单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦系统杀伤前列腺癌细胞的"旁观者效应"及其调控

目的评价单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦（HSV-TK/GCV）系统杀伤前列腺癌细胞PC-3m的“旁观者效应”,探讨连接蛋白（Cx）介导的细胞间隙连接交流（GJIC）在该系统“旁观者效应”中的作用,观察apigenin对PC-3m细胞连接蛋白43（Cx43）表达及GJIC状况的调控。方法MTT法评价TK基因系统杀伤PC-3m细胞的“旁观者效应”,划痕标记染料示踪技术（SLDT）比较几种代表细胞系GJIC功能状况,检测HSV-TK/GCV对其“旁观者效应”。逆转录－聚合酶链式反应（RT-PCR）法和SLDT检测PC-3m细胞Cx43表达和GJIC状况,并观察apigenin对Cx43表达、GJIC状况及“旁观者效应”的调控作用。结果HSV-TK/GCV系统杀伤PC-3m细胞时“旁观者效应”程度较弱,TK基因阳性细胞比例约为10%的混合细胞经100 μmol/L GCV处理72 h后,仅23.5%±3.21%细胞被杀灭。该自杀基因系统对GJIC功能强大的NIH-3T3、 Cos-7和L-02细胞“旁观者效应”程度远较GJIC功能低下的ACHN和HeLa细胞者强（P<0.001）。PC-3m细胞Cx43 mRNA表达降低,GJIC功能低下,apigenin不仅可上调PC-3m细胞Cx43表达、促进GJIC功能,还可使其“旁观者效应”明显改观（P<0.001）。结论细胞内在的GJIC功能与HSV-TK/GCV对其“旁观者效应”程度有正向关系,PC-3m细胞Cx43 mRNA表达减弱及GJIC功能低下可能是导致HSV-TK/GCV系统杀伤该细胞时“旁观者效应”较弱的原因,某些化学物质如apigenin可通过上调PC-3m细胞Cx43表达并促进GJIC功能,增强“旁观者效应”程度及TK基因系统疗效。     

Cx43在前列腺癌组织和PC-3细胞株中的表达及其意义

目的探讨缝隙连接蛋白43（Cx43）在前列腺肿瘤中的生物学意义。方法免疫组化法观察Cx43在正常组织和肿瘤组织以及体外培养的前列腺癌PC-3细胞株中的表达,并采用半定量RT-PCR法检测mRNA水平的变化。结果本实验在mRNA水平上证实PC-3细胞有Cx43 mRNA的表达,在蛋白水平上证实PC-3细胞和前列腺癌组织均有Cx43的表达,但其表达较正常者减弱,蛋白异常定位于胞浆中而非胞膜上。而且Cx43在前列腺癌组织中的表达与前列腺癌病理分级呈负相关。结论Cx43降低可能影响前列腺癌组织及前列腺癌细胞的发生和发展。     

LKB1通过增强间隙连接细胞通讯增加乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的研究LKB1对乳腺癌细胞顺铂化学敏感性的作用及机制。方法构建LKB1高表达的稳定转染细胞MDA-MB-231/LKB1及其空载对照细胞MDA-MB-231/VEC。RT-PCR、Western印迹法检测细胞间隙连接蛋白Cx26、Cx32、Cx43和Cx50的核酸、蛋白水平表达;免疫荧光实验对Cx43进行胞内表达定位;染料传输实验评估间隙连接细胞通讯功能;细胞毒实验检测顺铂杀伤乳腺癌细胞的＂旁观者效应＂及计算顺铂的半数抑制浓度。结果 LKB1增加了间隙连接蛋白Cx43的核酸及蛋白水平表达（P〈0.01）,但对Cx26、Cx32及Cx50的表达水平无明显影响。LKB1增加了细胞膜上Cx43的表达,增强了细胞传递荧光黄染料的能力,并使顺铂对细胞的旁观者杀伤效应增强。LKB1也增加了细胞对顺铂的敏感性,MDA-MB-231、MDA-MB-231/VEC和MDA-MB-231/LKB1的半数抑制浓度分别为22.46、24.72、6.55 nmol/L,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 LKB1通过增强乳腺癌细胞的Cx43表达及间隙连接细胞通讯功能增强了顺铂的旁观者杀伤效应,并增加了细胞对顺铂的敏感性。     

用PCR方法定量检测IL-6受体基因在前列腺癌中的表达

利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）定量检测了10例正常人前列腺、15例前列腺癌（PCa）及 PCa细胞系PC-3m中白细胞介素6受体(IL-6R）基因表达水平。结果发现,正常人前列腺组织中IL-6R基因呈低水平表达,PCa组织中IL-6R基因表达增强,明显高于正常组（P<0.01）,且73.3％（11/15）组织样本中IL-6R mRNA表达水平高于 PC-3m。而IL-6所介导的假单胞菌外毒素融合蛋白对该细胞系有强烈的杀伤作用。这表明IL-6及IL-6R与PCa的发生发展有关,并为PCa的生物学治疗的研究奠定了基础。     

