益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖的量效关系。方法:(1)取1 d龄SD大鼠颅骨分离培养OB,取5 d龄SD大鼠四肢长骨分离培养破骨细胞(OC),建立上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,经考马斯亮蓝法检测蛋白质弥散情况。(2)将40只10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清。(3)设置含药血清组和对照组,用MTT法检测各剂量组不同浓度含药血清在共育体系中对成骨细胞增殖的影响。结果:(1)在8 h内,培养液中蛋白质可以从一侧培养室经过隔膜弥散到另一组培养室。(2)益骨胶囊含药血清高剂量组25%和30%浓度对共育体系中OB的增殖有较明显的促进作用,与其他剂量组比较有显著差异(P<0.01)。结论:(1)为成功建立成骨细胞-破骨细胞共育体系提供依据。(2)益骨胶囊含药血清能够剂量依赖性促进共育体系中成骨细胞增殖。     

补肾壮骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖及骨保护素mRNA表达的影响

目的:观察补肾壮骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨其防治骨质疏松的机理。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠分为补肾壮骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和空白对照组制备含药血清和空白对照血清;取1天龄SD大鼠颅盖骨,分离、培养成骨细胞(OB),分别加入各实验血清组培养液培养OB,倒置相差显微镜下观察OB生长情况,MTT法测定OB的OD值,RT-PCR检测各组成骨细胞OPGmRNA表达。结果:3-8天时,补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组成骨细胞OD值均高于空白对照组(P<0.05)。各含药血清组成骨细胞OPGmRNA表达均高于空白对照组(P<0.01);补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组间比较,差异无显著意义(P<0.05)。结论:补肾壮骨胶囊含药血清组能促进OB增殖、上调OPGmRNA表达,可能是其防治骨质疏松的机制之一。     

益骨胶囊对成骨细胞增殖影响的时效及量效关系研究

目的 :运用中药血清药理学方法 ,观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞 (OB)体外增殖的影响 ,并探讨用于OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件。方法 :雌性 12月龄SD大鼠 80只 ,随机分为生理盐水组、益骨胶囊低剂量 (11 6g/kg)、中剂量 (34 8g/kg)、高剂量 (10 4 4g/kg)组 ,每日灌胃一次 ,连续 12天 ,分别在灌胃后的 0 5h、1h、1 5h、2h采血 ,分离血清 ,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养SD新生大鼠颅骨OB ,MTT法检测细胞增殖情况。结果 :末次灌胃后 1 5h采血组的吸收度 (A)值明显高于各组其它时间 (P <0 0 5 ) ;不同剂量各浓度的益骨胶囊含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用 ,其中以高剂量组的稀释比为 2 5 %的血清浓度最佳。结论 :益骨胶囊含药血清对OB增殖具有明显的促进作用 ;益骨胶囊用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量 9倍连续 12天灌胃、末次灌胃后 1 5h采血 ,血清添加浓度以 2 5 %为宜。     

益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞雌激素受体mRNA及其蛋白表达的影响

目的 从mRNA及蛋白水平研究益骨胶囊含药血清对成骨细胞雌激素受体(ER)表达的影响,从雌激素调控途径探讨益骨胶囊防治骨质疏松症的机理。方法 分离、培养新生大鼠成骨细胞,传代后分为3组,即含药血清组、空白血清对照组、DMEM对照组。采用RT-PCR法检测ERα和ERβ的mRNA相对表达量,采用放射性配基结合分析检测ER的亲和力(以平衡解离常数KD表示)和受体数量(以RT表示)。结果 益骨胶囊含药血清组和两对照组比较,ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P<0．05);ERα mRNA表达差异无显著性(P>0．05);益骨胶囊含药血清组和两对照组比较KD值差异无显著性(P>0．05),但RT有提高,差异有显著性(P<0．01)。结论 益骨胶囊含药血清能上调成骨细胞ERβ mRNA表达,能增加雌激素受体数量。通过雌激素调控途径防治骨质疏松症可能是益骨胶囊的药理机制之一。     

壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞增殖 及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的观察壮骨胶囊含药血清对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)合成的影响,探讨壮骨胶囊对骨代谢、骨形成机制的作用。方法壮骨胶囊由射干、白芍等组成。实验分为对照组、壮骨胶囊高、中、低剂量组(4.3、2.15、1.08 g生药/kg),给药组灌胃给予Wistar大鼠壮骨胶囊,对照组给于等体积水,连续给予7 d后,采血离心制备对照组空白血清及含药组血清;以小鼠成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,用空白血清及含药血清处理体外培养的MC3T3-E1成骨细胞,采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,IFCC速率法测定ALP活性,酶联免疫法测定BGP分泌量。结果壮骨胶囊含药血清各剂量组对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖有显著的促进作用,高、中剂量组48 h可促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.05),高、中、低剂量组72 h均能促进成骨细胞增殖(同对照组比较,P 0.01,P 0.05);高、中剂量组含药血清作用于MC3T3-E1细胞72 h后,ALP活性、BGP分泌量较对照组明显提高(P 0.01,P 0.05)。结论壮骨胶囊含药血清具有促进骨形成作用,这可能与其促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞ALP的合成和BGP的分泌,从而改善骨代谢有关。     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化及BMP-2和OPG的影响

目的研究益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)和骨保护蛋白(osteopro-tegerin,OPG)的影响,探讨益骨胶囊防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机制。方法选取10月龄SD雌性大鼠40只,随机分为益骨胶囊高、中、低剂量组及空白组,每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清。二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,传代后分为空白对照组、模型组、中药低、中、高剂量组。模型组用AGEs(400mg/L)处理,中药低、中、高剂量组分别用AGEs(400mg/L)和低、中、高剂量含药血清共同处理,分别用pNPP、ELISA、茜素红染色法检测成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)、骨钙素(bone gla protein,BGP)以及矿化结节,RT-PCR测定成骨细胞中BMP-2、OPG mRNA的表达,ELISA法检测BMP-2、OPG蛋白的表达量。结果原代分离培养的新生大鼠成骨细胞具有典型的成骨细胞特征;与空白对照组比较,模型组成骨细胞(OB)ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达降低,矿化结节减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药各剂量组ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达升高,矿化结节增加,且随剂量增加而明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论益骨胶囊含药血清提高AGEs作用下成骨细胞分化和矿化能力,提高BMP-2、OPG的表达,这可能是益骨胶囊防治OP的机制之一。     

健骨固本胶囊含药血清对大鼠成骨细胞作用的实验研究

目的:研究健骨固本胶囊(GB)含药血清对成骨细胞(OB)的作用及可能作用机制。方法:用胰蛋白酶-胶原酶消化法分离培养新生SD大鼠颅盖骨OB,以GB含药血清的培养液进行培养,分析含药血清对OB增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙化能力及OB的雌激素受体α(ER-α)表达的影响。结果:GB含药血清能刺激OB增殖、提高ALP的活性、增加OB的钙化能力,上调OB的ER-α表达,与空白对照组比较差异显著。结论:GB含药血清能刺激OB的增值、增加钙化能力,其机制可能与上调OB的ER-α表达有关。     

益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的:探讨益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法:取SD大鼠40只,雌雄各半。将大鼠分为A组(高剂量组)、B组(中剂量组)、C组(低剂量组)、D组(空白组),E组(对照组)。按照不同的剂量灌胃。灌胃10d后,制备含药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果:经过10d益骨口服液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P0.05或P0.01)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成明显。结论:证实了益骨口服液含药血清可以促进成骨细胞增殖、分化及矿化。     

