脾酪氨酸激酶对大鼠肺血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：研究脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase, Syk）在血小板源性生长因子BB（platelet-derived growth factor-BB, PDGF-BB）诱导大鼠肺血管平滑肌细胞（PVSMCs）增殖中的作用。方法：体外培养雄性Sprague-Dawley大鼠PVSMCs,经鉴定后选用3~5代细胞,经PDGF-BB诱导细胞增殖后,用3种不同剂量Syk选择性抑制剂piceatannol干预,以MTT比色法测定细胞增殖,3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成,流式细胞仪检测细胞周期,荧光定量PCR、Western blot分别检测细胞Syk mRNA和蛋白表达水平。结果：PDGF-BB刺激后,Syk蛋白表达水平明显增高,细胞显著增殖;经Syk抑制剂piceatannol干预后,随着Syk mRNA和蛋白表达水平的降低,细胞的增殖受到明显抑制,其抑制作用与剂量大小具有相关性。结论：在PDGF-BB诱导下的大鼠肺血管平滑肌细胞增殖中,Syk可能起促进作用。 ［中国当代儿科杂志,2010,12（11）：886-890］     

毛细支气管炎患儿红细胞免疫及T细胞亚群变化的研究

目的：探讨毛细支气管炎患儿红细胞免疫和T细胞亚群的变化及意义。方法：对45例毛细支气管炎患儿和30例正常儿童的红细胞免疫功能和T细胞亚群进行检测。检测外周血红细胞免疫复合物花环率（RBC-ICR）、红细胞C3b受体花环率（RBC-C3bRR）;采用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+细胞亚群。结果：毛细支气管炎患儿RBC-C3bRR［（13.6±6.2）%］、CD8+细胞百分比［（21.6±4.4）%］ 较对照组的（18.0±7.4）% 和 (25.6±5.2)%减低（P<0.01）;CD3+［（59.9±6.7）%］和CD4+细胞百分比［（53.5±6.2）%］及RBC-ICR［（8.3±3.5）%］均高于对照组的（52.1±8.3）%、（46.8±4.9）% 和（6.1±2.5）%（P<0.01）。毛细支气管炎患儿RBC-ICR和CD4+细胞百分比存在正相关（r=0.63,P<0.05）,RBC-C3bRR和CD4+细胞百分比存在负相关（r=-0.82,P<0.01）。结论：毛细支气管炎患儿存在T淋巴细胞、红细胞免疫功能障碍,可能在毛细支气管炎的发病机制中起到一定作用。     

阿糖胞苷及蟾蜍灵对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的研究

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)及蟾蜍灵对人白血病细胞株HL-60的作用及影响机制,验证两种药物治疗血液肿瘤的优越性。方法在体外设定的浓度梯度和作用时间下应用Ara-C及蟾蜍灵,采用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,以流式细胞术分析细胞凋亡,以噻唑蓝抑制实验(MTT比色法)观察上述两种物质对细胞的抑制作用。结果(1)蟾蜍灵明显抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为0.03μmol/L,随蟾蜍灵浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(2)Ara-C抑制细胞分裂增殖,其半数抑制浓度约为2.4μmol/L,随浓度增加诱导细胞凋亡时间缩短,程度增加;(3)蟾蜍灵联合Ara-C则抗增殖作用增强80%以上,凋亡率比单用Ara-C增加近30%。结论Ara-C对细胞的诱导凋亡作用主要作用于sub-G1期,在蟾蜍灵联合作用下其作用增强,可为临床治疗应用提供理论参考。     

地塞米松对大鼠肾小球系膜细胞增生水平的影响

目的：探讨地塞米松(DXM)对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增生作用的影响。方法：培养大鼠GMCs细胞,分空白对照组、LPS组和DXM组。DXM选用3种浓度,分别为250 ng/孔、1 000 ng/孔和4 000 ng/孔。LPS终浓度为5 mg/孔。采用MTT掺入方法,于 24 h 和48 h观察3组中GMCs增生水平。结果：DXM组在浓度为4 000 ng/孔时48 h的增生水平为(0.251±0.056) ng/L,低于LPS组和GMCs组［(0.787±0.110),(0.678±0.101) ng/L］,差异有显著性(P<0.05)。DXM浓度为4 000 ng/孔时GMCs增生水平于48 h抑制最为显著。结论：DXM能抑制大鼠GMCs增生。     

