彩超照射后胎鼠耳蜗毛细胞的定量及形态学观察

目的通过琥珀酸脱氢酶(SDH)组化染色和图象分析和耳蜗基底膜扫描电镜观察来评估彩色多普勒超声检查(彩超)对胎鼠耳蜗毛细胞的影响。方法彩超分别照射受孕前期(前15d)及受孕后期(40～55d)豚鼠子宫，5min／次，1次／d。通过对毛细胞形态学观察和毛细胞记数定量分析彩超对胎鼠听觉发育的影响。结果(1)实验组与对照组相比，毛细胞计数有显著差异，其中实验组以第2回，第3回和第4回损害严重，与对照组相比差异非常明显。(2)受孕前期照射组与受孕后期照射组相比较，毛细胞计数无统计学显著差异。(3)扫描电镜下毛细胞损害明显＜SDH染色铺片毛细胞的损害数目。结论(1)医用超声在一定照射时间下影响胎鼠毛细胞发育。毛细胞损害以耳蜗底部区域为主。(2)超声对受孕前期胎鼠的毛细胞损害程度同于受孕后期。(3)超声波使琥珀酸脱氢酶(SDH)活性降低的程度高于细胞表面形态学改变。     

噪声性听力损失与耳蜗外毛细胞Prestin蛋白的相关性分析

目的探讨噪声性听力损失(NIHL)与耳蜗外毛细胞Prestin蛋白表达的关系。方法将60只成年豚鼠随机分5组,除对照组外分别予以不同噪声声压级(85、95、105、115 d B SPL)的高斯白噪声暴露(28 d,6 h/d),而后检测听性脑干反应(ABR)以确定听阈位移水平,同时进行耳蜗病理学检查,采用免疫组化法分析耳蜗外毛细胞Prestin蛋白表达水平。结果各组豚鼠平均永久性听阈位移水平变化随着噪声暴露声压级的增强而增加(F=308.655,P0.01),强噪声声压级组(105 d B SPL)豚鼠的病理形态学显示明显的毛细胞损失,Prestin蛋白表达水平在高于95 d B SPL时随着噪声暴露声压级的增加而上调(F=700.072,P0.01)。结论耳蜗外毛细胞Prestin的表达增高,与耳蜗外毛细胞损失程度有关。     

甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响

为探讨氯化甲基汞 (MMC)所致脑发育损伤及其与c fos表达的关系 ,采用光镜、电镜等形态学方法 ,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用 ,并应用免疫细胞化学方法 (SP法 )观察MMC对培养神经胶质细胞c fos表达的影响。结果表明 ,体外培养的胶质细胞接触MMC后 ,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象 ,呈凋亡的典型形态。MMC 0 0 2mmol L作用于神经胶质细胞 10min后 ,c Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化 :c Fos蛋白阳性细胞率 0 5h开始增高 ,2h达高峰 ,4～ 6h又逐渐减少。MMC 0 0 0 12 5、0 0 0 5、0 0 2、0 0 8和 0 32mmol L作用 10min后 ,0 32mmol L组的阳性率显著高于除0 0 8mmol L组外的其他各组 (P <0 0 1)。提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c fos表达 ,并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c fos介导有关。     

c-fos基因在长期砷暴露大鼠肾小管上皮细胞的表达

目的研究凋亡调控基因c-fos对亚慢性砷中毒大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响,探讨凋亡机制在砷中毒肾小管细胞损伤中的意义。方法 SD大鼠随机分为高、低砷剂量组和对照组,砷染毒组自由饮用含砷水[高砷组:50mg/L,相当于10mg/(kg·d);低砷组:2mg/L,相当于0.4mg/(kg·d)],对照组饮蒸馏水。连续染砷16周后,以光镜观察肾小管上皮细胞形态结构变化并以免疫组化SABC方法检测肾小管上皮细胞c-fos的表达,并进行图像分析、计数。结果各砷染毒组肾小管上皮细胞c-fos阳性细胞数与对照组比较均增多,灰度值均降低,高剂量组肾小管上皮细胞c-fos阳性细胞数与低剂量组比较均增多,灰度值均降低,差异均有统计学意义(P0.01)。光镜下砷染毒组肾小管细胞可见空泡样变,核固缩,刷状缘不整齐,管腔狭小等形态学损伤改变。结论砷能致大鼠肾小管上皮细胞组织病理损害,c-fos基因的高表达可能参与了砷中毒肾小管上皮细胞凋亡的调控。     