阳和汤体外对大鼠成骨细胞及破骨细胞增殖的影响

目的探讨阳和汤含药血清对成骨细胞、破骨细胞的影响作用。方法 SD大鼠连续7 d灌胃阳和汤,腹主动脉采血,制备含药血清。分离并培养原代成骨细胞、成骨细胞株UMR106、原代破骨细胞、破骨前体细胞RAW264.7。随机分为阳和汤含药血清低剂量组、中剂量、高剂量,空白血清组,各组加入相应含药血清进行培养,分别于24、48、72h收获细胞,采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响;比色法测定破骨细胞TRAP酶活性。结果阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24、48、72h均能提高成骨细胞的增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组在48、72h也能明显提高细胞增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组对破骨前体细胞RAW264.7增殖率24、48、72h均没有影响,与空白血清组比较差异均无统计学意义;阳和汤含药血清中、高剂量组破骨前体细胞RAW264.7增殖率均低于空白血清组,24、48、72h比较差异有统计学意义;阳和汤含药血清低剂量组对破骨细胞的TRAP活性24、48 h影响不大,但72h TRAP活性低于空白血清组;阳和汤含药血清中、高剂量组48、72h破骨细胞TRAP活性均显著低于空白血清组。结论阳和汤能抑制体外培养的破骨前体细胞增殖,降低破骨前体细胞TRAP活性,对成骨细胞的增殖有促进作用。     

祛肝脂合剂对大鼠血脂和一氧化氮及其合酶的影响

目的探讨祛肝脂合剂对实验性高脂血症大鼠血脂和一氧化氮及其合酶的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、高脂对照组及祛肝脂合剂低、中、高剂量组并分别予相应处理。结果与高脂对照组相比，祛肝脂合剂低、中、高剂量组TC、TG、LDL—C、NO明显降低，血清NOS、iNOS活性降低，cNOS活性升高。结论祛肝脂合剂能调节高脂血症大鼠血脂代谢及纠正NO代谢紊乱。     

电针对局灶性脑缺血大鼠脑组织NO及NOS的影响

目的　研究电针对局灶性脑缺血后脑组织 N O含量及 3种亚型 N OS表达的影响。方法　采用改良大脑中动脉线栓法造成大鼠局灶性脑缺血模型 ,电针百会、大椎 ,应用硝酸还原酶法测定 NO含量及免疫组织化学技术检测脑组织 3种亚型NOS(n NOS、i NOS、e NOS)的表达 ,观察局灶性脑缺血后 3种亚型 NOS表达。结果　督脉电针能减少局灶性脑缺血后脑组织中 NO含量 (13.12± 3.15μm ol/L ) ,与缺血组比较 P <0 .0 1;督脉电针组缺血侧脑组织 i N OS、n N OS表达 (13.0 1± 1.32 ,32 .12± 1.5 6)显著低于缺血组 (P<0 .0 1) ,e NOS表达 (2 9.2 1± 3.0 1)显著高于缺血组 (P<0 .0 1)。结论　督脉电针能上调e N OS表达 ,同时下调局灶性脑缺血所致 n NOS、i NOS的异常表达 ,从而减少总 NO的生成量 ,降低缺血引起的毒性作用 ,对脑组织具有一定的保护作用     

麝香保心丸对兔动脉壁一氧化氮代谢影响的研究

目的:阐明麝香保心丸改善心肌血流灌注的机理。方法:复制兔高脂血症动物模型,造成动脉壁一氧化氮代谢异常;采用定量 RT-PCR 等技术,观察该药的干预效果。结果:高脂饮食可造成动脉一氧化氮代谢的紊乱,麝香保心丸可减轻这种损害;与高脂血症对照组相比,它有提高动脉壁内皮型一氧化氮合酶(eNOs)基因表达的趋势(P=0.08)、显著增强动脉 NOS 的活力(P<0.05)、提高血浆一氧化氮代谢产物(NOP)的水平(P<0.05)。结论:麝香保心丸的抗心肌缺血作用可能与保护动脉壁一氧化氮系统有关。     

