2型糖尿病患者胰岛素受体胰岛素结合哉基因突变的研究

目的：研究胰岛素受体结合域基因突变与胰岛素受体（INSR）功能异常的关系。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析法和核酸银染法,对70例2型糖尿病患者INSR结合域基因第2,3,6三个外显子（exon）及部分相邻内含子进行基因突变检测。结果：在对外显子6的检测中发现有9例突变,突变又可分为B,C两种不同的SSCP带型。其中B型7例,C型2例,C型突变经测序结果,与外显子6的3′端毗邻的内含子的第43位A→C突变。在外显子3中发现了2例突变。为同一带,在外显子2中尚未发现突变带型。结论：INSR结合域基因的突变在2糖尿病中出现的频率较低。C型突变对INSR结合域的影响及其在2型糖尿病发病中的作用尚待进一步研究。     

广东籍Ⅱ型糖尿病患者胰岛素受体基因变异的研究

目的 探讨胰岛素受体基因(IRG)变异与Ⅱ型糖尿病(Ⅱ型DM)患者胰岛素抵抗(IR)的关系.方法 运用聚合酯链反应及单链构型多态性(PCR-SSCP)对57例广东籍Ⅱ型DM和对照组健康人40人的IRG17外显子进行筛查,并对其进行DNA测序.结果 57例广东籍Ⅱ型DM和对照组健康人40人的IRG17外显子均为野生型(CGGCATGGTGT),未发现基因多态性和点突变.结论 胰岛素受体基因变异可能不是广东籍Ⅱ型DM患者发病和IR的原因.     

脂蛋白脂酶基因PvuⅡ酶切位点多态性与胰岛素抵抗关系的研究

目的旨在探讨脂蛋白脂酶基因第6内含子PvuⅡ酶切位点多态性与胰岛素抵抗、2型糖尿病的发生之间是否有关联。方法随机选取163例2型糖尿病患者作为病例组，106例正常人作为正常对照组，对第6号内含子PvuⅡI酶切位点进行多态性分析。结果病例组中P＋P＋组高密度脂蛋白胆固醇水平明显低于P-P-组，而血清三酰甘油、胰岛素抵抗指数指标水平高于P-P-组。结论PvuⅡ酶切位点多态性与2型糖尿病中胰岛素抵抗有关。     

空腹血糖、胰岛素和C肽联合检测的临床意义

目的对30例2型糖尿病患者及30例正常人空腹血清胰岛素和C肽测定结果进行统计学分析,了解2型糖尿病中糖代谢和胰岛B细胞功能。方法用化学发光法测定C肽和胰岛素。结果 2型糖尿病患者空腹胰岛素和C肽浓度高于正常人(P<0.05)。结论 2型糖尿病患者空腹血清胰岛素、C肽和血糖联合检测可作为糖尿病的分型依据。     

胰岛素受体底物的功能及其基因多态性与2型糖尿病的关系

目的:了解胰岛素受体底物(IRS)的功能及其基因多态性与2型糖尿病的关系,为2型糖尿病的药物开发提供新的视角和思路。方法:以"胰岛素受体底物""2型糖尿病""胰岛素抵抗""基因多态性"为中文关键词,以"Insulin receptor substrate""IRS""Type 2 diabetes""Insulin resistance""Polymorphism"为英文关键词,组合查询1991年1月-2017年11月在中国知网、万方、维普、Pub Med、Springer Link等数据库中的相关文献,对IRS家族的功能、基因多态性与2型糖尿病之间的关系进行综述。结果与结论:共检索到相关文献328篇,其中有效文献38篇。目前,已发现的IRS家族成员有6个(IRS-1~IRS-6)。IRS-1和IRS-2功能异常会导致胰岛素抵抗、诱发2型糖尿病;IRS-3和IRS-4与2型糖尿病的相关性尚不明确;IRS-5和IRS-6发现最晚,其蛋白功能尚不明确。IRS-1常见的Gly972Arg突变与2型糖尿病的发病呈正相关性;IRS-2的Gly1057Asp突变联合肥胖会诱导胰岛素抵抗,但该结论尚存在争议;IRS家族其他突变类型,包括IRS-1的Ala94Thr、Ala512Pro和Ser892Gly突变,IRS-2的ACC、Ala157Thr和Leu647Val突变等,这些突变类型与2型糖尿病的关系尚无充分论据支撑,还需要开展多人种、大样本量的研究。尽管目前的研究已经取得了一些进展,但研究尚不全面,IRS家族各成员及其突变位点与2型糖尿病的相关性仍需要在扩大的人群中进行进一步的验证试验。     

