白蛋白哮喘模型,ELISA法检测各组BALF和肺组织匀浆中IL-5和IL-6表达水平。结果模型组BALF和肺组织匀浆中IL-5和IL-6较对照组明显升高(P<0.05)。槲皮素中、高剂量组及地塞米松组大鼠哮喘症状明显减轻,BALF和肺组织匀浆中IL-5和IL-6表达明显降低,与哮喘组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素抑制哮喘大鼠IL-5和IL-6的表达,可能是其治疗哮喘的机制。     

地塞米松抑制哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶的表达

目的:探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶(p38 MAPK)表达的变化以及地塞米松对其影响.方法:复制大鼠哮喘模型,随机分成3组:正常对照组、哮喘对照组和地塞米松(DEX)干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-5含量和肺组织磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察气道阻力、BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化.结果:哮喘对照组大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平及气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加(P＜0.01);DEX干预组上述指标较哮喘对照组显著降低(P＜0.01),肺组织病理学损伤程度明显减轻.肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与气道阻力、BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关(r=0.77、0.63、0.65,P＜0.01).结论:p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.DEX对哮喘的治疗作用至少部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关.     

白细胞介素-1受体拮抗剂拮抗豚鼠哮喘的相关机制

目的：研究白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1ra)拮抗豚鼠哮喘的机制。方法：建立致敏豚鼠模型。吸入不同浓度的的IL-1ra。引喘豚鼠，检测引喘后8d血清，肺组织中，内皮素-1（ET），一氧化氮（NO），以及血液，肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞（EOS）的变化情况。结果：IL-1ra可以明显升高血清和肺组织中的NO浓度，降低血清和肺组织中的ET含量，减少血液和肺泡灌洗液中的EOS的数量；高剂量组缓解作用较强。结论：IL-1ra可增加机体内的NO浓度，降低ET的含量，减少EOS浸润，IL-1ra对豚鼠哮喘具有拮抗作用。     

罗红霉素对哮喘大鼠NF—κB及气道炎症的影响

目的：观察罗红霉素对哮喘大鼠NF-κB、气道炎症、气道高反应性的影响。方法：30只雄性SD大鼠随机分成正常对照组（C组）、哮喘组（A组）、罗红霉素组（R组）,每组10只。用卵白蛋白（OVA）制备哮喘大鼠模型。各组大鼠在末次激发后24h,检测气道反应性后放血处死：ELISA测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-4、IL-5、IFN-γ的浓度;免疫组化检测支气管上皮NF-κB p65活化。结果：哮喘组大鼠气道反应性高于对照组（P〈0．01）,罗红霉素组与哮喘组比较气道反应性下降（P〈0．05）;BALF中IL-4、IL-5,哮喘组含量均高于对照组（P〈0．01）,罗红霉素组均低于哮喘组（P〈0．01）,罗红霉素组BALF中IFN-γ低于对照组（P〈0．01）但高于哮喘组;哮喘组大鼠支气管上皮NF-κB蛋白的活化明显高于对照组,罗红霉素组低于哮喘组（P〈0．01）。支气管上皮NF—κB p65活化与BALF中的IL-4、IL-5的含量呈显著正相关（r=0．856,P〈0．01;r=0．912,P〈0．01）;大鼠BALF中的IL-4、IL-5的含量与Raw增加25％时（PC25Raw）呈显著负相关（r=-0．713,P〈0．01;r=-0．772,P〈0．01）,与Cdyn下降15％时（PC15Cdyn）呈显著负相关（r=-0．738,P〈0．01;r=-0．818,P〈0．01）。结论：罗红霉素可能部分通过抑制NF-κB活性而纠正哮喘Th1／Th2细胞因子失衡,罗红霉素降低哮喘大鼠的气道反应性可能和减少IL-4、IL-5的表达有关。     