碘缺乏对大鼠仔鼠小脑c-fos和c-jun蛋白表达的影响

目的研究碘缺乏对大鼠仔鼠小脑c-fos和c-jun蛋白表达的影响.方法选择健康Wistar大鼠30只(雌性20只,雄性10只),将雌鼠随机分成碘缺乏组及对照组,每组10只.碘缺乏组大鼠于合笼前1周开始喂饲低碘饲料(含碘20～40 ng/g),饮去离子水,直至仔鼠生后30 d;对照组大鼠喂饲标准饲料(含碘145～186 ng/g),饮自来水.取生后第20、30、60天仔鼠,测定体重、血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)水平,并取小脑组织进行免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)染色,用图像分析方法分析大鼠仔鼠小脑皮质c-fos和c-jun蛋白表达情况.结果碘缺乏组仔鼠生后第20、30、60天时,体重均低于对照组(均P＜0.01),血清T3、T4水平均低于对照组(均P＜0.01),小脑组织c-fos和c-jun染色强度均低于对照组(均P＜0.05),总积分光密度值均低于对照组(均P＜0.05).结论碘缺乏可降低大鼠仔鼠小脑组织c-fos和c-jun蛋白表达,影响神经系统的发育.     

甲基汞急性暴露下大鼠脑c-fos mRNA表达

目的探讨即刻早期基因c fos在甲基汞神经毒性分子机制中的作用。方法应用RT PCR方法研究大鼠注射甲基汞急性暴露后,中枢神经系统c fosmRNA表达。结果甲基汞在剂量为0.05mg/(kg·d)暴露60min和剂量为0.5mg/(kg·d)暴露20min就能够显著诱导大鼠脑即刻早期基因c fos表达;c fosmRNA表达量与汞的浓度没有明显正比关系。结论甲基汞能够显著诱导大鼠脑c fosmRNA表达,c fosmRNA表达变化在甲基汞神经毒性分子机制中具有重要作用,即刻早期基因c fos参与了甲基汞对中枢神经系统损害的毒性过程。     

噪声性听力损失与耳蜗毛细胞钙调蛋白表达的相关性分析

探讨不同程度的噪声性听力损失(NIHL)豚鼠耳蜗毛细胞钙调蛋白(Ca M)表达水平与永久性听阈位移(PTS)水平的关系,分析毛细胞的噪声损伤机制。将SPF级健康雄性豚鼠60只随机分为对照组和5个声压级(SPL)暴露组,除对照组外,其余4组分别予以85、95、105、115 d B SPL的高斯白噪声暴露,每天6 h,连续28 d,暴露前1 d和暴露结束后第7天进行听性脑干反应(ABR)测量,通过免疫组化法分析耳蜗毛细胞Ca M表达水平。结果显示,各组间豚鼠平均PTS水平变化差异均有统计学意义(F=327.04,P0.01),在高强度噪声暴露组PTS水平增加;各组豚鼠毛细胞Ca M积分光密度值(IOD)差异有统计学意义(F=54.21,P0.01),105、115 d B SPL噪声暴露组明显高于其他各组(P0.01),95、85 d B SPL噪声暴露组之间差异无统计学意义(P0.05),但明显高于对照组(P0.01)。提示NIHL的毛细胞Ca M表达水平与毛细胞损伤程度相关,Ca M可作为耳蜗毛细胞声损伤的评价指标。     