新城疫病毒抗人急性单核细胞白血病作用的实验研究

目的：研究显示新城疫病毒(NDV)在对转移的黑色素瘤、高分化肾细胞癌等肿瘤的治疗中已经取得了良好的临床效果。本研究通过体内及体外实验初步探讨NDV对人急性单核细胞白血病的作用。方法：体外实验观察NDV感染组和对照组,即NDV感染或未感染急性单核细胞白血病细胞株SHI-1形态和密度变化,MTT 法测定 NDV 对细胞增殖的影响。体内实验通过建立裸鼠异种移植瘤模型,瘤内注射 NDV,计算抑瘤率,并评估NDV在体内的毒性作用。结果：倒置显微镜下,对照组细胞形态规则、分布密集;NDV 感染组细胞形态不规则,聚集、融合现象明显,分布稀疏。MTT检测结果显示不同浓度NDV对SHI-1细胞的增殖均有明显抑制作用（P<0.01）,并呈现时间 浓度依赖关系。NDV对SHI-1裸鼠异种移植瘤的抑制率为 84.7%,明显高于对照组（P<0.01）。实验过程中裸鼠无毒性反应。结论：NDV 在体内及体外均有抑制白血病细胞增殖的作用,并具有良好的安全性。     

当归多糖增强放射损伤小鼠胸腺细胞增殖及红细胞C3b受体粘附功能的实验研究

目的：进一步探讨当归多糖(Angelica polysaccharide, AP)的药用价值。方法：检测正常对照组、放射对照组及放射+当归多糖治疗组3组的刀豆蛋白A(ConA)诱导的胸腺细胞增殖反应和红细胞C3b受体花环率。结果：放射对照组胸腺细胞OD值和红细胞C3b受体花环率［(0.24±0.01),(16.46±0.76)%］明显低于正常对照组［(0.35±0.01),(22.30±1.26)%］,而放射+当归多糖治疗组的胸腺细胞OD值和红细胞C3b受体花环率［(0.31±0.01),(21.07±1.22%)］显著高于放射对照组［(0.24±0.01),(16.46±0.76)%］,P<0.01,有统计学意义。结论：当归多糖能明显增强放射损伤小鼠的胸腺细胞增殖和红细胞C3b受体免疫粘附功能。     

Resistin基因对胰岛β细胞RINm5F增殖的影响

目的：Resistin被认为是联系肥胖与2型糖尿病的脂肪因子。本研究旨在探讨resistin基因过表达对胰岛β细胞株RINm5F增殖的影响。方法：体外培养RINm5F大鼠胰岛β细胞,通过pcDNA3.1-resistin真核表达质粒转染RINm5F细胞,筛选稳定表达株。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖,采用RT-PCR法验证Resistin mRNA水平及检测SOCS-3的mRNA水平,Western blot法检测Akt的总蛋白和磷酸化水平。结果：过表达resistin的RINm5F细胞增殖速度显著低于正常对照组（P<0.05）。过表达resistin的RINm5F细胞中Akt磷酸化水平为正常对照组的0.6倍(P<0.05),而SOCS-3 mRNA水平为正常对照组的3.2倍(P<0.05)。结论：Resistin基因过表达减缓了胰岛β细胞RINm5F的增殖,其机制可能与上调了SOCS-3从而导致Akt下调有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（1）：43-46］     

骨髓基质细胞及VLA-4抗体对儿童白血病细胞凋亡影响的研究

目的：研究骨髓基质细胞（BMSCs）对儿童白血病细胞的保护作用及细胞粘附分子缓慢抗原-4（VLA-4）抗体对原代白血病细胞凋亡的影响。方法：分离儿童白血病骨髓单个核细胞,培养BMSCs及白血病细胞。实验分4个组：①白血病细胞单独培养组（对照组）;②BMSCs＋白血病细胞组（BMSCs组）;③BMSCs上清+白血病细胞组（上清组）;④BMSCs＋白血病细胞＋VLA-4抗体组（抗体组）。流式细胞仪检测各组白血病细胞的凋亡率,RT-PCR方法检测各组白血病细胞survivin和bcl-2基因的表达。结果：BMSCs组和上清组的白血病细胞凋亡率均低于对照组,P<0.05。与BMSCs组和上清组比较,抗体组的凋亡率显著增高,P<0.05。抗体组12 h的凋亡率与24 h的凋亡率比较,差异有统计学意义,P<0.01。与BMSCs组和上清组比较,抗体组survivin、bcl-2基因的表达均有降低,P<0.05。结论：BMSCs对白血病细胞有保护作用,VLA-4抗体能够抑制白血病BMSCs与白血病细胞间的粘附,促进白血病细胞的凋亡。［中国当代儿科杂志,2010,12（11）：897-901］     

