脑益康药物血清对D-半乳糖致海马神经元凋亡的影响

目的 观察脑益康对D-半乳糖诱导海马神经元凋亡的影响.方法 制备脑益康药物血清.应用D-半乳糖诱导海马神经元损伤,测定细胞存活率及细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量,检测海马神经元Bcl-2 mRNA的表达.结果 脑益康药物血清可显著提高细胞存活率和SOD及GSH-Px活力(均P＜0.01),降低MDA含量(P＜0.01),上调Bcl-2 mRNA的表达(P＜0.05).结论 脑益康可通过提高海马神经元的自由基清除能力,减轻脂质过氧化损伤,上调Bcl-2 mRNA的表达来对D-半乳糖损伤的海马神经元发挥保护作用,减少细胞凋亡.     

D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆行为改变及对海马神经发生的影响

目的 探讨D-半乳糖衰老模型小鼠学习记忆行为变化及对海马齿状回细胞增殖的影响.方法 采用连续皮下注射D-半乳糖构建亚急性衰老小鼠模型,用Y-电迷宫检测衰老小鼠的学习记忆情况,并于造模完成前7 d腹腔内注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),行为检测完成后,取海马脑块行常规石蜡包埋,冠状连续切片,采用免疫组化法检测齿状回BrdU阳性细胞并计数.结果 衰老模型小鼠呈现明显的学习记忆减退,其齿状回增殖细胞数量与正常衰老相近.结论 采用连续皮下注射D-半乳糖可成功构建衰老模型,其学习记忆障碍可能与齿状回细胞增殖抑制有关.     

D-半乳糖诱导原代培养的海马神经元内cyclin D1的异常表达

目的探讨细胞周期蛋白cycylin D1海马神经元损伤的表达情况。方法在原代培养的海马神经元的第6天,加入50 mmol/L D半-乳糖作用72 h,制备D-半乳糖致神经元损伤模型,HE染色观察神经元形态变化,免疫细胞化学方法检测神经元的纯化程度,免疫印迹及免疫荧光染色检测cyclin D1的表达。结果体外培养的海马神经元经纯化后其纯度可达90%以上,对照组神经元胞浆中cyclin D1免疫荧光显色,胞核不显色,而D-半乳糖损伤组神经元胞浆中cyclin D1免疫荧光显色,而胞核中呈强阳性表达,Western bloting检测显示损伤组细胞中cyclin D1表达增强,即发生了明显的核转位。结论D半-乳糖可引起原代培养的海马神经元内cyclin D1发生核转位,提示cyclin D1可能参与了对神经元损伤的作用。     

D-半乳糖亚急性衰老大鼠模型的建立及评价

目的建立D-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型,对该模型进行探讨和评价。方法健康青年SD大鼠共60只,雌雄各半。分别分为2组,半乳糖组大鼠皮下每天注射半乳糖400 mg/kg,对照组每天注射等量生理盐水;老年鼠20只,雌雄各半,不做处理。实验开始后,每周记录体重变化情况,第7周末测试大鼠空间学习能力,第8周末测试大鼠空间记忆能力,计算大鼠胸腺、脾脏、睾丸和卵巢的脏器系数,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果半乳糖注射4 w后,雄性大鼠的体重比对照组显著性降低(P<0.05),注射6 w后,体重差异非常显著性降低(P<0.01);半乳糖组雌雄大鼠的空间学习能力和记忆能力较对照组显著性降低(P<0.05),听力阈值显著增加(P<0.05),胸腺指数非常显著性降低(P<0.01),雄性大鼠睾丸系数显著性降低(P<0.05),血清SOD活性显著性降低(P<0.05),MDA含量显著性增高(P<0.05);其余实验结果组间比较差异没有显著性(P>0.05)。结论 D-半乳糖皮下注射8 w可以复制出与24月龄老年大鼠自然衰老程度相似的亚急性衰老模型,雄性大鼠优于雌性大鼠。     

氧化应激对D-半乳糖致衰老小鼠的影响

目的 探讨氧化应激与衰老的相互关系.方法 应用腹腔注射D-半乳糖方法建立衰老模型,观察实验小鼠的外观特征,测定其运动能力、免疫器官指数(胸腺指数、脾脏指数)、脾淋巴细胞增殖活性、血清和脑组织中的SOD及MDA含量,并进行统计学分析.结果 与对照组相比,D-半乳糖腹腔注射后小鼠运动能力、脾指数、胸腺指数及脾细胞增殖活性下降(均P＜0.01),SOD的活性降低(P＜0.01),MDA的含量升高(P＜0.01).结论 氧化应激参与了衰老的发生发展过程,降低了机体的免疫功能和抗氧化能力.     

