体外保存兔甲状软骨活性的实验研究

目的:研究如何在体外长期保存兔甲状软骨块的活性.方法:取兔甲状软骨15块,软骨大小约5 mill×2 mill×1mm,将所取软骨块分别置于4℃,-80℃冷冻及RPMI-1640液,于37℃培养保存,于保存24 h,7,14,21,30 d时取样品,分别用HE,AB/PAS及Masson三色染色和台盼蓝排斥试验检测软骨活性.结果:用RPMI-1640培养液保存的兔甲状软骨,在整个保存期中活性保持较好,软骨细胞活性率保持在85%左右;-80℃冷冻保存7d时软骨基本失去活性,4℃保存软骨在保存30d时软骨活性明显降低.结论:与低温保存方法相比,用组织培养法能较好地保存兔甲状软骨块活性.     

人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论 :为体外研究人类牙齿正常发育及各种因素对牙齿发育的影响提供了一个实用的模型     

胆汁酸对人胰腺癌细胞的毒性作用

目的 :通过研究人胆汁中胆汁酸对人胰腺癌PANC 1和MIAPaCa 2细胞株体外增殖和超微结构的影响 ,探讨胆汁酸对人胰腺癌细胞生长抑制作用 .方法 :选用人胰腺癌PANC 1和MIAPaCa 2细胞在不加或添加 1 0mL·L-1 、2 0mL·L-1 、4 0mL·L-1 胆汁的RPMI 1 6 4 0培养液中经过 2 ,4 ,6 ,8d培养后 ,用MTT方法测定胆汁对细胞增殖抑制率 .PANC 1细胞培养 2 4h和 4 8h以后用扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部超微结构变化 .结果 :PANC 1和MIAPaCa 2细胞在添加胆汁的培养液中增殖受明显抑制 (P <0 .0 1 ) ,其对PANC 1的抑制率为 (2 4 .0 9± 5 .0 5 ) % -(89.6 1± 2 .2 8) % ,对MIAPaCa 2的抑制率为 (1 6 .71±1 0 .5 1 ) % - (78.5 5± 6 .5 9) % .PANC 1细胞在含胆汁培养液中培养后 ,细胞表面微绒毛变短变疏 ,细胞内线粒体、粗面内质网发生空泡变性 .结论 :胆汁中的胆酸对人胰腺癌细胞增殖有抑制作用 ,其抑制机制在于胆酸的细胞膜毒性作用     

益肾胶囊对慢性肾小球肾炎患者尿蛋白及NK细胞的影响

1　临床资料　慢性肾小球肾炎患者 130例 ,均根据临床实验室检查除外了继发性肾小球疾病 .男 87例 ,女 4 3例 ,年龄10～ 6 2 (平均 30 .6 )岁 ,肾功能均正常 .正常对照组 4 5例均为健康查体者 ,男 2 8例 ,女 17例 ,平均年龄 31.5岁 .常规分离单个核细胞 (PBMNC) .RPMI 16 4 0培养液调至 1× 10 9·L-1,作为效应细胞 .K5 6 2细胞传代培养 2～ 3d后 ,调至浓度为 1×10 10 ·L-1,作为靶细胞 .采用乳酸脱氢酶 (LDH)释放法效应细胞和靶细胞各 10 0 μL/孔在 37℃下 ,5 0mL·L-1CO2 孵箱中孵育 6h,加LDH底物混合液 10 0 μL/孔 ,避光反…     

兔关节囊自体游离移植形成软骨的实验研究

探讨兔髋关节囊移植化生软骨的可能性 ,为修复股骨头软骨缺损提供新材料。方法 :新西兰幼兔 2 4只 ,将其随机分成实验组 16只 ,取左髋关节囊 5mm× 5mm修复同侧股骨头软骨缺损 4mm× 4mm ;对照组 8只 ,仅造成左股骨头软骨缺损 4mm× 4mm。术后左髋进行持续被动活动 3周。这两组的右髋手术方法同实验组 ,术后让其自由活动 ,作为亚对照组。术后 6周及 12周处死动物 ,进行大体观察及组织学检查。结果 :实验组软骨形成率占 87.5 % (14/16 ) ,明显优于亚对照组的 2 9% (7/2 4) (χ2 =13 .0 99,P <0 .0 0 1) ,对照组无软骨形成。实验组及亚对照组 6周时 ,移植区表层可见滑膜细胞 ,深层为软骨细胞 ,12周时软骨细胞逐渐增多 ,对照组缺损区为纤维组织。结论 :兔髋关节囊移植可化生关节软骨 ,持续被动活动优于自由活动。关节囊游离移植在临床上的应用还需进一步研究。     

