胰岛素对大鼠创伤性脑损伤后脑GLUT-3表达的影响

目的 探讨大鼠创伤性脑损伤急性期胰岛素降糖治疗的脑保护作用机制.方法 成年雄性SD大鼠随机分成正常对照组、创伤性脑损伤(TBI)组和胰岛素治疗组,分别测定各组伤前、伤后血糖值,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定伤后伤侧及健侧皮层葡萄糖转运蛋白3(GLUT-3)基因表达,免疫组化法测定伤后伤侧及健侧皮层GLUT-3蛋白表达量和神经元神经特异性烯醇化酶(NSE)阳性染色细胞数.结果 TBI组伤后血糖升高,伤侧皮层GLUT-3表达增加,NSE阳性染色细胞数明显减少;胰岛素治疗组伤后血糖变化不明显,12、24、48、72 h GLUT-3表达量,NSE阳性染色细胞数明显多于TBI组;各组伤后健侧皮层GLUT-3表达量和NSE阳性染色细胞数未见明显变化.结论 创伤性脑损伤急性期胰岛素降糖治疗可减少伤后脑神经元缺失,对脑有保护作用,其机制可能与其降低高血糖所致的GLUT-3表达下调有关.     

创伤性脑损伤后高血糖对脑神经元损害作用的研究

目的:探讨大鼠创伤性脑损伤后高血糖对神经元的损害作用.方法:成年雄性SD大鼠随机分成正常对照组,创伤性脑损伤(Traumatic brain iniury,TBI)组和胰岛素治疗组.每组伤侧及健侧皮层设立自身对照.分别测定各组伤前伤后各时间点血糖值,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定伤后伤侧及健侧皮层葡萄糖转运蛋白3(Glucose transporter 3,GLUT-3)基因表达,Western-blot法测定伤后伤侧及健侧皮层GLUT-3蛋白表达,免疫荧光法测定伤后各组伤侧及健侧皮层单个神经元神经特异性烯醇化酶(Neuronspecificenolase,NSE)表达量和NSE阳性染色细胞数,longa评分、平衡木试验、网屏试验综合评定伤后各组神经功能.结果:正常对照组各时间点血糖值,GLuT-3表达量,单个神经元NSF:表达量及NSE阳性细胞数均未见明显变化;TBI组动物伤后血糖升高,伤侧皮层GLUT-3表达增加,单个神经元NSE表达量增加而NSE阳性染色细胞数明显减少神经瘫裂较重;胰岛素治疗组伤后血糖变化不明显,伤后12、24、48、72 h GLUT-3表达量,单个神经元NSE表达量及NSE阳性染色细胞数均明显多于TBI组神经瘫裂程度明显轻于TBI组.各组健侧皮层GLUT-3和单个神经元NSE表达量,NSE阳性染色细胞数均未见明显变化.结论:TBI后高血糖可加重神经元损伤,其机制可能与TBI后高血糖抑制伤后神经元CLUT-3的表达,增加伤后神经元葡萄糖代谢障碍有关.     

大鼠颅脑创伤后NaV1.6在海马的表达

目的 研究颅脑创伤(TBI)后NaV1.6的mRNA和蛋白在海马中的表达变化.方法 对成年SD大鼠实施脑液压伤,分别在伤后2、12、24和72 h处死大鼠,取伤侧海马行Real-time PCR和Western blotting,检测NaV1.6的mRNA和蛋白表达.结果 大鼠脑液压伤后2 h,NaV1.6 mRNA表达显著上调(P＜0.001),伤后12 h达最高水平;NaV1.6蛋白表达显著上调,并持续至伤后72 h(P＜0.01).结论 TBI可导致NaV1.6的mRNA和蛋白表达显著上调,这可能是TBI后神经元细胞膜上钠通道功能异常及其诱发兴奋性毒性作用的分子学基础之一.     

