安宫牛黄丸中朱砂和雄黄的药理作用特点与安全性评价

目的:研究安宫牛黄丸中朱砂、雄黄在复方中的药效学存在的必要性和安全性,明确汞和砷在成药中和体内的化学存在形态,以及它们的药代动力学特点.方法:利用化学手段首次合成了若干个化学结构明确的汞和砷的络合物,并以此为对照物,对汞和砷在安宫牛黄丸成药中、大鼠血液以及组织器官中的化学存在状态均进行分析检测.并采用与安宫牛黄丸药效学相关的多项指标,对安宫牛黄丸及其简化方(安宫牛黄丸去掉朱砂和雄黄)进行了药效和毒理学的比较研究,采用药代动力学的方法研究汞和砷在大鼠体内的吸收、分布、血药浓度和排泄.结果:建立了简便、快速合成汞、砷络合物的方法,并揭示了安宫牛黄丸中汞、砷在体内外的化学存在状态;药代动力学研究证明了朱砂和雄黄中的HgS和As2S2为不被机体所吸收的无活性成分,而其生物活性成分可能为酸可溶性或水可溶性汞和砷部分;经镇静、抗惊厥、解热、缺氧模型以及毒性试验等多项药理学指标证明,安宫牛黄丸原方的药理学作用和简化方无明显统计学差异.结论:安宫牛黄丸中朱砂和雄黄的主要成分HgS和As2S2是不能被机体所吸收的无活性成分,而其生物活性成分(具有一定的药效学作用)为酸可溶性的汞和砷部分,药理学试验说明安宫牛黄丸和简化方未见明显区别.     

安宫牛黄丸研究现状

综述了对安宫牛黄丸中朱砂和雄黄中总汞、总砷在动物体内的吸收、分布特点以及安宫牛黄丸及其简化方的药效学比较等试验 ,证明了在动物体内朱砂中的硫化汞和雄黄中的硫化砷只有少量可溶性的汞和砷被体内所吸收 ,而绝大部分硫化汞、硫化砷从消化道排除体外。而这部分可溶性的汞和砷很可能就是安宫牛黄丸朱砂和雄黄中的药理、毒理学的活性部分 ;作为构成朱砂和雄黄的主要成分硫化汞和硫化砷很可能是既不被体内吸收 ,又无任何药理活性的成分。这就给降低安宫牛黄丸中重金属的含量提供了可能。也为一大批含有重金属的中成药降低重金属含量作出了有意义的探索。     

安宫牛黄丸的药理及临床研究进展

作为久负盛名的中药急救药品,安宫牛黄丸协同其他疗法对脑炎,中风,脑出血、脑缺血性损伤等脑病及所导致的高热昏迷有独特的疗效,现代药理实验表明安宫牛黄丸对大鼠急性期脑出血、脑缺血损伤有较好的保护作用,对闭合性脑损伤大鼠的脑水肿、脑缺血缺氧状态等有一定的积极作用,另外安宫牛黄丸对脓毒症大鼠也有一定的干预作用。但由于安宫牛黄丸组方中含有雄黄(砷)和朱砂(汞),其安全服用尤为重要,本文从安宫牛黄丸的现代药理作用、临床应用等方面阐述它的研究现状,旨在为合理应用安宫牛黄丸提供新的思路和参考。     

雄黄砷的蓄积性研究

目的 研究大鼠长期给予雄黄后砷在血液、肝脏、肾脏和脑组织中的蓄积性,以探讨雄黄的毒性机制,为临床安全用药提供科学依据.方法 ①将禁食16 h后的雄性SD大鼠随机分为对照组(4只)和雄黄0.16g·kg-1组(28只).雄黄组灌胃给药1次,于给药后0.5,1,2,4,8,16,36 h时间点各取4只大鼠,取全血、心脏、肝脏、肾脏、肺和脑组织,测定砷含量.②将SD大鼠随机分为对照组和雄黄0.16,0.08,0.02g·kg-1剂量组,每组10只(雌雄各5只).各剂量组每日灌胃给药1次,共给药3个月.于末次给药后16 h取血、肝、肾、脑,测定砷含量.结果 单次给予雄黄0.16 g· kg-1后,一定量的砷能吸收进入体内,分布于血液和心、肝、肺、肾、脑等主要脏器,达峰时砷含量从高至低依次为血液＞肾＞肺＞肝＞心＞脑.血液中砷水平远高于其他脏器中砷水平,这一分布特点可能为雄黄治疗白血病的基础.雄黄反复给药3个月后,血液、肝脏、肾脏和脑组织均有一定程度的砷蓄积.在相同的雄黄剂量组,肾脏的砷蓄积倍数最高,其次是肝脏.然而在砷含量方面,血液中的砷含量远高于其他脏器的砷含量,砷含量由高至低的顺序为血液＞肾脏＞肝脏＞脑.雄黄长期用药时可造成肝、肾组织轻度病理变化,可能与肝、肾组织的砷蓄积相关.但未见血液与肝肾毒性相关的生化指标变化,说明肝脏与肾脏毒性较轻.结论 雄黄的可溶性砷可吸收入体内,广泛分布于主要脏器中.长期用药后,砷可在血液、肾脏、肝脏、脑组织蓄积,其中肾脏、肝脏砷蓄积与肝、肾毒性有关.血液是砷分布水平最高的部位,可能是雄黄治疗白血病的基础.     

