雄黄诱导白血病细胞凋亡及其bcl-2蛋白表达的研究

目的检测雄黄诱导白血病细胞凋亡能力,探讨分子机制。方法应用形态学观察细胞凋亡,计算细胞凋亡率,免疫组化方法检测白血病细胞bcl-2蛋白表达。结果雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性下降。结论雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达,从而导致白血病细胞发生凋亡,这是其治疗白血病的重要分子机制。     

雄黄体外诱导C6胶质瘤细胞凋亡的特点及分析

目的 观察雄黄对体外培养的C6胶质瘤细胞的生长抑制作用,探讨雄黄诱导的细胞凋亡特点和可能机制.方法 以雄黄溶液对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞进行诱导,通过MTT法观察浓度和时间对细胞存活率的影响,通过光镜、电镜观察细胞的抑制情况;采用Annexin V-FITC-PI双染流式细胞术观察药物引起的细胞凋亡情况,采用RT-PCR法观察诱导过程中Bcl-2、Bax和c-myc 3个基因的表达情况.结果 MTT结果显示,不同浓度的雄黄溶液可引起细胞不同程度的抑制;光镜及透射电镜下可现察到药物引起的细胞凋亡变化.Annexin V-FITC-PI双染显示,细胞在25 mg/L雄黄作用24、48h后的凋亡率分别为(10.134±3.14)%、(41.04±17.44)%,与对照组相比差异有统计学意义;RT-PCR观察到Bax基因表达的升高和Bcl-2、c-myc基因表达降低.结论 雄黄对C6细胞的抑制具有时间和浓度依赖性,浓度越高,越明显,此抑制与雄黄引起的凋亡有关,凋亡过程中伴有Bax基因表达的增加和Bcl-2、c-myc的降低.     

雄黄对白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达影响的研究

目的:检测雄黄诱导白血病细胞凋亡的能力,并探讨其分子机制。方法:应用形态学观察检测细胞凋亡,应用检测流式细胞仪白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达。结果:雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,白血病细胞有bcl-2强表达,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性的下降。白血病细胞有较弱的Fas蛋白表达,随着雄黄与白血病细胞作用时间的延长,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达从而导致白血病细胞发生凋亡是其治疗白血病的重要分子机制。     

雄黄诱导K562／ADM细胞凋亡的研究

探讨雄黄诱导多药耐药细胞Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡的能力,并初步探讨其分子机制,方法：采用荧光标记形态学观察,流式细胞仪进行ＤＮＡ分析及测定细胞表面ｐ－ｇｐ的表达。结果显示：雄黄能明显诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,且在４８ｈ后ｐ－ｇｐ的表达下调。     

雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞基因表达谱的作用

目的：应用cDNA芯片研究雄黄作用多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞后对其基因表达的影响。方法：应用包含4096条人类基因的cDNA表达谱芯片,检测雄黄作用于RPMI8226细胞前及48h后基因的表达。结果：在mRNA水平上,164条基因显著改变,53条基因上调,111条基因下调。结论：雄黄作用RPMI8226细胞株后可引起一系列基因改变,许多基因涉及了多发性骨髓瘤的发病机制,其中BTG1,TXNIP及ALK1基因可能与RPMI8226细胞的分化和凋亡有密切关系。     

雄黄诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的实验研究及临床应用

目的 :研究雄黄体外诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用 ,并观察其治疗多发性骨髓瘤的临床效果及毒副作用。方法 :用雄黄处理在体外培养的骨髓瘤细胞 ,以电子显微镜观测多发性骨髓瘤细胞凋亡 ,并应用雄黄治疗多发性骨髓瘤患者 8例。结果 :在 1 .0μmol/L浓度下 ,雄黄作用于体外培养的多发性骨髓瘤细胞 2 4h后 ,其凋亡率在 1 4.1 %～ 1 7.3 %之间 ,主要以早、中期表现为主 ,在 2 .0 μmol/ L浓度下 ,作用 2 4h后 ,凋亡率在 2 5.3～ 3 1 .7%之间 ,以晚期表现为主。用雄黄治疗的 8例患者完全缓解 ( CR) 5例 ,未缓解 ( NR) 3例 ,经 3～3 0 ( x=9)个月随访 ,5例缓解者无 1例复发。结论 :雄黄可作为细胞凋亡诱导剂用于治疗多发性骨髓瘤 ,且缓解率及长期生存率高 ,无明显毒副作用 ,经济方便     

