蛔虫粗抗原对人肺腺癌细胞凋亡中白细胞介素6和转化生长因子β分泌的影响

目的探讨蛔虫粗抗原对人肺腺癌细胞株(A549)凋亡,以及白细胞介素(IL-6)和转化生长因子β(TGF-β)分泌的影响。方法收集新鲜蛔虫虫体,制备蛔虫粗抗原。将A549细胞分别与低、中、高浓度的蛔虫粗抗原(蛋白浓度分别为25、125和500μg/ml)共培养,即低浓度组、中浓度组和高浓度组,同时设A549细胞+培养液的阴性对照组和阿霉素阳性对照组。用流式细胞术、ELISA和实时定量PCR(q PCR)分别检测作用1、18和24 h后A549细胞凋亡率和细胞周期,以及IL-6和TGF-β细胞因子水平和m RNA水平。结果 3个浓度的蛔虫粗抗原作用于细胞1、18和24 h后,细胞凋亡率均显著高于同时间点的阴性对照组(P0.01)。其中,中浓度组作用18 h后细胞凋亡率最高,为(47.10±3.68)%。细胞周期检测结果显示,中浓度组作用18 h后,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,与阴性对照组间差异有统计学意义(P0.01)。ELISA检测结果显示,相同作用时间下,A549细胞IL-6水平大多随蛔虫粗抗原作用浓度的增加而升高,TGF-β水平随着蛔虫粗抗原浓度和作用时间的不同,无明显的变化趋势。q PCR结果显示,中浓度组A549细胞的IL-6和TGF-βm RNA水平在作用18 h后达到最高,分别为5.95±0.31和3.43±0.35,且显著高于阴性对照组(P0.01)。结论蛔虫粗抗原可诱导A549细胞凋亡,并将细胞阻滞在G0/G1期,其调节过程可能有IL-6和TGF-β的参与。     

人IFN-β重组慢病毒的制备及对肺癌细胞增殖的影响

人β干扰素;;慢病毒载体;;基因转染;;A549细胞 %X 目的构建人β干扰素（IFN-β）基因重组慢病毒,体外转染人肺癌A549细胞,观察IFN-β基因的表达及其对A549细胞的增殖抑制作用。方法通过聚合酶链反应（PCR）获得人IFN-β基因,克隆到慢病毒载体,通过转染293细胞包装制备慢病毒液,并体外感染A549细胞,采用RT-PCR及Western Blot检测IFN-β基因在A549细胞中的表达情况。应用MTS法检测转染后对A549细胞增殖的影响。结果 IFN-β基因重组质粒经酶切后电泳结果显示能得到与理论大小相符的片段,基因测序结果与GenBank序列完全一致,重组质粒经鉴定正确,转染293细胞获得病毒滴度为3×107PFU/ml,体外感染A549细胞后,RT-PCR、Western Blot检测IFN-β表达水平明显增高,并可明显抑制A549细胞增殖。结论本研究成功构建IFN-β基因重组慢病毒,体外感染后能够稳定表达并抑制A549细胞增殖,为应用IFN-β基因治疗肺癌奠定初步基础。     

人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导人肺上皮细胞凋亡

目的　探讨人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导体外培养的人肺上皮细胞A549凋亡,以及提取物浓度和作用时间与细胞凋亡的相互关系。　方法　根据四氮唑盐酶还原法(MTT)结果,选用5种不同浓度的提取物诱导人肺上皮细胞凋亡。分别在诱导后的5个时间段,采用苏木素伊红(HE)染色盲法计数和二苯胺法检测DNA断裂率,观察肺上皮细胞凋亡情况。同时对某个时间和浓度组的样本,用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。　结果不同浓度人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导A549细胞凋亡,在5h之内细胞凋亡率随提取物浓度增加而增加,两者呈正相关关系,且细胞凋亡率显著高于对照组(P<005),5h细胞凋亡率达高峰(652%)。　结论　人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物可诱导人肺上皮细胞凋亡,细胞凋亡与其提取物浓度呈明显的相关关系。在时间上表现为双向变化关系,其变化程度同时受提取物浓度的影响     

