宫内感染致胎鼠脑TNF-α表达及脑细胞凋亡变化的研究

目的：研究孕鼠腹腔注射内毒素（LPS）胎鼠脑肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达及胎鼠脑细胞凋亡的变化。方法：妊娠18d孕鼠随机分为对照组、LPS组，分别腹腔注射盐水和LPS。免疫组化法及RT-PCR法观察不同剂量、不同时间点的LPS腹腔注射后，两组胎鼠脑TNF-α的表达；采用原位末端标记法测定孕鼠腹腔注射LPS 0．4mg／kg后48h胎鼠脑细胞凋亡的变化。结果：胎鼠脑组织中TNF-α蛋白水平及mRNA表达，LPS组均显著高于对照组（P〈0．05），随着LPS剂量的增大，差异更为显著（P〈0．01）；LPS以4mg／kg腹腔注射后，胎鼠脑组织的TNF-α蛋白含量及mRNA表达增加，1h即显著高于对照组（P〈0．01），4h达高峰，至8h仍显著高于对照组（P〈0．05）；LPS组注药后48h胎鼠脑海马区见大量棕褐色核染的凋亡细胞。与对照组比较差异显著（P〈0．01）。结论：TNF-α可能是LPS致胎鼠脑损伤的关键的细胞因子。     

宫内缺血缺氧致胚鼠脑细胞损伤凋亡的实验研究

目的 采用胚鼠宫内窘迫的动物模型,观察胚鼠缺血缺氧性脑损伤后不同时间点脑细胞的病理变化及损伤凋亡的情况。方法 孕17d(孕中期)孕鼠,实验组钳夹子宫动脉30min后,恢复血供。缺血后24h、48h及72h取标本。对照组行同期开关腹术,但不钳夹子宫动脉。与实验组对应的相同时间取标本。用HE,尼氏染色,胆碱酯酶染色,TUNEL及电镜在镜下观察脑组织的病理改变。结果 胚鼠缺血缺氧30min,脑组织可见出血,神经细胞发生水肿、变性;尼氏体形态变化,溶解;胆碱酯酶活性减弱;缺血再灌注后24h即出现凋亡细胞,并随缺血再灌注时间的延长逐渐增多。结论 宫内窘迫所致胚鼠缺血缺氧可造成神经细胞的严重损伤和凋亡。     

解冻后不同时间对鼠胎肝和胎脑细胞活度的影响

目的:探讨不同冻存和解冻条件下对wastar大鼠胎肝细胞和胎脑细胞活度的影响。方法:将两种细胞分别存放在4℃和- 2 0℃、4℃解冻条件下,比较两种细胞的活度情况。结果:实验表明细胞保存在4℃条件下2 4小时内使用可保证细胞活度,而保存在- 2 0℃、4℃解冻后,随保存时间延长,细胞活度大幅下降。结论:两种细胞在- 2 0℃冻存、4℃解冻后细胞活度下降,因而无临床应用价值。     

百草枯致幼儿皮肤损伤1例

病儿,男,1岁。缘于9 d前因父母发生争吵,母亲激愤之下服百草枯（20%原液）,（被送入当地医院治疗）,次日发现小儿双侧大腿皮肤发红,裤子有百草枯残留及气味,分析可能是父母争夺药瓶时洒在小孩身上,剂量不详。     

胎鼠牙胚细胞体外培养研究

目的 摸索正常胎鼠牙胚细胞离体培养所需条件,为进一步将其作为牙组织工程种子细胞奠定基础。方法 体视显微镜下取17d龄胎鼠下颌第一磨牙牙胚,胶原酶／分离酶消化,以含10％胎牛血清(FCS)的DMEM为培养基进行原代培养。倒置显微镜下观察培养细胞的生长特点,MTT法测定细胞活性绘制生长曲线,取原代培养4～9d的细胞进行组织化学和免疫组织化学染色。结果 倒置显微镜下观察,培养细胞在24h内贴壁,约7～9d生长连成片状。细胞有多角形、大而扁平梭形和长梭形几种形态。生长曲线表明：培养细胞在前3天生长缓慢,第4天呈对数生长,第7天达高峰。免疫组化结果表明：培养细胞来源于两种组织。结论 采用酶消化培养法,用胶原做基质饲养层,含10％FCS的低糖DMEM作为培养基,能将胎鼠牙胚细胞培养成活,并维持其细胞学特征。     