氨茶碱对哮喘豚鼠嗜酸细胞IL-3、IL-5及GM-CSF受体表达的影响

目的　观察氨茶碱(AM)对嗜酸细胞(Eos)上白介素 5受体α(IL 5Rα)、白介素 3受体α(IL 3Rα)、粒 巨噬细胞集落刺激因子受体α(GM CSFRα)及共同β链(βcR)mRNA表达的影响,探讨茶碱促进哮喘Eos凋亡的机制。方法　 18只健康豚鼠随机分为正常组、哮喘组、茶碱组,每组 6只,以卵蛋白致敏激发制作豚鼠哮喘模型,密度梯度分离法分离支气管灌洗液(BALF)中的低密度Eos(HEos)及正常密度Eos(NEos),以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,原位杂交检测各受体mRNA表达,RT PCR法检测EosIL 5Rα、IL 3Rα相对含量。结果　哮喘组HEos及NEos凋亡 (4±2, 3±2)明显低于正常组(8±2, 7±2,P<0 01),而哮喘组细胞数 (75±13, 51±11 )明显高于正常组(5±2, 10±3,P<0 01)。用AM 24h后不同密度Eos数量 ( 36±14, 33±8 )均明显低于哮喘组 (P<0 01, 0 05),AM组Eos凋亡 ( 15±5, 14±4 )明显高于哮喘组(P<0 01);哮喘组Eos表达IL 5、IL 3及GM CSFα受体mRNA,明显低于正常组 (P<0 01, 0 05 ),AM组中低密度Eos表达各受体mRNA均明显高于哮喘组 (P<0 05 );而哮喘组βcR表达(41±6, 39±7)表达显著高于正常组 (28±5,26±5,P<0 01),AM组βcR表达与哮喘组比较差异无显著性(P>0 05)。HEos表达各受体与NEo     

火把花根片对哮喘豚鼠抗炎机制及其对肺泡灌洗液IL-5受体mRNA表达的影响

目的　探讨火把花根片对哮喘豚鼠抗炎作用机制及其对肺泡灌洗液 (BALF)白介素 5(IL 5)受体mRNA表达的影响。方法　 3 2只健康豚鼠随机分为 4组 :正常对照组 ,哮喘组 ,地塞米松治疗组 ,火把花根片治疗组。后 3组制作成哮喘豚鼠模型 ,再激发用药。测定肺泡灌洗液的细胞总数和细胞分类 ,观察肺组织的病理改变 ,进行BALF的IL 5受体mRNART PCR半定量分析。结果　火把花根片治疗组BALF的嗜酸性粒细胞 (Eos)数较正常组和哮喘组 ,差异均有显著性 ,分别为P <0 0 5和P <0 0 1。肺组织病理切片 ,火把花根片组充血水肿明显 ,但Eos肺组织浸润较哮喘组有明显减少。BALF的IL 5受体mRNART PCR半定量分析显示 ,火把花根片治疗组与地塞米松治疗组差异无显著性 ,P >0 0 5,但和正常组与哮喘组比较差异有显著性 ,P <0 0 1。结论　火把花根片能抑制哮喘豚鼠的气道炎症 ,为临床治疗哮喘提供初步的理论基础     

左西替利嗪治疗支气管哮喘的疗效及可能机制

目的:研究左西替利嗪治疗哮喘的疗效及可能的机制。方法:以卵蛋白致敏法制备大鼠哮喘模型,40只SD大鼠随机分为5组,即正常对照组、哮喘组、地塞米松组、左西替利嗪高剂量组、左西替利嗪低剂量组,各组连续治疗与激发7d后取材。采用ELISA法测定大鼠血清中白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数、肺组织嗜酸粒细胞(Eos)计数及病理学观察等。结果:哮喘组IL-4、IL-5、TNF-α较正常对照组均有显著增加(P<0.01);地塞米松组IL-5、TNF-α水平较哮喘组显著降低(P<0.01);左西替利嗪高、低剂量组IL-4、IL-5、TNF-α均较哮喘组减少(P<0.05或P<0.01)。哮喘组BALF中白细胞总数和肺组织Eos计数较正常对照组明显增加(P<0.01);地塞米松组较哮喘组显著减少(P<0.01);左西替利嗪高、低剂量组BALF中白细胞总数与哮喘组相比明显减少(P<0.01),而其肺组织Eos计数与哮喘组相比无显著差异,明显高于地塞米松组(P<0.01)。病理组织学检查可见哮喘组支气管及血管周围有大量Eos浸润等改变,地塞米松组及左西替利嗪高、低剂量组肺组织病理改变均不同程度的轻于哮喘组。结论:左西替利嗪能显著降低哮喘相关细胞因子的水平,因此其可能成为一种新的治疗哮喘的药物。     