经戊二醛与环氧氯丙烷处理后猪瓣的形态与组织结构变化

目的 :研究戊二醛 (glutaraldehyde ,GA)与环氧氯丙烷 (epoxychloropropan ,EC)处理猪动脉瓣对其形态及组织结构的影响 .方法 :将宰杀 1h的猪主动脉瓣 4 0枚 ,平均分成 4组 ,分别置入对照组 :4℃的 30mL·L-1GA保存液中 ;GA组 :4℃的 5mL·L-1GA液保存 ;EC改性组 :经 4℃的 5mL·L-1GA液保存 4 8h后 ,移入 4℃的 2 0mL·L-1EC液保存 4 8h ,再用 4℃的 5mL·L-1GA液保存 ;EC处理组 :用 4℃的 2 0mL·L-1EC液保存 .各组在处理后 2mo观察大体形态 ,显微和超微结构 ,测定组织稳定性 ,组织含水量 ,保存 1a后测定组织断裂强度 .结果 :对照组 ,GA组 ,EC改性组的纤维形态结构无差别 ,EC处理组胶原纤维出现局灶性松乱和溶解现象 ;对照组 ,GA组和EC改性组 3组间热皱缩温度无明显差别 (P>0 .0 5 ) ,但分别明显高于EC处理组 (P <0 .0 0 1) ;4组间组织含水量无明显差别 (P >0 .0 5 ) ;4组间组织断裂强度无明显差异 (P >0 .0 5 ) .但EC改性的GA瓣组织结构的稳定性和抗钙化优于其他组 .结论 :EC改性的GA瓣较GA瓣能保持瓣膜结构的完整性并提高瓣膜组织的稳定性 ,具有更好的抗张强度和抗钙化能力 .     

MTT改良法检测胎盘口服液的生物活性

1　材料和方法　材料与仪器、胎盘提取物的制备、60 Co照射灭菌及蛋白质含量测定等参见文献 [1 ].①稳定性实验 :60 Co3kGy照射胎盘口服液 ,4℃保存 6mo,溶液的性状、细菌检查及蛋白质含量测定等均按 2 0 0 0版《中国药典》规定进行 .②胎盘提取物促进免疫细胞增殖的实验 :实验分对照及实验 2组 ,按文献 [1 ,2 ]进行 .用不完全 1 6 4 0培养液调整细胞数为1× 1 0 8·L-1 ,对照组加生理盐水 1 0 0 μL ,实验组加胎盘提取物1 0 0 μL ,反应终浓度为 5× 1 0 -2 g·L-1 ,做 5批次 .③改良MTT检测 :实验分原方法和新方法 2组 ,参照文献 [1 -…     

组织培养下胎儿卵巢雌二醇的分泌

目的 :观察组织培养条件下胎儿卵巢能否分泌雌二醇 (E2 )及胎儿胰腺条件培养液对E2 分泌的影响。方法 :取 16例中晚期妊娠水囊引产的胎儿卵巢 ,将其切成 1 2mm× 1 2mm× 1 2mm的碎块进行直接培养及加胎儿胰腺条件培养液组织培养。培养后测定培养液中E2 含量。结果 :胎儿卵巢在组织培养条件下能产生E2 ,随培养时间延长 ,E2 分泌量增加。加胎儿胰腺条件培养液组 ,E2 分泌量高于对照组 ,P <0 .0 5。结论 :胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2 ,可作为卵巢移植的供体。     

人骨髓造血基质干细胞体外增殖方法

目的 :探讨使骨髓造血基质干细胞 ( HSSC)体外稳定增殖的方法。方法 :取开胸术剪下的人肋骨 (正常血象 ,非血液系统及恶性肿瘤病 ) ,常规制备骨髓细胞悬液 ,从胎牛血清及人 AB型血清中选择最佳血清 ,人 AB型血清浓度分别为 5 %、1 0 %、1 5 %、2 0 %、30 %、35 %、40 %。培养液分别为 RPMI1 640、DMEM、IMDM以选择最佳培养液。加入人重组碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)进行最佳浓度测定。培养物置 CO2 孵箱中培养 2周后行 HE染色 ,计数基质细胞集落数。结果 :选择出最佳培养体系为 30 %人 AB型血清、1μg· L-1 b FGF、Penicillin 1 0 0 KU· L-1 、Streptomycin5 0 KU· L-1 、氢化考的松 1 0 -6mol· L-1 和 IMDM培养液。结论 :选择最佳的培养体系可增加HSSC增殖数量 ,最宜体外培养时间 ( 1 4～ 2 1 d) ,最大限度增加回输时的 HSSC数量 ,使自体回输治疗急性白血病 ( AML)成为可能     