二苯乙烯苷对动脉硬化大鼠一氧化氮合酶及其基因的调节作用

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)对动脉粥样硬化(AS)大鼠一氧化氮合酶(NOS)及其基因的调节作用与抗AS机制。方法:采用高脂饲料喂饲+维生素D3复制大鼠动脉粥样硬化模型,雄性SD大鼠60只,随机分为6组:正常组、模型组、辛伐他汀阳性对照组、TSG高、中、低剂量组(120,60,30 mg.kg^-1.d^-1)。造模12周后抽样检测大鼠主动脉,以大鼠动脉粥样硬化斑块形成为造模指标。经治疗给药6周后,检测大鼠血清和主动脉组织中NOS水平,RT-PCR检测大鼠主动脉eNOS和iNOS mRNA表达。结果:与模型组相比,辛伐他汀组和TSG高、中剂量组均能显著增加血清和主动脉组织NOS的活性、主动脉组织eNOS mRNA的表达及降低主动脉组织iNOS mRNA的表达。结论:TSG能上调AS大鼠动脉壁eNOS mRNA的表达,抑制AS大鼠动脉壁iNOS mRNA的表达,这可能是TSG抗AS的机制之一。     

平刺与直刺三阴交穴对寒凝证类痛经大鼠子宫微循环及NO、NOS的影响

目的:观察平刺、直刺三阴交穴对寒凝证类痛经模型大鼠血清、子宫组织中一氧化氮(NO)及其合成酶(NOS)的影响,探讨不同刺法即刻镇痛作用的机制。方法:60只SD雌鼠随机分为空白组、模型组、直刺组、平刺组,每组15只。采用全身冷冻加雌二醇注射法制备寒凝证类痛经模型。针刺组分别直刺或平刺"三阴交"穴,留针20min。记录各组大鼠的扭体反应情况并采用超高速动态可视化微循环研究系统观察子宫微循环状况。采用生化比色法测定大鼠血清NO、NOS含量,Western blot法检测子宫组织eNOS蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组扭体潜伏期缩短、扭体评分升高(P<0.01),微血流速度减慢(P<0.01),微血管、毛细血管(cap)管径缩小(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,直刺、平刺组扭体潜伏期均延长(P<0.05,P<0.01),扭体评分均显著降低(P<0.01),微血管、cap管径均显著扩张(cap管径5min时除外)(P<0.01)。平刺组针刺后15min血流状态优于直刺组(P<0.01,P<0.05),针刺后35min微血管管径较直刺组显著扩张(P<0.01)。两针刺组间扭体潜伏期及评分差异无统计学意义。与空白组比较,模型组血清NO、NOS与子宫组织eNOS蛋白表达含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,两针刺组血清中NO、NOS含量与子宫组织eNOS蛋白表达均升高(P<0.01,P<0.05)。平刺组NOS含量与eNOS蛋白表达均显著高于直刺组(P<0.05,P<0.01)。结论:直刺与平刺类痛经大鼠"三阴交"穴均显示出即刻镇痛效应,平刺法改善子宫微循环效果更佳,其机制可能与其更好地升高NO、NOS含量,上调子宫e NOS蛋白表达有关。     

牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血后大鼠脑组织一氧化氮合酶的影响

目的：探讨牛珀至宝微丸对大鼠局灶性脑缺血后脑组织一氧化氮合酶（NOS）的作用。方法：采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血模型。应用免疫组织化学技术检测脑组织NOS3种亚型（eNOS,nNOS,iNOS)的表达。观察牛珀至宝微丸对脑缺血后NOS3种亚型表达的影响。并进行神经病学评分。结果：牛珀至宝微丸组的缺血侧大脑皮层nNOS,iNOS表达显著低于缺血对照组（P<0.05,P<0.01),eNOS表达高于缺血对照组（P<0.05)。并可减轻神经损伤症状（P<0.05)。结论：牛珀至宝微丸能下调脑缺血所致nNOS,iNOS的异常表达，上调eNOS表达，这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。     