γ-氨基丁酸A受体及受体基因在大鼠急性脑缺血中的变化

目的观察大鼠大脑皮质γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)及受体基因(GABAARα1mRNA)在脑缺血不同时段的表达及其动态变化的规律,探讨其在急性脑缺血中变化的意义.方法55只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,脑缺血6 h组、12 h组、24 h组、3 d组、7 d组(均为手术组),假手术组;采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,至规定时间点取大脑组织,用光学显微镜观察神经元损伤程度,用形态分析系统检测各组G A B A A R表达的阳性细胞数.用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术与计算机分析系统在光学显微镜下观察GABAARα1mRNA在大脑皮质阳性神经元的表达情况.结果各手术组GABAAR及GABAARα1mRNA表达均低于假手术组及对照组,与对照组相比, GABAAR在缺血6 h其表达既有降低,至12 h降至最低.GABAARα1mRNA表达在缺血24h开始下降,3d下降显著,7d恢复正常,而假手术组与对照组相比无统计学意义.结论 GABAAR及 GABAARα1mRNA在急性脑缺血时含量降低可能为脑缺血时脑损伤的重要原因.     

大鼠颅脑创伤后NaV1.6在海马的表达

目曲研究颅脑创伤（TBI）后Nav1．6的mRNA和蛋白在海马中的表达变化。方法对成年SD大鼠实施脑液压伤,分别在伤后2、12、24和72h处死大鼠,取伤侧海马行Real—time PCR和Western blotting,检测Nav1．6的mRNA和蛋白表达。结果大鼠脑液压伤后2h,Naf1．6mRNA表达显著上调（P〈0．001）,伤后12h达最高水平;Nav1．6蛋白表达显著上调,并持续至伤后72h（P〈0．01）。结论TBI可导致Nav1．6的mRNA和蛋白表达显著上调,这可能是TBI后神经元细胞膜上钠通道功能异常及其诱发兴奋性毒性作用的分子学基础之一。     

癫痫状态大鼠海马GABA、GABAA受体α5亚单位表达的动态变化

目的 探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)及GABAA受体α5亚单位在癫痫持续状态(status epilepticus, SE)大鼠海马中的变化规律及其与自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure, SRS)的关系.方法 采用匹罗卡品诱导大鼠SE模型,用免疫组化技术检测大鼠SE后4个时相点即6、48、72 h和7 d海马GABA和GABAA受体α5亚单位表达的动态变化.结果 PILO组大鼠SE后6 h至7 d,海马内GABA能神经元持续减少,尤其以SE后48 h至7 d 改变最为明显,并与对照组比较差异极显著(P＜0.01);SE后6 h,PILO组大鼠海马GABAA受体α5亚单位的表达开始下降,SE后72 h至7 d,GABAA受体α5亚单位的表达显著降低,并明显低于对照组(P＜0.01).结论 GABA及GABAA受体Rα5亚单位表达的下调可能是SRS产生的重要因素之一.     

钾离子通道相互作用蛋白1在大鼠脑中的分布及其与GABA能神经元

目的与方法用免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)免疫阳性神经元在大鼠脑中的分布及其与GABA能阳性神经元的定位关系,研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)的功能。结果KChIP1免疫阳性神经元在大鼠皮层、海马均可见,海马部位KChIP1阳性神经元主要分布于锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层;KChIP1阳性和GABA能阳性神经元在正常大鼠大脑顶叶皮层和海马部位的共存比例分别为63.94%、63.11%。结论在大鼠脑内,KChIP1主要与抑制性GABA能神经元共存发挥其调节神经元兴奋性的功能。     