多氯联苯对大鼠骨髓间充质干细胞c-fos和c-jun表达影响的研究

目的探讨多氯联苯(PCB126)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)c-fos和c-jun表达的影响。方法采用percoll分离液(密度1.073g/cm3)分离Wistar大鼠MSCs、培养并传代,实验分为3组:对照组、低剂量组(10-7mol/L PCB126)和高剂量组(10-6mol/L PCB126)。PCB126分别作用于MSCs 12h和24h后,利用MTT方法检测细胞的增殖率,免疫荧光化学方法检测细胞c-fos的表达;PCB126分别作用于MSCs 30min、1h、2h、4h、8h、12h和24h后,利用RT-PCR分析c-fos和c-jun mRNA的表达;Western blot方法分析细胞c-fos和c-jun蛋白的表达。结果 10-6mol/L和10-7mol/L组12h时细胞的增殖率分别为13.8%和19.1%,24h时分别为31.5%和36.1%,48h时分别为42.5%和43.6%(t=8.42,P<0.01)。10-6mol/L和10-7mol/L组12h时c-fos的阳性率分别为54.6%(231/446)和51.3%(214/416)(χ2=15.59,P<0.01;χ2=15.45,P<0.01),24h时c-fos的阳性率分别为83.2%(376/425)和73.0%(309/423)(χ2=60.56,P<0.01;χ2=25.79,P<0.01)。RT-PCR结果显示,10-6mol/L组和10-7mol/L组在30 min和1h时c-fos mRNA的表达显著上调;两组在不同时间c-jun mRNA均上调且10-6mol/L组的表达水平明显高于10-7mol/L组(t=7.88,P<0.01)。10-6mol/L和10-7mol/L组12h时c-fos和c-jun蛋白表达上调(t=9.91和t=8.84,P<0.01),24h时c-fos和c-jun表达显著上调(t=9.52,P<0.01)。结论 PCB126能促进MSCs增殖,上调癌相关基因c-fos和c-jun的表达,PCB126影响MSCs的功能与c-fos和c-jun的表达异常有关。     

胃癌组织中miR-181a及其靶基因KLF6表达变化及意义

目的观察胃癌组织中微小RNA(miRNA)-181a(miR-181a)与其靶基因Kruppel样因子6(Kruppel like factor 6,KLF6,又称锌指转录因子9或核心启动子元件结合蛋白)的表达变化,并探讨其意义。方法 9例胃癌患者,手术时留取癌组织及癌旁组织,抽提其中的总RNA及蛋白质,采用实时荧光定量PCR检测标本中的miR-181a,Western blot检测KLF6蛋白。结果胃癌组织中miR-181a的表达量(2-△△Ct)为(1.981±1.080),癌旁组织miR-181a的表达量为(0.394±0.093);癌组织KLF6蛋白灰度值为(0.241 6±0.135 5),癌旁组织为(0.540 2±0.05 5),两种组织中的miR-181a、KLF6蛋白表达量相比,均p﹤0.01;miR-181a与KLF6蛋白的表达呈负相关(r=-0.590,p﹤0.01)。结论胃癌组织中miR-181a表达明显上调,KLF6蛋白表达明显下降;结合前期实验研究,我们推测miR-181a可能通过转录后基因沉默机制使KLF6蛋白表达下降,从而促进胃癌的发生发展。     

川芎嗪预处理对海马神经元c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪预处理对缺氧/复氧大鼠海马神经元JNK信号转导通路相关蛋白c-fos、c-jun表达含量的影响。方法胎鼠海马神经细胞培养7天后,随机分为6组(n=6):N组(未缺氧组)、C组(TMP 0μg/m L)、S组(JNK抑制剂SP600125 10μmol/L)、L组(TMP 60μg/m L)、M组(TMP 200μg/m L)、H组(TMP 800μg/m L),孵育1 h后制备缺氧/复氧模型。处理后测定海马神经元细胞的凋亡率以及c-fos、c-jun蛋白表达量,统计分析其与川芎嗪预处理的关系。结果 1川芎嗪预处理可降低海马神经细胞的凋亡率(P<0.01)。2川芎嗪预处理可降低c-fos、c-jun蛋白的表达(P<0.01)。结论川芎嗪可能通过抑制JNK通路相关蛋白c-fos、c-jun的表达对缺氧/复氧大鼠海马的神经元起到保护作用。     