沉默血管内皮生长因子C对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨沉默血管内皮生长因子(VEGF-C)基因对人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法构建靶向VEGF-C基因的重组慢病毒Lv-siRNA-VEGF-C,将其感染A549细胞,建立VEGF-C基因低表达的A549细胞。Western印迹检测Lv-siRNA-VEGF-C细胞组、空载体Lv-Ctrl对照组及空白A549细胞中VEGF-C蛋白的表达噻唑蓝(MTT)法、Transwell侵袭实验和裸鼠移植瘤模型分别检测各组细胞的增殖和迁移能力。结果与对照相比,VEGF-C基因低表达组细胞中VEGF-C蛋白的表达显著降低,细胞体内、体外增殖活性也明显下降,细胞侵袭能力亦显著降低。结论成功构建的慢病毒介导的针对VEGF-C的干扰载体可有效抑制A549细胞表达VEGF-C蛋白表达,沉默VEGF-C能抑制人NSCLC A549细胞的增殖和侵袭能力。     

携带人TRAIL基因的双靶向溶瘤腺病毒与X线联合抑瘤效应

目的探讨携带人TRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,联合X线照射对A549细胞生长的影响。方法将质粒pPE3-hTRAIL与pSG500用Lipofectamine2000共转染至293细胞内同源重组,包装出的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,采用PCR法进行鉴定,并在293细胞中大量扩增病毒,采用50%组织培养感染计量法测定病毒滴度,以MOI为5的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL感染A549细胞24 h,用RT-PCR法检测hTRAIL基因在肿瘤细胞中的表达。用不同MOI值(0.01～40)的CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,感染5 d,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对A549细胞的细胞存活率,以便确定适宜的感染滴度。用CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,感染后48 h,用不同剂量的X线(1和2 Gy)照射,照射后3 d,通过MTT比色法检测CNHK500-hTRAIL联合X线照射下A549细胞的细胞存活率。结果 PCR法鉴定表明溶瘤腺病毒CNHK500内携带hTRAIL基因,制备的CNHK500-hTRAIL病毒滴度为3.25×109PFU/ml,且CNHK500-hTRAIL携带的hTRAIL基因在A549细胞中有效表达。经不同MOI值CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,细胞存活率为64.26%～96.02%。CNHK500-hTRAIL感染联合不同剂量X线照射组细胞存活率较单纯X线照射(1和2 Gy)和单纯CNHK500-hTRAIL感染组明显降低(P<0.01),细胞存活率分别为50.77%和45.56%,增敏效应比值(E/O)为1.5和1.6,均大于1.4。结论成功构建了携带hTRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,CNHK500-hTRAIL感染与X射线联合照射对A549细胞生长有协同抑制作用。     

siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19转录、表达的影响

目的 研究siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19的影响.方法 利用前期已合成的siRNA-Med19慢病毒载体,感染A549细胞,并以无病毒感染组作为空白对照组,以慢病毒载体感染组作为阴性对照组.采用荧光图片和白光图片对比方法判断细胞的感染率;RT-PCR法检测细胞Med19mRNA的转录水平; Western 印迹法检测细胞Med19蛋白表达水平.结果 慢病毒载体对人肺癌A549细胞的感染率在80%以上,siRNA-Med19慢病毒感染组Med19mRNA转录水平明显降低,敲减效率大于70%,Med19蛋白表达量也明显降低.结论 siRNA-Med19慢病毒载体可以高效感染人肺癌A549细胞,siRNA-Med19对A549细胞Med19的转录和表达具有明显的抑制和消减作用.     

自噬相关基因Beclin 1沉默对人肺癌A549细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨应用RNAi技术沉默Beclin 1基因对人肺癌A549细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法应用真核细胞转染技术将Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人肺癌DDP耐药A549/DDP细胞,通过RT-PCR和Western印迹检测Beclin-1基因表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对DDP的耐药性及细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白对照组及空质粒对照组相比,重组质粒组Beclin 1mRNA及蛋白表达下降,凋亡率增加,对DDP的敏感性增加(均P<0.05)。结论 Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1转染人肺癌A549细胞后,可有效抑制Beclin-1基因的表达,增加人肺癌A549细胞对DDP的敏感性,促进细胞凋亡。     

