miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

miR-218对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨上调miR-218基因表达对子宫内膜癌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法以Lipofectamine TM2000为载体,将miR-218模拟物(mimics)及阴性对照(Scramble)转染人子宫内膜癌HEC-1B细胞,未转染的细胞作为空白组,转染48 h,qRT-PCR检测miR-218 mRNA表达; MTT法及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率; Western blotting检测HMGB1、β-catenin、cyclin D1、Bax蛋白表达。以转染miR-218 mimics后的HMGB1表达及双荧光素酶报告实验验证HMGB1与miR-218的靶向关系。结果转染miR-218 mimics的HEC-1B细胞miR-218 mRNA表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics组与空白组比较细胞活力降低,凋亡率升高,HMGB1、β-catenin和cyclin D1表达降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics可明显抑制野生型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性,而对突变型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性无影响。结论 miR-218可能通过靶向HMGB1抑制Wnt/β-catenin信号降低子宫内膜癌细胞活力,诱导细胞凋亡。     

miR-485-5p靶向Toll样受体4调控巨噬细胞的炎症反应

目的 探究miR-485-5p对Toll样受体4(TLR-4)的靶向作用，研究其在巨噬细胞炎症反应中的调控作用。方法 合成miR-485-5p模拟物(mimics)及其抑制剂(inhibitors),分别转染HEK-293T细胞，RT-PCR检测miR-485-5p的表达水平。根据miRNA靶向作用预测数据分析选定TLR-4作为研究的靶基因，构建TLR-43’UTR及其突变体萤火虫-海肾双荧光素酶报告基因系统，通过检测在细胞模型中过表达/抑制表达miR-485-5p后对荧光素酶活力的影响，验证miR-485-5p与TLR-4之间的靶向关系，Western blot检测TLR-4蛋白质表达水平。构建巨噬细胞模型，将miR-485-5p mimics及inhibitors分别转染巨噬细胞，RT-PCR检测靶基因TLR-4 mRNA的表达水平，ELISA检测上清中下游致病因子IL-6、 IL-17、IL-18的表达。结果 与对照组比较，转染miR-485-5p mimics后miR-485-5p表达水平升高，转染miR-485-5p inhibitors后miR-485-5p表达水平降低(P...     

microRNA-23a对氟暴露大鼠成骨肉瘤细胞成骨活性的影响及靶基因验证

目的探讨miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23a、Ⅰ型胶原(COL1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达水平;培养96 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测COL1、OPN、Runx2蛋白的表达水平;体外培养人胚胎肾细胞(293T),利用双荧光素酶报告基因法验证miR-23a可能的靶基因。结果与空白对照组相比,NaF组UMR-106细胞miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达水平明显升高(P0.05);与激动剂对照组比较,过表达组miR-23a mRNA表达水平明显上升、COL1 mRNA表达明显降低(P0.05),Runx2、OPN mRNA表达变化不显著(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达明显降低(P0.05)。与激动剂对照组比较,过表达组Runx2、OPN蛋白表达水平明显升高(P0.05),COL1蛋白表达水平变化不显著(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组COL1、OPN、Runx2蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与过表达组比较,过表达+NaF组OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05),COL1、Runx2变化不显著;与抑制组比较,抑制+NaF组COL1、OPN、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05)。过表达miR-23a后的293T细胞中双特异性磷酸酶5(DUSP5 mRNA)和蛋白表达水平均明显降低(P0.05),抑制mi R-23a后DUSP5表达水平均明显升高(P0.05);双荧光素酶报告确定DUSP5为miR-23a的靶基因。结论miR-23a能促进染氟UMR-106细胞中成骨活性基因的表达;DUSP5是miR-23a的靶基因。     

三氯化铝对SH-SY5Y细胞tau蛋白异常磷酸化作用

目的 探讨三氯化铝对SH-SY5Y细胞及tau蛋白异常磷酸化水平的影响.方法 选取SH-SY5Y细胞进行三氯化铝染毒,实验分为对照组、200、400和800μmol/L Al3+染毒组,染毒48 h后观察细胞形态学变化,采用CCK-8法测定细胞活性,并提取细胞蛋白,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞蛋白P-tau181、231、262、396和tau5的表达情况.结果 随着染铝浓度增加细胞数目减少,突触回缩,细胞活性测定结果显示,800 μmol/L A13+组细胞活性明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);Western-Blot结果显示200、400和800 μmol/L Al3+组P-taul81、231、396和tau5蛋白的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),800μmol/l.Al3+组P-tau262蛋白表达明显高于对照组,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 在本实验条件下,三氯化铝对SH-SY5Y细胞有毒性作用,低浓度就可引起tau181、231、396和tau5表达异常.     