5-FU和MMC溶于高氧液中的理化性质

目的 :研究高氧液对不同化疗药物生物活性的影响 .方法 :采用高氧发生仪对 9mL·L-1 氯化钠注射液 (9mL·L-1 NS)充氧 ,制备成高氧液 (氧分压为 80～ 1 0 0kPa) ;用高氧液 (9mL·L-1 NSHO)稀释 5 氟脲嘧啶 (5 Fu)、丝裂霉素(MMC) ,在不同温度下 (2 5℃和 37℃ ) ,分别作用 0 ,0 .5 ,1 ,2 ,3和 4h ,观察药液的理化性质 ,检测液体内药物含量及成分的变化 .结果 :用 9mL·L-1 NSHO稀释化疗药 ,在 2 5℃和37℃的温度下 ,放置 4h以内 ,外观无异常变化 ;9mL·L-1NSHO不影响药物的 pH值 ;9mL·L-1 NSHO稀释后的 5 Fu其药物含量与对照组无区别 ;9mL·L-1 NSHO稀释后的MMC ,在 4h以内其药物含量与对照组比较 ,不低于 90 % .结论 :9mL·L-1 NSHO对化疗药物不产生氧化反应 ,不影响其理化特性 .9mL·L-1 NSHO稀释化疗药后在 4h以内不会降低药物含量 .采用 9mL·L-1 NSHO稀释化疗药用于肿瘤患者 ,可提高肿瘤局部氧分压 ,改善肿瘤乏氧状态 ,增强耐药肿瘤细胞的化疗效果     

STUDY OF CULTURING CARDIOVASCULAR TISSUE IN VITRO

Objective To evaluate the feasibility of utilizing vascular cells combined with folded and framed culture model to develop completely autologous human tissue without using any scaffold material under the principles of Tissue Engineering. Methods Human vascular cells cultured from ascending aorta (group A ) and saphenous vein (group B) were seeded into 15cm-dishes (each n = 12 ) and cultured to form cell sheets over a period of four weeks with Dulbecco‘s modified Eagle‘s medium supplemented with lmmol/L L-ascorbic acid 2-phosphate. Thereafter, cell sheets (6 samples of each group) were four-layer folded and cultured in a newly developed frame device for additional four weeks. Controls remained under standard culture conditions. Tissue development was evaluated by light and electron microscopy, biochemical assays. Results The formation of multi-layered cell sheets and production of extracellular matrix were observed in each group after the initial four weeks. Analysis of the folded and framed neo-tissue revealed a solid structure with increased matrix formation and tissue organization compared to the control groups after additional four weeks. DNA assay indicated significantly lower cell proliferation infolded and framed cell sheets than in that of unframed counterparts. Yet hydroxyproline assay demonstrated significant increase of collagen content in the framed aortic and venous derived tissues, which contained 82% and 42% that of human pericardium. Conclusion It is feasible to obtain completely autologous human cardiovascular tissue with the alternative new approach. Numerous issues including improvement of mechanical strength of neo-tissue remain to be investingated.     

循环灌注式三维组织培养装置的设计及其性能测试

目的一种循环灌注式三维组织培养装置的设计并测试其性能.方法设计、制造一套循环灌注式三维组织培养装置,然后测定其流量、恒温效果、无菌效果并进行工程化组织的初步培养观察.结果循环灌注式三维组织培养装置可提供的循环流量为5.5～87.5 ml/min,流量恒定,培养室内温度可控制在36.5～37.5℃,昼夜温差小,系统连续运转7 d培养液中无细菌生长,初步培养结果表明,体外构建的组织工程骨在循环灌注式三维组织培养装置中可获得良好的培养效果.结论循环灌注式三维组织培养装置可用于组织工程研究,也可为临床提供较大量的工程化组织,是一种较为理想的组织工程生物反应器.     

肾素-血管紧张素-醛固酮系统中不同组分在脂肪组织中的表达

目的观察肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的不同组分在人皮下、肾脏和肾上腺周围脂肪组织中的表达,探讨不同脂肪组织中RAAS各组分的特点。方法提取12例皮下脂肪、12例肾周脂肪和9例肾上腺周围脂肪总RNA,逆转录-聚合酶链反应方法进行血管紧张素原(AGT)、肾素(Renin)、血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素转化酶2(ACE2)、血管紧张素Ⅱ受体1(AT1)、血管紧张素Ⅱ受体2(AT2)、醛固酮合成酶(CYP11B2)的mR-NA表达。结果皮下、肾脏和肾上腺周围脂肪组织中均存在AGT、ACE、ACE2、AT1和AT2mRNA表达,无CYP11B2mRNA表达。肾素mRNA仅在肾周和肾上腺周围脂肪组织中表达,其在肾周的表达显著高于肾上腺周围脂肪组织(P<0·05)。ACE、ACE2mRNA在肾周脂肪组织中的表达显著高于皮下脂肪组织(P<0·05)。ACEmRNA在3种脂肪组织中的表达均显著高于ACE2(P<0·05)。在肾上腺周围脂肪组织中,AT2mRNA的表达显著高于AT1(P<0·05)。结论脂肪组织中存在局部肾素-血管紧张素系统,但无醛固酮合成。     