慢性缺氧对大鼠肾功能和一氧化氮及内皮素的影响

目的　了解慢性缺氧对大鼠肾功能的影响 ,以及这种影响与一氧化氮 (NO)和内皮素 (ET)系统的关系。方法　制作慢性缺氧大鼠模型 ,测定血浆肌酐 (Scr)、尿素氮 (BUN)、尿NAG和肾组织NOS ,NO及ET - 1浓度 ,肾组织iNOS ,eNOS ,bNOS ,ETAR及ETBR的基因表达情况。结果　与正常大鼠相比 ,慢性缺氧大鼠血浆BUN及ET - 1浓度明显降低 (P均 <0 .0 5 ) ,Cr及NOS浓度无明显变化 (P >0 .0 5 ) ,尿NAG浓度明显升高 (P <0 .0 1) ,NO浓度明显降低 (P <0 .0 1)。肾脏匀浆中NOS含量轻度升高 (P >0 .0 5 ) ,NO含量明显升高 (P <0 .0 5 ) ,ET含量无明显变化 (P >0 .0 5 )。大鼠肾组织eNOSmRNA表达明显增加 ,iNOSmRNA表达明显减少 (P <0 .0 5 ) ,bNOSmRNA表达无明显变化 ;大鼠肾组织ETAR表达无明显增加 (P >0 .0 5 ) ,ETBRmRNA表达明显增加 (P <0 .0 5 )。结论　慢性缺氧可引起肾小管功能显著减退 ,可能与肾组织局部NO和ET系统表达改变有关。     

西红花酸对动脉粥样硬化鹌鹑血清一氧化氮含量的影响及其机制

目的：观察西红花酸（CCT）对动脉粥样硬化（AS）鹌鹑血清一氧化氮（NO）含量的影响并探讨其可能的作用机制.方法：用高脂饲料复制鹌鹑AS模型并灌胃给予CCT,9周后做主动脉HE染色观察AS病理变化、酶法测定血清中NO含量;培养牛主动脉内皮细胞（BAECs）,用氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）作用后测定培养液中NO含量和细胞中内皮源性NOS（eNOS）、诱导型NOS（iNOS）活性,RT-PCR方法测定eNOS基因表达水平,观察CCT对上述指标的影响.结果：CCT（25,50,100 mg/kg）能够明显改善鹌鹑AS病变,显著升高AS鹌鹑血清中NO含量;OX-LDL能显著减少BAECs培养液中NO含量,降低细胞内eNOS活性,下调eNOS mRNA表达水平.CCT（1,10 μmol/L）能显著增加OX-LDL作用后细胞培养液中NO含量,提高细胞内eNOS活性、上调eNOS mRNA表达水平.OX-LDL和CCT对细胞内iNOS活性没有明显影响.结论：CCT能显著增加AS鹌鹑血清NO含量,提高OX-LDL作用后牛主动脉内皮细胞NO含量和eNOS活性,其机制与CCT上调eNOS mRNA表达水平有关.     

针刺对多发梗死性痴呆大鼠一氧化氮/一氧化氮合酶的影响

目的：探讨针刺对多发梗死性痴呆（MID）大鼠一氧化氮（NO）/一氧化氮合酶（NOS）的影响.方法：MID大鼠随机分为模型组、针刺组和非穴组,并设正常组和假手术组.观察各组大鼠血清及不同脑区NO含量、NOS活性及各脑区神经元型NOS（nNOS）基因的表达.结果：与正常组比较,模型组大鼠血清、皮质、海马NO含量升高,海马及纹状体NOS活性升高,各脑区nNOS mRNA及蛋白表达增强.针刺可明显逆转上述异常改变.结论：针刺可抑制MID大鼠 nNOS的过度表达,降低NOS活性,减少NO的产生,从而通过NO/NOS途径起到一定的神经保护作用.     

蛇床子素对去势大鼠雄激素水平和-氧化氮合酶的影响

目的:研究蛇床子素对雄性激素水平及一氧化氮合酶活性的影响.方法:采用幼年去势雄性大鼠连续灌胃蛇床子素20天后,测定大鼠血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量,测定阴茎组织中一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)含量.结果:蛇床子素高剂量组可升高T、LH、FSH含量(P《0.05或P《0.01).蛇床子素高、低剂量均可显著增加NOS含量(P《0.01).结论:蛇床子素可提高去势大鼠雄激素、促性腺激素含量及一氧化氮合酶的活性,提示蛇床子素具有雄激素样作用和促性腺激素样作用.