肺癌磁共振扩散加权成像与肿瘤细胞密度的相关性研究

目的利用表观扩散系数（ADC）来评价肺癌的组织学特征。方法28例肺癌患者，其中男性18例，女性10例，年龄25～79岁．平均年龄52岁。行扩散加权成像（DWI）检查并测量病灶的ADC，方差分析比较不同组织学类型肺癌ADC问的差别。对11例外科切除的肺癌病灶ADC与细胞密度进行相关性分析。结果鳞癌、腺癌、小细胞癌平均ADC分别为（1．67±020）×10^-3mm2／s、（2．08±0128）×10^-3mm2／s、（1．76±0.21）×10^-3mm2／s，腺癌的ADC明显高于鳞癌及小细胞癌（P〈Q05）。肺癌ADC与细胞密度呈显著负相关（r=-0．71，P=0．015）。结论腺癌的ADC明显高于其他类型肺癌；ADC似乎可以鉴别肺癌的组织学类型。     

miR-126在1713-雌二醇抑制血管内皮细胞VCAM-1蛋白表达中的作用研究

目的探讨17β-雌二醇（17β-estradiol，E2）对于血管内皮细胞中血管细胞黏附分子1（VCAM-1）的表达影响，探索miR-126在其中的作用。方法培养人脐静脉血管内皮细胞，以脂多糖LPS刺激诱导炎症反应，给予不同浓度梯度的E2处理不同时间，应用免疫印迹法观察VCAM-1的蛋白表达。转染miR-126的抑制物沉默miR-126表达后，观察E2对VCAM．1蛋白表达的影响变化。结果与对照组比较，LPS可诱导VCAM-1蛋白表达增加（854．0±21．3）％，n：3，P〈0．01）。分别给予不同浓度的E2（10^-8～10^-6mol／L）预处理后，均能抑制VCAM-1蛋白表达。抑制率分别为（44．3±4．0）％（n=3，P〈0．05）、（45．14±7．1）％（n=3，P〈0．05）和（65．9±7．2）％（n=3，P〈0．01）；E2（10^-8mol／L）分别处理内皮细胞24、48、72h后，可呈时间依赖性抑制LPS所诱导的VCAM．1的蛋白表达，抑制率分别为（52．1±4．4）％、（59．54-7．7）％和（64．5＋6．5）％（n=3，P〈0．05）。转染miR-126的抑制物可明显抑制miR-126表达[抑制率为（75．8±6．7）％，n=3，P〈0．01]，该抑制物可明显抑制17β-雌二醇对VCAM-1蛋白的抑制作用。结论E2通过miR-126下调LPS诱导的血管内皮细胞VCAM-1蛋白表达。     

间充质干细胞治疗提升免疫性血小板减少症小鼠的血小板数并影响其外周血单核细胞中 T-bet 和 GATA-3基因表达北大核心CSCD

目的：探讨间充质干细胞（ MSC）对原发免疫性血小板减少症（ ITP）小鼠血小板数目的影响及其机制。方法采用腹腔注射大鼠抗小鼠CD41抗体（ MWReg30单抗）的方法诱导BALB/c小鼠产生ITP后,取20只作为实验组,20只作为对照组。之后通过鼠尾静脉给实验组小鼠注射MSC 2×107个/只。注射后5 d、7 d、14 d,测定实验组与对照组小鼠外周血血小板数;14 d时应用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）检测小鼠外周血单个核细胞（ PBMC）中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达;应用酶联免疫法测定Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2及Th2类细胞因子IL-4、IL-10的水平。结果7 d、14 d后,注射MSC实验组小鼠血小板值[（588．0±81．6）×109/L、（623．0±78．9）×109/L]明显高于未注射MSC对照组[（317．0±90．1）×109/L、（288．0±87．8）×109/L]（P＜0．05）;14 d时,实验组PBMC中T-bet mRNA表达水平低于对照组[（0．04±0．03） vs （0．27±0．05）]（P＜0．05）;GATA-3 mRNA的表达水平高于对照组[（0．14±0．04） vs （0．07±0．05）]（P＜0．05）;实验组Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平[（3．1±1．7） pg/ml、（3．2±2．1） pg/ml]明显低于对照组[（10．3±4．8） pg/ml、（16．3±5．7） pg/ml]（P＜0．05）;实验组外周血 Th2类细胞因子 IL-4、IL-10水平[（88．6±15．2） pg/ml、（38．3±11．8） pg/ml]明显高于对照组[（32．7±5．7） pg/ml、（22．1±3．4） pg/ml]（P＜0．05）。结论 MSC可以有效提升ITP小鼠的血小板数,机制可能与抑制了T-bet和GATA-3的表达失常导致的Th1细胞极化有关。     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量与妊娠高血压综合征的关系