纳米雄黄对卵巢癌细胞COC1凋亡的影响

目的 探讨纳米雄黄对卵巢癌细胞COC1的凋亡作用.方法 0.6 μmol/L浓度的纳米雄黄作用于COC1细胞,于不同时间收集的细胞.倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞中Bax、Bcl-2和Caspase-3的mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平.结果 0.6μmol/L浓度的纳米雄黄作用于COC1细胞48 h后出现显著的凋亡形态改变;纳米雄黄显著的促进细胞凋亡,并随着纳米雄黄处理COC1细胞时间的延长凋亡率显著性增加(P＜0.05);随着纳米雄黄处理间的延长COC1细胞中的Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著增加(P＜0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论 纳米雄黄对COC1细胞有显著的促凋亡作用,其作用机制可能与升高Bax和Caspase-3的表达和降低Bcl-2的表达有关.     

肿瘤细胞凋亡的分子学机理

细胞凋亡(Apoptosis)源自希腊,表述树叶从树上飘落或花瓣从花上落下的过程,在分子生物学中意指程序性细胞凋亡。 细胞凋亡的过程是:一旦受到一个凋亡的信号,一个粘连的细胞立即集拢并迅速浓缩它的DNA(这被认为是DNA断裂的结果),继之核分离为分散的、浓缩的染色质块,细胞裂为数个膜包裹的囊一细胞凋亡体,这些染色质块及囊迅速被巨噬细胞或邻近细胞识别并吞噬。 激活的巨噬细胞通过诱导细胞凋亡来决定肿瘤细胞的死亡,其作用尾一氧化氮依赖性机制;另一     

纳米雄黄对卵巢癌细胞增殖凋亡的调控作用及分子机制研究

目的：探讨纳米雄黄对卵巢癌细胞Skov3增殖和凋亡的影响及其潜在分子机制。方法：采用机械研磨法制备纳米雄黄;以Skov3细胞为靶细胞,分别采用MTT实验及流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡情况;同时,利用Western blot检测细胞内Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。结果：纳米雄黄能够显著抑制细胞增殖能力;40mg/L和80mg/L纳米雄黄处理Skov3细胞48小时,细胞凋亡显著增加;40mg/L纳米雄黄处理Skov3细胞48小时,Skov3细胞内Bcl-2蛋白表达水平显著降低,Bax蛋白表达显著增加。结论：纳米雄黄能够显著抑制Skov3细胞增殖,促进其凋亡,可能通过抑制细胞内Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白表达发挥抑制卵巢癌的发生发展的作用。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨姜黄素诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法:应用形态学方法、AnnexinV荧光染色和流式细胞仪(FCM)检测HepG2细胞凋亡的发生,应用RT-PCR检测凋亡相关基因P53、bcl-2和Fas的变化。结果:姜黄素对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质碎裂;流式细胞仪检测凋亡率为11.7%,细胞停在G1和G2期。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存。在姜黄素诱导HepG2细胞凋亡过程中,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强。结论:凋亡为姜黄素抑癌的机制之一,姜黄素诱导HepG2细胞凋亡可能与P53、bcl-2和Fas基因表达有关。     