PS-1基因外显子5～9的突变研究

目的：筛查PS-1基因外显子5-9的突变，了解PS-1基因突变在中国人群中的分布情况及在中国人群阿尔茨海默病（AD）发病中可能产生的影响。方法：利用PCR-SSCP分析技术对120例正常体检人群PS-1基因外显子5-9进行突变筛查。结果：在这5个外显子中未发现任何突变，但在内含子9中第16位核苷酸处发现一种基因多态性位点，T／G基因型频率为65．8％，T／T基因型的频率为34．2％，未发现GiG基因型；等位基因T的频率为67．1％，等位基因G的频率为32．9％。结论：PS-1基因外显子5-9的突变频率较低，可能不是中国人群AD的主要危险因素：内含子9多态性与AD之间的关系还需进一步研究证实。     

肺癌中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶融合基因及表皮生长因子受体基因突变分析

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况,从而指导有效的个体化靶向治疗。方法采用扩增阻滞突变系统(ARMS)-聚合酶链反应(PCR),检测200例NSCLC患者EML4-ALK融合基因和EGFR基因表达情况。结果 200例NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因扩增阳性为16例(8%),EGFR基因突变为64例(32%),18外显子(G719X)突变1例,19外显子突变32例,20外显子突变4例,21外显子突变25例,19外显子和20外显子联合突变1例20外显子和21外显子联合突变1例。本组EML4-ALK融合基因阳性患者中均无EGFR基因突变发生。结论NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因和EGFR基因突变检测对有效的个体化靶向治疗至关重要。     

新疆石河子女性乳腺癌患者BRCA1与BRCA2基因突变的研究

目的探讨BRCA1和BRCA2基因突变情况。方法通过PCR及DHPLC方法检测60例乳腺癌患者中BRCA1和BRCA2基因所有外显子及外显子内含子拼接区域基因的突变情况。结果发现BRCA1突变包括3个疾病相关性突变,5种错义突变,4种核苷酸多态性,而BRCA2突变包括4个疾病相关性突变,8种错义突变,5种核苷酸多态性。结论新疆石河子地区家族性乳腺癌的BRCA1基因突变率为6.12%,低于国外和国内其他地区;BRCA1基因致病性突变更多见于ER/PR(+)的乳腺癌患者。     

2型糖尿病GLUT4的基因突变筛查和方法学探讨

目的：探讨2型糖尿病(DM)患者葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因外显子4a的基因突变在2型DM发病机制中的作用。方法：采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法对220例2型DM患者和150例健康对照者的GLUT4基因外显子4a进行筛查，并对筛选的突变基因进行测序分析。结果：在220例2型DM患者中，共检出4例在外显子4a内AAC→AAT（Asn^130）的突变，1例纯合子，3例杂合子，突变率为1．82％。在150例健康对照者中，未发现任何突变。两组突变率无差别(P＝0．157)。结论：GLUT4基因突变在2型DM患者中的发生率较低，不是2型DM致病的主要原因。但2型DM是一种多基因疾病，单个基因突变可能与胰岛素信号途径中的其他突变及环境因素相互作用，导致2型DM的易感性增加。     

早发糖尿病家系葡萄糖激酶基因突变的筛查

目的 早发2型糖尿病家系中可能存在MODY2基因（GCK）的致病突变,了解MODY2基因在早发家族性2型糖尿病发病中作用。方法 收集100个2型糖尿病家系,先证者均在40岁前被诊断为糖尿病,且至少还有一个一级亲属在45岁之前被诊断糖尿病。提取先证者血DNA,用PCR产物扩增MODY2基因的所有外显子和外显子／内含子拼接区,将PCR产物直接进行测序。SPSS进行统计分析。结果 在MODY2基因的筛查中发现3个DNA变异,一个在外显子4（ccc—ccg,为杂合的脯氨酸同义突变Pr0145Pro）,一个在外显子7（gcc—gcg,为杂合的丙氨酸同义突变ala233ala）,一个在内含子9（IVS＋8C〉T）。这三个变异等位基因频率分别为0．5％、0．5％、36％。对内含子IVS9＋8C〉T多态性的群体关联研究发现等位基因T在糖尿病组频率显著低于非糖尿病对照组（36％V847％,P〈0．05）,而C等位基因高于对照组（64％V853％,P〈0．05）。结论 MODY2基因内或附近的基因变异不是早发2型糖尿病家系的主要致病原因。     