不稳定逼尿肌Cx43基因表达及其与逼尿肌细胞间缝隙连接通讯功能的关系研究

目的研究连接蛋白Cx43基因在体外培养不稳定逼尿肌细胞中的表达及不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯(gap junction intercelluar communication,GJIC)功能的变化,初步探讨二者与逼尿肌不稳定(destrusor instability,DI)的关系.方法健康雌性Wistar大鼠40只,分为DI组和正常组.RT-PCR及Western blot法检测各组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白表达变化,划痕标记荧光染料示踪技术(SLDT)检测各组逼尿肌细胞间GJIC功能变化.结果RT-PCR及Western blot检测结果显示DI组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白含量明显高于正常组(P＜0.01),SLDT结果表明DI组逼尿肌细胞间GJIC明显强于正常组(P＜0.01).结论体外培养不稳定逼尿肌细胞中Cx43基因表达增加,细胞间GJIC增强,二者可能与DI的发生有密切关系.     

HSVtk/GCV介导的旁观者效应对人膀胱癌的作用机理

目的研究单纯疱疹病毒胸腺苷激酶基因(HSVtk)联合丙氧鸟苷(ganciclovir, GCV)对人膀胱癌细胞(BIU87)的旁观杀伤作用,探讨旁观者效应产生的机制.方法将携带HSVtk基因的细胞BIU87-TK与BIU87混合培养,观测HSVtk/GCV系统的旁观者效应.染料划痕标记观察细胞间缝隙连接功能;RT-PCR 检测连接蛋白Connexin26 (Cx26) mRNA表达.同时观测维甲酸对缝隙连接和旁观者效应的影响.结果当BIU87-TK占40%时,共培养细胞对GCV的杀伤敏感性接近60%,显示出旁观者效应.大量细胞凋亡.划痕实验见染料传至临近细胞,RT-PCR 检测出Cx26mRNA表达(0.15).维甲酸处理后,染料传递至更多细胞,Cx26mRNA表达增加到0.34, HSVtk/GCV的旁观者效应随之提高.结论 HSVtk/GCV对人膀胱癌细胞具有旁观杀伤作用,其机理与细胞间缝隙连接和凋亡有关.维甲酸能增强细Cx26表达和缝隙连接功能,提高旁观者效应.     

二氢睾酮对前列腺癌LNcap和PC-3细胞株EGFR mRNA表达的影响

目的探讨AR免疫表型突变对前列腺癌(prostate carcinoma,PCa)增殖和凋亡效应的影响机制,为PCa的病理及临床提供实验依据.方法应用不同水平DHT刺激LNcap和PC-3细胞株,检测EGFR mRNA及蛋白在不同AR表达的PCa中的表达特点,研究雄激素及AR与PCa增殖和凋亡的相关性.结果低水平DHT促进LNcap细胞EGFRmRNA的表达,促进LNcap细胞增殖,随DHT水平升高EGFR mRNA表达下降,增殖活性下降,不加DHT组EGFR mRNA表达较低.低水平DHT与不加DHT对PC-3细胞EGFR水平影响不大,增殖活性较高,高水平DHT刺激则EGFR表达下降.结论在AR正常表达情况下,雄激素可提高前列腺癌细胞EGFR水平且有剂量依赖性.AR表达异常,雄激素信号途径改变,不能影响EGFR的转录水平,EGFR的表达和激活可能受其他表达上调的细胞因子调控.     

六味地黄丸调控肝癌CBRH7919细胞Cx43表达的体外研究

【目的】探讨六味地黄丸对大鼠肝癌CBRH7919细胞缝隙连接蛋白(Cx)43表达的影响。【方法】应用血清药理学方法制备六味地黄丸含药血清,分别采用蛋白免疫印迹(Western blot)法、异硫氰酸荧光素(FITC)标记间接免疫荧光染色—激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术检测不同剂量(体积分数0%、2.5%、5%、10%)六味地黄丸含药血清组CBRH7919细胞Cx43蛋白的表达,采用实时定量逆转录—聚合酶链反应(RT-q PCR)检测各组肝癌细胞Cx43 m RNA的表达。【结果】与对照组(0%六味地黄丸含药血清)比较,体积分数为2.5%、5%、10%的六味地黄丸含药血清均能明显提高肝癌CBRH7919细胞Cx43蛋白及m RNA表达水平。【结论】六味地黄丸可能是通过促进肝癌CBRH7919细胞Cx43蛋白及m RNA的表达,改变Cx43膜定位,改善细胞间缝隙连接通讯功能,从而发挥抑制肝癌的作用。     