安宫牛黄丸对脓毒症大鼠血浆内毒素水平的影响

目的 探讨安宫牛黄丸对盲肠结扎穿孔(CLP)法所致脓毒症大鼠血浆内毒素水平的影响.方法 取雄性SD大鼠90只,随机分为5组,分别为空白对照组、模型对照组、安宫牛黄丸低剂量组、中剂量组、高剂量组.各组动物于手术前禁食12 h,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)复制脓毒症模型,中药组每只大鼠分别于术前0.5 h和术后6 h按1.0,2.0,3.0 g/kg的剂量灌胃安宫牛黄丸,空白对照组和模型组动物灌胃饮用水.于术后24 h,动物腹腔采血以终点显色鲎试验法测定血浆内毒素水平,另外取动物肺脏匀浆测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)含量.结果 模型组血浆内毒素水平明显高于空白对照组,而安宫牛黄丸低、中剂量组内毒素水平均显著低于模型组(P＜0.01).模型组肺组织MPO含量明显高于空白对照组,而安宫牛黄丸低、中剂量组肺组织MPO含量均显著低于模型组(P＜0.05和P＜0.01).结论 安宫牛黄丸具有降低脓毒症大鼠血浆内毒素水平和肺脏MPO含量的作用,提示安宫牛黄丸对脓毒症具有一定的干预作用,为进一步探讨安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用机理提供了药效学基础.     

安宫牛黄丸对实验性大鼠脑缺血模型的影响

目的:探讨安宫牛黄丸对脑缺血模型的保护作用及血流变的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组(生理盐水12 mL.kg-1ig)、安宫牛黄丸组(0.25 g.kg-1安宫牛黄丸溶解液ig)、西药组(20%甘露醇10 mL.kg-1、速尿1.5 mg.kg-1、胞磷胆碱钠注射液20 mg.kg-1尾静脉注射)、中西药组(西药组+安宫牛黄丸组),采用线栓法制备大脑中动脉梗死(MACO)大鼠模型,连续给药4 d后断头取脑,在脑缺血后第1,2,3天进行卒中指数评分,光镜下观察各组脑缺血4 d后缺血脑组织病理形态学变化,检测血液流变学指标的变化。结果:脑缺血4 d后全血黏度(ηb)、血浆黏度(ηp)、血小板聚集率(PAgT)、红细胞聚集指数(EAI)、红细胞刚性指数(IR)明显升高,红细胞变形指数(DI)明显降低,安宫牛黄丸组、西药组、中西药组均可不同程度地降低脑卒中指数,降低脑缺血大鼠的ηb,ηp,PAgT,EAI,IR并增加DI,以中西药组作用最为显著(P<0.05或P<0.01)。结论:安宫牛黄丸对脑缺血损伤具有脑保护作用,这可能与其降低血液黏度作用有关。     

安宫牛黄丸对急性脑出血大鼠脑组织中一氧化氮合酶及单胺类神经递质的影响

目的 探讨安官牛黄丸对大鼠脑出血急性期脑组织中一氧化氮合酶(NOS)及单胺类神经递质的影响.方法 建立大鼠脑出血急性期模型,观察脑出血后4、24、72h脑组织中一氧化氮(NO)和NOS及海马和皮质区去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺(5-HT)的含量及不同治疗方案下其含量的变化.结果 模型动物损伤后4h脑组织中NO含量增加,NOS活性升高,与正常组相比有显著差异;72h达到高峰.安宫牛黄丸组72h NO含量和NOS活性明显低于模型组与小牛去蛋白血清组.脑出血后4h,模型组神经递质含量较正常组显著下降,以24h下降明显,72h又有回升并接近4h值;安宫牛黄丸组、小牛去蛋白血清组与模型组相比均有差异,但安宫牛黄丸组作用优于小牛去蛋白血清组.结论 安宫牛黄丸对脑出血急性期的大脑具有保护作用.     