目的 探讨孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量（fetal nucleated red blood cells，FNRBC）数与妊娠高血压综合征的关系。方法 对128名孕龄32～42周，年龄24～35岁的孕妇外周血进行单密度梯度离心，对分离后的细胞进行制片、染色，显微镜下进行FNRBC计数，比较组间差异。结果 38名正常妊娠组孕妇外周血中FNRBC数目为（6．4667±2．5141）个／5ml，36名轻度妊高征组孕妇外周血中FNRBC数目为（9．5300±2．3286）个／5ml，28名中度妊高征组孕妇外周血中FNRBC数目为（13．7100±4．0286）个／5ml，26名重度妊高征组孕妇外周血中FNRBC数目为（31．5000±9．4086）个／5ml。四组间比较P值均小于0．05。结论 妊高征组孕妇外周血FNRBC数目明显升高，为妊高征的临床预测和评估提供了一条新思路。     

外周血MSCs的分离培养及对G-CSF的动员反应

目的建市多种种属外用血间充质干细胞（MSCs）的分离培养方法，探讨其对粒细胞集落刺激因子（G—CSF）的动员反应。方法用percoll（1．131g/mL）分离多种种属外周血单个核细胞，进行贴壁培养MSCs。以G-CSF作为动员剂，培养骨髓和外周血来源的MSCs，计数动员前后的成纤维细胞集落形成单位（CFU-F）。结果对多种种属进行外周血MSCs分离培养，成功率不同。在本实验条件下．可以稳定的直接分离培养出大鼠外周血的MSCs。G—CSF动员后，骨髓来源MSCs的CFU-F数昔显著高于对照组（P〈0．01）；外周血来源MSCs的CFU-F数量也显著高于对照组（P〈0．01），接近4倍。结论不同种属外周血MSCs分离培养难易不同，其直接原因是生理条什下外周血中存在的MSCs量少导致的。G—CSF可以有效地动员大鼠骨髓和外周血MSCs。     

先兆子痫患者外周血、脐血及蜕膜NK细胞的相关研究

目的：对先兆子痫孕妇外周血、脐血及蜕膜NK细胞进行研究，以探讨先兆子痫的病因。方法：对42例先兆子痫患者及20例正常孕妇外周血、脐血NK细胞分离后记数。采用免疫组织化学法检测胎盘蜕膜NK表型后记数并检测其平均灰度。结果：①轻度及重度先兆子痫患者母血及脐血NK细胞数均显著高于正常孕妇（P〈0．05）；②重度先兆子痫患者蜕膜NK细胞数高于正常孕妇（P〈0．05）；③轻度及重度先兆子痫患者胎盘蜕膜NK细胞CD56组化染色平均灰度值高于正常孕妇（P〈0．05）。结论：先兆子痫患者外周血、脐血及蜕膜的NK细胞数量均高于正常孕妇，且呈激活状态的胎盘蜕膜NK细胞较多，可能与发病有关。     

