人胎肝细胞移植治疗代谢性疾病的免疫学研究

目的 利用人胎肝细胞移植治疗小鼠α-L-艾杜糖苷酶(IDUA)缺陷引起的黏多糖贮积症(MPS),观察移植后受体的免疫反应、血清及肝脏IDUA活性恢复情况.方法 将已鉴定纯化的人胎肝细胞移植给IDUA缺陷小鼠,在移植前及移植后第5、10、15天,流式细胞仪检测受体小鼠T细胞亚群CD3、CD4和CD8;ELISA法检测免疫指标IL-2、TNF-α、IFN-γ;荧光分光光度计法检测血清及肝脏IDUA活性情况.结果 胎肝细胞移植后能定植在受体肝脏中,受体在移植后第5、10、15天分别与移植前比较,血清中反映免疫状态的指标T细胞亚群、IL-2、TNF-α和IFN-γ均显著升高(P＜0.05);血清及肝脏IDUA活性在移植后第5天显著提高(P＜0.01),以后随着时间的延长,活性随之衰减.结论 人胎肝细胞移植给IDUA缺陷小鼠后,能够定植在受体肝脏中.然而由于免疫排斥反应,IDUA活性在移植后第5天达到高峰,但在第10天后下降至移植前水平.     

胎肝细胞移植治疗粘多糖贮积症的实验研究

（上海交通大学医学院附属新华医院血液科, 上海 200092）摘要：目的探讨用胎肝细胞移植治疗小鼠α L 艾杜糖苷酶（IDUA）缺陷引起的粘多糖贮积症（MPS）,筛选免疫抑制方案。方法将人胎肝细胞移植给经不同免疫抑制剂方案处理的IDUA缺陷小鼠,流式细胞仪检测移植前、后受体小鼠T细胞亚群（CD3、CD4/CD8比例）;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M（IgM）、白介素 2（IL 2）、肿瘤坏死因子 α（TNF α）、干扰素 γ（IFN γ）水平;荧光分光光度计法检测血清IDUA活性。结果受体移植后血清中反映免疫状态的指标（T细胞亚群、IL 2、TNF α、IFN γ）均显著升高（P＜0.05）;血清IDUA活性在移植后第5天显著提高（P＜0.01）,后随时间延长,活性随之衰减;经CTX＋CsA＋FTY720＋强的松联合免疫抑制预处理组在移植后IDUA活性维持最持久。结论胎肝细胞移植能提高IDUA活性。由于免疫排斥反应,移植前应进行免疫抑制预处理,以CTX＋CsA＋FTY720＋强的松联合方案免疫抑制效果最佳。     

人胎肝细胞移植治疗重症肝炎的初步研究

应用人胎肝细胞移植,治疗8例重症肝炎患者,共输注47次。结果6例存活,初步讨论胎肝细胞移植的作用机理。     

胎肝细胞宫内胎鼠腹腔注射对其移植免疫反应的影响

目的 研究胎肝细胞宫内注射对小鼠移植免疫反应状态的影响。方法 利用C57BL／6小鼠的胎肝细胞对BALB／c胎鼠行宫内胎鼠腹腔注射（孕期第14－16日），分娩存活的BALB／c雌性小鼠7－9wk时作受体，C57BL／6新生鼠作供体，行异位心肌移植，以小鼠心肌移植后的存活时间、混合淋巴细胞培养和对诱导迟发型变态反应（DTH）的影响观察该方法对小鼠移植排斥反应的影响作用。结果 和对照组相比较，宫内注射组小鼠移植一心肌存活时间明显延长，混合淋巴细胞培养等结果也具有显性差异（P＜0.01）。结论 胎肝细胞宫内注射的方法可以延长小鼠心肌移植的存活期，对小鼠移植掩护反应可以起到明显的抑制作用。     

冷冻保存小鼠胎肝细胞移植治疗急性辐射损伤

造血干细胞是造血重建的主要来源,而移植低温保存的骨髓、外周血造血干细胞治疗辐射损伤、再生障碍性贫血、综合免疫缺陷病、淋巴瘤等患者均有较好疗效。但同种异体移植易引起严重移植物抗宿主病(GVHD)。人们对胎肝细胞和自体骨髓移植寄予很大希望,它不仅可获得满意的造血重建,而且避免了GVHD的发生。目前冷冻保存技术已成为造血干细胞移植的一个重要组成部分。     

移植胎肝细胞在体内分布和存活的示踪观察

我们观察了胎肝细胞的在体同位素标记及其影响因素;同时应用同位索标记的胎肝细胞,观察了胎肝细胞移植后在受体体内的分布格局和存活情况及其一些影响因素。实验发现,经胎鼠腹腔注射,~(125)I-UdR时,胎肝摄取~(125)I-UdR最多。标记胎肝细胞经外周静脉注射给成年小鼠后,主要分布在肺和肝中,这种分布格局受注射胎肝细胞数量和速度的影响。结果提示:在体法同位素标记的胎肝可用于胎肝细胞移植研究。     