安宫牛黄丸对实验性大鼠脑缺血的保护作用

目的 研究安宫牛黄丸对实验性大鼠脑缺血的保护作用及机制.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、安宫牛黄丸组、西药组、中西药组,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的动物模型,在脑缺血后6 h、24 h、48 h、72 h进行神经功能行为评分;造模连续给药4 d后,取脑组织,计算脑系数,干湿重法观察脑组织含水量,腹主动脉采血以酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清中白细胞介素-10（IL-10）水平的变化.结果 阻断大脑中动脉后4 d内,除了假手术组外,所有大鼠都出现程度不同的运动障碍;脑系数、脑含水量和血清IL-10水平均显著升高（P〈0.05）;安宫牛黄丸组、西药组、中西药组均可不同程度地降低脑系数、脑组织含水量及改善神经功能缺损症状,并升高血清IL-10水平（P〈0.05）;以中西药组作用最优,与假手术组、模型组、安宫牛黄丸组、西药组比较有统计学意义（P〈0.05）;安宫牛黄丸组与西药组间相比差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 安宫牛黄丸对局灶性脑缺血大鼠脑损伤具有保护作用,其对血清细胞因子的影响是其对脑缺血保护作用的可能机制之一.     

针药结合对实验性脑缺血大鼠缺血区 Bax、Bcl-2的影响

目的：探讨针药结合对实验性脑缺血大鼠缺血区Bax、Bcl-2表达的影响。方法：建立大鼠大脑中动脉栓塞脑缺血模型,将大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组和治疗组（手十二井穴放血组、安宫牛黄丸组、针药结合组、尼莫地平组,各组又分为缺血6 h、24 h、48 h、72 h 4个时间段）。除正常对照组、假手术组每组5只动物外,其余每组10只。药物治疗组每天灌胃1次,井穴放血治疗组每天放血2次。采用免疫组化法检测Bax、Bcl-2的表达。结果：模型对照组Bcl-2和Bax表达显著高于正常对照组和假手术组（P＜0．01）;井穴放血组、安宫牛黄丸组及针药结合组均可使Bcl-2增多、Bax减少（ P＜0．05）,且两者的比值上调,以针药结合组效果最佳（P＜0．01）,缺血后6 h和24 h尤为显著（P＜0．05）,48 h后针药结合组与尼莫地平对照组对比,差别无统计学意义（P＞0．05）。结论：井穴放血与安宫牛黄丸结合在脑缺血早期能有效抑制永久性大脑中动脉闭塞大鼠脑细胞凋亡,发挥脑保护作用,适于中风初期的急救。     

雄黄单次和多次给药在大鼠体内的药物动力学和组织分布

目的研究雄黄中的砷在大鼠体内的药物动力学和组织分布。方法大鼠单次、多次灌服雄黄,采用微波消解-原子荧光光度法测定药后一系列时间点的血砷浓度和脏器、组织中的砷含量。应用PK Solutions 2.0~(TM)药动学软件计算药动学参数。结果雄黄(75 mg·kg~(-1))灌胃给药后,雄黄中的砷只有少量吸收进入血液中,吸收、分布和消除半衰期分别为4.30,12.59,22.70 h;血砷浓度在药后3 h和12 h分别达到峰浓度(46.0,42.0μg·L~(-1)。雄黄(75mg·kg~(-1)·d~(-1))连续灌胃给药15 d,从第7天起达到稳态浓度,停药后2周的血清中未检出砷,消除半衰期为43.61 h。单次给药后,在大鼠各主要脏器、组织中均可检测到砷,以脾、毛发、肺和肾上腺中分布较多,肾、心、肝、膀胱、皮肤次之;大脑、睾丸、肌肉、胫骨中分布较少,多次给药后砷除了同样在肾上腺、肺、毛发和脾分布较多外,在肾和膀胱的积累显著增加。停药2周后,砷在各脏器组织(心除外)中的含量普遍显著降低,降幅从21.1%到69.5%不等。结论雄黄中的砷只有少量可溶性砷吸收进入血液中,单次灌胃给药后,雄黄中的砷在大鼠体内吸收、分布和消除均较缓慢。多次灌胃给药延缓了砷在体内的消除。雄黄中的砷在大鼠体内分布广泛;首次发现砷在肾上腺中有较高的蓄积,提示肾上腺可能是雄黄作用的靶器官之一。     