Relationship between the expression of connexin43 and bystander effect of suicide gene therapy in ovarian cancer

heHSV TKbystandereffecthasbeendefinedtodescribetheGCV mediateddeathofHSV TKex pressingcellsandadjacentHSV TKnegativecells .Thiseffectisconsideredaprerequisiteforthethera peuticefficacyofHSV TK /GCVtherapyowingtothecurrentlowefficiencyofdeliveryvectorstota…     

凋亡相关基因Survivin蛋白在前列腺癌组织中的表达及临床意义

[目的]探讨凋亡抑制基因Survivin蛋白在前列腺癌（PCa）中的表达及临床意义。[方法]应用免疫组织化学方法，检测43例前列腺癌和5例正常前列腺组织中Survivin蛋白的表达。[结果]PCa组织Survivin蛋白的表达率为81．40％（35／43），其中低、中、高分化腺癌的阳性表达率分别为100％、84．62％、57．14％；临床分期A—B、C—D期阳性表达率分别为72．41％、100％。5例正常前列腺组织中未见阳性表达。[结论]Survivin蛋白的表达与前列腺癌临床病理特征和生物学行为有密切关系，检测Survivin对诊断前列腺癌、判断其恶性程度及预后均有一定参考价值。     

前列腺癌中COX-2 TGF-β1表达与肿瘤发生浸润和转移的相关性研究

目的:通过检测前列腺癌(PCa)、癌前期病变及良性前列腺增生(BPH)组织中COX-2、TGF-β1表达,探讨其在PCa发生、发展及转移中的作用。方法:随机选择39例PCa、13例癌前期病变和23例BPH标本,应用免疫组化SABC法分别检测COX-2和TGF-β1的表达强度、分布和形态,并采用北航病理图像分析系统分析实验结果。结果:在BPH和PCa组织中,COX-2阳性率分别为8.70%(2/23)、64.10%(25/39);而TGF-β1的阳性率分别为21.74%(5/23)、79.49%(31/39)。COX-2、TGF-β1在PCa组织中的表达均明显高于BPH(P<0.01)。结论:COX-2、TGF-β1表达与PCa生物学行为关系密切,尤其在PCa浸润、转移过程中,二者可能通过促进PCa细胞增殖、抑制细胞凋亡和诱导血管生成等协同发挥重要作用。     

前列腺癌中白细胞介素-6的表达及其意义

目的 探讨细胞因子白细胞介素-6(IL-6)在前列腺癌发生发展中的作用及其临床意义.方法 ①采用免疫组化SABC法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对前列腺癌组织及其相应的癌旁前列腺组织和前列腺癌细胞系PC-3及LNCaP中的IL-6表达进行检测;②采用酶联免疫吸附试验(ELlSA)检测前列腺癌患者及随机正常人群外周血中IL-6的浓度和前列腺癌细胞系PC-3及LNCaP培养上清液中的IL-6浓度.结果 ①前列腺癌组织中IL-6表达明显强于相应的癌旁前列腺组织,且与肿瘤的分期分级相关;PC-3细胞中IL-6呈强阳性表达,而LNCaP细胞中IL-6呈弱阳性表达.②前列腺癌患者外周血中IL-6浓度显著高于正常人群组;而PC-3细胞组培养上清液中IL-6浓度也明显高于LNCaP细胞组.结论 IL-6基因可能在前列腺癌的发生发展中起重要作用,有可能是前列腺癌从激素依赖性转化为非激素依赖性的因素之一.     

DADS提高HSV-tk/GCV自杀基因系统对兔晶状体上皮细胞旁观者效应的机制

目的:探讨二烯丙基二硫化物(dialyl disulfide,DADS)提高重组腺相关病毒(recombinant adenoassociated virus,rAAV)介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus kinase,HSV-tk)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)系统对兔...     

The inhibitory effects of siRNA expression vector on CXCR4 expression in prostate carcinoma cell lines

INTRODUCTION Ithasbeendemonstratedthatchemokinesandtheirreceptorsarecloselyrelatedtomalignantbehavior oftumorcells.Especially,thechemotaxiscausedby CXCR4anditsligandstromalcellderivedfactor1(SDF1)inthetumorcells,suchasleukemiacells,lungcarcinomacellsandovarycarcinomacells,isthe mostinteresting[13].Ithasalsobeenindicatedthat CXCR4isexpressedinmanykindsofnasopharyngeal carcinomacellsandprostatecarcinomacells[46].CXCR4andSDF1canalsobeexpressedsimultaneouslyinsome kindsoftumorcells.The…     