以胎鼠为供体的肾上腺移植实验研究

目的研究以不同胎龄胎鼠为供体的肾上腺移植后,移植物的结构重建及分泌功能状况。方法将30只SD大鼠,分为5组,每组6只。A组,假手术组;B组,双侧肾上腺切除组;C、D、E组分别以16、18、20d龄胎鼠为供体进行移植。结果术后4周,C、D、E组镜下显示被膜增厚,被膜下有许多新增殖的细胞,球状带、束状带有较好的重建。体质量：A组术后第3周降至最低点,第4周逐渐恢复接近术前水平;B组术后持续上升;C、D组术后前2周增高,后2周持续下降;E组术后前3周缓慢升高,第4周回落。血清皮质酮水平：B组术后急剧下降;C、D、E组术后2周都大幅下降,然后逐渐增高;D、E组术后同期水平接近,C组术后水平却明显低于D、E组（P〈0．05）。结论胎鼠肾上腺移植后易于成活,结构可较好地重建,分泌功能逐步增强,是一种合适的供体;大龄胎鼠的供体移植后,在免疫排斥反应方面与小龄胎鼠的供体无明显差异,而结构重建及分泌功能优于小龄胎鼠的供体。     

胎鼠听囊细胞体外培养研究

目的:了解哺乳动物听觉细胞的来源,探索听觉细胞前体细胞体外增殖和分化. 方法:取孕鼠胚胎听囊细胞进行体外培养,用免疫细胞化学方法,分别对培养的细胞进行细胞角蛋白、F-肌动蛋白和calretinin染色观察细胞特征;BrdU染色观察细胞增殖. 结果:培养的细胞在体外进行分化和增殖,细胞形态主要有上皮细胞形态、成纤维细胞形态和神经细胞形态3种. 对细胞角蛋白和F-肌动蛋白这两种上皮细胞的标志染色呈阳性. 在原代培养就出现calretinin染色明显阳性的细胞. 传代后结果仍为阳性着染,但强度减弱. BrdU染色显示培养细胞具有明显的增殖活性. 本研究共传8代,历时4 mo,细胞形态维持稳定. 结论:胎鼠听囊细胞在体外自然培养条件下可以分化或者增殖为未成熟毛细胞. 本研究为探索刺激听觉毛细胞再生的治疗方法提供研究思路和方法.     

妊娠期孕鼠饮酒对胎鼠血脂影响的研究

目的观察妊娠期孕鼠饮酒对胎鼠体重及血脂的影响。方法将20只健康小鼠随机分为对照组、低剂量酒精组、中剂量酒精组和高剂量酒精组,每组按指定剂量喂食酒精或蒸馏水直至其分娩,检测胎鼠体重及其血液中高密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯含量。结果胎鼠体重因孕鼠饮酒量的增多而逐渐降低,对照组高密度脂蛋白胆固醇浓度最高,低剂量酒精组及高剂量酒精组总胆固醇浓度最高,中剂量酒精组甘油三酯浓度最高。结论妊娠期孕鼠饮酒使胎鼠体重降低并可引起胎鼠脂质代谢紊乱。     

胎鼠室旁核加压素分泌的实验研究

目的 研究不同胎龄大鼠室旁核加压素能神经元加压素的分泌及发育中的变化,为研究加压素的生理功能提供发生学资料。方法 应用光镜技术和免疫细胞化学技术观察１０ｄ,１４ｄ,１８ｄ和２２ｄ胎鼠脑ＨＥ染色切片和ＰＡＰ法切片中ＡＶＰ阳性细胞。应用图像分析仪检测各组胎鼠室旁核中ＡＶＰ阳性细胞的平均灰度值。结果 １０ｄ组室旁核内无ＡＶＰ阳性细胞;１４,１８,２２ｄ各组均有ＡＶＰ阳性细胞。但１４ｄ组染色浅淡;图像分析     