苦参碱对人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨苦参碱（matrine, Mat）对体外人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的影响,以及Mat诱导RD细胞凋亡的相关机制。方法：采用MTT比色法检测终浓度为0.5、1.0、1.5和2.0 mg/mL Mat对RD细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测上述4种不同浓度Mat对RD细胞的凋亡作用;RT-PCR法检测终浓度为0.5、1.0和1.5 mg/mL Mat对RD细胞Cyclin D1及Survivin mRNA表达的影响。结果：各浓度实验组RD细胞的增殖抑制率和凋亡率均高于未经Mat处理的对照组（均P<0.01）,且随着药物浓度增加,细胞增殖抑制率逐渐增高,呈剂量依赖性。RT-PCR检测Cyclin D1 及Survivin mRNA在各组RD细胞中均有表达,两者的表达水平在各浓度处理组中与对照组相比均有明显下降（P＜0.01）。其中Cyclin D1在各浓度组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,而Survivin仅在0.5 mg/mL 和1.5 mg/mL组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Mat能明显抑制RD细胞的增殖,并诱导其凋亡;其抗肿瘤机制可能与下调Survivin和Cyclin D1 mRNA的表达有关。     

鼠尾草酸增加1,25(OH)2D3诱导HL-60细胞分化及其机制研究

目的：已证实1, 25(OH)2D3可以诱导HL-60细胞向成熟单核细胞分化,但其不足之处是高钙血症和形成耐药株。该实验应用鼠尾草酸（CA）联合1, 25(OH)2D3研究对HL-60细胞分化的影响及引起细胞内活性氧（ROS）水平和细胞内钙离子浓度的改变。方法：应用鼠尾草酸,1,25（OH）2D3单独和联合应用处理HL-60细胞,共分为5组：空白对照组;低浓度1,25（OH）2D3（1 nmol/L）组、鼠尾草酸组;联合处理组（10 μmol/L鼠尾草酸和1 nmol/L 1,25（OH）2D3）;高浓度1,25（OH）2D3（100 nmol/L）组。每24 h监测1次,通过四唑氮蓝(MTT)法观察细胞生长,共72 h;收集处理后72 h的HL-60细胞,通过光学显微镜观察细胞形态,用流式细胞仪（FCM）检测不同处理组细胞周期及单核细胞分化标记CD14的表达,ROS和细胞内钙离子浓度。结果：72 h后,联合处理组HL-60细胞与空白对照组相比,细胞增殖明显受抑制（Ab= 0.560±0.020; P<0.01）,细胞形态具有成熟单核细胞特征,CD14的表达率升高（57.62%;P<0.01）,G0/G1 期细胞显著增多, ROS水平下降［（52.67±10.76）%,P＜0.01］;联合处理组细胞内钙离子水平同空白对照组比较差异无显著性（115.64±17.74 nmol/L,P>0.05）,但与高浓度1,25（OH）2D3组相比细胞内钙离子水平明显下降(P<0.01)。结论：鼠尾草酸可增强1,25（OH）2D3对HL-60细胞的诱导分化、增强抑制HL-60细胞增殖作用,细胞阻滞于G0/G1期,细胞内活性氧水平降低,这可能与细胞的诱导分化机制有关,且这一联合作用不增高细胞内钙离子水平。     