妇女血清铜锌测定及其临床意义

用原子吸收法测定正常非孕妇女100例，正常孕妇332例，有畸胎史妇女40例．低体重儿孕妇23例之血清铜锌值（mg／L）。正常非孕妇铜锌分别为0．886±0．38和0．914±0．46，早、中、晚孕期铜值依次为0．953±0．26、1．589±0．38．1．550±0．42；锌值依次为0．72±0．25，0．655±0．13，0．673±0．18。畸胎史妇女铜锌值分别为1．39±0．56和0．62±0．20，低体重儿孕妇铜锌值分别为1．555±0．60和0．729±0．33。故笔者认为孕期妇女服用适量锌对预防胎儿畸形有重要意义。     

元参组方对粒系造血祖细胞的增殖作用

目的研究中药方剂对急性骨髓型放射病的治疗效果和对造血系统的作用及其作用机理。方法选用元参等11种中药组成元参组方,小鼠一次皮下注射后,观察不同时间外周血细胞、胸腺重量、骨髓有核细胞、粒系造血祖细胞、胸腺细胞与骨髓细胞混合培养后粒系造血祖细胞的变化。结果元参组方早期加速粒细胞的成熟和释放,第6天约为注射前的1．5倍。给药8d后,试验组胸腺重量、骨髓有核细胞、脾指数分别为（85．9±5．6）mg、（8．9±1．3）×10^6／每根股骨、1．42,对照组胸腺重量、骨髓有核细胞、脾指数分别为（74．2±6．2）mg、（6．8±0．5）×10^6／每根股骨、1．0,试验组明显高于对照组。试验组小鼠胸腺细胞与对照组小鼠骨髓细胞按20：1混合培养,骨髓CFU-G约为加入未注射元参组方的小鼠胸腺细胞的1．5倍。未注射元参组方则未见有放大作用。结论元参组方对外周血白细胞、骨髓有核细胞、胸腺重量和粒系造血祖细胞有明显的升高作用,激活胸腺细胞对粒系造血祖细胞的增殖有明显的放大作用。这种放大作用通过元参组方激活胸腺细胞实现。     

诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构的实验研究

目的建立一种体外诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构的技术方法。方法体外诱导人胚胎胰腺干细胞分化为胰岛细胞，将胰岛细胞制备成浓度分别为1×10^4／ml、3×10^4／ml、1×10^5／ml、3×10^5／ml（1×10^4／ml、3×10^4／ml、1×10^5／ml、3×10^5／ml组）单细胞悬液，在含有细胞外基质（ECM）的培养基中悬浮培养24h以诱导形成胰岛样结构，在荧光体视显微镜下观察胰岛样结构的形态和大小；采用免疫荧光染色方法检测胰岛样结构中ECM成分及其细胞组成与定位。将胰岛样结构分别在含5．6和30．0mmol／L葡萄糖的培养基中体外培养2h，采用放射免疫法测定上清中胰岛素水平。建立糖尿病大鼠模型，经门静脉将胰岛样结构移植至大鼠肝脏，移植后连续3d经鼠尾静脉检测血糖水平。结果90％人胚胎胰腺干细胞分化的胰岛细胞形成了胰岛样结构，其包膜、大小均与天然人胰岛组织结构相似；以形成直径150μm大小胰岛样结构的比例为标准，比较各组细胞浓度与胰岛样结构形成率的关系，结果显示分别与1×10^4／ml、3×10^4／ml、3×10^5／ml组（25．0％±2．5％、28．0％±3．0％、21．5％±2．5％）相比，1×10^5／ml组胰岛样结构形成率最佳（36．5％±4．0％，均P〈0．01）。胰岛样结构包膜上含有与天然人胰岛组织类似的ECM成分，且其中含有胰岛素、胰高血糖素和C-肽阳性细胞，其细胞比例与分布均与天然人胰岛组织类似。30．0mmol／L高糖浓度刺激后胰岛样结构胰岛素释放水平[（110±12）μIU／ml]较5．6mmol／L基础糖浓度[（59．5±8．0）pIU／ml]明显增加（P〈0，01），胰岛样结构移植后糖尿病大鼠血糖水平较移植前均明显降低（P〈0．01）。结论本研究建立的技术方法可以将干细胞分化的胰岛细胞在体外大量、快速、高效地诱导形成具有功能的胰岛样结构。     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的：研究醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白（FN），以及对转化生长因子B1（TGF-β1）基因表达的影响。方法：（1）以不同浓度的ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激肾小球系膜细胞48h后，用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。（2）以10^-9mol／L的ALD刺激系膜细胞不同时间（24、48、72h）后，分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果：（1）ELISA的结果显示，ALD可促进系膜细胞合成分泌FN，且呈剂量和时间依赖性，SPI能拮抗ALD的作用。（2）半定量RT-PCR的结果显示，ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达，也呈剂量和时间依赖性，SPI也能拮抗ALD的作用。结论：ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN，及TGF-β1mRNA的表达，SPI能拮抗ALD的作用，具有一定的肾脏保护作用，从而有益于延缓肾小球硬化的进展。     