槐杞黄对哮喘大鼠BALF中IL-5及INF-γ的影响

目的观察槐杞黄对大鼠哮喘模型BALF中IL-5及INF-γ的影响。方法大鼠40只,随机分成4组:正常对照组(N组)、哮喘模型组(A组)、地塞米松组(D组)、地塞米松+槐杞黄组(H组),复制哮喘模型。用细胞计数板计算支气管肺泡灌洗(BALF)中细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)数;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清卵蛋白特异性IgE(OVA-IgE)和BALF中白介素-5(IL-5)、INF-γ的水平。结果 A组血清OVA-IgE、BALF中EOS数和IL-5水平高于N组(P<0.05);D组和H组各指标较A组下降(P<0.05);H组各指标较D组下降(P<0.05),与N组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A组BALF中INF-γ的水平低于N组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);D组和H组各指标较A组回升(P<0.05);H组较D组进一步回升(P<0.05),与N组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论槐杞黄辅助治疗可以抑制哮喘大鼠OVA-IgE和IL-5合成,促进INF-γ合成,调节Th1/Th2平衡,从而发挥其抗EOS性气道炎症的作用。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入部位IL-1β表达的抑制作用

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入系统(C7T5脊神经节及对应的脊髓后角)IL-1β表达的抑制作用。方法以卵蛋白致敏豚鼠制作哮喘模型,免疫组织化学检测各组豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角IL-1β的表达,Westernblot免疫印迹检测各组豚鼠肺、C7T5脊神经节及对应的脊髓后角IL-1β的蛋白表达变化。结果哮喘组豚鼠IL-1β在肺及内脏感觉传入系统表达明显高于对照组(P<0.01),而地塞米松组则明显低于哮喘组(P<0.01)。结论IL-1β可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠IL-1β的表达可能是激素治疗哮喘的机制之一。     

银杏内酯吸入剂对哮喘模型豚鼠气管嗜酸性粒细胞浸润的影响

目的:探讨银杏内酯吸入剂对哮喘模型豚鼠气道嗜酸性粒细胞浸润的影响。方法:将豚鼠随机分为7组,每组8只,分别为哮喘模型组,银杏内酯吸入剂低、中、高剂量组(剂量分别为5、10、20mg·kg-1),银杏内酯腹腔注射(ip)组(剂量为20mg·kg-1),地塞米松组(剂量为10mg·kg-1)和正常对照组,计数肺灌注液(BALF)和支气管中的嗜酸性粒细胞(EOS)数。结果:与正常对照组比较,模型组BALF中的EOS显著增多,银杏内酯吸入剂组可显著减少BALF和支气管中的EOS浸润数(P<0.05)。结论:银杏内酯吸入剂能对抗哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞浸润,可作为治疗支气管哮喘的一种新方法。     

孟鲁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡及Fas mRNA表达的影响

目的研究白三烯受体拮抗剂孟鲁司特(montelukast,MK)对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞(eosinophil,Eos)凋亡和Fas mRNA表达的影响。方法以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度离心法分离并计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞；采用TUNEL技术原位检测嗜酸性粒细胞凋亡；通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达。结果孟鲁司特能显著降低哮喘豚鼠BALF中Eos的数量；在孟鲁司特治疗组，嗜酸性粒细胞凋亡指数明显升高，Fas mRNA的表达显著增强，与模型组比较均有显著性差异。结论嗜酸性粒细胞凋亡与Fas mRNA表达增加高度相关；增强气道嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达，促进其凋亡，可能是孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的一个重要机制。     

卡介菌多糖核酸对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

目的观察卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对小鼠哮喘胸腺活化调节趋化因子(thymus and activation regulated chemo-kine,TARC)及mRNA表达的影响。方法以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。30只清洁级♂Balb/c小鼠随机分为3组,每组10只:正常对照组、哮喘组、BCG-PSN治疗组。末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行细胞计数及分类;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中TARC、IL-4和IFN-γ蛋白的浓度;光镜观察肺组织病理变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中TARC mRNA的表达;采用免疫组织化学法测定肺组织中TARC蛋白的表达。结果与正常对照组相比,哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)绝对值及百分比、TARC和IL-4浓度、肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达均增高,BALF中IFN-γ浓度低于正常对照组。经BCG-PSN干预后,BALF中细胞总数、EOS绝对数及百分比,TARC、IL-4浓度较哮喘组均下降,肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达较哮喘组均下调,BALF中IFN-γ浓度较哮喘组增高。免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度呈正相关。结论卡介菌多糖核酸可降低TARC在肺组织中的表达,降低气道炎症。