SARS患者血清冠状病毒抗体检测

目的探讨SARS患者血清冠状病毒抗体产生情况.方法采用ELISA方法,对42例临床诊断SARS患者、47例普通肺炎患者和30例正常人进行血清冠状病毒抗体(IgG,IgM)检测.结果42例临床诊断为SARS患者,36例可在10 d左右检测到IgM抗体,阳性率为85.7%,IgG抗体阳性33例,阳性率为78.6%.47例临床诊断为普通肺炎的患者,IgM阳性2例,阳性率为4.26%,IgG阳性4例,阳性率为8.51%.30例正常人体检者没有出现IgM或IgG阳性.结论SARS冠状病毒抗体检测对临床早期诊断有一定的帮助.     

SARS冠状病毒PUMC01分离株的基因组序列分析

目的 对北京协和医院分离的SARS冠状病毒(SARS-CoV)PUMC01株的基因组序列进行变异及系统发育分析。方法 利用随机引物法构建SARS-CoV-PUMC01分离株的cDNA文库,随机挑选质粒克隆进行大规模测序,测序反应经过组装后获得全基因组序列(Genbank Accession No．,AY350750),对该序列与SARS-CoV的参考序列相比进行系统发育及变异分析。结果 与参考序列(SARS-CoV-Tor2及SARS-CoV-Urbani)相比较,在SARS-CoV-PUMC01上共发现10个变异位点;与其他的17株SARS-CoV进行系统发育分析后发现,18株SARS-CoV分为两类,两类之间及每一类的各株病毒间具有不同的分化时间。结论 了解不同地区SARS-CoV之间的系统发育关系,为系统了解不同SARS-CoV分离株之间的临床关系以及SARS-CoV的传播链提供了进化上的证据。     

SARS冠状病毒与实验室诊断

引起严重急性呼吸综合征(SARS)的病原是一种新型冠状病毒。作者对其结构、致病性、抵抗力以及实验室诊断的现状与不足进行了综述。     

SARS的临床诊断和治疗进展

已经证明严重急性呼吸综合征(SARS)是由一种新型冠状病毒所引起。在控制疾病过程中，早期发现、明确传播途径、采取特殊的预防措施是非常重要的。我国制定了疑似和确诊病例的标准，但实验室检查和标准还不完善。迄今主要的治疗措施是隔离、应用利巴韦林和糖皮质激素，以及机械通气等，其他治疗措施诸如恢复期血清疗法还处于探索之中。在征服SARS的过程中还有很多问题急待解决。     

老年SARS患者的临床诊断、治疗及预后分析

目的了解老年严重急性呼吸综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)患者的临床特点、治疗方法及预后。方法回顾性分析北京协和医院2003年3月～5月的老年SARS患者的临床资料,并以同时期非老年SARS患者为对照。结果临床资料完整的老年SARS患者共24例,非老年SARS53例为对照。老年组合并高血压、糖尿病等基础疾病高于对照组,出现咳嗽、咯痰、呼吸困难的比例高于对照组(P<0.05)。老年组合并呼吸衰竭占50%,对照组仅为7.5%,两组相比差异有显著性(P<0.05)。血小板减低的比例老年组高于非老年组(P<0.05)。所有患者均接受了利巴韦林和抗菌素治疗,接受三代头孢菌素或亚胺培南治疗的比例老年组高于对照组(P<0.05)。老年组病死率也明显高于非老年组(33.3%vs3.8%,P<0.05)。单因素分析发现,老年、血小板减少、呼吸衰竭是死亡的危险因素,而Logistic回归分析发现,3者均不是死亡的独立危险因素。结论虽然老年SARS患者发病率相对较低,但基础病多,病情相对较重,治疗难度较大,病死率高。     

