白藜芦醇抑制骨肉瘤细胞侵袭实验研究

目的探讨白藜芦醇对骨肉瘤细胞侵袭的作用及其潜在的作用机制。方法用不同浓度的白藜芦醇处理4种骨肉瘤细胞系,24、48、72h后采用CCK-8法评估细胞增殖情况,并进行流式细胞术实验分析细胞凋亡情况。采用Transwell测定法检测细胞侵袭能力。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分析肿瘤细胞侵袭相关基因的表达。结果白藜芦醇以剂量依赖性的方式抑制骨肉瘤细胞增殖,同时促进骨肉瘤细胞凋亡,并显著抑制骨肉瘤细胞侵袭,其中相关基因基质金属蛋白酶(MMP)1、MMP2、MMP9表达明显下降。结论白藜芦醇可有效抑制骨肉瘤细胞侵袭,其潜在机制可能是下调MMP1、MMP2、MMP9等肿瘤侵袭相关基因的表达。     

塞来昔布抑制脑胶质瘤细胞运动侵袭的影响

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对13251胶质瘤细胞运动侵袭能力的影响.方法 采用脑胶质瘤细胞的体外趋化运动模型和体外侵袭模型,分12、24 h的不同时间进行了Celecoxib抑制胶质瘤细胞运动侵袭的生物特性研究.结果 趋化运动实验中Celecoxib处理后12 h组、24 h组细胞较对照组细胞的趋化运动能力明显下降,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞趋化运动抑制率为52.57%、73.91%,两者差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭实验中Celecoxib处理12、24 h后侵袭至滤膜下表面的细胞数均低于对照组的细胞数,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞组织侵袭抑制率为55.90%、85.16%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Celecoxib能在模拟体内运动侵袭试验中有效抑制U251胶质瘤细胞的运动侵袭能力.     

塞来昔布抑制胃癌多药耐药基因表达的研究

目的探讨选择性环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布对胃癌细胞株BGC823多药耐药(MDR)1表达的影响。方法 BGC823细胞株经不同浓度的塞来昔布处理后,用ELISA法检测胃癌细胞前列腺素E2(PGE2)的分泌;24,48h后用RT-PCR检测多药耐药MDR1mRNA的表达,48h后用免疫细胞化学染色法检测P-gp的表达。结果塞来昔布可显著抑制胃癌细胞株BGC823的PGE2分泌,并呈浓度依赖性(P0.05)。不同浓度塞来昔布作用于细胞后,胃癌细胞株BGC823的MDR/P-gp表达受不同程度抑制,100μmol/L的塞来昔布对MDRlmRNA表达抑制作用强于10μmol/L(P0.01)。作用48h与24h相比,塞来昔布对MDRlmRNA表达的抑制作用更强(P0.01)。结论塞来昔布可抑制BGC823MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。其可能通过抑制COX-2活性而抑制PGE2表达,最终抑制P-gp的表达。     

塞来昔布防治胃癌的机制及应用前景

甘肃为我国胃癌高发区,胃癌病死率居全国之首,安全有效的治疗是研究重点.近年来,随着对肿瘤分子生物学机制研究的不断深入,肿瘤的靶向治疗已成为研究的新方向.大量研究结果表明:环氧合酶(COX)的过度表达在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,非甾体类抗炎药塞来昔布是一种新型COX-2选择性抑制剂,可明显降低消化道肿瘤的发病率.它通过抑制肿瘤生长和肿瘤新生血管生成,诱导肿瘤细胞凋亡,逆转多药耐药,增强化疗药的细胞毒作用和放射敏感性,与化、放疗产生协同作用,从而抑制肿瘤的发生、发展.因此,以COX-2为特异靶点的治疗策略有望为胃癌治疗提供新的思路,具有良好的临床应用前景.     

miR-133a靶向MMP-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制研究

目的 研究微小RNA(microRNA,miR)-133a靶向基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制.方法 培养正常成骨细胞株hFOB1.19及骨肉瘤细胞株MG63、U20S、SAOS2,采用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain...     