重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对Hep2细胞移植瘤的杀伤效应

目的研究自行构建的重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对裸鼠Hep2细胞移植瘤的杀伤效应。 方法裸鼠皮下接种Hep2细胞悬液建立荷人喉癌动物模型。将裸鼠分为单次治疗组和连续治疗（每天1次、连续5d）组，每组据治疗药物不同再分为PBS组、携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的复制缺陷型5型重组腺病毒（Ad-GFP）组、Ad-CD80-TPE-GM组，以PBS、Ad-GFP组为对照组。单次治疗组于治疗后4d取外周血并剥离肿瘤，分别用有限稀释法、BCA蛋白质定量试剂盒和流式细胞术检测肿瘤组织中的病毒感染滴度、总蛋白浓度和CD80表达阳性率，ELISA法检测血清和肿瘤组织中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CS）表达水平，并计算肿瘤组织中病毒感染滴度量和总蛋白中GM-CSF的表达量。连续治疗组于首次给药后观察裸鼠肿瘤体积的变化，待对照组肿瘤直径〉1cm，或肿瘤表面出现明显溃疡时剥离肿瘤，计算Ad-CD80-TPE-GM组分别与2个对照组相比的相对肿瘤增殖率和抑瘤率。 结果单次治疗组中，Ad-CD80-TPE-GM组肿瘤组织中病毒感染滴度量（IU/tumor）为1.13×10^6（1.40×10^5～7.25×10^7），明显高于Ad-GFP组[1.17×10^2（7.80×10^1～2.40×10^2），P=0.01]，而PBS组未检测到病毒；GM-CSF表达量（pg/mg）为397.32±179.67，明显高于PBS组（4.02±0.93，P〈0.01）和Ad-GFP组（6.92±2.79，P〈0.01）；CD80表达阳性率为31.6%＆#61617;9.0%，而PBS和Ad-GFP组均基本不表达（均P〈0.001）。连续治疗组中，Ad-CD80-TPE-GM组与PBS和Ad-GFP组相比，相对肿瘤增殖率分别为31.8%（P〈0.05）、25.9%（P〈0.01）；抑瘤率分别为73.4%、77.9%（均P〈0.001）。 结论Ad-CD80-TPE-GM能在端粒酶阳性的人喉癌Hep2细胞移植瘤组织内大量复制并有效表达目的基因，具有明显的抗肿瘤效应。     