移植胎肝细胞对环磷酰胺处理小鼠存活率的影响

本文复制了小鼠免疫/造血功能抑制(IHS)模型,观察了移植胎肝细胞对IHS小鼠存活率的影响。结果发现,经静脉或脾内移植胎肝细胞(FLC)可延长IHS小鼠存活率,其效果以后一种移植途径为佳;同种FLC移植(C_(57)→ICR)和同系FLC移植(ICR→ICR)对IHS小鼠生存率延长效果类似。实验提示,移植FLC可能会改善IHS小鼠免疫和造血功能。     

建立肝细胞皮下移植模型用以研究异种移植免疫反应

目的：建立异种肝细胞皮下移植模型，并探讨用以研究异种移植细胞性排斥反应的可能性。方法：用原位肝脏胶原酶循环灌注法分离大鼠肝细胞，分离出的肝细胞存活率达95％以上，分别注射于皮下及脾脏，于移植后不同时间点取材进行组织形态及功能观察，HE染色为主，结合G－6P、SDH等组织化学方法观察移植肝细胞的存活状态。结果：在术后3－28天期间，脾脏组与皮下组存活率无显著性差异（P＞0．05），仅在60天时相点脾脏组存活率（75％）大于皮下组（37．5％）；且术后4－7天开始发生细胞性排斥反应。结论：认为肝细胞皮下移植可作为研究异种移植细胞性排斥反应的模型。     

人胎肝细胞对BALB／c小鼠免疫系统及其功能的影响

This study sought to better understand the effects of human fetal liver cells(FLC) on immunity. FLC were injected into BALB/c mice intraperitoneally. The design included four groups: negative control and three dose (125 x 10(5), 25 x 10(5), 5 x 10(5) FLC/day) groups. The results showed that FLC increased the thymus visceral coefficient, numbers of T-lymphocytes(TLC) and lymphocytes(LC) in blood, total number of spleen cells, the number of plaque forming cells(PFC) of spleen, the rate(%) of transformation and stimulus index of TLC of spleen, and the function of macrophages. FLC also effected the function of natural killer cells(NK cells) of BALB/c mice. The findings suggest that human FLC can strengthen the nonspecific immunity, humoral immunity and cellular immunity in mice. In this study, however, no effect of FLC on spleen visceral coefficient was noticed, and no sign of delayed type allergy was observed.     

肝移植治疗终末期肝病

由于各种原因引起的进行性不可逆性肝脏损害，常规的内外科治疗无效，肝移植已成为唯一有效的手段。本文对肝移植的发展史、适应证、手术时机选择、手术技术与手术方式发展、肝移植伦理学发展等方面作扼要的阐述。     

胎肝细胞悬液输注治疗肝硬化

自1990年3月～1992年3月,用胎儿肝细胞悬液(Fetal Liver Cell Suspension,FLC)辅助治疗失代偿性肝硬化17例,并同15例常规治疗作对照。结果:FLC组病人,一月后17例均见腹胀,纳差消失,食欲增加,16例乏力感消失。9例腹水者7例消失,2例减轻。4例脾大者3例缩小。5例凝血机能障碍者3例恢复正常。17例血清白蛋白球白异常,12例有明显改善。而对照组一月后上述变化不明显。13例腹胀6例减轻,14例纳差,7例减轻,15例乏力,5例消失。6例腹水者2例消失,1例增加。5例脾大者无1例明显缩小,凝血机能障碍者10例中2例恢复正常。血清白蛋白15例异常,5例改善。结果提示:FLC辅助治疗肝硬化有较好的疗效,且无副作用,供体来源方便,操作较简单,值得进一步研究和应用。     

胎肝血管的解剖学观测

目的解剖观测胎肝门静脉、肝固有动脉、胆总管十二指肠上段、脐静脉及静脉导管，为临床辅助性胎肝移植提供解剖学资料。方法选择５６例经福尔马林固定的正常胎儿，解剖显露门静脉、肝固有动脉、胆总管十二指肠上段、脐静脉、静脉导管，测其长度和压扁外径。结果脐静脉、门静脉、肝固有动脉、胆总管十二指肠上段、静脉导管长度分别为４５．２±９．２ｍｍ、２０．１±３．３ｍｍ、１６．３±２．８ｍｍ、１７．２±３．１ｍｍ、１３．１±２．５ｍｍ；直径分别为３．４±０．５ｍｍ、３．０±０．４ｍｍ、１．８±０．２ｍｍ、１．８±０．２ｍｍ、３．０±０．３ｍｍ。结论胎肝血供丰富，在供血管道中以脐静脉最粗，门静脉次之，肝固有动脉最细。因此，在辅助性胎肝移植时可选用脐静脉代替门静脉，以门静脉替代肝固有动脉。同时，在胎肝移植前，应结扎静脉导管，以保证肝脏足够的血供。     