雌激素受体及胆汁酸代谢相关基因在胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ERα)与胆汁酸代谢相关基因胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、胆固醇27α羟化酶(cholesterol 27-hydroxylase,CYP27A1)、胆固醇12α羟化酶(cholesterol 12α-hydroxylase,CYP8B1)mRNA在妊娠期肝内胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达及其意义。方法将60只清洁级SD孕鼠自孕第13天均分为2组:对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0 mL.kg-1.d-1;研究组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.25 mg.kg-1.d-1。2组孕鼠分别于妊娠第13、17、21天断尾采母鼠血2 mL检测血清生物化学指标,于妊娠第21天处死。抽取母鼠、胎鼠血并提取母鼠、胎鼠肝脏组织。应用酶联免疫吸附试验检测2组孕鼠以及胎鼠血清中胆酸浓度;应用实时定量PCR技术检测各组胎鼠肝脏ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的mRNA表达量。结果①胆酸指标比较:在妊娠第17天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(24.6±1.3)μmol/L、(58.7±3.2)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度明显高于对照组(t=2.462,P<0.05);在妊娠第21天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(26.5±3.1)μmol/L、(66.4±2.7)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度与妊娠第17天时研究组以及对照组相比(F=5.43,P<0.05),差异有统计学意义。②胎鼠肝脏CYP7A1 mRNA、CYP27A1 mRNA、CYP8B1 mRNA表达:研究组中CYP7A1 mRNA(1.25±0.01)、CYP27A1 mRNA(2.05±0.03)、CYP8B1 mRNA明显高于对照组(0.35±0.02、0.75±0.03、0.85±0.02),P值均<0.05,差异有统计学意义。③胎鼠肝脏雌激素受体的表达:研究组中ERαmRNA(0.75±0.02)明显高于对照组ERαmRNA(0.45±0.01)。结论妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕鼠胎鼠肝细胞ER、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的表达升高,胆汁酸的合成与代谢调节机制存在障碍,可能是导致ICP胎儿围生期死亡发生的原因之一。     

HRCT对急性百草枯中毒肺损伤的影像与临床评价

目的:探讨胸部HRCT对百草枯中毒肺损伤的影像特征及临床意义。方法:回顾性分析13例百草枯中毒患者的胸部影像学资料,结合临床,总结胸部HRCT在百草枯中毒肺损伤中的影像特征及诊断价值。结果:13例中8例存活3周以上的患者,中毒早期(≤2 d)5例表现为过度通气、磨玻璃影。1例两下肺小片状实变。1例仅见双侧少量胸腔积液,2例无明显异常。中期(3d～21d)显示弥漫磨玻璃密度影分布7例,渗出病变6例,实变5例。肺气肿5例。纵隔积气1例。晚期(>3周)8例表现不同程度肺间质纤维化和肺小蜂窝改变,2例伴牵引性支气管扩张。5例死亡病例中早期即表现为渗出性病变和肺实变为主。结论:胸部HRCT检查对百草枯中毒肺损伤的影像特征和进展分析有明显优势,在指导临床治疗和预后评价方面有重要意义。     

RP-HPLC测定祛风止痛片中原儿茶酸和原儿茶醛的含量

目的：建立同时测定祛风止痛片中原儿茶酸和原儿茶醛含量的方法。方法：采用RP-HPLC法,色谱条件为LunaC18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（16：84）,流速：0.8mL·min^-1,柱温：30℃,检测波长：280nm。结果：原儿茶酸和原儿茶醛分别在0.62～12.40μg·mL^-1（r=0.9997）和0.14～2.80μg·mL^-1（r=0.9997）浓度范围内均有良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.9%、97.9%;RSD均小于2.0%。结论：本方法准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。     