分光光度法测定鼠疫疫苗浓度方法的建立

目的研究鼠疫疫苗浓度与吸光度（A）值之间的相关性,建立通过测定A值来计算鼠疫疫苗浓度的方法。方法确定分光光度法测定鼠疫疫苗浓度的特异性、测定波长及线性范围。4个专业的实验室经对9批成品疫苗进行比浊,测定与细菌浊度标准管（相当于鼠疫浓度7．0亿／ml）浊度一致菌液的A值及标准管对应浓度±20％（即5．6亿／ml和8.4亿／ml）菌液的A值,根据该结果制备鼠疫疫苗浓度测定用参考品。4个实验室应用该参考品对鼠疫疫苗进行协作测定,确定分光光度法测定鼠疫疫苗浓度的可行性。结果确定600nm作为吸光度测定波长,鼠疫疫苗浓度在2．6—10．5亿／ml之间时A值与菌液浓度之间有很好的相关性（r=0．9998,df=3,P〈0．01）。成功制备了3种浓度（即5．6、7．0和8．4亿/ml）的鼠疫疫苗浓度测定用参考品,其A值分别为0．444、0．557和0．651。经4个实验室应用该参考品对鼠疫疫苗进行协作测定,测定误差小于5％。结论分光光度法具有良好的重现性,适用于鼠疫疫苗浓度的测定。     

地塞米松对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的调节

 目的：观察胸膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP-1）的表达及地塞米松（Dex）对其表达的影响，为进一步研究胸水治疗的机制提供实验依据。方法:体外培养大鼠胸膜间皮细胞，细胞鉴定后，采用免疫细胞化学、RT-PCR方法检测AQP-1表达；应用Western blotting检测以不同浓度Dex（10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4 mmol/L）处理细胞 24 h 及以10^-4 mmol/L Dex处理细胞 6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h后AQP-1表达情况。结果:发现胸膜间皮细胞存在AQP-1表达， 10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4 mmol/ L Dex干预胸膜间皮细胞 24 h 后，AQP-1蛋白表达量(积分吸光度)分别为755.04±19.81、843.72±19.41、862.96±26.53、694.80±32.00、938.08±13.32，分别高于正常对照组（372.90±16.46） 2.02、2.26、2.31、1.86、2.52倍 (P<0.01)，AQP-1表达升高与地塞米松浓度无关；以10-4 mmol/L Dex干预细胞 6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h 后，AQP-1蛋白表达量分别为：554.14±23.57、917.78±38.62、1 587.20±61.22、1 322.09±28.65、918.40±26.62、1 117.60±51.32，分别高于正常对照组（495.91±23.12）1.12、1.85、3.20、2.67、1.85、2.25倍(P<0.01)，AQP-1表达与地塞米松作用时间有关。结论:胸膜间皮细胞存在AQP-1表达，地塞米松对胸膜间皮细胞AQP-1表达有明显的增强性调节作用，具有时间依赖性。     

以腺病毒为模式分析影响病原微生物2种常用灭活方法可靠性的因素

目的以表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒（rAdvGFP）为模式病毒,模拟实验室内利用次氯酸钠灭活含病毒废液和利用紫外线对生物安全柜台面进行消毒的实验室操作,并评价其可靠性及影响因素。 方法终浓度为0（阳性对照）、0．5％、0．2％、0．1％、0．05％的次氯酸钠溶液（0．5％、0．2％、0．1％、0．05％次氯酸钠组）分别与rAdvGFP溶液（1×10^6 TCID50）混合后,将混合液原液与混合液的1：10～1：10^5倍比稀释液分别接种人胚肾293细胞,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达。将rAdvGFP溶液（1×10^3 TCID50）置于紫外灯下分别照射0（阳性对照）、15、30、60、120min（15、30、60、120min照射组）,各组再按垂直照射高度的不同分为5、10、20、30、67cm亚组,照射后收集各组病毒液接种293细胞,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达。实验均重复3次。 结果各组次氯酸钠病毒混合液原液均造成细胞不同程度的损伤,其中0．5％次氯酸钠组混合液原液对细胞的毒性作用较强;稀释10倍后,除0．05％次氯酸钠组外,其余各浓度次氯酸钠组稀释液均导致细胞不同程度的死亡;稀释100倍后,仅0．5％次氯酸钠组稀释液仍对细胞具有毒性作用。荧光显微镜下观察显示,仅0．1％次氯酸钠组的1：10、1：10^2倍稀释液和0．05％次氯酸钠组的1：10、1：10^2、1：10^3倍稀释液接种细胞可见绿色荧光。紫外线照射后在荧光显微镜下观察显示,15min照射组的各亚组细胞均可见明显绿色荧光;30min照射组的20、30、67cm亚组与60、120min照射组的67cm亚组细胞仍可见绿色荧光。 结论有效氯浓度须在0．2％以上、安全柜内1．12mW／cm^2强度紫外线照射30min以上方能有效灭活重组腺病毒,建立实验室操作的可靠性评价技术体系并据此制定标准操作规程很有必要性。     

