伊马替尼对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖及顺铂、紫杉醇敏感性的影响

目的：探讨伊马替尼对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖和对顺铂、紫杉醇敏感性的影响及其作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法检测细胞增殖率、Hoechst33342染色检测细胞凋亡;采用免疫荧光测定伊马替尼处理前后人卵巢癌细胞株SKOV-3 p-PDGFRβ的表达情况。结果：伊马替尼可以诱导SKOV-3细胞凋亡,对其增殖抑制作用与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,并显著提高了SKOV-3细胞对顺铂、紫杉醇的敏感性（P〈0.05）;PDGF-BB可促进PDGFRβ发生磷酸化,伊马替尼在体外阻断了SKOV-3细胞p-PDGFRβ的表达,p-PDGFRβ可能是伊马替尼的主要作用靶点。结论：伊马替尼对SKOV-3细胞有明显杀伤作用,并显著增强该细胞株对顺铂、紫杉醇的敏感性;伊马替尼可在体外阻断SKOV-3细胞PDGFRβ的磷酸化,这可能是其影响细胞增殖的主要途径之一。     

Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV-3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响

目的探讨Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响。方法采用MTT法检测Genistein单用及合用顺铂对细胞增殖的影响,流式细胞仪分析Genistein及Genistein联合顺铂对细胞周期和凋亡的影响。结果Genistein对SKOV3细胞增殖表现出浓度依赖性的抑制作用,并显著提高了其对顺铂的敏感性(P<0.05);0.625～5μg/ml顺铂与2.5～10μg/mlGenistein合用基本表现为协同作用。5、10μg/mlGenistein均可将细胞阻滞于G2/M期并诱导一定程度的凋亡,10μg/mlGenistein还可进一步的干扰S期进程;当顺铂与Genistein合用时,两种药物在干扰SKOV3细胞周期和诱导凋亡方面表现为显著的协同效应。结论Genistein能够抑制耐药卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并显著增强该细胞对顺铂的敏感性。     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期卵巢癌的疗效观察

目的：探讨紫杉醇联合顺铂治疗晚期卵巢癌的疗效和毒副反应。方法入组53例晚期卵巢癌患者,均接受紫杉醇联合顺铂治疗,其中紫杉醇静脉途径给药,顺铂经腹腔灌注给药,并并对患者的疗效和毒副反应进行评价。结果53例晚期卵巢癌患者均可评价疗效和毒副反应,CR 10、PR 12例、SD 24、PD 7例,总有效率为415%,疾病控制率为868%,1 a 生存率为604%。主要毒副反应为白细胞减少、恶心呕吐、周围神经毒性等,大多为轻度,所有毒副反应经对症处理后均可缓解,未影响治疗的顺利进行。结论紫杉醇联合顺铂治疗晚期卵巢癌安全有效,值得临床推广应用。     

紫杉醇脂质体联合顺铂治疗中晚期卵巢癌临床观察

卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,死亡率居所有妇科恶性肿瘤之首,首次治疗多以手术切除为主,但由于卵巢癌患者就诊时多数已属晚期,故需要采取综合治疗[1]。卵巢癌的化疗多采用紫杉醇和铂类为主的联合方案。但由于这类方案毒副反应发生率较     

hMS H2重组质粒对人卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响

目的：研究hMSH2重组质粒对卵巢癌顺铂敏感性方面的影响。方法：构建重组真核表达质粒pCAN－hMSH2,通过酶切及测序法对重组质粒进行鉴定。采用脂质体转染技术对卵巢癌耐药细胞SKOV3／DDP进行瞬时转染,对照组为未转染细胞和SKOV3敏感细胞;hMSH2在细胞内的表达变化由Western blotting和RT－PCR进行检测;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法对细胞的顺铂敏感性进行检测;耐药细胞的凋亡情况通过Hoechst染色法检测。结果：重组质粒pCAN－hMSH2转染进SKOV3／DDP后,经RT－PCR和Western blotting检测证实转染成功,hMSH2的表达得到增强;MTT结果提示转染后的卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性明显增强;Ho-echst染色发现,转染后耐药细胞的凋亡明显增强。结论：hMSH2基因转染后能提高其在SKOV3／DDP细胞中的表达,增强SKOV3／DDP细胞对顺铂的敏感性,促进在顺铂作用下的凋亡。     