miR-22在卵巢癌中的表达及其分子机制研究

目的:检测miR-22在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-22调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法:运用qRT-PCR检测66例卵巢癌及相应癌旁正常组织中miR-22的表达改变;构建异黏蛋白(metadherin,MTDH)3’UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-22对MTDH 3’UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-22 mimics转染卵巢癌细胞SKOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-22对SKOV3细胞生长增殖的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-22在66例卵巢癌组织中表达下调;在双荧光素酶报告检测显示,miR-22能特异性地与MTDH 3’UTR结合,抑制其荧光素酶活性。Western blot结果显示,过表达miR-22或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-22或干扰MTDH可抑制人SKOV3细胞的生长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-22通过靶向调控MTDH的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

miR-126调控Shh通路抑制卵巢癌细胞增殖的机制研究

目的探讨miR-126对Shh通路活化和卵巢癌细胞增殖的影响,为临床诊疗卵巢癌提供新靶点。方法选取2017年1月-2018年12月在浙江衢化医院病理确诊并进一步行手术切除治疗的卵巢癌患者20例为研究对象,取其癌性组织及其邻近癌旁组织作为组织标本。检测癌性组织及癌旁组织的miR-126相对表达量。转染miR-126mimics、miR-126inhibitor及阴性对照试剂后,检测癌细胞的miR-126相对表达量、Shh蛋白表达量、细胞周期以及癌细胞的增殖活性。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,卵巢癌组织中miR-126的相对表达量明显高于癌旁组织(P0.05)。卵巢癌细胞转染后,①mimics组的miR-126相对表达量升高于NC组(P0.05),inhibitor组的miR-126相对表达量低于NC组(P0.05);②与NC组卵巢癌细胞增殖活性比较,inhibitor组卵巢癌细胞增殖活性增高(P0.05),mimics组卵巢癌细胞增殖活性降低(P0.05);③与NC组比较,inhibitor组G1期细胞群体明显增多,S期细胞群体减少,mimics组G1期细胞群体明显减少,S期细胞群体增多(P0.05);④与NC组比较,inhibitor组Shh蛋白表达水平升高(P0.05),mimics组Shh蛋白表达水平(P0.05)。结论卵巢癌与miR-126作用相关,抑制卵巢癌细胞增殖的可能作用机制是miR-126调控Shh通路抑制癌细胞生长。     

hsa-circ-0015382通过miR-330-3p/SP4轴调控子痫前期的发生

目的 探讨环状核糖核酸中hsa-circ-0015382通过调控miR-330-3p/SP4轴参与妊娠期孕妇子痫前期的发生。 方法 取子痫前期孕妇及正常孕妇顺产胎盘组织和产前静脉血提取总RNA。采用qRT-PCR检测hsa-circ-0015382和miR-330-3p的表达。采用Western Blotting检测特异性蛋白4（Specificity protein 4,SP4）的表达。原代培养子痫前期产妇胎盘滋养层细胞（PPC）,采用双荧光素酶报告基因检测SP4是miR-330-3p的直接靶基因。采用MTT法检测hsa-circ-0015382和miR-330-3p对胎盘滋养层细胞增殖能力的影响,用Transwell法和细胞划痕实验检测hsa-circ-0015382和miR-330-3p对PPC细胞侵袭迁移能力的影响。 结果 hsa-circ-0015382在子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中异常高表达,SP4是miR-330-3p在PPC细胞中的直接靶基因。在PPC细胞中抑制hsa-circ-0015382表达后,miR-330-3p的表达升高,hsa-circ-0015382和SP4的表达显著降低,同时细胞增殖能力和侵袭迁移能力增强,差异具有统计学意义（P＜0.05）。在PPC细胞中转染miR-330-3p mimics后,细胞增殖能力和侵袭迁移能力增强,差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 hsa-circ-0015382通过调控miR-330-3p/SP4轴参与子痫前期的发生。     