扇贝多肽对紫外线A诱导HaCaT细胞Fas、c-fos表达的影响

目的观察扇贝多肽(PCF)对紫外线A(UVA)照射后HaCaT角质形成细胞Fas、c-fos表达的影响,以探讨PCF保护UVA致HaCaT细胞损伤的分子机制。方法体外培养的HaCaT角质形成细胞分为5组:对照组、UVA模型组、5.69mmol/LPCF组、2.84mmol/LPCF组、1.42mmol/LPCF组。蛋白质印迹法检测Fas、c-fos蛋白表达;RT-PCR检测FasmRNA表达;荧光定量PCR检测c-fosmRNA表达。结果 UVA照射后模型组Fas、c-fos表达均显著增加(P0.01),1.42～5.69mmol/L剂量范围内的PCF可抑制UVA引起的HaCaT细胞Fas、c-fosmRNA及蛋白表达(P0.05),且有剂量依赖性。结论 PCF可通过抑制Fas、c-fos表达而抑制UVA诱导的HaCaT细胞损伤。     

miR-181a在子宫内膜异位症中的表达情况分析

目的探讨miR-181a在子宫内膜异位症中的表达及其对细胞增殖及迁移能力的影响。方法选取2016年5月-2017年1月该院收治的子宫内膜异位症患者共45例作为观察组,另选择同期进行健康检查的45例女性作为对照组,使用实时荧光定量PCR技术检测所有患者子宫内膜组织中的miR-181a指标表达情况,分析miR-181a在子宫内膜异位症中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响。结果检测结束后发现观察组患者子宫内膜组织中miR-181a表达量△Ct计算结果显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05);比较各分期患者miR-181a表达量发现Ⅲ期、Ⅳ期患者显著高于Ⅰ期和Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0. 05);Ⅳ期患者miR-181a表达量明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期,差异有统计学意义(P<0. 05);miR-181a表达量越高的子宫内膜异位症患者发生病灶细胞增殖、迁移的概率越高。结论 miR-181a在子宫内膜异位症患者中的表达量明显高于正常人群,miR-181a表达量与子宫内膜异位症患者病灶细胞增殖、迁移呈正相关,miR-181a可作为子宫内膜异位症的诊断指标之一。     

血管紧张素-（1-7）抑制肾小球系膜细胞增殖过程中c-fos蛋白表达

目的观察血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对血管紧张素-Ⅱ（Ang-Ⅱ）诱导的肾小球系膜细胞（GMC）增殖过程中c-fos表达的影响。方法体外培养GMC，Ang-Ⅱ为刺激因子，不同浓度Ang-（1-7）为干预因子。用结晶紫计数法检测GMC数目的变化；Western blot检测GMC中c-fos蛋白表达的变化。结果Ang-（1-7）呈剂量依赖性地抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC增殖和GMC内c-fos蛋白表达。结论Ang-（1-7）可能通过抑制c-fos的表达，抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC增殖。     