125I 粒子植入治疗荷人乳腺癌裸鼠移植瘤的实验研究

 目的 综合评价 ¹²⁵ I 粒子植入治疗荷人乳腺癌裸鼠移植瘤的疗效，为临床应用提供实验依据。 方法 在 3 ~ 4 周龄雌性 Nc-nu/nu 裸鼠右侧乳房脂肪垫部位注射人乳腺癌 MCF-7 细胞悬液 0.1 ml（5 × 10⁶ 个/ml），建立荷人乳腺癌动物模型。18 只荷瘤裸鼠分为治疗组（肿瘤中心部位植入放射性活度为 29.6 MBq 的 ¹²⁵I 粒子 1 枚）和对照组（不进行任何干预），每组 9 只。饲养 21 d，观察裸鼠肿瘤体积的变化，计算抑瘤率。第 21 天以脱颈椎法处死 2 组裸鼠，处死前检测外周血白细胞计数；处死后取肿瘤、肝脏、心脏、右侧肾脏组织进行组织形态学观察，以免疫组织化学方法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡抑制基因 Bcl-2 的表达，透射电镜行肿瘤组织超微结构观察。 结果 治疗组肿瘤体积治疗前后分别为（118 ± 14）mm³ 和（21 ± 3）mm³（t = 20.32，P = 0.00）；对照组分别为（118 ± 14）mm³ 和（339 ± 32）mm³（t = 18.98，P = 0.00），治疗组与对照组比较，抑瘤率为 93.8% ± 17.8%。2 组治疗前后比较外周血白细胞计数差异均无统计学意义。光镜观察治疗组裸鼠肝脏、心脏、右侧肾脏组织均未见出现水肿、充血等明显放射损伤改变，¹²⁵ I 粒子植入部位周围可见纤维组织增生，瘤细胞中心区出现大小不等的坏死区。肿瘤组织 PCNA 及 Bcl-2 表达阳性率治疗组分别为 35.42% ± 3.91% 和 11.90% ± 0.75%，对照组分别为 73.39% ± 3.55% 和 20.09% ± 1.69%，治疗组 PCNA 及 Bcl-2 表达阳性率均明显低于对照组（t = 21.55，P = 0.00；t = 13.26，P = 0.00）。透射电镜观察肿瘤组织内见凋亡细胞，并有大量胶原纤维增生和凋亡小体形成。 结论 ¹²⁵ I 粒子植入对荷人乳腺癌裸鼠移植瘤的增殖有明显抑制作用，能够有效地缩小肿瘤体积，有望作为乳腺癌保乳治疗的综合性手段之一应用于临床     

人海绵状血管瘤动物模型的建立和治疗药物的筛选

 目的 建立人海绵状血管瘤的动物模型，并用于药物筛选。方法 用荆豆凝集素包被的免疫磁珠分离和纯化人海绵状血管瘤内皮细胞（HCAEC）。将HCAEC（2.5×10⁶个）与人肝癌细胞Bel-7402（5×10⁵个）混合接种于裸鼠皮下，建立海绵状血管瘤的动物模型。通过绿色荧光蛋白示踪和组织学检查分析血管瘤中内皮细胞的来源和血管瘤的病理特征。另外，应用血管瘤内皮细胞和血管瘤动物模型筛选血管瘤的治疗药物。结果 HCAEC与Bel-7402细胞共移植于裸鼠皮下后7～9 d即可见接种局部形成血管瘤样结构。组织学检查显示血管瘤模型的组织学特征与人的海绵状血管瘤非常相似。细胞绿色荧光蛋白示踪显示绿色荧光蛋白存在于血管瘤的管壁，表明这些细胞来源于接种的HCAEC。药物筛选发现876-3，一种从中药中提取的单体，体外明显抑制HCAEC增殖，体内对血管瘤具有良好治疗作用。结论 HCAEC与肝癌细胞共移植在裸鼠皮下可以形成人源化血管瘤动物模型，这种血管瘤动物模型可以用于治疗药物的筛选。     