褪黑素对D-半乳糖拟衰老小鼠海马线粒体膜流动性的影响

目的　研究褪黑素 (MT)对拟衰老小鼠海马线粒体膜流动性的影响。方法　 D-半乳糖诱导昆明小鼠衰老同时腹腔注射外源性褪黑素连续 8w,以 DPH为荧光探针 ,检测小鼠海马线粒体膜粘滞系数 ,同时测定线粒体悬液丙二醛含量。结果　衰老组小鼠海马线粒体膜流动性降低 ,MDA生成增加 ,给予 MT (5mg/ kg· d- 1　 ip)明显提高膜流动性 ,MDA生成显著减少 (均 P<0 .0 1 )。结论　药理剂量 MT (5mg/ kg)对 D-半乳糖衰老小鼠膜脂质过氧化损伤具保护作用     

腹腔和皮下注射D-半乳糖衰老大鼠模型分析

目的 探讨腹腔和皮下注射D-半乳糖建立衰老大鼠模型间的差异.方法 分别腹腔和皮下连续注射D-半乳糖40d后,称量大鼠体重,取血测血糖、C反应蛋白(CRP)、丙二醛(MDA)含量;总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.取胸腺、脾脏、皮肤和脑组织,称量胸腺和脾脏重量,测脑组织单胺氧化酶(MAO-B)活性和皮肤羟脯氨酸含量,同时制作切片.结果 经过比较发现,皮下注射组CRP含量较腹腔注射组高(P＜0.05);T-SOD活性和GSH-Px活性较腹腔注射组高(P ＜0.01);MDA含量较腹腔注射组低(P＜0.01);皮肤羟脯氨酸含量较腹腔注射组低(P＜0.05),但脑组织MAO-B活性、胸腺指数、脾脏指数和血糖并无明显差异.结论两种方法均能建立稳定可靠的衰老大鼠模型.两种模型均能在多层面上反映出机体的衰老情况,腹腔注射法在构建大鼠衰老模型上效果更明显.     

卷柏总黄酮对D-半乳糖衰老模型小鼠的影响

目的研究卷柏总黄酮对D-半乳糖(D-gal)致衰老模型小鼠的影响。方法昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(给予600 mg/kg复方吡拉西坦蛋白水解物片混悬液)、卷柏总黄酮高中低3个剂量组(分别灌服800、400和200 mg/kg的卷柏总黄酮混悬液),除正常对照组外,其余5个试验组小鼠每日均颈背部皮下注射5%D-gal 0.25 ml/10 g,连续注射6 w建立衰老动物模型,正常对照组小鼠颈背部皮下注射等量生理盐水。于试验第3周开始给予供试品,各组小鼠均按20 ml/kg体积灌胃给药,正常对照组,模型组灌服蒸馏水,连续给药4 w。采用酶法测定脑组织匀浆的蛋白质含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果卷柏总黄酮高、中剂量组均能明显增加衰老小鼠胸腺指数和脾脏指数(P0.01或P0.05)。卷柏总黄酮能够显著提高D-gal诱导的亚急性衰老小鼠机体组织SOD活性,降低MDA含量。结论卷柏总黄酮可显著改善D-gal衰老模型小鼠的衰老指征,能明显抵抗由D-gal所致衰老小鼠免疫器官的萎缩,使D-gal衰老模型小鼠大脑SOD活性增加、MDA含量下降,具有抗氧化、抗衰老作用。     

何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶表达的影响

目的 通过观察何首乌饮干预的衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶(β-gal)表达的改变,探讨何首乌饮的抗衰老作用.方法 用D-半乳糖制造衰老大鼠模型,何首乌饮的干预作用分治疗和预防两部分,检测β-半乳糖苷酶活性,观察下颌下腺衰老细胞数目改变.结果 预防性实验部分:模型组衰老细胞数目多于正常组和各预防性用药组;治疗性实验部分:用药各组与自然恢复组相比,衰老细胞数目明显减少,其中治疗中剂量组最低.结论 何首乌饮具有抗模型大鼠下颌下腺细胞衰老的作用.     