SARS冠状病毒辅助蛋白的研究进展

严重急性呼吸道综合征冠状病毒（SARS-CoV）2002～2003年在全球范围内引起了SARS的大规模暴发。其基因组约30kb,含14个潜在的开放阅读框（ORF）,其中6个ORF编码病毒复制的必需蛋白如复制酶（ORF 1a和1b）和4个结构蛋白：核衣壳、刺突、膜和包膜。其余8个ORF编码SARS-CoV特有的辅助蛋白。本文主要在3个方面概述了SARS-CoV辅助蛋白的研究进展：检测感染病人辅助蛋白的抗体;辅助蛋白的表达、加工和定位;辅助蛋白对细胞功能的影响,从而揭示SARS-CoV辅助蛋白的分子和生化特征,为研究SARS-CoV为何有如此强大的致病力提供线索。     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的 分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性。建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法，为SARS的快速诊断提供依据。方法 合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物，从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段，随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNll09与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示，该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus，BCV)和鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)同源性最高，在氨基酸水平上同源性高达75％。结论 SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNll09的保守性极强，适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

RT-PCR对SARS患者粪便SARS冠状病毒RNA的连续测定及其临床意义

目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况。方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,只要有1次RT-PCR结果阳性即判定该标本为阳性。结果在46例患者中,有17例(37.0%)患者的粪便SARS-CoV套式RT-PCR扩增结果为阴性,29例(63.0%)为阳性。粪便SARS-CoVRT-PCR结果阳性时SARS患者的病程为(31.76±10.78)d(12～64d),其中最长1例为64d,系2次连续留取的粪便标本均为阳性、每次标本用2个不同引物RT-PCR扩增结果均为阳性。结论SARS-CoV在患者粪便中排出的时间可长达发病后64d,平均32d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该予以足够的重视。     

SARS患者血清中SARS相关冠状病毒抗体产生规律的初步分析

目的 :了解严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中 SARS病毒特异性 Ig M、Ig G抗体产生的规律。方法 :随机选取32例 SARS患者 5 5份血清标本 ,应用 EL ISA分别检测抗 SARS病毒 Ig M、Ig G抗体。结果 :Ig M抗体阳性率为 5 6 .4 % ,平均出现时间为 (5 .88± 2 .6 2 ) d,其中 2例患者在发病后第 2天即出现阳性 ,平均消失时间为 (14 .2 5± 2 .97) d;Ig G抗体阳性率为4 1.9% ,平均出现时间为 (11.4 0± 4 .2 0 ) d,其中 2例患者在发病后第 3天即为阳性 ;Ig M和 Ig G抗体的总体阳性漏检率为6 .2 5 %。结论 :SARS患者于发病后 3～ 7d血清中出现特异的 Ig M抗体 ,可用于实验室诊断 ;同时进行 Ig M和 Ig G抗体的检测可用于发病 8～ 14 d左右的实验室排查检测     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性,建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法,为SARS的快速诊断提供依据。方法合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物,从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA,经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析,并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段,随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100%),而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNI109与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示,该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus,BCV)和鼠肝炎病毒(murinehepatitisvirus,MHV)同源性最高,在氨基酸水平上同源性高达75%。结论SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNI109的保守性极强,适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达

目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoV N蛋白单克隆抗体均为阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoV N蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义。     

SARS冠状病毒S蛋白S1区多肽与SARS病人血清的免疫反应

目的 测定根据计算机预测的SARS冠状病毒S蛋白S1区的抗原表位多肽与SARS病人血清的免疫反应,以寻找和确定SARS相关冠状病毒的中和抗原表位。方法 采用多肽合成仪合成SARS冠状病毒S蛋白S1区的多肽,并用ELISA方法检测合成的多肽与SARS病人血清的免疫反应。结果 合成的8个多肽与SARS病人血清免疫反应的光密度值是其与正常人血清免疫反应的光密度值的1.5～2.6倍。结论 合成的多肽与SARS病人血清的免疫反应较低,提示这些多肽是否为SARS冠状病毒的抗原表位还要进一步研究。     

感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的 用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染的Vero细胞，为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料。方法 标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞．对培养液负染色标本和vero细胞超薄切片标本进行TEM观察。结果 在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒．病毒颗粒为圆形或椭圆形，外周有冠状排列的纤突，病毒颗粒直径约80～160nm，纤突长度约20～40nm、感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中，主要在内质网和空泡内，可见群集的大小较一致的病毒颗粒。结论 本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARs冠状病毒(SARS—CoV)相符。     

