雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究

目的 研究天然活性化合物雷公藤红素（celastrol）对裸鼠移植肿瘤的抑制作用。方法 建立人源肝癌HepG2细胞的裸鼠皮下移植肿瘤模型。20只裸鼠随机分为4组,即空白对照组和雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组分别按4.0 mg/kg、2.0 mg/kg、1.0 mg/kg雷公藤红素腹腔给药,每日一次,每周5 d,共给药30 d,实验中每5 d测量一次肿瘤体积的变化。结果 雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组的体积抑瘤率分别是89.52%、65.60%和12.21%,与空白对照组相比,高剂量组、中剂量组的差异具有统计学意义（P〈0.05）。高剂量雷公藤红素给药后对裸鼠肝脏和肾脏等产生严重的毒性反应。结论 雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤具有良好的体内抗肿瘤效果,应进一步开展药物新剂型及分子结构优化方面的研究,减少其毒副反应。     

转染P53基因对胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致癌性的作用研究

 目的:探讨转染野生型P⁵³(wt-P⁵³)和突变型P⁵³(mtP⁵³)基因,对人胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致瘤性的影响及意义.方法:采用质脂体介导法,分别将wt-P⁵³和mt-P⁵³基因导入人胶质瘤细胞株SHG44,体内外检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性.结果:转染mt-P⁵³基因的细胞株,G418筛选细胞集落数、软琼脂平皿细胞集落数以及裸鼠瘤组织重量和体积,均显著高于对照组(P <0.01);而转染Wt-P⁵³ 基因的细胞株均显著低于对照组(P<0.01),表明导入wt-P⁵³基因的细胞株,瘤细胞生长速度明显低于对照细胞株和导入.mt-P53基因的细胞株,即导入mt-P⁵³基因的细胞株瘤细胞生长速度最快,而导入Wt-P⁵³基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢.结论:Wt-P⁵³基因能有效地抑制人胶质瘤细胞生长;mt-P⁵³基因则可以明显地促进瘤细胞生长.     

转染P~(53)基因对胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致癌性的作用研究

探讨转染野生型P~(53)（wt一P~(53)）和突变型P~(53)（mtP~(53)）基因，对人胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致瘤性的影响及意义。方法：采用质脂体介导法，分别将wt一P~(53)和mt一P~(53)基因导入人胶质瘤细胞株SHG44，体内外检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果：转染mt一P~(53)基因的细胞株，G418筛选细胞集落数、软琼脂平皿细胞集落数以及裸鼠瘤组织重量和体积，均显著高于对照组（P＜0．01）；而转染Wt一P~(53)基因的细胞株均显著低于对照组（P＜0．01），表明导入wt一P~(53)基因的细胞株，瘤细胞生长速度明显低于对照细胞株和导入。mt一P53基因的细胞株，即导入mt一P~(53)基因的细胞株瘤细胞生长速度最快，而导入Wt-P~(53)基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论：Wt一P~(53)基因能有效地抑制人胶质瘤细胞生长；mt一P~(53)基因则可以明显地促进瘤细胞生长。     

雷公藤单体体外抑制胶质瘤细胞的实验研究

目的 :研究雷公藤单体对胶质瘤细胞的体外抑制作用。方法 :通过 MTT法测定 3种雷公藤单体 (甲素、红素和 Wilforol A)对胶质瘤细胞株 SHG4 4、C6、U2 5 1的体外抑制作用 ;应用免疫组化法观察雷公藤甲素与雷公藤红素后 SHG4 4胶质瘤细胞 bax、bcl- 2蛋白表达的变化。结果 :雷公藤二萜类单体雷公藤甲素对胶质瘤细胞有极明显的抑制作用 ;雷公藤三萜类单体中红素的抑制作用次之。两者均使 SHG4 4细胞 bax表达增加 ,bcl- 2表达下降。结论 :雷公藤甲素与雷公藤红素对胶质瘤细胞有明显的抑制作用 ,其作用与促进 bax表达、抑制 bcl- 2表达 ,导致细胞凋亡有关。     