PAFR对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及机制研究

背景与目的：目前卵巢癌的治疗方式仍是手术及术后辅助铂类药物为主的化疗,但复发率高,容易耐药。前期研究已证实血小板活化因子受体（platelet-activating factor receptor,PAFR）在上皮性卵巢癌中高表达,且能促进卵巢癌细胞增殖、侵袭及转移。探索顺铂（cisplatin,CDDP）作用后卵巢癌细胞中PAFR的表达变化及其对卵巢癌细胞CDDP敏感性的影响,并对其机制进行初步探讨,旨在为卵巢癌靶向治疗及克服CDDP耐药提供新方法。方法：采用蛋白质印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测不同浓度的CDDP作用于卵巢癌细胞株（SKOV-3和CAOV-3）不同时间后各组细胞PAFR的表达情况。采用Western blot及免疫荧光法验证CDDP作用于卵巢癌细胞后核因子κB（nuclear factor Kappa-B,NF-κB）/p65及缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）的表达。采用Western blot及RTFQ-PCR检测小RNA干扰沉默NF-κB及HIF-1α后PAFR的表达情况。采用细胞增殖和凋亡实验检测抑制PAFR表达后对卵巢癌细胞CDDP敏感性的影响。采用Western blot验证CDDP和（或）PAFR抑制剂作用细胞后下游信号通路关键分子P70S6K/AKT/ERK的变化情况。结果：CDDP能够引起卵巢癌细胞中PAFR表达升高,并呈现剂量及时间依赖性（P＜0.01）。CDDP能够引起转录因子NF-κB及HIF-1α的核聚集,沉默NF-κB及HIF-1α后,CDDP诱导的PAFR表达下降。PAFR特异性小分子拮抗剂WEB2086或RNA干扰抑制PAFR表达均能显著提高卵巢癌细胞对于CDDP的敏感性,即细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）,而凋亡率明显升高（P＜0.01）。CDDP作用于卵巢癌细胞后,表达升高的PAFR能够激活下游的AKT及ERK信号通路分子。结论：CDDP作用于卵巢癌细胞后能够引起转录因子NF-κB及HIF-1α的核聚集从而上调PAFR的表达。抑制PAFR表达能够增加卵巢癌细胞对CDDP的敏感性,可能成为卵巢癌靶向治疗的新方法。     

紫杉醇联合顺铂腹腔注射晚期卵巢癌患者的疗效及对生存期的影响

目的探讨紫杉醇联合顺铂腹腔注射治疗晚期卵巢癌的临床疗效,以及对患者生存期的影响。方法选取卵巢癌患者120例,随机分为观察组与对照组。两组均采用紫杉醇联合顺铂静脉化疗,观察组同时给予腹腔注射治疗。结果观察组治疗有效率为78.33%,对照组有效率为60.00%。观察组有效率明显高于对照组(P<0.05)。观察组腹腔积液控制有效率为84.21%,对照组有效率为63.89%,观察组明显高于对照组(P<0.05)。观察组1年生存率为91.67%,2年生存率为78.33%,3年生存率为68.33%。对照组1年生存率为78.33%,2年生存率为60.00%,3年生存率为50.00%。观察组生存率明显高于对照组(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较无显著差异(P>0.05)。结论紫杉醇联合顺铂腹腔注射治疗晚期卵巢癌的临床疗效显著,且生存期长。     

阿帕替尼联合TP方案治疗铂敏感复发卵巢癌67例疗效分析

摘 要：［目的］ 探讨阿帕替尼联合紫杉醇与铂类药物（TP）方案治疗铂敏感复发卵巢癌的近远期疗效及不良反应,评估其安全性。［方法］ 选择肿瘤内科收治的铂敏感复发卵巢癌患者134例,对照组给予TP方案治疗,观察组在对照组基础上加用阿帕替尼,评价近远期疗效,检测血清肿瘤标志物并记录不良反应。［结果］ 观察组客观缓解率和疾病控制率均高于对照组（P<0.05）。治疗后,两组患者血清CA125、HE4水平均低于治疗前,观察组血清CA125和HE4水平均低于对照组（P<0.05）。治疗后,两组患者血液学毒性、肝肾毒性、神经毒性等不良反应相比无统计学差异（P>0.05）,观察组消化道反应、血压升高发生率较对照组高（P<0.05）。治疗后两组患者生活质量和卡氏功能状态评分均高于治疗前,且观察组高于对照组（P<0.05）。随访12个月,观察组中位生存时间9个月,高于对照组中位生存时间7个月（P<0.05）。［结论］ 阿帕替尼联合TP方案治疗铂敏感复发卵巢癌患者,临床疗效好,可降低血清肿瘤标志物水平且不增加不良反应。     