安宫牛黄丸及重金属组分对内毒素脑损伤大鼠大脑皮层单胺类递质的影响

目的：探讨安宫牛黄丸脑电激活作用的机制,评估朱砂、雄黄在其“醒脑开窍”作用中所发挥的作用,推测其在适应证“瘟病”治疗中存在的意义,为安宫牛黄丸组方的合理性提供实验依据。方法：70只SD大鼠随机分为7组,即对照组、模型组、含朱砂雄黄的安宫牛黄丸(全方)组、不含朱砂雄黄的安宫牛黄丸(简方)组,朱砂+雄黄组、雄黄组、朱砂组,分别给与蒸馏水、0.4 g·kg^-1全方、0.32 g·kg^-1简方、0.08 g·kg^-1朱砂+雄黄、0.04 g·kg^-1雄黄、0.04 g·kg^-1朱砂,连续给药3 d,末次给药后1 h,以内毒素(LPS)尾静脉注射复制内毒素脑损伤模型,以单胺类递质及其代谢产物为观察指标,采用高效液相电化学检测法(HPLC-ECD),测定安宫牛黄丸及朱砂、雄黄对LPS致脑损伤皮层中单胺类递质及其代谢产物含量的影响。结果：LPS尾静脉注射6 h后,皮层中去甲肾上腺素(NE)含量明显升高,肾上腺素(E)有降低的趋势,对3-甲基-4-羟-苯乙二醇(MHPG)的影响不明显；皮层中5-羟色胺(5-HT)、代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量明显升高；多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)含量无明显变化,3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)的含量降低。全方有降低NE,提高DOPAC,E含量的趋势,但统计学无明显差异,全方可明显降低5-HIAA含量,和模型组比较差异显著。简方则进一步提高皮层NE含量,和模型组及全方组比较差异显著,简方可显著提高皮层DA含量,和各组比较差异均显著。朱砂+雄黄升高E含量、降低NE含量的作用更明显；单独的雄黄可明显降低5-HT含量。结论：安宫牛黄丸可部分逆转LPS所致皮层单胺类神经递质的改变,朱砂+雄黄及单独雄黄、朱砂和全方的作用相似。对皮层单胺类递质的影响可能是安宫牛黄丸对内毒素脑损伤促清醒作用机制之一,推测朱砂雄黄可能是安宫牛黄丸醒脑开窍作用的重要物质基础。     

安宫牛黄丸对急性缺血大鼠神经元凋亡及其磷酸化Akt表达的影响

目的 观察安宫牛黄丸对大鼠急性缺血后神经元凋亡及神经元内磷酸化Akt表达的影响.方法 50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安宫牛黄丸小、中、大剂量组.采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血模型,采用Nissl染色观察脑损组织伤,采用NeuN和TUNEL荧光双染检测神经元凋亡,NeuN和磷酸化Akt免疫荧光双染检测神经元内磷酸化Akt的表达.结果 大、中剂量安宫牛黄丸可显著改善神经功能,减轻缺血引起的脑组织损伤,减少引起的神经元凋亡比率,上调神经元内磷酸化Akt的表达.结论 安宫牛黄丸可能通过上调缺血后神经元内磷酸化Akt的表达,抑制神经元凋亡的发生.     

安宫牛黄贴穴位敷贴抗脑缺血及耐缺氧实验研究

目的：研究安宫牛黄贴穴位敷贴对小鼠缺氧及脑缺血的影响。方法：将100只小鼠,随机分成5组,即模型组、药物组和穴位敷贴高、中、低剂量组,连续给药7天后,分别采用结扎双侧颈总动脉模型、常压耐缺氧模型,记录小鼠存活时间。结果：安宫牛黄贴穴位敷贴高、中、低剂量组双侧颈总动脉结扎小鼠存活时间及小鼠常压耐缺氧时间均明显延长,与模型组比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）,与药物组比较,疗效相当（P〉0．05）。结论：安宫牛黄贴穴位敷贴能明显延长小鼠缺氧及脑缺血的存活时间,挥示其对动物缺氧及脑缺血具有一定的保护作用。     