金属硫蛋白对D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆的影响

目的 观察不同剂量金属硫蛋白(MT)对D-半乳糖致衰老大鼠模型的学习记忆的改善作用.方法 Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、MT剂量组(低0.46、中1.4和高4.2 mg/kg),每组10只.采用跳台法和Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆功能,HE染色观察大鼠海马神经元形态变化,生化酶学法检测AChE、MAO-B、ChAT活性,黄嘌呤氧化酶法测定SOD,TBA法测定MDA.结果 D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆能力明显下降,海马神经元核固缩;海马AChE、MAO-B活性明显增加(P＜0.01),ChAT活性明显降低(P＜0.01),给予外源性MT能以剂量依赖性的方式改善D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆能力的损害、海马神经元损伤,并能明显阻遏D-半乳糖致衰老大鼠的海马AChE与MAO-B活性增加(低剂量组P＜0.05,中、高剂组P＜0.01),以及ChAT活性的降低(低剂量组P＜0.05,中、高剂量组P＜0.01).结论 MT能够改善D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆功能,延缓脑组织的衰老.     

Effects of dihydrotestosterone on synaptic plasticity of hippocampus in male SAMP8 mice

The senescence-accelerated-prone mouse 8 (SAMP8) has been proposed as a suitable, naturally derived animal model for investigating the fundamental mechanisms of Alzheimer's disease (AD). In addition, the serum testosterone levels decrease quickly in the natural growth process of this model. This study investigated the effect of androgen deficiency on the synaptic plasticity of hippocampus in male SAMP8 mice after castration and dihydrotestosterone (DHT) administration. We observed the dendritic spines and synapses using Golgi staining and transmission electron microscope. Androgen deficiency after castration significantly reduced the number of apical dendritic thorns, and the abnormal ultrastructure of excitatory synapses was more obvious. Androgen replacement therapy reversed this change. To explore the protective mechanisms and neurological basis of DHT, we researched the changes of expression of GluN1 subunit-containing N-methyl-d-aspartate receptors (NMDARs) and synaptophysin (SYN), which are closely related to synaptic plasticity. Comparisons were made among results observed with immunohistochemistry techniques, Western blots analysis and RT-PCR analysis. The GluN1 and SYN regulation at the protein and mRNA levels probably be related to the DHT-induced morphological synaptic plasticity. This study will be helpful for understanding the function of androgen, and it provides a valuable theoretical basis about the protective and therapeutic targets of androgen in AD.     

D-半乳糖致衰老大鼠单胺类神经递质的改变

目的 建立大鼠的衰老模型,研究衰老形成的机理。方法 ２０只ＳＤ大鼠随机分成２组,第１组腹腔注射Ｄ－半乳糖６０ｍｇ／ｋｇ,第２组腹腔注射生理盐水,每日１次,４２ｄ后用Ｙ迷宫测定大鼠学习和记忆功能,然后迅速处死大鼠,取海马测定单胺类神经递质代谢产物水平,结果 半乳糖化ＳＤ大鼠海马内３－甲氨基－４－羟基苯乙二醇（ＭＨＰＧ０,５－羟基吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）水平显著降低,高香草酸（ＨＶＡ）水平无明显改变。     

左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类和单胺类神经递质含量变化的影响

目的 观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类神经递质Asp、Glu、Gly、GABA和单胺类神经递质5-HT、NE含量变化的影响，探讨老年机体神经元的神经递质的变化，以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退化的作用机制。方法 以自然衰老大鼠为动物模型，分设4组：青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用HPLC-荧光法，检测各组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、gly、GABA含量变化；采用ELISA法，检测5-HT、NE含量变化。结果 与青年对照组相比，老年对照组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、Gly、GABA含量有不同程度升高，而与老年对照组相比，两用药组含量有不同程度降低。同时，老年对照组大鼠海马NE含量减少，左归丸组能提高老年大鼠海马NE含量。而各组大鼠5-HT含量无明显差异。结论 左归丸、右归丸通过不同程度地纠正老年大鼠海马和杏仁核脑区氨基酸类和单胺类神经递质的紊乱状态，使兴奋性和抑制性神经递质趋向平衡，从而有助于改善大脑边缘系统，延缓机体衰老。     

Effects of amino acid supplementation on myocardial cell damage and cardiac function in diabetes