原儿茶酸对β淀粉样蛋白_(1-42)诱导PC12细胞毒性的保护作用及机制

【目的】探讨原儿茶酸(PCA)在阿尔茨海默病(AD)细胞模型中的保护作用及机制。【方法】采用免疫荧光法鉴定β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))纤维聚体,将Aβ_(1-42)作用于PC12细胞,并于不同时间点(0、3、6、9、12、24 h)观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率以确定造模条件,并用MTT法检测原儿茶酸对PC12细胞的毒性条件。采用预保护的给药方式,检测不同浓度的原儿茶酸对PC12细胞的干预作用。采用Western-blot法检测自噬相关标记蛋白Beclin1的表达水平,以探究原儿茶酸的保护作用机制。【结果】显微镜下观察到12、24 h时,Aβ_(1-42)白色团块聚集基本稳定,无明显差异,MTT检测细胞损伤率均达40%,由此确定12 h和24 h均可做为AD的造模条件。原儿茶酸在200~800μmol/L浓度作用24 h的条件下,细胞活力显著上升(P0.01)。Western-blot结果显示:原儿茶酸可显著增加Beclin1的表达水平。【结论】原儿茶酸有助于改善Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞毒性,其机制可能与增加自噬水平有关。     

别嘌呤醇对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的　探讨别嘌呤醇 (ALLO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的影响。方法　将新生 7日龄SD大鼠 14 3只随机分为别嘌呤醇治疗组、缺氧缺血对照组和假手术组 ,缺氧缺血后即刻、2 4和 4 8h分别腹腔注射ALLO或生理盐水 ,然后观察ALLO对HIBD模型鼠缺氧缺血 (HI)后 4 2h脑含水量、72h脑神经元凋亡(TUNEL法 )及超微结构改变、14d体质量增长率、脑病理改变 (海马神经元死亡率 )、30d学习分辨能力和记忆保持能力 (三臂迷宫试验 )等的影响。结果　脑含水量 :治疗组缺血侧 [( 84 .75± 4 .5 2 ) % ]含水量较对照组[( 92 .32± 3.75 ) % ]明显减少 (P <0 .0 1) ;TUNEL染色结果 :HI后 72h缺血侧脑组织可见较多凋亡细胞。治疗组缺血侧皮质凋亡细胞数明显低于对照组 [分别为 ( 93.6± 10 .8)和 ( 110 .5± 16 .9)个 / 30 0 0个细胞 ,P <0 .0 1],治疗组缺血侧海马凋亡细胞数明显低于对照组 [分别为 ( 83.2± 11.5 )和 ( 94 .2± 12 .3)个 / 30 0 0个细胞 ,P <0 .0 5 ];超微结构改变 :对照组凋亡细胞数为 18%左右 (计数 30个视野 ) ,而治疗组为 6 %左右 ,治疗组细胞坏死、丢失也较对照组减轻 ;HI后 14d体质量增长百分率 (WIP) :治疗组 [( 16 7.0± 33.6 ) % ]较对照组 [( 135 .6±4 7.5 ) % ]无显著性差异 (P >0 .0 5     

细胞凋亡参与脑心综合征心肌损伤及针刺干预作用

目的观察心肌细胞凋亡在脑心综合征(cerebral-cardiac syndrome,CCS)发病中的作用机制及针刺的干预作用。方法从60只健康SD大鼠中随机选择10只作为伪手术组,其余50只用于CCS模型复制,从模型复制成功的大鼠中随机选取30只,分成模型组、针刺组和非经非穴组,每组10只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核方法复制CCS模型,伪手术组向大鼠尾状核注入等量生理盐水。模型复制后72h处死动物,分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)和免疫组织化学法检测心肌组织病理变化、细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)的表达。结果 HE染色示伪手术组心肌结构正常,模型组心肌细胞变性、坏死,大量平滑肌断裂;TUNEL及免疫组织化学染色提示模型组出现较多凋亡细胞,Caspase 3大量表达,针刺组TUNEL染色阳性细胞和Caspase 3阳性细胞均较模型组和非经非穴组显著减少(P<0.01)。结论心肌细胞凋亡参与了CCS大鼠心肌损伤,其机制可能与上调凋亡蛋白酶Caspase 3表达有关,而针刺可拮抗CCS大鼠心肌组织细胞凋亡。     