猪原位肝移植围术期血流动力学及生化代谢变化的研究

目的：在体外静脉－静脉转流下行原位猪肝移植术，观察围术期血流动力学及生化代谢和小剂量多巴胺、硝普钠对肾功能的保护作用。方法：随机选择健康杂种猪１６头，静脉复合麻醉下，经右颈外静脉插入Ｓｗａｎ－Ｇａｎｚ导管监测血流动力学，自右颈内动脉和颈外静脉采血监测血气和血生化。无肝期采用门静脉和股静脉Ｙ型连接后，再与左颈外静脉连接，进行体外静脉－静脉转流。无肝前期小剂量多巴胺、硝普钠静脉联合用药并观察尿量。结果：无肝期和新肝期血流动力学变化剧烈并伴有代谢性酸中毒；血清Ｋ＾＋在新肝期有一过性升高；未出现少尿或无尿。结论：原位肝移植术中即使应用体外静脉－静脉转流术仍有血流动力学、酸碱及电解质的显著变化，小剂量多巴胺与硝普钠联合应用有助于肾功能维护。     

体外诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化的研究

目的:体外分离和定向诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化.方法:无菌条件下从正常C57BL/6J胎鼠肝中分离出间充质干细胞,体外培养传3代后用高浓度葡萄糖培养基以及碱性纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和尼克酰胺诱导分化,观察胎肝间充质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后胰十二指肠同源异型基因盒1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)、胰岛素原1(proinsulin-1,INS-1)、葡萄糖转运子2(glucose transporter-2,GLUT-2)表达情况;胰岛素免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞胰岛素的表达;在形成胰岛样细胞簇后,用双硫腙做胰岛B细胞特异性染色.结果:RT-PCR显示诱导5 d后PDX-1、INS-1、GLUT-2均有表达,而诱导前的细胞则没有检测到表达;胰岛素免疫细胞化学表明细胞簇内的细胞胰岛素染色强阳性;细胞簇双硫腙染色阳性(每个T-25培养瓶有80～120个).结论:从胎肝中分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛B样细胞.     

鼠肝移植手术方法的探讨

目的　对鼠肝移植的缝合法、套管法、肝动脉重建吻合法进行比较 .方法　分别采用缝合法、袖套法、肝动脉吻合法行鼠肝移植 .结果　缝合法无肝期平均 2 1.2± 2 .5 min,三袖套法和二袖套法 +肝动脉重建吻合法无肝期平均分别为13.6± 3.4 min,12 .9± 3.1min.平均存活天数缝合法、三袖套法、二袖套法 +肝动脉重建吻合法分别为 6 7.2± 5 .6 d;4 6 .4± 6 .3d;73.5± 4 .4 d.并发症主要表现为 :术中、术后出血 ;袖套扭转 ,脱落 ;感染 ;胆漏及吻合口血栓形成 .结论　袖套法是一种快速、简单的移植术式 ,而缝合法及肝动脉重建吻合在特定的移植研究中 ,具有不可取代的作用 .尤以袖套法 +肝动脉吻合法值得提倡     

Ad.VEGF转染自体骨髓基质细胞移植治疗猪慢性缺血性心脏病

目的:探讨小鼠胎肝组织中干细胞抗原-1阳性的细胞(Sca-1 细胞)向心肌细胞分化的潜能.方法:取妊娠14.5 d的小鼠胎肝,制作细胞悬液,用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca-1 细胞,PCR鉴别Y染色体性别决定区域(Sry)基因序列;将2×103个雄性小鼠Sca-1 细胞输注给经致死剂量50C0(10 Gy)全身照射的雌性小鼠体内,于移植后2个月,处死受体小鼠,取心肌组织固定、制片,免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠心肌组织内供体小鼠胎肝Sca-1 细胞向心肌细胞分化的情况.结果:在受体小鼠心肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,呈现心肌组织的部分特征,表型为Desmin /Flt-1-/CD45-/F4-/80.结论:小鼠胎肝Sca-1 细胞(其中绝大部分是造血干细胞)具有向心肌组织细胞分化的潜能.     

Eleven dental implants placed in a liver transplantation patient: a case report and 5-year clinical evaluation

Due to an increased risk of infection, dental implant in organ transplantation patients has long been considered questionable, particularly when the restoration is complicated. Five-year follow-up data of a 45-year-old liver transplant recipient with long-term immunosuppressive therapy was reported. One year after liver transplantation, 11 Brånemark implants were inserted in the maxilla and mandible, using minimally invasive surgery. Oral clinical parameters included peri-implant bone absorption, probing depth, and implant mobility. The measured fifth-year parameters were within normal ranges indicating a stable osseointegration with moderate vertical bone loss. This case report suggests that immunocompromised patients can be successfully rehabilitated with dental implants through careful examination, suitable antibiotic administration, and minimally invasive dental implant procedure.