HSV—tk基因治疗人脑胶质瘤SHG44的实验研究

为了研究脑肿瘤的基因治疗，构建了含有ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，并成功地对人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞。经体实验证实，ＳＨＧＬＮＴＫ对阿昔洛韦（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ，ＡＣＶ）的杀伤敏感性高于ＳＨＧ４４约１０００倍，＾３Ｈ－ＴＤＲ掺入法证实，ＡＣＶ能够明显抑制ＳＨＧＬＮＴＫ的ＤＮＡ合成。体内实验证实，ＡＣＶ可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠全内的肿瘤形成，原位基因转 治疗裸     

雷公藤单体体外抑制胶质瘤细胞的实验研究

背景与目的：已有研究发现雷公藤具有抗肿瘤作用,本研究旨在探讨雷公藤单体对胶质瘤细胞的体外抑制作用。方法：通过MTT法测定3种雷公藤单体（甲素,红素和WilforolA)对胶质瘤细胞株SHG44,C6,U251的体外抑制作用;应用免疫组化法观察雷公藤甲素与雷公藤红素对SHG44胶质瘤细胞中Bax,Bcl-2蛋白表达的影响。结果：雷公藤二萜类单体雷公藤甲素对胶质瘤细胞有极显著的抑制作用;雷公藤三萜类单体中红素的抑制作用次之,两者均使SHG44细胞Bax表达增加,Bcl-2表达下降。结论：雷公藤甲素与雷公藤红素对胶质瘤细胞有明显的抗肿瘤作用,其作用与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,导致细胞凋亡有关。     

人脑胶质瘤SHG—44cDNA文库的构建和鉴定

从人脑胶质瘤体外细胞系SHG－44中抽提总RNA，亲和纯化分离mRNA．逆转录合成cDNA，经重组连接，体外包装，感染大肠杆菌Y1090后建成的SHG－44cDNA文库，其库容量含9．25×105原代重组子，重组百分比94．9％，克隆效率为1．04×10pfu／μgcDNA．同时，以兔抗牛GFAP多抗为探针对该文库进行免疫筛选，得到了两个GFAP相关基因的cDNA克隆，在表达水平上，该cDNA文库含GFAP基因的频率为1．2×10-5，从而证实文库中有目的基因的有效表达，为与此相关的分子生物学研究提供了一个有用的工具。     

蒿甲醚对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤实验

目的探讨蒿甲醚（Artemether）对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C₆脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC₅₀)。立体定位仪对48只（雌、雄各半）SD大鼠建立脑胶质瘤原位模型,随机分为6组：对照组;模型组,蒿甲醚33.3 mg/（kg·d）、50.0 mg/（kg·d）、66.6 mg/（kg·d）;联合用药组,蒿甲醚50.0 mg/（kg·d）+ 硫酸亚铁1.5 mg/（kg·d）;阳性药对照组。采用灌胃给药法连续给予各组SD大鼠用药10天,对照组给予0.9%氯化钠溶液。肿瘤体积按a²bπ∕6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径)计算。全脑标本用4%多聚甲醛固定。肿瘤组织做病理观察。结果蒿甲醚抑制大鼠C₆脑胶质瘤细胞增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性;模型组和联合用药组对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤率分别为：54.5%、61.0%、64.5%和69.8%;模型组组间比较,蒿甲醚66.6 mg/（kg·d）用药组的抑瘤率明显高于蒿甲醚33.3 mg/（kg·d）用药组;各实验组间比较,联合用药组的抑瘤率显著高于模型组33.3 mg/（kg·d）。结论口服蒿甲醚对SD大鼠脑部原位接种C₆脑胶质瘤有明显的抑瘤作用。     

雷公藤红素抑制血管生成的实验研究

目的：探讨雷公藤红素对血管生成的抑制作用。方法：采用MTT法测定雷公藤红素对血管内皮细胞株(ECV)增殖的影响,观察雷公藤红素对ECV迁移实验和小管形成实验的作用,以及对鸡胚尿囊膜血管生成的影响。体内实验采用Matrigel plug方法。结果：雷公藤红素可明显抑制ECV的体外增殖,IC50为1．33μg／ml;可抑制ECV的迁移和小管形成,并且呈明显的剂量依赖性;同时具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成和Matrigel plug中的血管新生的作用。结论：雷公藤红素具有明显抑制血管生成的作用,有可能成为有效的血管生成抑制剂。     