奥曲肽对肠源性内毒素肝损害的保护作用

目的:探讨奥曲肽对肠源性内毒素肝损害的机理及保护作用.方法:用42只SD大鼠制作肠源性内毒素肝损害的动物模型,随机分为7组,观察各实验组大鼠血浆内毒素、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、ALT、LDH及肝组织病理形态学的变化.结果:门静脉复流后.奥曲肽B2、B3组内毒素、TNF-a水平较相应生理盐水A2、A3组明显降低(P＜0.01.P＜0.01);奥曲肽B2、B3组ALT值较相应生理盐水各组明显下降(P＜0.05、P＜0.01);奥曲肽B3组LDH值较相应生理盐水.A3组亦明显下降(P＜0.05).奥曲肽各组的肝脏病理组织学改变较相应生理盐水各组明显减轻.结论:奥曲肽对肠源性内毒素肝损害有明显的保护作用.     

茶多酚对镉致大鼠精子损伤的保护作用

目的 探讨镉对大鼠精子损伤及茶多酚(TP)的保护作用.方法 50只清洁级SD系成年雄性大鼠,随机分为阴性对照组、模型组和TP干预组(50,100,200 mg/kg).模型组和各干预组以CdCl2腹部皮下注射染毒5周,干预组分别给予50,100,200 mg/kg TP灌胃.干预结束后取大鼠血、睾丸、附睾等组织进行相关...     

核酸营养对铅染毒大鼠淋巴细胞DNA损伤的影响

目的研究核酸对铅染毒大鼠淋巴细胞DNA损伤的保护作用。方法纯种雄性健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、铅染毒组、核酸低剂量组、核酸高剂量组。对照组正常饮水,其余3组饮0.8%醋酸铅水溶液,核酸组灌胃核酸,对照组、染毒组灌蒸馏水。5周后,采用单细胞凝胶电泳技术对各组大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤进行分析。结果染毒组大鼠淋巴细胞DNA的迁移率和尾长显著高于对照组,核酸组大鼠淋巴细胞DNA的迁移率和尾长显著低于染毒组,在统计学上差异有显著性(P<0.05)。结论慢性铅染毒可致大鼠淋巴细胞DNA损伤,饮食核酸对淋巴细胞DNA损伤具有一定的保护作用,可减轻铅染毒所造成的氧化损伤。     

尼莫地平孕期干预对生长受限仔鼠神经系统损伤的保护作用

[目的]探讨钙离子拮抗剂孕期干预能否减轻生长受限仔鼠神经系统损伤.[方法]将40只SD大鼠按妊娠先后顺序随机分为3组:①A组:不缩窄子宫动脉,不予尼莫地平治疗;②B组,缩窄子宫动脉,不予尼莫地平治疗;③C组:缩窄子宫动脉,术后予尼莫地平治疗.通过TUNEL法检测各组新生仔鼠皮层和海马CA1区神经元凋亡;Morris水迷宫法检测出生21 d后各组仔鼠学习记忆功能.[结果]①3组仔鼠皮层神经细胞凋亡率差异有统计学意义(F=55.63,P<0.01).其中C组仔鼠平均为(2.98±0.54)个/HP,低于FGR组(5.05±1.17)个/HP(P<0.01),但高于对照组(2.30±0.69)个/HP(P<0.05).②3组仔鼠海马CA1区神经元凋亡率差异有统计学意义(H=34.88,P<0.01).其中C组中位数为0.833(0.332)个/HP,低于B组1.5(0.75)个/HP(P<0.01),高于A组0.5(0.333)个/HP(P<0.01).③Morris水迷宫学习记忆功能检测,3组仔鼠5 d的训练差异有统计学意义,F(组间)=44.052,P<0.01;F(时间)=7153.846,P<0.01).C组仔鼠找到平台的时间较B组短(P<0.05),但较A组长(P<0.05)[结论]钙离子拮抗剂尼莫地平孕期治疗能对生长受限仔鼠神经系统损伤有保护作用.