雄黄诱导NB4细胞的基因表达谱改变

据CMJ报道,西安交通大学第一医院王怀宇博士应用基因芯片技术,研究了雄黄对急性早幼粒细胞白血病细胞株作用后上千条基因的表达变化,发现雄黄可诱导46条基因表达改变,其中包括蛋白质翻译合成相关基因、细胞信号传导、细胞受体等基因。这些新发现的差异表达基因对揭示雄黄诱导急性早幼粒细胞白血病缓解的具体分子机制提供了重要的线索,通过深入研究雄黄的诱导分化及凋亡治疗也为应用该方法治疗其他肿瘤提供了重要参考。     

雄黄对K562细胞端粒酶活性和凋亡的作用

目的 :探讨雄黄对慢性粒细胞白血病细胞株K5 6 2细胞端粒酶活性及凋亡的调节作用和机制 .方法 :MTT法检测细胞增殖力 ;PCR ELISA法测定端粒酶活性 ;流式细胞仪测量细胞周期和细胞凋亡 .结果 :0 .3,0 .6 ,1.5和 3.0mg·L-1雄黄 (72h)在诱导K5 6 2细胞凋亡的同时可显著抑制细胞端粒酶活性和细胞增殖 ,并呈剂量相关 ;1.5 ,3.0mg·L-1雄黄 (72h)可诱导K5 6 2细胞G2 /M期阻滞 .结论 :雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡达到抑制细胞生长的作用 ,端粒酶活性下降是雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡的机制之一 .由大剂量雄黄诱导的K5 6 2细胞G2 /M期阻滞可能与端粒酶活性显著下降有关     

电镜下几种凋亡细胞的形态特征

 目的 观察不同种类、不同原因引起的凋亡细胞的基本形态及差异。方法 用透射电镜观察原位组织和培养细胞在生理条件下和外界因素作用下产生的凋亡细胞,其中有卵巢颗粒膜细胞、烷化剂作用的光感受细胞、培养的人膀胱癌T24细胞株和肝癌细胞株。结果 凋亡细胞的基本形态变化有：胞体变小、胞质浓缩、核染色质凝聚,而核膜、质膜及细胞器保存完好。各种凋亡细胞间的形态差异主要表现为核染色质凝聚的形态不同：有的凝聚染色质边移于核膜下,或呈新月形;有的核染色质凝聚成块状,散布于核内;有的呈致密凝聚,占据整个核区。结论 电镜下观察到凋亡细胞的核染色质凝聚除边移外还有其他形态,正常组织中的暗细胞和坏死组织中的凝固性坏死细胞应与凋亡细胞相区别。     

小鼠后肾发育中的细胞凋亡及凋亡小体行踪的超微结构

 目的 观察小鼠后肾发育过程中所出现的细胞凋亡及凋亡小体的行踪。方法 应用光镜和透射电子显微镜技术观察胚龄12，14，16，18 d 胎鼠后肾发育过程中细胞凋亡及凋亡小体的超微结构。结果 后肾发育中程序性细胞死亡是由经典的细胞凋亡和坏死样程序性死亡所组成，其中以经典的细胞凋亡为主要形式。细胞凋亡后形成凋亡小体。凋亡小体是由少量皱缩的细胞质和固缩的染色质碎块组成，一旦出现即被邻近细胞所吞噬。后肾内间质细胞、输尿管芽细胞以及发育中肾单位内各种细胞都具有很强的吞噬凋亡小体的能力。被吞噬的凋亡小体体积大小不一，数量不等，细胞器首先被消化，染色质碎块随后被消化。结论 后肾发育时期凋亡细胞主要由后肾自体细胞吞噬处理，后肾内各种细胞都具有较强的吞噬凋亡小体的能力。     

苦参碱对黑色素瘤A375细胞株的诱导凋亡作用

目的 观察苦参碱对黑色素瘤细胞株A375增殖的抑制作用.方法 应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对A357细胞的增殖抑制.应用流式细胞仪观察苦参碱诱导A375细胞凋亡,采用透射电镜观察瘤细胞形态学改变.结果 0.5g/L以上浓度的苦参碱对A375细胞增殖具有显著抑制作用,并与剂量相关.细胞凋亡率随着药物浓度的增大而增加.1.0g/L处理细胞24h后可见胞体明显变圆,透射电镜下发现细胞皱缩,染色质边集等细胞凋亡改变.结论 苦参碱对黑色素瘤细胞株A375增殖有明显抑制作用,并能诱导其发生凋亡.     