上海2株严重急性呼吸综合征冠状病毒2的分离与鉴定

目的 从新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者鼻/咽拭子样本中分离、培养严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）。方法 将来自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子样本以TPCK胰酶处理,然后接种Vero E6细胞;待大部分细胞出现明显病变时,取细胞培养上清用qRT-PCR法检测病毒核酸,并用反转录PCR扩增病毒受体结合区（RBD）基因片段;将病毒扩增培养后感染接种于96孔板中的Vero E6细胞,观察细胞病变效应,并用免疫荧光法检测病毒蛋白。结果 2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本接种的Vero E6细胞出现明显细胞病变效应,细胞培养上清中检测出新复制产生的SARS-CoV-2核酸,扩增出的RBD序列与早期分离出的SARS-CoV-2相应序列完全一致;病毒感染的Vero E6细胞病变迅速,并能与SARS-CoV-2核衣壳蛋白（N蛋白）单克隆抗体、刺突蛋白（S蛋白）单克隆抗体及COVID-19患者恢复期血清发生反应。结论 从2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本中成功分离出SARS-CoV-2,为后续开展SARS-CoV-2感染与致病机制研究、防治药物与疫苗的研发奠定了基础。     

SARS患者首诊的胸部X线表现

目的分析严重急性呼吸综合征(SARS)首诊患者的胸部X线表现及其在诊断和鉴别诊断中的作用.方法回顾性分析79例SARS患者首诊胸部X线平片,其中男性40例,女性39例;平均年龄(34.1±12.3)岁(15～69岁);平均体温(38.8±0.58)℃.79例患者起病时间至首次胸部X线检查平均时间为(5.8±3.7)d.观察项目包括:病变部位、肺部的基本病变、胸腔积液、心包积液、肺门和纵隔淋巴结增大等.结果79例患者首诊X线胸像阴性者占总例数的45.5%,43例X线胸像阳性者肺内所见均以渗出性病变为主,占阳性总数的81.3%.首诊胸片阳性和阴性者的平均年龄和平均起病时间的比较差异无显著性(P＞0.05).79例患者首次胸片未见有心包积液、肺门和纵隔淋巴结增大.结论SRAS患者的胸部X线表现多以磨玻璃样病变为主,但特异性不强;SARS患者首诊胸部X线阴性者并不少见,且胸部X线阳性者出现时间也可能较晚,应引起临床上的重视.     

重症SARS患者的气管插管分析

目的对13例重症严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)患者的气管插管及呼吸治疗进行分析。方法 采用回顾性方法,对重症监护病房收治的13例SARS患者的气管插管情况进行分析。结果 在转入的13例重症SARS患者中,已有3例行气管插管或气管切开,其余患者采用面罩或鼻导管吸氧。随着病情的进展,有1例患者需进行气管插管,1例气管插管后再行气管切开,并有2人次更换气管插管。结论对无创呼吸支持无效病例应采取气管插管,给予有创呼吸支持,以增加患者的救治机会。气管切开前先行气管插管有助于减少缺氧的发生及呼吸道分泌物的播散,规范化的防护措施能有效防止医务人员感染。     

SARS患者白细胞形态学观察

目的：观察不同病程的严重急性呼吸综合征(SARS)患者白细胞形态的变化。方法：对不同病程SARS患者的血涂片进行形态观察和分析。结果：SARS患者发病期间，其粒细胞比例明显升高，淋巴细胞明显减少，而且出现核仁及多核仁现象，随病程进展，粒细胞、淋巴细胞的比例逐渐恢复至正常范围，有核仁的淋巴细胞也随之减少至消失，均为正常成熟的淋巴细胞。结论：SARS患者发病期间，外周血涂片白细胞分类中，中性粒细胞(分叶核)比例升高，淋巴细胞比例明显减少，随病程进展出现的核仁淋巴细胞减少，血细胞比例、形态恢复正常。