体内表达谷胱甘肽过氧化物酶-7型基因对骨髓抑制的防护作用研究

 目的 探讨体内表达谷胱甘肽过氧化物酶-7 基因（Gpx-7）对 5-氟尿嘧啶（5-Fu）引发小鼠骨髓抑制的防护作用。方法 以尾静脉注射5-Fu（250 mg/kg）的方法建立小鼠骨髓抑制和再生模型。5-Fu 注射后第 1 天，通过电穿孔转染法将 pcDNA3.1- Gpx7 重组质粒 50 μg 注入小鼠胫前肌（实验组），以 pcDNA3.1 空质粒载体 50 μg 电穿孔转染作为对照组，每组各 30 只小鼠。 5-Fu 注射前和注射后 3、7、11、14 d，2 组各断颈处死 6 只小鼠，计数小鼠外周血白细胞数、血小板数和单条腿骨髓细胞总数；然后分别取 5-Fu 注射后 7、14 d 断颈处死小鼠各 3 只进行骨髓细胞集落形成试验；并分别取 5-Fu 注射前和注射后 3、7、11、14 d 断颈处死的小鼠各 1 只制备完整大腿骨石蜡组织切片，观察骨髓组织形态学的变化。结果 注射 5-Fu 后 11 和 14 d，实验组外周血白细胞数分别为（3917 ± 733）和（6857 ± 1878）/μl，均明显高于同时点对照组[分别为（2683 ± 920）和（4017 ± 1011）/μl，均 P < 0.05）]；注射 5-Fu 后 11 d，实验组外周血小板数为（150.8 ± 64.3）万/μl，明显高于同时点对照组[（63.0 ± 60.3）万/μl，P < 0.05）]；注射 5-Fu 后不同时间 2 组间单条腿骨髓细胞总数差异无统计学意义。注射 5-Fu 后 7、14 d，2 组之间骨髓细胞集落形成数差异无统计学意义。 实验组注射 5-Fu 后 11 d 小鼠的骨髓组织形态恢复程度与对照组注射 5-Fu 后 14 d 小鼠类似；注射 5-Fu 后 14 d 小鼠的骨髓组织形态接近注射前。 结论 体内表达 Gpx-7 基因可以促进被化疗药物 5-Fu 抑制的小鼠骨髓再生。     

永生化人肝细胞系的建立和生物学特性研究

目的建立永生化人肝细胞系（IHCL），评价其作为制备生物人工肝细胞材料的可行性。方法利用基因转移技术对原代培养的人肝细胞转染永生化基因猴病毒40大T抗原和人端粒酶逆转录酶，建立IHCL。以噻唑蓝法测定IHCL细胞生长曲线；流式细胞仪分析细胞增殖周期；裸鼠皮肤和肝脏局部接种观察细胞致瘤性；RT-PCR检测肝细胞相关基因mRNA表达；蛋白质印迹法检测肝功能相关蛋白的表达。应用Cytodex3微载体培养IHCL，分析细胞的生长状态和细胞密度。将IHCL细胞分别与5例重症肝功能衰竭患者的血清共培养，培养前后检测血清中胆红素和尿素氮水平，评价IHCL的解毒功能。结果所建立的IHCL具有原代肝细胞的形态，并具有较好的增殖能力，细胞已经传代超过80次。IHCL细胞以DNA二倍体整数倍方式增殖，细胞倍增周期为38h。裸鼠接种IHCL部位均未见肿瘤生长。RT-PCR检测显示IHCL细胞表达仅α1-抗胰蛋白酶、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶、谷胺酰胺合成酶和谷胱甘肽硫转移酶的mRNA；蛋白质印迹分析证实IHCL细胞表达这4种蛋白。IHCL细胞可以在微载体上贴附生长，细胞密度可以达到2．86×10^6个／ml。将IHCL细胞与重症肝功能衰竭患者血清共培养12、24和48h后，血清中总胆红素由（346±94）μmol／L分别下降至（330±97）、（315±97）和（295±100）μmol／L，直接胆红素由（243±70）μmol／L下降至（218±76）、（198±79）和（184±75）μmol／L，24、48h与共培养前比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；而尿素氮进行性地升高，由（6．6±0．9）μmol／L分别升高至（9．0±0．9）、（9．9±1．1）和（12．5±1．6）μmol／L，3个时间点与共培养前比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论所建立的IHCL细胞系具有正常人肝细胞的基本生物学特性和主要的功能特性，具备成为生物人工肝细胞     