埃罗替尼和塞来昔布协同抑制胆管癌细胞生长

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼(erlotinib)与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胆管癌细胞生长的协同抑制作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测胆管癌细胞株QBC939增殖,流式细胞术检测用药前、后细胞凋亡和细胞周期的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹方法观察用药前、后细胞中COX-2、EGFR下游信号及凋亡、细胞周期相关基因蛋白表达的变化。结果:QBC939细胞表达COX-2 mRNA和EGFR mRNA及相应蛋白。埃罗替尼、塞来昔布抑制QBC939细胞增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。同时,塞来昔布增强了埃罗替尼抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。联合用药显著降低p-MAPK、p-Akt及PGE2表达。结论:塞来昔布和埃罗替尼均可抑制胆管癌细胞的生长,而联合用药具有协同作用,能同时阻断EGFR和COX-2信号通路。在胆管癌治疗中具有一定应用前景。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与骨肉瘤

寻找新方法,提高骨肉瘤(OS)治愈率,已成为骨科研究的重点.多个基因参与OS的发生发展,基质金属蛋白酶(MMP)与MMP组织抑制剂(TIMP)平衡紊乱在OS中起重要作用.MMP表达与肿瘤分级或侵袭性相关,且与复发或转移风险相关;TIMP表达与较弱的肿瘤侵袭行为及良好预后相关,其中以明胶酶(MMP-2、MMP-9)及TIMP-2、TIMP-1与OS关系最密切.明胶酶和MT1-MMP过表达多提示OS预后不良.尽管MMP-9、TIMP-1有不同作用,对疾病不同时期有重要意义,但都可作为OS不良预后的标记物,对高危病人更好地划分亚型有意义.抑制MMP治疗OS有潜在可行性.该文就MMP及TIMP在OS研究中的进展作一综述.     

塞来昔布协同顺铂P13K/Akt途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 塞来昔布(50 μmol/L或100 μmol/L)和(或)顺铂(10 μg/ml)作用骨肉瘤MG-63细胞48 h后,MTT法测定细胞增殖的抑制率,电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测基因水平COX-2表达变化,Western blot检测COX-2及凋亡相关蛋白表达变化.P13K抑制剂Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测蛋白表达变化.结果 塞来昔布导致MG-63细胞阻滞在G1期,通过激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9的内源性凋亡途径诱导细胞凋亡;顺铂单药作用后骨肉瘤MG-63细胞凋亡率为5.93%,而联合应用塞来昔布50μmol/L或100 μmol/L后,凋亡率分别为6.66%和37.15%,与顺铂联合具有明显的协同作用;COX-2蛋白表达未降低.塞来昔布联合顺铂明显降低P13K/Akt、survivin、Bcl-2的表达,检测到caspase-9、caspase-3的激活和PARP裂解片段.Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测到pAkt(Thr308)、Bcl-2、survivin表达下调.结论 塞来昔布可通过非COX-2途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,与P13K/Akt、survivin、Bcl-2蛋白相关,并且PI3K/Akt途径在survivin、Bcl-2表达调控中发挥重要作用.这可能是塞来昔布药物干预的中心环节.     

埃罗替尼和塞来昔布抑制胆管癌生长和血管生成

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布对胆管癌荷瘤裸鼠的肿瘤生长协同抑制作用。方法:联合EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-selective tyrosine kinaseinhibitor,EGFR TKI)埃罗替尼和COX-2抑制剂塞来昔布作用于胆管癌细胞株QBC939荷瘤裸鼠,评价药物体内作用效果。结果:埃罗替尼、塞来昔布联合用药显著抑制肿瘤生长,与对照组、埃罗替尼、塞来昔布单药组相比,均有显著性差异。抑制肿瘤生长的作用伴随EGFR下游活性蛋白p-MAPK的下调和VEGF、Ki-67表达的降低。肿瘤组织微血管密度降低。结论:埃罗替尼、塞来昔布抑制胆管癌荷瘤生长,抑制肿瘤细胞增殖,同时抑制肿瘤新生血管。两者具协同作用。靶向抑制EGFR和COX-2通路可以作为胆管癌的潜在治疗方法。     