体外培养心血管组织的研究

目的 探讨以血管细胞结合折叠-支架培养模式来获得完全自身心血管新生组织的可行性。方法 将人体大隐静脉和升主动脉血管壁组织培养出的细胞种植于15cm培养碟中，经过4周的培养，将获得的细胞薄膜折叠成4层，固定于支架上，再经过4周的培养，获得来源于静脉或动脉血管壁的完全自身组织。比较二种来源的新生组织的组织学、超微形态学、DNA含量、胶原含量的差异。结果 经过4周的培养，二种来源的细胞都形成含有多层细胞的薄膜；再4周的培养后，折叠-支架培养模式得到的组织比非折叠-支架培养的组织更有弹性，形态学上更均一致密，有更多的细胞外基质生成，虽然DNA含量低于后肯，但胶原含量明显高于后者；动脉和静脉来源的细胞经折叠-支架培养得到的组织，其胶原含量分别达到人体心包的82％和42％。结论 仅以血管细胞结合折叠-支架培养模式来获得完全自身心血管新生组织的方法是可行的。     

脑垂体生长激素的提取及其特性鉴定

本文报道一种从新鲜、冰冻猪脑垂体提取高纯度生长激素 (FGH) 的程序,包括常规的萃取、离子交换树脂层析和凝胶过滤。使用超速离心、聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物学分析测定PGH的特性,其蛋白质的分予量是22000,沉降系数 (S20W) 为2.2267。每克新鲜猪脑垂体可获得0.8mg PGH。     

带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损

目的 :回顾性研究了带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损的治疗效果。方法 :应用腓肠肌皮瓣、肌瓣、比目鱼肌瓣、肌骨膜瓣、跗外侧血管蒂骰骨趾短伸肌复合瓣、胫前或胫后血管节段性骨膜支骨膜瓣转位修复小腿组织缺损 37例。结果 :组织瓣全部存活 ,骨愈合时间 4～ 6个月 ,无炎症复发、窦道及溃疡。结论 :带血管蒂组织瓣转位修复小腿组织缺损 ,疗程短、疗效好 ,手术简便易行 ,不仅可修复软组织缺损 ,而且同时一期修复骨缺损。     

组织因子及组织因子途径抑制物在PCI中无复流的研究进展

研究发现组织因子及组织因子途径抑制物与PCI中无复流的发生密切相关,现就组织因子及组织因子途径抑制物与无复流做一综述。     

基于重组组织因子凝血活酶试剂的研究进展

在20世纪90年代出现可纯化TF之前,凝血活酶试剂由人或动物组织粗提物制成。近年来,已经使用高度纯化的重组组织因子（rTF）或者可溶性组织因子（sTF）来制备凝血活酶试剂。本文综述国内外基于重组组织因子的凝血酶原试剂研发技术的发展历程,归纳出重组凝血活酶试剂优于组织提取物试剂的特点,分析了凝血活酶的发展趋势,并指出高灵敏性和稳定性重组凝血活酶是未来凝血活酶的发展方向。     

联合应用Schwann细胞与同种异体基底膜修复鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 :观察自体Schwann细胞与同种异体基底膜合用促进鼠坐骨神经再生的能力。方法 :将无细胞成分的同种异体基底膜与Schwann细胞混合培养 7d ,获得含Schwann细胞的基底膜。 2 4只BALB/C小鼠随机分为A、B两组并分别移植含有Schwann细胞的基底膜及无细胞成分的基底膜。术后 1,2 ,4,8周测定A、B两组坐骨神经功能指数 (SFI)及再生髓鞘平均厚度 (TRMS)。结果 :术后 1,2周 ,A、B两组SFI及TRMS无差异 (P >0 .0 5 ) ,术后 4,8周 ,A组SFI及TRMS优于B组 (P <0 .0 1)。结论 :自体Schwann细胞与同种异体基底膜合用可较单纯的基底膜更好地促进神经再生及功能的恢复。     

脂肪组织游离移植的初步实验观察

20只雌性Wistar大鼠盆腔的整块脂肪和小珠状脂肪植入和注入背部皮下。光镜下可见到两种形式的脂肪中,部分细胞坏死和囊肿形成,并随时间延长而加重。肉眼观察呈明显的体积和重量的缩减和囊肿形成。3周时尚未出现明显缩减,但6周时吸收明显,观察终期24周时仅存6.9％(整块植入)和21.l％(小珠状注入),后者明显优于前者(P<0.05)。