细胞凋亡与细胞因子

细胞凋亡 (apoptosis)是一种特殊的细胞死亡类型 ,指细胞在一定的生理或病理条件下 ,遵循自身固有程序结束生命的现象。细胞凋亡现象存在于多种生物体中 ,在胚胎发育、免疫耐受、肿瘤发生及组织更新等过程中起重要调节作用。近年来研究发现 ,细胞凋亡可受多种因素影响 ,其中细胞因子可影响细胞凋亡。1　细胞凋亡细胞凋亡是一种有秩序、受控制并按某种特定程序发展的生理性的自然死亡过程。其形态学特征是 :胞浆首先变圆 ,随即与邻周细胞脱离 ,失去微绒毛 ,胞浆浓缩 ,内质网扩张呈泡状并与细胞膜融合 ,线粒体无大变化 ,核染色质密度增高 ,呈…     

生精细胞的凋亡研究进展

<正>凋亡(apoptosis)是由澳大利亚病理学家Johnkerr于1972年提出的,指细胞由基因控制的主动死亡过程。形态上表现为核固缩、染色质浓集、细胞膜皱折、胞体变小,细胞成断片后,最后成为被膜包绕的凋亡小体而被邻近的细胞吞噬与降解。组织学表现为单个细胞缺失,周围没有炎症反应。生物化学表现为活化Ca~(2+)依赖的核酸内切酶,在核小体连接处将染色质DNA降解成单或寡核苷酸小体,其大小均为长度180～200bp的倍数。凋亡可以是一种生理现象,也可以是病理现象。它与因缺血、缺氧而引起的病理性细胞坏死明显不同,后者细胞器和细胞膜出现肿胀、溶解、破裂,细胞内含物释放到细胞间隙可引起炎症反应。     

雄黄抗人肝癌BEL-7402细胞作用

目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制.方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位.结果:与阴性对照组比,雄黄能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的生长和...     

雄黄对HL—60／ADR作用的初步研究

目的：探讨中药雄黄对HL－60／ADR耐药细胞在抑制生长、逆转耐药、诱导凋亡方面的作用和影响。方法：（１）MTT比色法观察对细胞的换制;（2）用免疫组化法检测细胞Pgp的变化;（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）雄黄抑制HL－60／ADR耐药细胞的生长,药物浓度与HL－60／ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系;（2）随着药物浓度的增加和时间的推移,HL－60／ADR细胞中MDR基因的表达产物Pgp阳性率逐步降低;（3）随着药物浓度的增加,HL－60／ADR细胞凋亡率增加。结论：雄黄可抑制HL－60／ADR 细胞生长,逆转其耐药,促进细胞凋亡,与剂量呈依赖性,其机制可能与Pgp表达下降有关。     

siRNA诱发K562/Adr细胞凋亡的机制研究

目的研究siRNA引起K562/Adr细胞凋亡的机制。方法siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染K562/Adr细胞,透射电镜观察K562/Adr细胞超微结构变化;W estern b lot检测凋亡相关蛋白Bc l-2的改变。结果透射电镜下,pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组细胞胞浆浓缩、线粒体出现肿胀空泡样变、胞核内染色质浓集、染色质形成新月体样改变并有凋亡小体形成等典型的凋亡改变;W estern b lot结果表明pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组发生凋亡的K562/Adr细胞中,Bc l-2含量明显减少,与mock相比差异具有显著性意义(P<;0.05)。结论siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ通过抑制Bc l-2表达诱导K562/Adr细胞发生凋亡,逆转其多药耐药的发生,从而为siRNA逆转白血病多药耐药提供坚实的理论依据。