吗啡联合顺铂对卵巢癌细胞Skov3增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的 探讨吗啡（Mor）联合顺铂（DDP）对人卵巢癌Skov3细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度Mor（10、20、50、100、200 μmol／L）和DDP（1、2、5、10、20 mg／L）作用于Skov3细胞24、48、72、96 h后的增殖抑制率,筛选适合的浓度进行后续功能学研究。取对数生长期Skov3细胞分为4组：Mor（200 μmol／L）组、DDP（20 mg/L）组、Mor+DDP（200 μmol／L Mor+20 mg/L DDP）组和未加药对照组,分别采用流式细胞仪和实时定量PCR检测各组处理48 h的细胞凋亡率及凋亡相关基因（Bax、Bcl-2和caspase-3）的mRNA水平,采用Transwell试验和Western blotting检测各组处理48 h后穿膜细胞数和侵袭相关蛋白（MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2）水平。结果 随Mor（10～200 μmol／L）和DDP（1～20 mg／L）浓度增加,Skov3细胞的增殖能力受抑制,且抑制效应呈浓度和时间依赖方式;Mor+DDP组处理24、48、72、96 h后的增殖抑制率高于Mor组、DDP组和对照组（P＜0.05）。与对照组相比,Mor、DDP和Mor+DDP组的细胞凋亡率、caspase-3活化率、Bax mRNA、caspase-3 mRNA、TIMP-1和TIMP-2水平均升高,Bcl-2 mRNA、穿膜细胞数、MMP-2和MMP-9水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;Mor+DDP组的上述指标水平均优于Mor组和DDP组（P＜0.05）。结论 Mor和DDP对Skov3细胞均有细胞毒性,能抑制增殖及侵袭转移并诱导凋亡,且Mor联合DDP应用的抑制作用增强。     

伊立替康联合顺铂治疗复发转移性卵巢癌

目的:观察伊立替康联合顺铂治疗复发转移性卵巢癌的疗效与安全性。方法:对11例复发性卵巢癌应用伊立替康200mg/m2,静滴,第1天;顺铂25 mg/m2,静滴,第1-3天,21天为1个周期,2个周期后进行一次疗效评价。结果:11例患者中完全缓解1例,部分缓解6例,总有效率为63.6%;主要不良反应为血液毒性,Ⅲ-Ⅳ度中性粒细胞下降36.3%(4/11),其次为恶心、呕吐,Ⅲ-Ⅳ度恶心、呕吐为27.3%(3/11),仅1例出现Ⅲ度腹泻。结论:伊立替康联合顺铂治疗复发转移性卵巢癌是可行、安全、有效的。     

醋酸甲羟孕酮体外诱导卵巢癌SKOV-3细胞株凋亡的研究

目的:研究醋酸甲羟孕酮体外诱导卵巢癌SKOV-3细胞株凋亡的作用机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度醋酸甲羟孕酮(1×10-4、1×10-3、1×10-2和1×10-1 mmol/L)和LY294002(PI3K抑制剂,1.4×10-3 mmol/L)对人卵巢上皮癌SKOV-3细胞株生长的抑制作用.蛋白质印迹法检测不同浓度醋酸甲羟孕酮作用下,细胞内Akt、p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平的变化.结果:醋酸甲羟孕酮以剂量依赖方式抑制SKOV-3细胞的体外增殖(P<0.01),这种抑制作用可被LY294002所阻断.随着醋酸甲羟孕酮使用剂量的增大,SKOV-3细胞内p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平逐步降低,P<0.05.与对照组相比,醋酸甲羟孕酮浓度为1×10-4 mmol/L时,p-Akt表达量下降约28%,Bcl-2表达量下降约10%;当醋酸甲羟孕酮浓度上升至1×10-1 mmol/L时,p-Akt表达量下降约35%,Bcl-2表达量下降约27%.不同药物浓度组间Akt表达水平差异无统计学意义,P>0.05.结论:醋酸甲羟孕酮能够体外诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡,可能与抑制Akt发生磷酸化相关.     