Although amino acid deficiencies are known to occur in diabetes patients and are considered to contribute to the occurrence of cardiomyopathy, the mechanisms of the impact of the restoration of amino acids on improved cardiac function are not completely understood. Accordingly, the present study was conducted to examine the beneficial effects of dietary supplementation of taurine, arginine and carnitine, individually or in combination, in an experimental model of chronic diabetes. For inducing diabetes, rats received a single injection of streptozotocin (65 mg/kg body weight). Experimental animals were treated (by oral gavage) daily for three weeks with amino acids before the induction of diabetes; this treatment was continued for an additional eight-week period. Diabetes was observed to induce cardiac dysfunction, myocardial cell damage, and changes in plasma glucose and lipid levels. Treatment of diabetic animals with taurine, unlike carnitine or arginine, attenuated alterations in cardiac function, as evidenced by echocardiography and in vivo catheterization techniques. Taurine, carnitine and arginine, individually or in combination, attenuated diabetes-induced cell damage as revealed by electron microscopy. While carnitine alone reduced plasma levels of triglycerides with an increase in high-density lipoprotein cholesterol, none of the amino acids, alone or in combination, had an effect on myocardial glycogen content, lipid accumulation or hyperglycemia. These results suggest that dietary supplementation of taurine attenuates diabetes-induced changes in cardiac contractile function and ultrastructure without any alterations in plasma lipid and glucose levels.     

快速眼动睡眠剥夺后大鼠皮质及海马神经元突触相关蛋白神经颗粒素表达的变化

目的:探讨不同时间的快速眼动(REM)睡眠剥夺对大鼠皮质及海马各区神经颗粒素分子表达变化的影响及意义。方法:Sprague-Dawley大鼠70只,随机分为睡眠剥夺组(SD)、实验环境对照组(TC)和空白对照组(CC)。其中SD组又分为12h、1d、3d、5d、7d共5个时点组。采用改良多平台(MMPM)睡眠剥夺法进行REM睡眠剥夺,运用免疫荧光染色共聚焦显微镜观察REM睡眠剥夺后不同时点大鼠皮质及海马各区的神经颗粒素表达的分布规律和时空变化;同时结合蛋白印迹(Western blot)技术对皮质及全海马神经颗粒素蛋白作选择性半定量分析。结果:神经颗粒素主要分布于正常大脑皮质Ⅱ、Ⅲ层的神经元胞体和树突、海马CA1～CA3锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层内。REM睡眠剥夺12h后大鼠皮质神经颗粒素的表达即开始减少,与对照组比较有显著性差异,直至第7d均呈下降趋势;海马结构中神经颗粒素表达未见显著变化。蛋白印迹实验印证了这一结果。结论:REM睡眠剥夺能引起大鼠大脑皮质神经颗粒素表达减少,且随睡眠剥夺时间的延长而渐趋明显,这可能是REM睡眠剥夺引起大脑神经元突触可塑性改变,进而影响大鼠学习记忆功能损害的机制之一。     

APP5肽类似物P165对糖尿病小鼠海马突触蛋白的影响

目的探讨β-淀粉样前体蛋白（APP）5肽类似物P165对糖尿病小鼠海马神经元α-突触核蛋白（α-Syn）、Shank1和突触后致密物质95（PSD-95）的影响。方法链脲佐菌素腹腔注射诱发DM小鼠模型，P165灌胃治疗。5周后，行灌注固定，海马CA1区α-Syn、Shank1和PSD-95免疫组织化学染色。结果与对照组相比，糖尿病（DM）组α-Syn阳性细胞增多（P〈0.01），胞浆突起深染，Shank1和PSD-95阳性细胞减少，染色浅（P〈0.01）；与DM组相比，P165治疗组α-Syn阳性细胞减少（P〈0.05），胞浆突起染色变浅；Shank1和PSD-95阳性细胞增多（P〈0.05），胞浆突起深染。结论糖尿病小鼠海马神经元存在突触蛋白表达的异常，P165可改善DM小鼠海马神经元突触蛋白的表达。     

肝硬化与肝癌患者血浆氨基酸分析

目的探讨肝硬化与肝癌患者血浆氨基酸变化及其临床意义。方法用日立835氨基酸分析仪对46例肝硬化患者和44例肝癌患者血浆氨基酸进行测定。方法用日立835氨基酸分析仪对46例肝硬化患者和44例肝癌患者血浆氨基酸进行测定。结果肝硬化时血浆谷氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、酪氨酸显著升高（P〈0.01）,苏氨酸、苯丙氨酸明显升高（P〈0.05）;肝癌时血浆苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸显著升高（P〈0.01）,丝氨酸明显升高（P〈0.05）;两组中BCAA/AAA（支链氨基酸/芳香族氨基酸）比值均较正常对照组显著降低（P〈0.01）,缬氨酸、亮氨酸较正常对照组明显降低（P〈0.05）。说明以上血浆氨基酸分析与对照组之间的差异有统计学意义。结论血浆氨基酸分析对肝硬化与肝癌诊断和治疗有一定指导意义。     