DADS提高HSV—tk／GCV自杀基因系统对兔晶状体上皮细胞旁观者效应的机制

目的：探讨二烯丙基二硫化物（diallyl disulfide,DADS）提高重组腺相关病毒（recombinant adenoassociated virus,rAAV）介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus kinase,HSV—tk）／丙氧乌苷（ganci—clovir,GCV）系统对兔晶状体上皮细胞旁观者效应的可能机制。方法：应用免疫组织化学方法检测正常兔晶状体上皮细胞间隙连接蛋白43（connexin43,Cx43）及转染HSV-tk基因的晶状体上皮细胞Cx43的表达,以及不同浓度的DADS诱导下的2种细胞的Cx43表达,MTT比色法检测细胞存活率。结果：兔晶状体上皮细胞Cx43及转染删弘砒基因的晶状体上皮细胞的Cx43经DADS诱导后表达阳性明显增强,尤其以50μmol／LDADS最明显。MTT比色法检测显示DADS增强了HSV—tk／GCV自杀基因系统的旁观者效应。结论：DADS可以提高晶状体上皮细胞Cx43的表达,并可提高HSV—tk／GCV自杀基因系统对兔晶状体上皮细胞的旁观者效应。     

雌二醇及雌酮对人子宫内膜细胞GJIC及连接蛋白的影响

【目的】 探讨雌二醇(E2)及雌酮(E1)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)及连接蛋白(Cx)43?32表达的影响?【方法】 采用划痕染料标记示踪技术及激光共聚焦显微镜扫描技术(LSCM),观察E2及E1对原代培养的20例人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察E2及E1对Cx 43?Cx 32表达的影响?【结果】 5 × 10-5 mol/L雌二醇作用48 h后间质细胞及腺上皮细胞GJIC功能没有明显变化(P > 0.05),2.5 × 10-5 mol/L雌酮作用间质及腺上皮细胞48 h后,细胞GJIC功能有所下降(P 0.05)?【结论】 E1抑制细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;E1及E2均未影响子宫内膜细胞Cx43?Cx32的表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能?     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞缝隙连接蛋白43表达的影响

目的 研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）中缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达的影响.方法 将体外培养的大鼠GMC分为6组：低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组,蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）抑制剂组.培养72 h后,收集细胞并提取细胞总蛋白,Western-blot法检测黄芩苷对高糖环境下GMC中PKC和Cx43表达的影响,用划痕标记染料示踪技术检测黄芩苷对GMC缝隙链接通讯功能（gap junction intercellular communication,GJIC）的影响.结果 Western-blot结果显示,与低糖组比较,高糖组中PKC蛋白表达量显著增加（P〈0.01）,Cx43蛋白表达量显著减少（P〈0.01）;黄芩苷呈剂量依赖性降低PKC蛋白表达水平,升高Cx43蛋白表达水平.划痕标记染料示踪实验结果显示：与低糖组比较,高糖组GMC的GJIC功能缺乏,未向邻近细胞传输;与高糖组比较,PKC抑制剂组罗氏黄荧光染料向划痕两侧邻近细胞传输的层数较黄芩苷各剂量组明显增多,黄芩苷各剂量组呈剂量依赖性地增加传递的层数.结论 黄芩苷可剂量依赖性地抑制高糖环境下GMC中PKC的异常活化,从而上调Cx43表达,恢复GJIC的功能.     

Detection of pim-1 mRNA in prostate cancer diagnosis

Background Pim-1 plays an important role in the apoptosis, proliferation, differentiation of cancer cells and progression of cancer. In this study we detected the expression of pim-1 mRNA in normal prostate, benign prostatic hyperplasia (BPH), and prostate cancer (PCa) and explored its diagnostic value for PCa.Methods The prostate tissues were collected from 23 patients with PCa, 37 patients with BPH, and 3 healthy volunteers. Pim-1 mRNA expression levels in these samples were determined by the quantitative real-time PCR (QRT-PCR). The differences of expression were calculated based on a standard curve.Results The ratio of pim-1 mRNA to β-actin in the normal prostate, BPH, and PCa were 1.05±0.04, 2.57±0.74 and 4.45±0.63, respectively. The differences among PCa, BPH and NT were significant (P&lt;0.05, respectively).Conclusion Detecting pim-1 mRNA expression by QRT-PCR provides a reliable metric for the diagnosis of PCa.     

Cx43蛋白在宫颈癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响

探讨细胞间隙连接蛋白Ｃｘ４３在人子宫吕细胞系ＨｅＬａ中表达,及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法应用流式细胞仪以及ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ划痕记荧光舆技术,研究维甲酸作用对ＨｅＬａ细胞Ｃｘ４３蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用。