福辛普利对大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察福辛普利（FOS）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的影响。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3—10代用于实验。实验分为五组：对照组、LPS刺激组（LPS组）、福辛普利（FOS）高、中、低剂量组（分别为FOS1组、FOS2组、FOS3组）。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定24h和48h两个时间点各组细胞增殖,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定6h、12h和24h细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量RT-PCR法检测ECM纤维连接蛋白（LN）β2mRNA表达的变化。结果（1）LPS可诱导GMC增殖,FOS可抑制LPS诱导的GMC增殖;（2）正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时间点分泌ECM均高于对照组（P〈0．01）,而FOS各组分泌ECM均低于LPS组（P〈0．01）;（3）正常培养的大鼠GMC可表达一定量LNβ2 mRNA,LPS组在各时间点LNβ2mRNA表达量均高于对照组,FOS各组表达量均低于LPS组。结论LPS可诱导GMC增殖且分泌ECM增加,FOS可抑制LPS诱导的GMC增殖,从蛋白和mRNA两个水平抑制LPS诱导的GMC分泌ECM增加,为FOS对肾脏的保护作用提供了理论依据。     

T-type Ca2+ channels are involved in high glucose-induced rat neonatal cardiomyocyte proliferation

Infants develop hypertrophic cardiomyopathy in approximately 30% of diabetic pregnancies. We have characterized the effects of glucose on voltage-gated T-type Ca2+ channels and intracellular free calcium concentration, [Ca2+]i in neonatal rat cardiomyocytes. We found that T-type Ca2+ channel current density increased significantly in primary culture neonatal cardiac myocytes that were treated with 25 mM glucose for 48 h when compared with those that were treated with 5 mM glucose. High-glucose treatment also caused a higher Ca2+ influx elicited by 50 mM KCl in the myocytes. KCl-induced Ca2+ influx was attenuated when nickel was present. Real-time PCR studies demonstrated that mRNA levels of both alpha1G (Ca(v)3.1) and alpha1H (Ca(v)3.2) T-type Ca2+ channels were elevated after high-glucose treatment. High-glucose also significantly increased ventricular cell proliferation as well as the proportion of cells in the S-phase of the cell cycle; both effects were reversed by nickel or mibefradil. These results indicate that high glucose causes a rise in [Ca2+]i in neonatal cardiac myocytes by a mechanism that is associated with the regulation of the T-type Ca2+ channel activity.     

缺氧缺血性脑病患儿红细胞胞浆游离钙水平变化的临床意义

目的 探讨红细胞胞浆游离钙(RBC[Ca2+]i)在缺氧缺血性脑病(HIE)发病机制中的作用及其应用价值.方法 选择2002年6月至2006年3月我科收治的28例中、重度HIE患儿作为研究对象,HIE患儿入院后在常规治疗的基础上给予尼莫地平治疗,疗程7～10 d.于治疗前、治疗72 h和7～10 d各采集静脉血1次,采用Fura-2/AM法检测RBC[Ca2+]i水平.以我院产科同期收住的20例正常新生儿作为对照组.结果 (1)中、重度HIE组治疗前后各时间点RBC[Ca2+]i水平均明显高于对照组,差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01),中、重度HIE组间差异元显著性(P＞0.05).(2)HIE息儿RBC[Ca2+]i水平于治疗后72h达到高峰,然后逐渐恢复,至治疗7～10 d仍高于对照组(P＜0.05).(3)RBC[Ca2+]i水平与HIE程度存在明显正相关(r=0.447,P＜0.05).结论 RBC[Ca2+]i参与了HIE的病理生理过程,在HIE发病机制中可能起重要作用,动态监测RBC[Ca2+]i水平可能有助于HIE的早期诊断和预后判断.     

增生性肾炎患者系膜细胞增生与细胞周期调控蛋白的相关研究

目的 观察增生性肾炎患者肾小球系膜细胞（MC）在不同增生程度时细胞周期调控蛋白表达水平的变化。方法 采用免疫组织化学技术,检测34例肾不小球肾炎患者肾刺标本中细胞正性调控蛋白周期素D1（cyclinD1)、负性调控蛋白P21^CIP1(P21)、P27^KIP1(P27)和增殖细胞核抗原（PCNA）表达。结果 在正常对照及非增生性肾炎组中,cyclin D1、P21不表达,P27呈高表达。在增生性肾炎组中,cyclin D1、P21和P27阳性表达主要在系膜区,随着系膜增生程度的加重,肾小球cyclinD1、P21表达增加,并与PCNA呈正相关（P均＜0．01）;P27则表达减少并与PCNA呈负相关（P＜0．05）;肾小球P27表达还与血肌酐之间呈显著性负相关（P＜0．01）。结论 在人类增生性肾炎中,cyclin D1、P21和P27参与MC的增生;P27在肾组织的表达量可能与疾病进展密切相关。     