外源性IFN-β基因对裸鼠SHG44胶质瘤的诱导凋亡研究

目的: 探讨β干扰素基因对人脑胶质瘤的诱导凋亡作用,以及人β干扰素裸DNA治疗人脑胶质瘤的可行性和作用机制。 方法: 建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将IFN-β基因的真核表达载体pSV2IFNβ注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、TUNEL染色以及电镜,了解IFN-β基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的作用。 结果: IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡。 结论: IFN-β裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长并诱导胶质瘤细胞凋亡,该实验为IFN-β基因治疗人脑胶质瘤的应用奠定了初步基础。     

人脑胶质瘤干细胞SHG-44s的克隆及初步鉴定

目的:探讨人脑胶质瘤体外细胞系中存在肿瘤干细胞的可能性.方法:将SHG44细胞系和SHG44-9细胞株,分别应用含血清培养基(DMEM 10?S)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF)培养.用CD133免疫磁珠分离干细胞、Hoechst33342和NESTIN流式细胞仪、Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞.结果:CD133磁珠分离得到的干细胞的比例:在血清组SHG44和SHG44-9分别为0.021%和0.035%:无血清组分别为1.2%和2.3%.而Hoechst33342和CD133标记后流式细胞仪检测干细胞比例:血清组中SHG44、SHG44-9分别为1.5%、0.37%;无血清组分别为16.4%和29.1%.并且这些细胞能够增殖和分化成神经元和胶质细胞.而Nestin标记后SHG44、SHG44-9中分别有51.05%、77.53%阳性细胞.结论:体外长期传代培养的人脑胶质瘤细胞系中存在肿瘤干细胞SHG44s,CD133磁珠和Hoechst33342流式细胞仪分离和检测胶质瘤干细胞是行之有效的方法,而Nestin 细胞是干细胞分化后的祖细胞或前体细胞,不能作为分离和检测干细胞特异性标记物使用.     

去甲二氢愈创木酸诱导体外恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的：观察去甲二氢愈创木酸（nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞凋亡的影响,并探讨其发生的可能机理。方法：采用MTT（methy thiazolyl tetrazolium)法检测细胞增殖抑制的情况。利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测体外培养细胞的凋亡情况,用免疫组织化学,原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：（1）一定浓度（100μmol/L）的NDGA处理SHG-44细胞不同时间后,在NDGA抑制细胞增殖的同时,也可诱导此细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;（2）免疫组化染色结果表明,一定浓度的NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞凋亡的发生呈负相关;（3）原位杂交结果显示;NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA可诱导SHG-44细胞的凋亡,这种作用可能与其下调bcl-2基因的表达有关,确切机制有待进一步深入研究。     

重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响

 目的　研究BMP-2是否对胶质瘤细胞也具有诱导凋亡作用。方法　培养的人脑胶质瘤细胞系SHG-44中加入rhBMP-2,运用透射电镜观察凋亡的超微结构,流式细胞仪技术分析细胞DNA周期变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的改变。结果　电镜下可见细胞核染色质浓缩、边集、核碎裂;DNA周期分析显示在G1期峰前存在一个凋亡峰(12.1%);DNA电泳呈梯状。结论　rhBMP-2在体外对人脑胶质瘤细胞系SHG-44有明显诱导凋亡的作用。     

高能X线和人参皂甙Rb1对人脑胶质瘤细胞SHG-44的影响

[目的]探讨高能X线和人参皂甙Rb1对人脑胶质瘤细胞株SHG-44的影响。[方法]应用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化;RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9mRNA的表达水平。[结果]高能X线照射后SHG-44细胞增殖受到抑制,且随照射剂量加大抑制作用增强。当加入人参皂甙Rb1后,细胞增殖抑制更加明显;高能X线照射后SHG-44细胞表现为G2/M期阻滞,而人参皂甙Rb1可缓解G2/M期阻滞现象;辐射促进MMP-2、MMP-9的表达,且随照射剂量的增加表达量增加,而人参皂甙Rb1抑制其表达,与药物浓度呈反比。[结论]人参皂甙Rb1与高能X线协同抑制SHG-44的增殖,辐射后肿瘤细胞侵袭能力增强,而人参皂甙Rb1使照射后肿瘤细胞侵袭能力下降。     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞周期的影响