Insulin receptor variant forms and type 2 diabetes mellitus

Type 2 diabetes is a polygenic and heterogeneous disease resulting from interaction of genetic factors with environmental influences. Numerous candidate genes have been investigated, but no single major susceptibility gene for Type 2 diabetes has been identified. The insulin receptor was considered a plausible candidate gene. The insulin receptor exists in two isoforms differing by the absence (Ex11-) or presence (Ex11+) of 12 amino acids in the C-terminus of the alpha-subunit due to alternative splicing of exon 11.Ex11- binds insulin with two-fold higher affinity than Ex11+. This difference is paralleled by a decreased sensitivity for metabolic actions of insulin. Some, but not all, studies have reported that expression of the low-affinity Exll+ is increased in Type 2 diabetes, suggesting that alterations in abundance of the two isoforms mnight contribute to insulin resistance. Insulin and Type 1 insulin-like growth factor (IGF) receptors have been shown to form hybrid receptors in tissues co-expressing both molecules. Hybrid receptors bind IGF-I, but not insulin, with high affinity, and behave as IGF-I receptors rather than insulin receptors in terms of receptor autophosphorylation and hormone internalisation. It has been shown that the abundance of hybrid receptors is increased in skeletal muscle and fat from Type 2 diabetic patients, and is negatively correlated with in vivo insulin sensitivity. Mutations in the insulin receptor gene were identified in studies which examined an appropriately sized population of Type 2 diabetic patients. The prevalence of mutations in the insulin receptor gene ranged from 0.4 to 7.8%.     

湖南地区238 例非小细胞肺癌EGFR 基因突变状态分析

目的：评价湖南地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变状态及其与临床特征之间的关系。方法收集2012年1月至2013年6月中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院手术切除的非小细胞肺癌石蜡包埋组织238例,采用PCR扩增结合直接基因测序的方法,对组织DNA中EGFR基因第18-21外显子突变进行检测。结果在238例非小细胞肺癌中,EGFR突变的检出率为35.3％（84/238）。其中,第18、19、20、21号外显子突变占总突变的比例分别为2.4％（2/84）、67.9％（57/84）、3.6％（3/84）、26.2％（22/84）。19号外显子的突变均为第746-753密码子的碱基缺失,以Del E746-A750为主;21号外显子突变类型以L858R为主。女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者（P〈0.05）。而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期和淋巴结转移均无相关性（P〉0.05）。结论湖南地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21外显子为主,且19外显子的突变率高于21外显子,多见于女性、腺癌、不吸烟患者。     

Genetic, pharmacological and functional analysis of cholecystokinin-1 and cholecystokinin-2 receptor polymorphism in type 2 diabetes and obese patients.

Cholecystokinin (CCK) and gastrin (G) and their receptors (CCK1 and CCK2) are involved in multiple physiological functions. Notably, CCK1R plays a role in the regulation of food intake whereas both CCK1R and CCK2R play a role in the regulation of pancreatic endocrine function. CCK1R and CCK2R may therefore serve as pharmacological targets in diabetes and obesity and genes encoding these receptors may be candidate genes in the pathogenesis of the diseases. In this study, we used single nucleotide polymorphism analysis and allele specific amplification for mutation screening of the CCK2 receptor gene and family linkage study. Mutated receptors were constructed, expressed in COS-7 cells for analysis of their binding and functional properties. V125I-CCK2 receptor variant was found in 2 out of 18 type 2 diabetes mellitus families tested. V125I mutation co-segregated in those 2 initial families, but further association studies showed that this mutation was not associated with diabetes or early age at diagnosis of the disease. V125I-CCK2 receptor high affinity sites exhibited a 2-fold enhanced binding affinity for CCK which was correlated to a slightly increased potency in coupling to inositol phosphate production. Since CCK2 receptor is expressed in pancreatic glucagon-producing cells in humans and is involved in secretion of glucagon, an increase of binding affinity of the mutated CCK2 receptor could enhance glucagon secretion in patients bearing V125I mutation. We also characterized a mutant of the CCK1 receptor which was previously identified in an obese patient. This mutant, V365I-CCK1, demonstrated a decreased level of expression (26%) and efficacy (25%) to stimulate inositol phosphates. It can therefore be expected that in humans bearing V365I mutation, decreases in CCK1 receptor expression and coupling efficiency may affect CCK-induced regulation of satiety. Polymorphism or mutations in the CCK receptors may be involved in type 2 diabetes mellitus and obesity. However, further studies are necessary to precisely evaluate this role in humans.     