Surfactant modulates calcium response of neutrophils to physiologic stimulation via cell membrane depolarization

Pulmonary surfactant (PS) reduces inflammation in the lung by poorly understood mechanisms. We have observed that surfactant-associated proteins (SAP) insert monovalent cation channels in artificial membranes. Neutrophils are primary mediators of acute pulmonary inflammation, and their functions are activated by increases in cytosolic ionized calcium concentration ([Ca2+]) and by changes in membrane potential. We hypothesize that PS inserts SAP-dependent cation channels in neutrophils, causing membrane depolarization, altered [Ca2+] response, and depressed activation. Human neutrophils were isolated, exposed to PS+SAP (1% Survanta), PS-SAP (1% Exosurf), or buffer, and washed before activating with selected stimulants. PS+SAP reduced phorbol ester- and formyl peptide-stimulated adherence and aggregation by 38% (p < 0.05) and 54% (p < 0.02), respectively. PS+SAP also inhibited the formyl peptide-induced [Ca2+] response of neutrophils (p < 0.01), but only in the presence of external Ca2+. Further characterization of this inhibition demonstrated that PS+SAP blocked formyl peptide-induced influx of both Ca2+ and Mn2+, and that this inhibition was present during activation by other neutrophil stimulants (IL-8, immune complexes). Prior depolarization of neutrophils with gramicidin-D similarly inhibited the [Ca2+] response of neutrophils to formyl peptide, and analysis of neutrophil membrane potential by 3,3'-dipentyloxaearbocyanine iodide (diOC5(3)) fluorescence revealed that PS+SAP induced rapid neutrophil depolarization. In contrast, PS-SAP exhibited little effect on neutrophil function, [Ca2+], or membrane potential. We conclude that PS+SAP decreases neutrophil adherence and aggregation responses, blocks Ca2+ influx after physiologic stimulation, and decreases membrane potential. We speculate that these effects are caused by membrane depolarization via SAP-dependent cation channel insertion, and that all of these effects contribute to the antiinflammatory properties of PS+SAP.     

姜黄素抑制脂多糖刺激的系膜细胞增殖及其白细胞介素1β和巨噬细胞趋化蛋白1基因的表达

目的　观察姜黄素对系膜细胞增殖以及对系膜细胞基质蛋白分泌的影响 ,并进一步探索姜黄素对系膜细胞白细胞介素 (IL 1β)和巨噬细胞趋化蛋白 (MCP 1)基因表达的改变。 方法　采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞后 ,分别收集上清液及细胞 ,应用ELISA的方法测定上清液中胶原Ⅳ和Ⅲ的蛋白分泌量 ,MTT法测定系膜细胞活性 (吸光度值 ) ,RT PCR的方法测定系膜细胞IL 1β和MCP 1基因的相对表达量 ,以未加LPS及姜黄素和仅加LPS不加姜黄素作为对照组。结果　当姜黄素浓度大于或等于 6 2 5 μmol/L时 ,系膜细胞增殖明显受到抑制 (P <0 0 1) ,且表现为浓度依赖性。在基础状态下 ,系膜细胞分泌一定量的胶原Ⅳ和Ⅲ [(10± 9 13)ng/ml和 (2 9 5± 0 5 8)ng/ml],亦有MCP 1mRNA表达 [(42 1± 14 98) % ],但IL 1βmRNA几乎不表达 ;经LPS刺激后其胶原Ⅳ和Ⅲ分泌增加 [(138 75± 2 3 2 3)ng/ml和 (38 2 5± 5 38)ng/ml],同时IL 1β和MCP 1基因表达上调 [分别为 (16 91± 1 6 8) %和 (76 6± 6 5 9) % ],而姜黄素浓度为 4 μmol/L时即能明显抑制LPS刺激的系膜细胞胶原Ⅳ和Ⅲ的蛋白分泌 (P <0 0 5 ) ,且在高浓度时作用更为明显 ;同时姜黄素还能消除LPS上调系膜细胞IL 1β和MCP 1基因表达的作用 (P <     