pGenesil-siHBV X 对 HepG2.2.15 细胞 HBV 表达和复制的抑制效果研究

 目的 研究针对HBV X基因区设计的小干扰RNA（siRNA）表达载体质粒pGenesil-siHBV X 对HepG2.2.15细胞HBV表达和复制的抑制效果及特异性。方法 针对HBV X区设计siRNA表达载体质粒pGenesil- siHBV X。分别用培养液（空白对照）、脂质体Metafectene、pGenesil 空载体、pGenesil-siHK（阴性对照）、pGenesil-siAFP（特异性对照）、pGenesil-siHBV X处理或转染HepG2.2.15细胞各3次。于每次转染后24 h，取各组细胞培养上清液，用时间分辨荧光免疫测定技术检测上清液中HBsAg和HBeAg含量，用化学发光法检测AFP含量，用PCR荧光定量技术检测HBV-DNA复制水平。 结果 pGenesil-siHBV X转染能抑制HepG2.2.15细胞对HBV标志物的表达，且抑制作用随转染次数增加而增强。第3次转染后，pGenesil-siHBV X组细胞上清液中 HBsAg、 HBeAg和HBV-DNA检测结果分别为（6.26 ± 1.07）ng/ml 、（0.13 ± 0.05）Ncu/ml和（3.01 ± 0.40）×107拷贝/ml，与空白对照组的（22.50 ± 1.39）ng/ml、（1.12 ± 0.11）Ncu/ml和（12.33 ± 1.28）×107拷贝/ml比较，差异有统计学意义（t值分别为12.80、12.21、9.71，P < 0.05）；pGenesil-siHBV X 转染不影响细胞对AFP的表达（t = 0.18，P = 0.86）。结论 pGenesil-siHBV X可以有效和特异地抑制HepG 2.2. 15细胞HBV-DNA的复制及HBsAg和HBeAg表达。     

羊种布鲁氏菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞cDNA文库的构建

 目的 构建羊种布鲁菌 05/43 株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的 cDNA 文库。 方法 培养的绵羊肺泡巨噬细胞经羊种布鲁菌 05/43 株侵染后，以 Trizol 试剂提取其总 RNA， 用 cDNA 文库构建试剂盒构建巨噬细胞的 cDNA 文库。随机选取 cDNA 文库中的 18 个克隆进行表达序列标签（EST）序列测定，测序结果用 BlastX 和 BlastN 软件在 GenBank 蛋白质库和核酸库中进行序列同源性比对。 结果 构建的 cDNA 文库的库容量为 1.192 × 10⁶，重组率为 95.65%。18 个 EST 测序，12 个与 CD 抗原基因、细胞因子基因、蛋白酶基因等已知功能的基因序列相关，6 个为未知功能基因的 EST 序列。 结论 成功构建了羊种布鲁菌 05/43 株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的 cDNA 文库，这将有助于阐明该菌株的致病机制。