miR-148a-DNMT1对汽油添加剂甲基叔丁基醚所致16HBE细胞DNA损伤的影响

目的 探讨miR-148a-DNMT1 对汽油添加剂甲基叔丁基醚（MTBE）所致人支气管上皮细胞（16HBE）DNA损伤的影响。方法 运用Lipofectamine 2000脂质体将miR-148a mimics转染至16HBE细胞;qRT-PCR分析miR-148a及DNMT1 mRNA的表达;Western Blot分析DNMT1蛋白的表达改变;以终浓度为8 µmol/L的MTBE对正常16HBE,16HBE-mimics及16HBE-NC空载体组细胞分别染毒培养48 h;运用单细胞凝胶电泳（SCGE）实验分析各组细胞的DNA损伤程度。结果 转染miR-148a mimics的16HBE细胞中miR-148a表达增强（P < 0.05）,DNMT1 mRNA及蛋白表达降低（均P < 0.05）,MTBE对各组细胞DNA有损伤,损伤程度无明显差异（P > 0.05）。结论 尚未发现miR-148a-DNMT1的表达变化对汽油添加剂MTBE所致DNA损伤的明显影响。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

Choice of measures of vaccination and estimates of risk of pediatric pertussis

BackgroundVaccination uptake at the individual level can be assessed in a variety of ways, including traditional measures of being up-to-date (UTD), measures of UTD that consider dose timing, like age-appropriate vaccination, and risk reduction from individual doses. This analysis compared methods of operationalizing vaccination uptake and corresponding risk of pertussis infection.MethodsCity-wide case-control study of children in Philadelphia aged 3 months through 6 years, between 2001 and 2013. Multiple logistic regression was used to isolate the independent effects of each measure of vaccination uptake and the corresponding relative odds of pertussis.ResultsBeing UTD on vaccinations was associated with a 52% reduction in risk of pertussis (OR 0.48, 95% CI: 0.34, 0.69). Evaluation of delayed receipt of vaccine versus on-time UTD yielded similar results. There was a decrease in risk of pertussis for each additional dose received with the greatest reduction in pertussis infection observed from the first (OR 0.48, 95% CI: 0.28, 0.83) and second dose (OR 0.17, 95% CI: 0.08, 0.34). Additional doses conferred minimal additional protection in this age group.ConclusionExamining vaccination status by individual doses may offer improved predictive capacity for identifying children at risk for pertussis infection compared to the traditional UTD measure.     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。     

Correlates of stages of change of smoking among inhabitants of deprived neighbourhoods

BACKGROUND: This study examines the prevalence and correlates of stages of change of smoking, in terms of psychosocial, structural and sociodemographic factors, among inhabitants of deprived neighbourhoods. METHODS: Cross-sectional data were obtained from a survey on health related behaviour. Subjects were 2009 current and former smokers, aged 20-46, living in deprived neighbourhoods in Rotterdam, the second largest city in the Netherlands. Three groups of smokers were formed according to the stages of change-definitions of the Transtheoretical Model: smokers not planning to quit (precontemplators), smokers planning to quit (contemplators/preparators) and former smokers (actors/maintainers). Smokers planning to quit and smokers not planning to quit were compared regarding psychosocial factors (attitude, social norm, self-efficacy), structural factors (neighbourhood problems, material deprivation, financial problems, employment status) and sociodemographic factors (age, gender, marital status, cultural background, educational level). Former smokers were compared with smokers planning to quit regarding structural and sociodemographic factors. Logistic regression was used to assess correlates of stages of change. RESULTS: Smokers planning to quit (prevalence = 19%) reported a more positive attitude, stronger social norms and higher self-efficacy expectations in quitting smoking than smokers not planning to quit (prevalence = 57%). Smokers planning to quit less often were Dutch-born, more often had attended higher vocational schooling or university and more often reported experiencing two or more neighbourhood problems compared to smokers not planning to quit. Former smokers (prevalence = 24%) were older, more often Dutch-born, married, employed and higher educated, compared to smokers planning to quit. Furthermore, former smokers less often reported material deprivation and financial problems than smokers planning to quit. CONCLUSION: Among people living in deprived neighbourhoods, different factors correlate with different stages of change of smoking. Implications for health promotion are discussed.     