大鼠创伤性脑损伤后诱导型NOS阳性表达与神经细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤(TBI)后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和神经细胞凋亡的关系。方法：将健康SD大鼠随机分为假手术组、伤后24h组、伤后72h组、伤后168h组。采用iNOS免疫组化技术，研究大鼠创伤性脑损伤后iNOS的表达变化及其细胞定位，采用凋亡细胞原位缺121末端标记法(TUNEL)，观察大鼠在创伤性脑损伤后不同时点的神经细胞凋亡情况。结果：大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区iNOS活性明显升高，伤后72hiNOS阳性表达最明显，伤后168h仍有表达。大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区神经细胞凋亡明显增多，伤后72h增多最明显，可持续168h。结论：TBI后损伤区周围皮质和伤侧海马的iNOS阳性细胞呈高表达并与神经细胞的凋亡呈同步变化，推测iNOS的表达可能参与了TBI后的继发性神经细胞凋亡。     

实验性大鼠脑创伤后脑组织FADD及Caspase的表达

目的 观察脑损伤后FADD和caspase-3表达及其时序性变化,探讨脑损伤的分子机制及脑损伤时间推断.方法 采用Marmarou法制造大鼠重型弥漫性颅脑创伤模型,运用HE染色法观察脑损伤后大鼠海马CA1区损伤情况,并运用免疫组织化学法,观察各组大鼠脑损伤后的不同时相点((3、6、12、24、48、72、168、336 h)海马CA1区的神经细胞凋亡情况和FADD和caspase-3的表达情况.结果 脑创伤组于伤后6 h,镜下可见大鼠海马CA1区出现散在变性坏死神经元,于伤后72 h加重,并观察到广泛水肿及神经元变性坏死改变;正常及手术对照组大鼠,脑组织CA1区内有低水平的FADD和caspase-3表达;脑创伤后3 h大鼠海马CA1区出现FADD和caspase-3阳性凋亡细胞,伤后6 h、12 h及24 h数量逐渐增多,并于伤后48 h达到高峰.结论 脑创伤后可诱导FADD和caspase-3蛋白在脑内表达,并呈现出时序性变化.     

海藻酸诱导复杂部分发作癫痫大鼠海马GABAA受体α1亚单位的表达

目的:研究海藻酸(KA)致痫大鼠海马GABAA受体α1亚单位的动态表达水平以及加巴喷丁(GBP)干预对它们的影响,探讨复杂部分发作癫痫(CPS)的发生机制,为开发针对GABA受体亚单位水平的新型抗癫痫药物(AEDs)提供理论依据。方法:成年雄性Wistar大鼠海马CA3区注射2μgKA建立复杂部分发作模型,采用免疫组化SABC法检测癫痫大鼠海马各区GABAA受体α1亚单位(GABAARα1)的动态表达水平,并用GBP干预癫痫的发作观察GBP对GABAARα1表达的影响。结果:KA致痫后海马CA1区、CA3区GABAARα1表达呈先升后降趋势,齿状回(DG)表达水平则逐渐增加。GBP对癫痫早期GABAARα1表达无直接影响。结论:在KA诱导的CPS模型中,GABAARα1表达减少和由此所引起的抑制功能减弱,可能是癫痫发生的一种分子机制。     

癫痫宁治疗癫痫病的实验研究

目的　研究癫痫宁治疗癫痫患者的疗效与机理 ,方法 :观察模型小鼠服癫痫宁后 ,各种类型癫痫发作控制的情况 ,脑内GABA的含量。结果　药效学实验表明 ,癫痫宁灌胃给药能够显著降低小鼠最大电休克的惊厥率 ,降低戊四唑所致小鼠癫痫小发作的发作率 ,能明显延长士的宁和盐酸氨基脲所致的小鼠惊厥潜伏期并降低其死亡率。对小鼠听源性惊厥发作亦有显著对抗作用。此外 ,能显著增加正常小鼠脑内GABA的含量     