早发性帕金森病Parkin基因突变研究

目的：研究早发性帕金森病患者Parkin基因的突变情况，并分析Parkin基因突变对其功能的影响。方法：以40例早发性帕金森病患者和100例正常人为研究对象，提取基因组DNA，扩增Parkin基因的7对外显子，并用单链构象多态性（SSCP）的方法分析Parkin基因的缺失突变和点突变情况。结果：2例患者外显子4缺失．1例患者外显子2缺失，1例患者外显子7发乍G951C突变。正常人中未发现外显子缺失和点突变。结论：Parkin基因突变是早发性帕金森病患者发病原因之一。     

唐山市苯丙酮尿症患儿筛查及PAH基因突变情况分析

摘要：目的　分析唐山市苯丙酮尿症（PKU）患儿筛查结果及苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因突变的情况。方法　选取2015年1月—2018年12月唐山市新生儿303 777例,通过茚三酮免疫荧光法检测新生儿足跟血中苯丙氨酸（PA）含量。再利用聚合酶链反应（PCR）和基因测序的方法对筛查出的PKU患儿PAH基因进行检测。结果　303 777例新生儿初步筛查共发现609例可疑阳性,召回其中411例（67.49%）进行复查,确诊42例（13.8/10万）。42例PKU患者的PAH基因测序显示,在84条染色体上共检测到62个（73.81%）12种突变,其中错义突变8种,无义突变2种,缺失突变1种,剪接突变1种。患者PAH基因突变分布在第2、3、6、7、9外显子上,其中第7外显子最多（35个,56.45%）,其次为第3外显子（14个,22.58%）。最常见的突变基因为Exon7-R243Q（18个,29.03%）和Exon3-R111X（10个,16.13%）、Exon7-R261Q（10个,16.13%）。筛查中发现1例典型PKU患儿,该患儿在PAH基因外显子区域同时发现2处杂合突变：c.208-210delTCT（缺失突变）和c.964G＞A（鸟嘌呤＞腺嘌呤）。结论　唐山市新生儿PKU发病率略高于全国,PAH基因突变以错义突变为主,第7外显子是唐山市患儿PAH基因高频突变位点。     

Correlation between serum CEA levels and EGFR mutations in Chinese nonsmokers with lung adenocarcinoma

Aim： To evaluate the relationship between epidermal growth factor receptor （EGFR） mutations and serum carcinoembryonic antigen （CEA） levels in Chinese nonsmokers with pulmonary adenocarcinoma. Methods： We sequenced exons 18-21 of the EGFR gene in 98 cases. The patients were divided into two groups based on their pre- treatment serum CEA levels （below or above 5 n~/mL） for analyzing the correlations with EGFR mutations. Results： Sixty-seven cases harbored EGFR mutations. The rates of EGFR mutations and exon 19 mutations in the high-CEA group （78.2% and 49.1%, respectively） were significantly higher than those in the Iow-CEA group （55.8% and 20.9%, respectively）. Serum CEA levels were found to be the only independent predictor of EGFR mutation （OR 2.837; 95% CI： 1.178-6.829） and exon 19 mutation （OR 3.618; 95% CI： 1.319-9.918）. Furthermore, a higher serum CEA level was associated with a higher EGFR mutation rate and a higher exon 19 mutation rate： patients with serum CEA levels 〈5 ng/mL, 〉5 and 〈20 ng/mL, 〉20 ng/mL showed the EGFR mutation rate of 55.8%, 74.1%, 82.1%, respectively, and the exon ：19 mutation rate of 20.9%, 40.7%, 57.1%, respectively. Patients with EGFR mutations displayed a significantly higher incidence of abnormal serum CEA levels （〉5 ng/mL） than patients without EGFR mutations （64.2% vs 38.7%）. Conclusion： Elevated serum CEA levels predict the presence of EGFR gene mutations in Chinese nonsmokers with pulmonary adenocarcinoma.     

胰岛素联合格列美脲治疗2型糖尿病疗效观察

目的：观察胰岛素联合格列美脲治疗2型糖尿病的疗效与安全性。方法：60例2型糖尿病患者随机分为单药组（胰岛素）和联合用药组（胰岛素＋格列美脲）,每组30人,疗程3个月,比较两组患者治疗前后血糖、糖化血红蛋白、胰岛素用量的变化,并记录低血糖反应次数。结果：2组患者治疗后血糖、糖化血红蛋白水平均显著降低;但联合用药组降低水平明显优于单药组。联合用药组胰岛素用量明显减少。两组低血糖反应次数无明显差异。结论：胰岛素联合格列美脲治疗2型糖尿病疗效好,并且安全。     

肝豆状核变性患者ATP 7B基因外显子8、12、18的DNA测序突变

目的 对肝豆状核变性(WD)患者ATP7B基因外显子(exon)8、12、18进行PCR扩增测序,研究其突变特点.方法 对30例患者(WD组)和10例健康者(对照组)提取外周血基因组DNA,PCR扩增ATP7B基因外显子8、12、18相关片段,并对扩增产物进行测序和分析测序结果 .结果 对照组未见异常,WD组发现12例患者外显子8有突变,突变率为40.0%,测序发现有6例患者外显子Arg778leu呈复合杂合子突变;发现4例外显子12有突变,有2例患者存在双重突变,外显子18未检出突变.结论 WD的ATP7B基因外显子8、12为突变的热点区,18号外显子不是突变热点.