 目的　观察去甲二氢愈创木酸(NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞周期的影响。方法　采用细胞培养、免疫组化、细胞计数及流式细胞仪检测等技术方法。结果　①在200μM浓度范围内,NDGA对SHG-44细胞增殖有抑制作用,使细胞增殖受阻于G1→S期,且这种作用与浓度呈正相关;②在NDGA处理96小时内,NDGA对SHG-44细胞的增殖抑制作用以处理后24小时最明显;③NDGA处理后,SHG-44细胞cyclin D1和CDK4蛋白表达减弱,p16蛋白表达增强。结论　NDGA对SHG-44细胞周期有明显的增殖抑制作用,且这种作用可能与CDK4蛋白激酶活性降低有关。     

尼卡地平抑制胶质瘤生长的体外实验

 目的　研究钙拮抗剂尼卡地平(Nicardipine,NC)对 恶性胶质 瘤细胞系U25IMG的细胞生长效应。方法　在无血清培养基中，予不同剂量的NC、EGF及NC和EGF(10ng/ml)干预 ，应用MTT比色法观察它们的细胞生长效应。结果　EGF对U251MG细胞表现出剂量依赖性生长刺激作用，10ng/ml时接近 最大效应，与10%小牛血清的促生长效应相仿(P＞0.05)；NC抑制U251MG细胞生长，并 完全阻断EGF的效应。结论　尼卡地平能抑制胶质瘤细胞生长并完全阻断EGF的生长刺激作用，为 临床上治疗胶质瘤提供一条新的线索。     

整合素与胶质瘤细胞凋亡

 目的　研究整合素 β1在胶质瘤细胞中的表达及在胶质瘤细胞增殖、生存方面的作用。 方法　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞整合素 β1的含量 ,以不同浓度的抗整合素 β1抗体处理在胶原蛋白I上培养的SHG4 4胶质瘤细胞 ,MTT法测定ID50 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞仪分析细胞周期改变。结果　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞表达整合素 β1,MTT曲线测定发现 ,2 0 μg/ml抗整合素 β1抗体处理SHG4 4胶质瘤细胞 4 8小时后 ,显著抑制SHG4 4胶质瘤细胞的增殖。流式细胞仪分析可检出凋亡峰。结论　整合素 β1在SHG4 4胶质瘤细胞中高表达 ,并与胶质瘤细胞增殖、生存密切相关 ,抑制整合素 β1的表达可促进胶质瘤细胞的凋亡及坏死。     

Celastrol inhibits the growth of human glioma xenografts in nude mice through suppressing VEGFR expression

Celastrol, a compound purified from Tripterygium wilfordii whose preparations have been used for clinical treatment for rheumatoid arthritis, has been demonstrated to have antiangiogenic activity, and be inhibitory against mice tumor growth by a few recent studies. However, whether its antiangiogenic activity plays a role in the celastrol-mediated suppression of tumor growth and the molecular basis of anti-tumor activity are poorly understood. In this study, we found that celastrol inhibited the growth of human glioma xenografts in mice, which concurred with the suppression of angiogenesis. Interestingly, while celastrol had no effect on either the expression of VEGF or its mRNA levels, celastrol treatment lowered the expression levels of its receptors (VEGFR-1 and VEGFR-2) and their mRNA levels. These findings suggest that celastrol have potential to be used as an antiangiogenesis drug through its role in suppressing VEGF receptors expression that might consequently reduce the signal transduction between VEGF and VEGFR.     

人脑胶质细胞瘤中血管内皮生长因子基因的表达研究

目的　研究血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)在脑胶质细胞瘤中的表达及其与肿瘤病理分级、新生血管形成的关系。方法　采用Northern杂交和免疫组织化学染色检测 3 0例脑胶质瘤标本 ,2例脑胶质瘤细胞株 ,4例正常脑组织的VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果　正常脑组织中VEGFmRNA的表达水平极低 ,而脑胶质瘤组织和细胞系中VEGFmRNA的表达水平高 ,P <0 .0 5。在正常脑组织中未见VEGF免疫组化染色阳性细胞 ,脑胶质瘤组织和细胞系中VEGF高表达 ,P <0 .0 5。随着脑胶质瘤恶性程度的增加 ,VEGFmRNA的表达增高 (γ =0 .85 ,P <0 .0 1)。VEGF的表达还与肿瘤的血管密度相关 (γ =0 .88,P <0 .0 1)。结论　脑胶质瘤中VEGF的异常表达 ,是判断脑胶质细胞瘤恶性程度和血管丰富程度的 1项客观指标。