尼美舒利对结肠腺癌细胞MMP-2表达的影响

目的 探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂——尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞的生长及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响。方法实验分为尼美舒利组、二甲亚砜（DMSO）对照组及不接种细胞的空白对照组，采用MTT法检测不同浓度的尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29（COX-2高表达）及HCT-116（COX-2低表达）增殖的抑制效应；采用改良明胶酶谱分析法检测MMP-2的表达。结果尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29和HCT-116生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性，且对HT-29细胞的抑制作用强于HCT-116细胞；尼美舒利抑制了HT-29细胞的MMP-2表达，而对HCT-116细胞MMP-2的表达的抑制作用不明显。结论尼美舒利可明显抑制COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29的增殖和生长，提示尼美舒利可能通过抑制COX-2活性而降低细胞MMP-2的表达。     

三氧化二砷抑制骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对骨肉瘤细胞及二倍体细胞增殖的影响。方法　应用噻唑蓝 (MTT)法和集落形成能力测定、形态学观察、流式细胞术和电镜观察等方法检测和观察As2 O3 对骨肉瘤细胞株MG 63及二倍体细胞株MRC 5增殖的影响。结果　As2 O3 对骨肉瘤细胞及二倍体细胞株的增殖有抑制作用 ,并具有时间依赖性和一定范围内的剂量依赖性。≥ 1μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63骨肉瘤细胞的抑制率达 70 % ,而≥ 8μmol/L浓度的As2 O3 对MRC 5细胞的增殖才达到相近的抑制率 ;0 .5～ 2 .0 μmol/L浓度的As2 O3 对MG 63细胞的生长抑制率高 ,而对MRC 5细胞的生长抑制率低 ,表现为明显的选择性抑制 ( P <0 .0 1)。 1μmol/LAs2 O3 处理的MG 63细胞第 3天呈典型的凋亡形态学改变 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1期细胞前出现明显亚二倍体峰 ,凋亡率与As2 O3 处理时间呈正相关 ;MRC 5细胞则未见明显凋亡峰。结论　As2 O3 通过诱导细胞凋亡抑制骨肉瘤细胞和二倍体细胞增殖 ,在一定浓度内As2 O3 可选择性抑制骨肉瘤细胞的生长增殖。     

CCL5对MCF-7中细胞增殖能力及CD44~+/CD24~-亚群比例的影响

目的 观察外源性趋化因子5(CCL5)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及CD44+/CD24-亚群比例的影响,探讨其在乳腺癌进展过程中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测浓度为10、50、100、500 μg/L的外源性rhCCL5(recombinant human CCL5)作用0、24、48 h后MCF-7细胞增殖水平的变化,流式细胞仪检测CD44~+/CD24~-亚群比例的变化.结果 rhCCL5作用48 h后MCF-7细胞增殖水平高于对照组(P＜0.05),并呈浓度依赖趋势;且高于作用24、0 h后细胞的增殖水平(P＜0.05).50、500μg/L rhCCL5处理MCF-7细胞后升高了细胞株中CD44~+/CD24~-亚群的比例,分别为对照组的5.68和6.05倍(P＜0.05).结论 外源性CCL5可以明显升高MCF-7细胞的增殖水平以及CD44~+/CD24~-亚群的比例,这种作用可能是其诱导乳腺癌进展的机制之一.     

肺癌抑癌基因-1对人骨肉瘤细胞株MG63的侵袭和转移抑制效应研究

目的观察肺癌抑癌基因-1（TSLC1）稳定转染至骨肉瘤细胞株后对其侵袭、转移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法采用稳定表达TSLC1基因的人骨肉瘤细胞株M8T为研究对象,转染空载体的细胞系M8P设为对照组,MG63细胞株为空白组;Transwell法检测三组细胞株的体外侵袭和迁移能力;将细胞制成1×107细胞悬液,于裸鼠尾静脉注射,第4周开始处死裸鼠,肉眼及镜下观察肺部转移灶形成情况,肺组织石蜡包埋切片HE染色检测。将0.5 mL磷酸盐缓冲液（PBS）重悬2×107细胞皮下注射5周龄裸鼠,皮下肿瘤生长情况1周检测1次。结果 M8T细胞株体外侵袭细胞数目为（25.86±2.12）,迁移的细胞数目为（37.55±3.46）;其裸鼠皮下成瘤形成时间：于注射后第4周开始生长,较对照组和空白组细胞株成瘤时间晚,体积显著减小,体内肺转移形成时间为注射后第9周,肺部转移灶发生率为40%。结论 TSLC1基因可明显抑制人骨肉瘤细胞的侵袭和转移及皮下成瘤能力。     