医学院学生14例癔症分析

目的为了解高校大学生癔症发病情况,以利于做好癔症发作的预防。方法对徐州医学院14例癔症病人发作诱因、临床表现及诊治情况进行回顾性分析。结果具备＂癔症性格特征＂的女大学生易受精神刺激出现心理障碍而发病,且临床症状与体征不符,有复发倾向,暗示治疗有效。结论癔症的起病与精神因素和暗示密切相关,在治疗中暗示疗法同样起着重要作用。应加强女大学生心理健康教育,积极预防癔症发作。     

10例肺吸虫病临床分析

目的了解肺吸虫病的临床表现,诊断和鉴别诊断,为临床防治肺吸虫病提供科学依据。方法采用回顾性分析法,对临床收治的10例肺吸虫病人进行统计分析。结果10例肺吸虫病人,男性多于女性,儿童多发。人体感染肺吸虫后,可表现为胸肺型、胸腹混合型、皮肤型、脑型,但因虫体寄生部位不同,临床表现不一。肺吸虫病人白细胞和嗜酸细胞计数升高。肺吸虫病最易误诊的疾病为结核病。结论肺吸虫病的临床表现和体征并不一致,主要与疾病临床分型有关。临床医生应熟悉肺吸虫病防治知识,提高对肺吸虫病的诊断和鉴别诊断能力,防止误诊、误治。     

两种不同肌瘤剔除术治疗子宫肌瘤的临床疗效比较

目的:比较腹腔镜子宫肌瘤剔除术与腹式子宫肌瘤剔除术的临床疗效。方法:回顾分析63例腹腔镜子宫肌瘤剔除术与61例腹式子宫肌瘤剔除术的临床资料,比较2种手术方式的手术时间、术中出血量、肛门排气时间、使用抗生素时间、术后感染率、体温恢复正常时间、住院时间等情况。结果:两组患者接受子宫肌瘤剔除术顺利完成,腹腔镜组手术时间长于开腹组(P0.05),腹腔镜组术中出血量及剔除肌瘤个数均少于开腹组(P0.05),术后腹腔镜组体温恢复正常时间、肛门排气时间、抗生素使用及住院时间均短于开腹组,两组患者最多随访6个月,腹腔镜组平均康复时间较开腹组短(P0.05),两组随访B超均未发现明显肌瘤结节。结论:腹腔镜子宫肌瘤剔除术损伤小,恢复快,住院时间短,是值得推广的微创手术。     

通过设计发夹RNA抑制HIV病毒NEF基因表达的实验研究

目的 实验研究shRNA能否抑制宿主细胞Hele细胞中NEF基因的表达.方法 给HIV病毒宿主细胞Hele细胞加入预先设计好的4对shRNA,同时设置对照组,提取细胞总RNA和细胞总蛋白,设计NEF和GAPDH的引物,利用SYBR Green实时荧光定量PCR检测NEF的基因水平,利用western blotting检测NEF的蛋白水平.结果 定量PCR和Western-blot方法检测显示,NEF-miRNA-1、NEF-miRNA-2、NEF-miRNA-3、NEF-miRNA-4干扰质粒对靶基因mRNA表达都有抑制作用,其中NEF-miRNA-3干扰质粒抑制作用最显,抑制率达87％.结论 可以通过设计shRNA去抑制HIV病毒的复制.     

尘肺病患者145例死因调查

目的分析汉中市尘肺病的发生、发展和死亡原因，以提高尘肺病患者的生存质量。方法对145例尘肺病患者的死因进行回顾性分析，计算其平均发病年龄、死亡年龄及患尘肺病后的存活年限。结果矽肺的平均发病年龄和死亡年龄均早于煤工尘肺和石棉肺，尘肺病的主要死因为患肺部疾患，患尘肺病后的平均存活年限为12a。结论加强职业健康体检工作，对尘肺病人做到早发现早治疗和预防并发症的发生。     

性发育异常发病机制的研究进展

正常的性腺分化可分为3个过程：原始性腺形成、性别决定和卵巢/睾丸发育。在任一环节中,基因表达或调控发生异常均有可能导致性发育异常疾病的发生。性发育异常是指染色体、性腺和解剖性别不典型。随着分子生物学技术的发展,不断地发现新的基因或信号通路参与性腺分化和发育,如SRY、SF1、WT1、Sox9等基因与睾丸发育密切相关,Wnt/Rspo1/B连环蛋白通路、Dax1、Foxl2等基因在卵巢分化中发挥着重要作用,一些非编码RNA和转化生长因子也有重要的调节功能,且睾丸和卵巢发育均为主动过程,即使在出生后因某些基因的改变两者间也可出现横向分化。这些为揭示性分化异常的发病机制提供了可能。