ICP-OES法测定安宫牛黄丸中重金属的含量

目的:通过对安宫牛黄丸中重金属元素铅、砷和汞进行含量测定,探究其是否符合限量规定,为该药品的质量控制和安全用药提供可靠依据。方法:采用HNO3-HClO4混酸对样品进行湿法消化,运用ICP-OES法测定安宫牛黄丸中重金属的含量。结果:重金属元素检测分析方法考察结果表明3种重金属元素As、Hg和Pb的含量分别为:3.46×4μg/g、2.19×4μg/g、1.66×2μg/g。结论:该药品因含有以治疗为目的的矿物类药物朱砂(HgS)和雄黄(As2S3),故砷、汞、铅的含量均超出国家限量标准。因此,为了进一步提高含重金属中药的用药安全性,中药中重金属含量应采取更进一步的控制。     

安宫牛黄丸对出血性中风大鼠的实验研究

目的研究安宫牛黄丸对出血性中风大鼠的影响。方法自发性高血压大鼠随机分为A组（空白对照组）、B组（模型组）、C组（西药治疗组）、D组（中药治疗组）、E组（中西结合治疗组）,以自体血制作出血性中风大鼠模型,术后1 d、2 d3、d分别进行神经功能（肌力测验、平衡木行走试验）及血常规和凝血功能的测定。结果术后各组之间血常规、凝血功能差异无统计学意义（P〉0.05）,B组大鼠神经功能缺损较A组高（P〈0.05）,术后2 d、3 d C、D、E组神经功能缺损低于B组（P〈0.05）,E组神经功能缺损明显低于C组及D组（P〈0.05）,C组与D组间相比差异无统计学意义。结论安宫牛黄丸能减轻大鼠神经功能损,但对凝血功能、血常规无明显影响。     

安宫牛黄丸联合亚低温治疗重症脑梗死的随机对照研究

目的:观察安宫牛黄丸联合亚低温治疗重症脑梗死的临床疗效。方法:入选68例重症脑梗死的患者,随机分为两组,治疗组34例,给予常规药物治疗基础上给与安宫牛黄丸及亚低温治疗;对照组34例,给于常规药物治疗。治疗前后两组均予临床疗效评定及神经功能缺损评分(NDS)。结果:治疗组死亡率明显低于对照组,治疗后病情恢复程度比较有明显统计学差异(P<0.05)。结论:对重症脑梗死的患者,早期应用安宫牛黄丸联合亚低温治疗对于改善预后有显著疗效,并且操作简便、副反应小、便于在现代临床推广应用。     

ICP—OES法测定安宫牛黄丸中重金属的含量

目的：通过对安宫牛黄丸中重金属元素铅、砷和汞进行含量测定,探究其是否符合限量规定,为该药品的质量控制和安全用药提供可靠依据。方法：采用HNO3-HCIO。混酸对样品进行湿法消化,运用ICP-OES法测定安宫牛黄丸中重金属的含量。结果：重金属元素检测分析方法考察结果表明3种重金属元素As、Hg和Pb的含量分别为：3．46X4μg／g、2．19×4μg／g、1．66×2μg／g。结论：该药品因含有以治疗为目的的矿物类药物朱砂（HgS）和雄黄（As：S,）,故砷、汞、铅的含量均超出国家限量标准。因此,为了进一步提高含重金属中药的用药安全性,中药中重金属含量应采取更进一步的控制。     

雄黄灌胃给药后砷在孕大鼠脏器内的分布及排泄途径研究

目的研究口服雄黄后砷在孕大鼠体内的分布和排泄途径。方法结合生殖毒性Ⅱ段试验,雌性SD大鼠交配后随机分成高、中、低（550、250、125 mg/kg）剂量组和阴性对照组（0.5%羧甲基纤维素钠）4组,妊娠第6-15日每日1次用雄黄悬浊液连续灌胃10 d,于妊娠第20日处死。每组10只,取孕大鼠各主要脏器（心、肝、脾、肺、肾、脑、子宫）和全血、胎盘、胎仔及不同给药时间点的尿液和粪便,运用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）、电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-OES）分别测定砷含量,分析砷在各脏器的分布情况以及排泄途径。结果各脏器中砷含量均显著高于阴性对照组,全血砷含量最高,并随剂量的增加而增加;与其他脏器比较,脑和胎仔组织内各剂量组的砷含量最低。给药第2日粪便中即出现大量砷,日排泄量折合成雄黄约占摄入量的69.5%～80.2%;而给药第10日排泄量上升到85.2%～96.2%;停药第4日粪便中雄黄排泄量急剧下降。尿液中排泄的砷微量,并有剂量依赖性,停药第4日排泄量仍在较高水平。结论砷在不同脏器内蓄积与给药剂量有关,其中以全血、脾、胎盘、肺内砷含量较高;口服雄黄主要经肠道排泄,而组织内蓄积的砷可能经肾脏排泄。