抑制CK2增加Sorbitol引起的肺癌细胞凋亡

目的探讨抑制CK2对雷帕霉素引起的肺癌细胞凋亡的影响。方法选用人肺癌A549细胞,MTT方法检测单独利用山梨醇(Sorbitol)或者联合CK2抑制剂TBB对A549细胞活性的影响,Western印迹检测单独利用Sorbitol或者联合CK2抑制剂TBB凋亡相关蛋白caspase-3和PARP,以及线粒体凋亡相关蛋白细胞色素C表达水平的影响。结果 MTT结果显示,Sorbitol可以显著引起A549细胞活性下降,并呈现时间依赖性和剂量依赖性。Western印迹结果显示,Sorbitol可以引起凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved caspase-3以及细胞色素C表达水平明显上升。MTT结果显示,联合应用CK2抑制剂可以明显增加Sorbitol,引起细胞活性降低。Western印迹显示,与单独给予Sorbitol比较,联合应用CK2抑制剂TBB,凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved caspase-3进一步增加。结论 CK2抑制剂TBB可提高人肺癌A549细胞对Sorbitol的敏感性。     

鞭毛蛋白致肺微血管内皮细胞炎症诱发共培养肺泡上皮细胞炎症的级联放大效应与信号传导通路

目的探讨鞭毛蛋白感染后炎症级联放大效应与信号传导通路。方法建立Transwell共培养体系,将人肺微血管内皮细胞株（ human pulmonary microvascular endothelial cells, HPMECs ）接种于Transwell小室的下层,培养2h后,将人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549细胞株接种于小室的上层与HPMECs共培养15d。实验分为3组：HPMECs与A549细胞共培养空白对照组、鞭毛蛋白（2μg／mL）感染HPMECs再与A549细胞共培养组（实验组I）、HPMECs加DAPT（Notch信号阻断剂,终浓度10μmol／L）预处理再行鞭毛蛋白感染与A549细胞共培养组（实验组Ⅱ）。用ELISA法检测各组HPMECs和A549细胞培养上清液TNF-α蛋白表达,检测HPMECs上清液Notchl蛋白表达水平。结果与共培养空白对照组比较,鞭毛蛋白感染HPMECs后,共培养HPMECs和A549细胞上清液TNF-α蛋白[（11．45±1．59）pg／mLvs（6．13土0．86）pg／mL,（P〈0．01）、（9．93±1．46）pg／mLvs（5．895：0．83）pg／mL,（P〈0．01）]和HPMECs上清液中Notchl蛋白[（7．03±1．06）pg／mL坩（5．39±0．76）pg／mL,（P〈0．05）]表达水平皆明显升高,提示鞭毛蛋白引起HPMECs炎症,且向A549细胞传导级联放大,而HPMECs使用Notch信号阻断剂处理后,HPMECs上清液Notchl蛋白表达水平明显降低[（3．78±0．53）pg／mLvs（7．03±1．06）pg／mL,（P〈0．01）],共培养A549细胞上清液TNF-α蛋白表达水平也显著下降[（7．47±1．05）pg／mL坩（9．93±1．46）pg／mL,（P〈0．05）],表明HPMECs炎症反应经过Notch信号通路传导向A549细胞级联放大。结论鞭毛蛋白感染肺微血管内皮细胞能引起炎症反应,并可能经过Notch信号通路传导向肺泡上皮细胞级联放大。     

慢病毒介导的IGF1R基因干扰对A549细胞对紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰技术沉默人肺腺癌A549细胞胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)表达,并观察其对萦杉醇化疗敏感性的影响.方法 构建IGF1R重组慢病毒,感染A549细胞,建立稳定低表达IGF1R细胞株;应用RT-PCR及蛋白免疫印迹法检测IGF1R沉默效率;CCK8比色法检测IGF1R沉默后A549细胞对紫杉醇敏感性的影响.构建裸鼠移植瘤模型,检测紫杉醇对低表达IGF1R的A549细胞移植瘤生长的抑制作用.结果 成功构建IGF1R重组慢病毒,并建立了稳定低表达IGF1R的A549细胞株;紫杉醇对低表达IGF1R的A549细胞的半数抑制剂量由38.52 μg/L降至16.27 μg/L,敏感性提高2.37倍;低表达IGF1R的A549细胞移植瘤生长缓慢,与紫杉醇联合应用后,移植瘤生长显著抑制,体积抑瘤率达87.5％,重量抑瘤率达88.2％.结论 慢病毒介导的IGF1R基因沉默能抑制人肺腺癌细胞增殖,并显著提高腺癌细胞对紫杉醇的敏感性.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.