miR-455-3p 通过靶向调控转脂蛋白4 抑制卵巢癌细胞SKOV-3 的增殖、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探讨miR-455-3p 对卵巢癌细胞SKOV-3 增殖、迁移能力及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并研究其作用机制。方法：人卵巢上皮细胞株IOSE80、卵巢细胞系SKOV-3 和A2780 细胞培养完成后,将miR-455-3p mimic 及其阴性对照分别瞬时转染至细胞中。qPCR 实验检测IOSE80、SKOV-3 和A2780 细胞miR-455-3p 和转脂蛋白4（fatty acid-binding protein 4,FABP4）mRNA表达水平,Wb检测FABP4 和EMT相关蛋白的表达水平,CCK-8 法检测细胞增殖活性,Transwell 实验用于评估细胞迁移能力,生物信息学预测miR-455-3p 的靶基因,应用双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p 与FABP4 的靶向关系。结果：与正常卵巢上皮细胞IOSE80 相比,卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780 中miR-455-3p 低表达（均P<0.05）,而FABP4 高表达（均P<0.05）。此外,过表达miR-455-3p 明显抑制SKOV-3 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.05）。过表达miR-455-3p 通过上调E-cadherin 表达、下调N-cadherin 和Vimentin 表达而抑制EMT进程（均P<0.05）。FABP4 是miR-455-3p 的靶基因,且miR-455-3p 能特异性结合FABP4 3’-UTR,并负调控其表达水平（P<0.05）。过表达FABP4 能够明显逆转miR-455-3p 对SKOV-3细胞增殖和迁移的抑制作用（均P<0.05）。结论：miR-455-3p 在卵巢癌中作为一个抑癌蛋白,通过靶向调控FABP4 从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及EMT,有望成为卵巢癌新的潜在治疗靶点。     

手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO的增殖抑制作用

目的:研究手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO体外增殖及裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其机制。方法:MTT法检测手霉素及手霉素联合顺铂对3AO细胞的体外增殖抑制作用;建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,采用免疫组织化学SP法检测手霉素及手霉素联合顺铂对移植瘤组织survivin、NF-κB、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和caspase-3蛋白的表达,FCM检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率的变化。结果:手霉素对3AO细胞的增殖有明显抑制作用,且呈时间和剂量依赖效应(P<0.05)。手霉素可增强顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用,随着手霉素浓度的增加(10～40 μmol/L),对3AO细胞的增殖抑制作用增强。手霉素或顺铂单药组以及联合用药组的裸鼠移植瘤体积均明显小于对照组,其中联合用药组裸鼠移植瘤体积明显小于手霉素或顺铂单药组(P<0.05)。各给药组裸鼠移植瘤组织中survivin、NF-κB和VEGF蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),其中联合用药组又明显低于各单药组(P<0.05);各给药组caspase-3蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。手霉素单药组、顺铂单药组和手霉素联合顺铂组的细胞凋亡率依次升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,G0/G1期细胞依次减少(P<0.05),G2/M期细胞依次增多(P<0.05),S期细胞变化不明显。结论:手霉素联合顺铂可明显抑制3AO细胞的体内外增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin、NF-κB和VEGF以及上调caspase-3蛋白的表达有关。     

Twist下调影响卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性的研究

目的:探讨Twist对卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性及细胞增殖凋亡的影响。方法:通过Western blot筛选细胞株,构建小干扰RNA,qPCR筛选Twist-siRNA,将构建成功的Twist-siRNA逆转录于上皮性卵巢癌细胞株A2780中,通过CCK-8细胞术及流式细胞术,研究下调Twist对卵巢癌细胞株的增殖、凋亡及对化疗药物顺铂的影响。结果:选择人卵巢癌细胞株A2780,引入小干扰RNA后,Twist表达降低;细胞的增殖能力下降,凋亡增加（P＜0.05）,差异有统计学意义。si-Twist组相比对照组Twist基因的表达量明显降低, 且呈现一定的顺铂浓度依懒性差异(P<0.05）。结论:下调Twist可抑制卵巢癌细胞A2780的增殖,促进其凋亡;下调Twist卵巢癌细胞A2780对顺铂的敏感性增加。     