甘珀酸钠苦参素包合物对小鼠中枢的抑制作用

目的：研究甘珀酸钠苦参素包合物（OCSIC）对小鼠中枢的抑制作用并探讨其机制.方法：采用行为药理学方法观察OCSIC对小鼠主动、被动活动协调能力及耐力对戊巴比妥钠（PENT）催眠作用的影响;γ-氨基丁酸（GABA）、地西泮（DZ）、3-哌啶甲酸乙酯（EN）的协同作用及对印防己毒素（PTX）、海人藻酸（KA）、N-methyl-D-aspartate（NMDA）所致惊厥的拮抗作用.采用免疫组织化学方法（SABC法）检测OC-SIC对小鼠大脑皮层、海马GABA转运体1（GAT-1）蛋白表达的影响.结果：OCSIC100,50,25mg/kg分别使小鼠自主活动减少86.7%,85.6%,17.2%;PENT使入睡潜伏期分别缩短61.2%,49.0%,36.7%,而睡眠持续时间分别延长379.8%,146.2%,132.2%（P〈0.01,P〈0.05）并能明显加强阈下剂量PENT的催眠作用.阈下剂量的OCSIC与阈下剂量的GABA或EN合用分别可使小鼠自主活动率减少78.8%,47.0%（P〈0.01）;OCSIC100mg/kg与阈下抗惊厥剂量DZ（0.5mg/kg）合用能对抗PTX致惊厥作用（P〈0.05）,但不能对抗KA,NMDA致惊厥作用.OCSIC能明显减少小鼠大脑皮层和海马GAT-1免疫阳性细胞的表达（P〈0.01）.结论：OCSIC具有中枢抑制作用,其作用机制与GABA神经功能有关.     

吗啡对神经损伤性大鼠脊髓背角投射神经元的影响

目的:探讨吗啡对神经损伤性大鼠脊髓背角投射神经元诱发放电的影响及其作用机制。方法:采用Chung模型建立慢性神经性疼痛大鼠模型,行为学方法测试机械刺激缩足阈值判断模型是否成功。单个神经元记录法记录脊髓背角投射神经元放电活动。实验分正常大鼠组(N组),假手术组(S)和神经损伤性大鼠组(I组)。3组在脊髓表面予以吗啡、荷包牡丹碱(BIC)和番木鳖碱(STN)前后,以不同级别机械刺激足部感受野,分别记录脊髓背角投射神经元诱发放电活动。结果:脊髓表面用10μmol/L吗啡能显著抑制3组大鼠脊髓背角投射神经元的诱发性放电活动。与基础值相比,N组和S组压力刺激抑制了72%±6%(P<0.05),钳夹刺激抑制了76%±5%(P<0.05),但I组抑制作用显著低于N组和S组,压力与钳夹刺激与基础值比分别抑制32%±4%和26%±3%(P<0.05);而予以BIC阻断GABAA受体后,N组和S组吗啡的抑制作用明显减弱(P<0.05),I组吗啡的抑制作用无明显改变(P>0.05);STN阻断甘氨酸受体后,3组吗啡的抑制作用无明显区别;GABAA受体和甘氨酸受体同时阻断后,吗啡无明显抑制作用。结论:吗啡对慢性神经损伤性大鼠脊髓背角投射神经元诱发性放电活动的抑制作用明显减弱,主要与慢性神经损伤性大鼠脊髓GABA减少有关。     

小鼠胚胎干细胞体外诱导分化成GABA能神经元

目的探讨小鼠胚胎干细胞在体外培养向GABA能神经元定向诱导分化的可能性。方法将小鼠胚胎干细胞以"无血清"方法培养,用DMEM/F12、N2、B27及NT4作为诱导分化剂定向诱导分化,分化好的细胞利用免疫荧光技术、流式细胞技术和RT-PCR鉴定。结果在胚胎干细胞诱导分化成神经元后期,免疫荧光显示有GABA能神经元存在;RT-PCR结果证实有GABA能神经元正确分化的重要调控基因Viaat、Gad1和Gad2基因表达;流式细胞仪计数结果显示GABA阳性细胞约占总细胞数的(11.49±6.86)%。结论小鼠胚胎干细胞经体外培养可以定向诱导分化成GABA能神经元,可作为神经移植的新来源。     