体外小儿骨髓间充质干细胞对牵张应力早期应答反应的研究

目的 观察体外小儿骨髓间充质干细胞(MSCs)对周期性牵张应力的早期应答反应.方法 分离并培养小儿MSCs,利用体外细胞牵张应力装置对第三～六代细胞加载短期力学信号,检测各组细胞内Oa2+以及早期反应基因蛋白(c-fos、c-jun和c-myc)的表达情况.结果 应力干预MSCs后,细胞内Ca3+浓度在受力1min后即增高,荧光强度是对照组的164.63%,3、5min升高更明显,干预10 min后Ca2+浓度升高的幅度有下降趋势;c-fos、c-jun和c-myc基因蛋白在未受力组细胞内不表达或微量表达,加载力学信号后,表达发生了明显的变化,随时间的延长,均表现为增强-持续-回复原来水平.结论 周期性牵张应力影响MSCs内Ca2+的浓度及早期反应基因蛋白(c-fos、c-jun和c-myc)的表达,推测c-fos、c-jun和c-myc参与了MSCs响应力学的信号传导途径,可能依赖Ca2+通道的活化来调控.     

脾酪氨酸激酶在血小板源性生长因子诱导的肺血管平滑肌细胞表型转换中的作用

目的 观察在血小板源性生长因子(PDGF-BB)诱导增殖的肺血管平滑肌细胞(VSMC)中,脾酪氨酸激酶(syk)的特异性抑制剂piceatannol对VSMC表型转换的影响.方法 以SD大鼠VSMC为基础,设空白对照组(不作任何处理)、对照组(PDGF-BB培养)和药物干预组(PDGF-BB和piceatannol培养).[3H]-TdR掺入量测定DNA合成;透射电镜观察细胞超微结构变化;用RT-PCR和Western blot对syk、平滑肌α肌动蛋白(α-SM-actin)及平滑肌22α蛋白(SM22α)表达活性进行检测;激光共聚焦显微镜观察F-actin的改变,并对荧光的改变程度进行定量分析.通过以上方法 观察syk在VSMC增殖和表型转换过程中所起的作用.结果 和空白对照组比较,对照组[3H]-TdR掺入量明显升高(2429.25±253.36 vs.242.75±14.33,P<0.01);细胞超微结构呈现增殖状态;syk mRNA(1.70±0.25 vs.1.01±0.12,P<0.05)和蛋白表达水平明显上升;α-SM-actin(0.10±0.00 vs.1.00±0.00,P<0.01)和SM22α(0.18±0.00 vs.1.00±0.01,P<0.01)的mRNA和蛋白表达水平明显下降;细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度降低(263.75±19.21 vs.1146.23±62.61,P<0.01).piceatannol可明显抑制这些生物学效应(药物干预组).结论 piceatannol可以抑制血小板源性生长因子介导的VSMC内SM22α和α-SM-aetin的表达,从而抑制VSMC表型的转换,进而抑制VSMC的增殖.说明在VSMC中,PDGF-BB是通过syk信号通路对其表型转换进行调控,进而影响VSMC的迁移和增殖.     

反义寡核苷酸抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞血管内皮生长因子mRNA表达及其生物效应的研究

摘要 目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）转染对神经母细胞瘤LA-N-5细胞VEGF mRNA表达的影响以及对肿瘤细胞增殖、分化的影响。方法 用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和错义寡核苷酸（MSODN）转染LA-N-5细胞，半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF165和VEGF121 mRNA转染前后不同时间表达的变化；MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率。结果 半定量RT-PCR检测结果显示，在转染后72 h VEGF165和VEGF121 mRNA的表达：ASODN组为0.346±0.029和0.227±0.036，ASODN+LipofectamineTM2000组为0.275±0.035和0.165±0.017。ASODN组和ASODN+LipofectamineTM2000组均显著抑制VEGF mRNA的表达，ASODN+LipofectamineTM2000组抑制作用较ASODN组更强（P<0.05）；转染后ASODN组和ASODN+LipofectamineTM2000组细胞增殖显著受抑，在48 h时抑制率最高，分别为（39.92±2.74）%及（55.80±2.52）%,ASODN+LipofectamineTM2000组对细胞增殖的抑制作用较ASODN组更为明显（P<0.05）。MSODN组、MSODN+LipofectamineTM2000组对LA-N-5细胞增殖抑制作用与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 VEGF ASODN可抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞VEGF在mRNA水平的表达，并能抑制神经母细胞瘤LA N 5细胞的增殖和分化，LipofectamineTM2000能明显增强VEGF ASODN的抑制效果。