叔丁基过氧化氢体外模拟噪声引起的耳蜗毛细胞氧化损伤模型的建立

目的 研究有机氧化剂叔丁基过氧化氢(t-BHP)体外模拟噪声对耳蜗毛细胞的氧化损伤.方法 用t-BHP染毒,设置从30～4000 μmol/L8个染毒浓度对耳蜗毛细胞(HEI-OC1)细胞染毒12h,绘制100 μmol/L浓度组染毒时间(1～96 h)与耳蜗毛细胞存活率曲线;采用台盼蓝染色法检测细胞存活率,噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖能力的改变,2’-7’-二氯荧光黄双乙酯(DCFH-DA)探针法检测胞内活性氧(ROS)水平.结果 不同浓度的t-BHP对耳蜗毛细胞染毒12h后,100μmol/L以上浓度组细胞存活率开始出现有统计学意义的下降,其中200～2000μmol/L浓度组细胞存活率呈直线下降.100 μmol/L浓度组t-BHP染毒时间-细胞存活率曲线较为平缓.MTT试验提示,30μmol/L的t-BHP染毒可以促进耳蜗毛细胞增殖,200μmol/L以上各浓度组则抑制细胞增殖.DCFH-DA探针法显示,无染毒细胞镜下无荧光(-),阳性对照为强荧光(+),30和50 μmol/L浓度组则有弱荧光(-+),100μmol/L染毒组为强明亮荧光(++),200～1000μmol/L各组荧光均较强,但随着存活率的迅速降低视野下细胞稀疏.结论 100 μmol/L的t-BHP对HEI-OC1细胞染毒12h可以在不影响细胞外形、增殖能力的前提下提高耳蜗毛细胞内ROS水平,模拟噪声引起的氧化应激.     

高压氧对海水淹溺肺水肿兔肺c-fos和c-jun基因表达的影响

目的 观察高压氧对海水淹溺肺水肿（PE－SWD）兔肺c-fos,c-jun基因表达的影响并探讨其作用机制。方法 制备PE－SWD动物模型,分别采用高频通气、联合用药治疗和高频通气、联合用药、高压氧（HBO）治疗。用原位杂交法观察3组兔肺内c-fos和c-jun基因水平。结果 对照组肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞胞浆中有大量c-fos和c-jun mRNA。用药治疗组和HBO组兔肺内c-fos和c-jun基因表达较对照组明显减少,尤以HBO4组减少更甚。结论 HBO可改善受损肺组织氧气供给,减轻其损伤,从而减少c-fos,c-jun的表达。     

婴幼儿头发稀疏的因素分析

目的:探讨婴幼儿头发稀疏的因素。方法:采取分组对照、纵向追踪、整体抽样调查的方法对237例被监测儿童的性别、孕期情况、有关疾病、矿物质进行分析,其中头发稀疏63例(头发稀疏组),头发浓密112例(对照组)。并按工作流程追访两组头发生长情况4年。结果:头发稀疏的产生机制与亲代幼年时是否同样存在头发稀疏存在明显关联(P<0.01);头发稀疏组与对照组矿物质检测结果比较,差异无统计学意义;3岁前头发稀疏组头发直径明显细于对照组,两组比较有统计学差异(P<0.01),4岁时头发稀疏组头发直径仍细于对照组,但差别无统计学意义。结论:婴幼儿期头发稀疏为出生后遗传信息表达的生理现象,合理的饮食结构有助于头发的生长发育,3～4岁时头发便会逐渐生长正常,存在明显的追赶过程。     

丙烯酰胺对L-02胎肝细胞株细胞凋亡和原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的观察丙烯酰胺(AA)对L-02胎肝细胞株细胞凋亡的影响以及对原癌基因c-fos、c-jun蛋白表达的影响。方法以不同终浓度AA(低剂量组:0.01和0.1mmol/L,中剂量组:0.5、1.0和2.5mmol/L,高剂量组:5.0和7.5mmol/L)对L-02细胞分别染毒12h和24h,CellTiter 96 MTS/PMS Assay法检测细胞存活率,流式细胞术法检测细胞凋亡,westernblot方法检测c-fos、c-jun蛋白表达水平。结果与对照组相比,低剂量染毒组细胞存活率略有升高,中、高剂量组则显著降低(P<0.05);中、高剂量(>2.5mmol/L)染毒组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05);染毒组c-jun、c-fos蛋白表达水平较对照组显著增高(P<0.05),且随着AA浓度的升高呈先升高后降低的趋势;随着染毒时间的延长,c-jun、c-fos蛋白表达水平也显著增高(P<0.05)。结论AA可引起细胞凋亡及原癌基因c-jun、c-fos蛋白表达增高。