GABA及GABAα受体在大鼠前额叶执行控制中的作用机制研究

目的探讨γ-氨基丁酸(GABA)及GABA受体(GABA αR)在大鼠前额叶执行控制功能中的作用机制.方法用氨基酸分析技术、免疫组化技术和原位杂交技术研究执行控制能力不同的大鼠(执行控制能力好组及差组)前额叶GABA含量、GABA免疫阳性神经元数量和GABA αR mRNA表达.结果与执行控制能力好组大鼠相比,执行控制能力差组大鼠GABA含量较少[(6.52±3.03)μmol/g vs (4.03± 1.17)μmol/g,P ＜0.05 ]、GABA免疫反应阳性神经元数量较少(208±77 vs 143±59,P ＜0.01)、GABA αR mRNA表达较高(139±36 vs 182±51,P ＜0.05).结论 GABA及GABA αR在前额叶执行控制中起重要作用.     

低压缺氧对大鼠学习记忆及海马GABA含量的影响

在机体的所有器官中,中枢神经系统对低氧最敏感,低氧可引起脑功能障碍,如记忆、行为、情绪等高级功能障碍,但机制尚不清楚.为此,本实验利用低压缺氧模型,探讨大鼠学习记忆行为的改变以及与海马GABA含量的关系.     

中药天年饮对衰老大鼠脑γ-氨基丁酸含量的影响

目的:观察衰老大鼠不同脑区抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)含量的变化及中药天年饮的延缓衰老作用.方法:30只SD大鼠随机分为3组,正常组、衰老模型组和天年饮用药组,每组10只大鼠.D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型.采用高效毛细管电泳法检测各组大鼠大脑皮质、海马、下丘脑抑制性氨基酸GABA的含量.结果:衰老大鼠皮质、海马、下丘脑抑制性氨基酸GABA的含量明显下降(正常组大鼠与模型组大鼠比较:P＜0.01);中药天年饮可明显提高衰老大鼠各脑区GABA的含量(天年饮用药组大鼠与模型组大鼠比较:P＜0.01).结论:中药天年饮可改善衰老大鼠脑GABA的代谢,具有延缓脑老化的作用.     

实验性肝性脑病小鼠GABA受体分析

作者用自己建立的只需一只小鼠即可作GABA受体分析的方法(NSB、TB、SB:CV<10%),进行了肝性脑病(HE)小鼠大脑的GABA受体分析.此外,测定了HE时GABA调节蛋白的变化.结果表明HE组虽有Triton处理的突触膜上低亲和力GABA受体消失,但起作用的GABA受体位点不变.同时,新鲜和处理突触膜上GABA受体亲和力增加,提示GABA突触传递活性增强.HE小鼠突触膜上结合的GABA调节蛋白含量减少,抑制活性降低.它可能是HE小鼠GABA受体亲和力增加的原因之一     

UDMH对GABA及其受体影响的研究

目的：探索UDMH急性中毒的γ-氨基丁酸及其受体机制,为UDMH急性中毒的治疗提供理论依据。实验：大鼠染毒,测定脑组织中GABA含量和GAD活性,观察脑神经末梢微囊受体的变化。结果：UDMH使脑组织中GABA含量和GAD活力显著降低（P＜0．01）。体外试验发现UDMH使GABA与其受体的结合下降;体内染毒试验发现在大鼠惊厥发作前GABA受体的结合显著下降,惊厥发作时GABA与受体的结合显著上升。结论：UDMH通过影响GABA代谢过程和GABA受体功能部分导致中枢神经系统中毒症状出现。     

脊髓背角NMDA/GABA受体在慢性神经病理痛中的交互作用

慢性神经病理痛是现代医学难题之一，严重影响患者的身心健康，而目前所采单一用的药物或理化等治疗手段均不能达到满意效果。新近研究发现，NMDA和GABA受体在慢性神经病理痛中分别发挥着不同的重要作用。推测针对NMDA和GABA受体作用机制的研究将开辟慢性神经病理痛治疗或／和神经保护新途径。