Effects of ethanol on excitatory and inhibitory synaptic transmission in rat cortical neurons

BACKGROUND: The gamma-aminobutyric acid-A (GABA(A)) receptor and glutamate receptors are among the most important target sites for the behavioral effects of ethanol. However, data in the literature concerning the ethanol modulation of the GABA(A) and glutamate receptors have been controversial. The activity of the neuronal nicotinic acetylcholine (ACh) receptors (nAChRs) has recently been reported to be potently augmented by ethanol. The activation of nAChRs is also known to cause the release of various neurotransmitters including GABA and glutamate. Thus, ethanol potentiation of nAChRs is expected to stimulate the GABAergic and glutamatergic systems. METHODS: Whole-cell patch clamp experiments were performed using rat cortical neurons in primary culture to record spontaneous miniature inhibitory postsynaptic currents (mIPSCs) and spontaneous miniature excitatory postsynaptic currents (mEPSCs). RESULTS: Two types of neurons were distinguished: bipolar neurons possessed alpha4beta2 nAChRs generating a steady current in response to 30 nM ACh, and multipolar neurons that did not generate a current by ACh application. Acetylcholine greatly increased the frequency of mEPSCs and mIPSCs in bipolar neurons but not in multipolar neurons. The amplitude of neither type of neuron was affected by ACh. Ethanol at 10 to 100 mM suppressed the amplitude of mEPSCs while augmenting the amplitude of mIPSCs in both bipolar and multipolar neurons, indicating the direct action on the respective receptors. In bipolar neurons, ACh plus 100 mM ethanol greatly increased the frequency of mIPSCs beyond the levels achieved by ACh alone, while no such increases were observed in multipolar neurons. CONCLUSIONS: It is concluded that ethanol stimulation of nAChRs modulates the activity of both glutamate and GABA receptors in rat cortical bipolar neurons.     

中性氨基酸对帕金森病发生干预的实验研究

目的探讨中性氨基酸干预帕金森病发生的作用机制.方法分别在应用百草枯建立的帕金森病小鼠模型的前后腹腔注射中性的左旋缬氨酸（L-Val）、左旋苯丙氨酸（L-Phe）、右旋缬氨酸（D-Val）及碱性的左旋赖氨酸（L-Lys）,采用免疫组化、Western印迹法观察小鼠脑黑质部位百草枯沉积以及多巴胺能神经元变性和α-突触核蛋白（α-Syn）聚集的改变.结果在应用百草枯之前注射L-Val、L-Phe,小鼠脑黑质部位百草枯染色明显减弱,多巴胺能神经元变性及a-Syn聚集均明显减少;而在应用百草枯之后注射,则变化不明显.以同样方式注射D-Val及L-Lys,多巴胺能神经元变性及α-Syn聚集改变也不明显.结论L-Val、L-Phe等左旋中性氨基酸具有竞争性抑制百草枯进入中枢神经系统的作用,并且具有结构特异性,对帕金森病的发生可以起到预防性保护作用。     

高蛋白饮食及氨基酸对胰岛功能的影响

2型糖尿病的高发病率与环境冈素特别是当前不合理的饮食方式有关.多数研究显示,短期高蛋白饮食可刺激正常个体胰岛素分泌;对肥胖个体不影响空腹血糖,并可减轻体重,降低空腹胰岛素、稳态模型-胰岛素抵抗指数,增强胰岛素敏感性;另外,也可以显著降低2型糖尿病患者糖化血红蛋白(Hb)Alc和餐后血糖.然而,长期高蛋白饮食对胰岛功能的影响研究很少,尤其是对正常个体究竟是否存在像糖毒性、脂毒性那样所谓的"蛋白毒性",目前还没有定论.氨基酸对胰岛功能的影响方面,比较肯定的是精氨酸、丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸、色氨酸对胰岛β细胞具有促分泌作用,半胱氨酸具有抑制作用,而亮氨酸对胰岛β细胞的作用存在争议,且机制尚未阐明.明确氨基酸对胰岛功能的影响,有助于进一步了解高蛋白对胰岛功能的影响以及明确高蛋白与糖尿病发生的关系.