HSP27-siRNA抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的探讨HSP27-siRNA对肝癌细胞的生长的影响。方法将HSP27-siRNA转染到人肝癌细胞株QGY细胞中;利用MTT法检测不同浓度不同时间HSP27-siRNA对QGY细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测分析HSP27-siRNA对QGY细胞周期及凋亡的影响。RT-PCR检测HSP27-siRNA对QGY细胞HSP27 mRNA表达的影响;Western blot检测HSP27-siRNA对HSP27基因表达蛋白的抑制效率。结果HSP27-siRNA能抑制QGY细胞HSP27 mRNA的表达,使其HSP27蛋白的表达下降。HSP27-siRNA在体外能抑制QGY肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,作用均呈剂量-时间依赖。结论HSP27-siRNA能抑制QGY细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,有可能成为临床治疗人肝癌有效方法。     

单抗CD44-生物素-亲和素系统提高软骨细胞与支架黏附能力的研究

目的 观察单抗CD44-生物素(Biotin) -亲和素(Avidin)绑定系统在构建组织工程软骨中能否提高软骨细胞与支架的黏附能力.方法 分别制备软骨细胞二维和三维培养体系,分3组:A:壳聚糖+软骨细胞;B:生物素+亲和素化壳聚糖+软骨细胞;C:生物素化单抗CD44+亲和素化壳聚糖+软骨细胞.分别测定细胞展平面积、细胞接种脱落率、细胞增殖率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan )、sox9的mRNA表达,组织学切片观察壳聚糖支架内细胞黏附生长情况.结果 细胞展平面积、细胞增殖率及ColⅡ、aggrecan、sox9的mRNA表达量皆为:C组＞B组＞A组(P＜0.05).细胞接种脱落率:A组为C组的3.71倍、为B组的2.17倍,而B组为C组的1.71倍,A组＞B组＞C组(P＜0.05).组织切片显示细胞在支架内C组增殖旺盛、胞外基质表达较丰富,A组增殖较弱、胞外基质表达较弱,B组介于C与A组间.结论 单抗CD44-Biotin-Avidin绑定系统能比Biotin-Avidin绑定系统更显著的提高软骨细胞与支架的黏附能力,促进组织工程软骨种子细胞的增殖和软骨细胞表型的表达.     

膀胱尿路上皮细胞癌CD44v6和CD44v8蛋白的表达及临床意义

目的 探讨C044v6和CD44v8蛋白在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达及其与临床病理的相关性.方法 应用免疫组织化学技术检测60例膀胱尿路上皮细胞癌和10例正常膀胱粘膜CD44v6和CD44v8蛋白的表达.结果 CD44v6在10例正常膀胱粘膜无表达,60例膀胱尿路上皮细胞癌中阳性表达23例(38.3%),阳性表达与肿瘤的病理分级,TNM分期相关.CD44v8在10例正常膀胱粘膜无表达,60例膀胱尿路上皮细胞癌中阳性表达是29例(48.3%),阳性表达与肿瘤的病理分级,TNM分期相关.结论 膀胱尿路上皮细胞癌组织中CD44v6和CD44v8有相关性,可作为判断膀胱尿路上皮细胞癌分级,分期的一个参考指标,联合检测可以可提高判断的敏感性.     

RNA干扰抑制CD44和CD133的表达对肺腺癌A549细胞增殖能力的影响

目的 观察CD44和CD133的表达对人肺腺癌A549细胞株增殖能力的影响.方法 筛选可持续增殖的A549细胞并培养,按CD44和133表达的不同将筛选出的细胞分成5组,非转染组:CD44+CD133+细胞(A组)、CD44-/CD133-细胞(B组)、未分选A549细胞(C组);转染组:CD44-和CD133-细胞(D组)及阴性对照组(E组).筛选得到沉默效果最佳的小干扰RNA(siRNA)片段,并用其转染各组细胞,采用MTS法检测并比较干扰前后各组细胞的增殖能力.结果　沉默效果最佳的siRNA片段及浓度为siCD44-h_002 25 nmol/L和siCD133-h_002 25 nmol/L,沉默效率分别为62%和82%.用其转染各组样本后,CD44和CD133的表达明显被抑制,比较转染前后各组样本的灰度值,差异有统计学意义(P＜0.01).通过分析MTS图显示,转染后细胞的增殖能力显著下降.结论　CD44和CD133的阳性表达,与人肺腺癌A549细胞株较强的增殖能力有关,CD44和CD133可能是肺腺癌干细胞的表面标志物.