去甲斑蝥素衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用及机制初步探讨

背景与目的:去甲斑蝥素(norcanthridin,NCTD)是斑蝥素(canthridin)的衍生物,对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但其药效较同类化疗药物小.本研究探讨NCTD衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抗增殖作用,同时与NCTD的作用进行比较,并初步探讨Nd3的作用机制.方法:采用增殖抑制实验分别测定Nd3和NCTD对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析Nd3对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的改变.Western blot方法检测Nd3对SKOV3细胞周期和凋亡相关蛋白Cdc2、Cyclin B1、Bax和Bcl-2表达的影响.结果:2.5、5、10、20、30和40 μmol/L的Nd3作用SKOV3细胞48 h后,细胞抑制率依次为27.3%、34.1%、53.3%、64.3%、83.3%和96.7%,与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.001).Nd3作用24 h、36 h和48 h的IC50分别为(25.1±2.3)μmol/L、(21.8±2.8)μmol/L和(20.4±3.3)μmol/L.细胞周期分析证实,10、20、30、40 μmol/L Nd3作用48 h后,G2/M期细胞百分数为14.3%、20.2%、26.2%和27.9%:同时30 μmol/L的Nd3作用12、24、36、48 h后,G2/M期的细胞比例分别为19.8%、26.6%、27.8%和32.0%,呈现G2/M期阻滞.此外Nd3可以诱导SKOV3细胞凋亡,40 μmol/L的Nd3作用48 h后细胞凋亡率高于对照组30%以上.Western blot结果表明,Nd3可使Bax蛋白的表达增高,而Cdc2、Cyclin B1和Bcl-2的表达则相应减少.结论:Nd3能明显抑制SKOV3细胞的增殖,其作用比NCTD强,且可阻断SKOV3细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制与Cdc2、Cyclin B1、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化有关.     

PTEN基因增强卵巢癌A2780细胞对紫杉醇敏感性的研究

背景与目的:近来的研究表明PTEN基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因)失活在肿瘤化疗耐药发挥了重要作用。本文研究外源性PTEN基因稳定转染人卵巢癌A2780细胞后对紫杉醇敏感性的影响。方法:将野生型PTEN基因真核表达质粒在脂质体介导下转染人卵巢癌A2780细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照(3组细胞分别命名为WT-PTEN/A2780,GFP/A2780和A2780),分别应用RT-PCR和蛋白印迹技术检测各组细胞PTEN mRNA转录和蛋白表达的变化;四甲基偶氮唑蓝实验观察转染PTEN基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和A2780细胞对紫杉醇药物敏感性的影响,流式细胞仪(FACS)分析细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,转染野生型PTEN基因能明显增加A2780细胞PTENmRNA转录和蛋白的表达,差异有显著性(P<0.05);MTT法显示,WT-PTEN/A2780细胞生长明显慢于GFP/A2780和A2780细胞;紫杉醇对WT-PTEN/A2780,GFP/A2780和A2780的IC50值分别为(7.6±0.40)nmol/l、(22.5±0.9)nmol/l和(22.7±0.8)nmol/l,WT-PTEN/A2780细胞对紫杉醇药物敏感性显著增加(P<0.05);FACS分析显示,紫杉醇作用24h后,WT-PTEN/A2780,GFP/A2780和A2780的凋亡率分别为(34.6±1.6)%、(13.5±0.9)%和(12.7±1.0)%,差异有显著性(P<0.05)。结论:转染野生型PTEN重组质粒能有效提高A2780细胞内PTEN的表达,诱导A2780细胞凋亡,显著增加A2780细胞对紫杉醇杀伤的敏感性。     

EGFR特异性siRNA促进卵巢癌细胞凋亡的研究

目的观察EGFR基因特异性短发卡状小干扰RNA（siRNA）对人类卵巢癌细胞Skov-3细胞凋亡的影响。方法构建pshRNA—EGFRsiRNA真核基因表达载体，采用脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株Skov-3。实验分为3组：空白对照组（未经转染的人类卵巢癌Skov-5细胞）、非特异性转染组（转染非特异性质粒载体）及特异性转染组。用RT—PCR方法检测mRNA水平的变化，免疫细胞化学方法检测EGFR蛋白水平的变化，流式细胞术检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果与空白对照组和非特异转染组相比，转染pshRNA—EGFR后，Skov-3细胞中EGFRmRNA拷贝数明显减少，EGFR蛋白表达水平明显降低。凋亡细胞明显增多，呈时间依赖性，而空白对照组和非特异性转染组无明显的凋亡。结论靶向EGFR基因的siRNA表达载体可以显著抑制其在人类卵巢癌Skov-3细胞的表达，促进细胞凋亡，为卵巢癌的基因治疗提供新的思路。