Abstract：

Objective To study the effect of expression of CD44 and CD133 on the tumorigenesis of human lung adenocarcinoma cell line A549. Methods A549 cells having continuous self-renewal ability were cultured, and classified into 5 subpopulations based on differential expression patterns for CD133and CD44. The small interfering RNA (siRNA) with optimal sequences was screened out, and transfected the A549 cells. The methods of MTS and cell counting were used to investigate the proliferation of A549cells before and after the expression of CD133 and CD44 was inhibited by RNAi. Results For the optimal sequences and concentrations for siRNA transfection efficiency being 25 nmol/L for both siCD44-h_002 25and siCD133-h_002 25, the transfection efficiency was 62% and 82% respectively. Stably transfected cells were screened, and the expression of CD44 and CD133 was inhibited significantly. The gray values before transfection were significantly different from those after transfection ( P ＜ 0. 01 ). The MTS curve showed that the cell viability was significantly decreased after transfection. Conclusion The proliferation ability of A549 cells was related to the positive expression of CD44 and CD133. CD133 and CD44 may be important surface markers of lung cancer stem cells.     

骨肉瘤组织iNOS和CD44的表达及意义

目的: 研究骨肉瘤组织中诱导型一氧化氮合酶(inducednitricoxidesynthase, iN OS) 与肿瘤表面CD44抗原表达之间的关系。方法: 14例骨肉瘤标本分为转移组和非转移组,分别进行iNOS和CD44的免疫组织化学染色(SP法), 染色强度记分并进行统计学分析。结果: 转移与非转移的骨肉瘤组织中iNOS和CD44表达存在明显差异, 已转移的肿瘤iNOS表达弱而CD44表达强, 非转移的肿瘤则正好相反。结论: iNOS与CD44和骨肉瘤的转移能力之间存在一定的相关性, 可为临床分析肿瘤的预后和发展过程提供一定的帮助。     

不同浓度七氟醚对人肺腺癌细胞株A549黏附能力、CD24和CD44v6表达的影响

目的 观察不同浓度七氟醚对人肺腺癌细胞株A549黏附能力、CD24和CD44v6表达的影响.方法 人肺腺癌细胞株A549用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基于37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养.取对数生长期的人肺腺癌A549细胞,接种于24孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4组:对照组(C组)、1.7％七氟醚组(S1组)、3.4％七氟醚组(S2组)和5.1％七氟醚组(S3组).S1组、S2组和S组人肺腺癌A549细胞通入95％ O2-5％CO2混合气体6 L/min,经1.7％、3.4％、5.1％七氟醚作用6h,C组通入95％ O2-5％ CO2混合气体2 L/min 6 h.各组处理完成后,置于37℃、5％CO2培养箱中继续培养24h.分别于处理前、处理2、4和6 h(T4)时,每组取6个复孔的细胞,再培养24h后,检测细胞黏附率;分别采用RT-PCR法和流式细胞仪检测CD24和CD44v6的mRNA及其蛋白表达.结果 与处理前比较,S1组、S2组和S3组处理2、4和6h时细胞黏附率降低,CD24和CD44v6的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05);与处理2h时比较,S2组和S3组处理4和6h时细胞黏附率降低,CD24和CD44v6的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05);与处理4h时比较,S2组和S3组处理6h时细胞黏附率降低,CD24和CD44v6的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05);与C组比较,S1组、S2组和S组处理2、4和6h时细胞黏附率降低,CD24和CD44v6的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05);与S1组比较,S2组和S3组处理2、4和6h时细胞黏附率降低,CD24和CD44v6的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05);与S2组比较,S3组处理2、4和6h时细胞黏附率降低,CD24和CD44v6的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚可降低人肺腺癌细胞株A549的黏附能力,且呈浓度和时间依赖性,其机制可能与下调CD24和CD44v6的表达有关.