多西紫杉醇对人胃癌细胞BGC-823 hTERT启动子转录活性及其调控基因c-myc表达的研究

目的:探讨多西紫杉醇对人胃癌细胞BGC-823端粒酶活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达、hTERT启动子转录活性及其转录调控基因c-myc蛋白表达的影响。方法:加药多西紫杉醇24、48和72h后收集细胞,MTT比色法测定IC50值;分别采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性和RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶hTERT mRNA的表达;Luciferase法检测hTERT启动子活性;Western blot技术检测c-myc蛋白的表达。结果:多西紫杉醇可以明显抑制胃癌细胞BGC-823的端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,呈一定的时效、量效关系;进一步研究发现,多西紫杉醇对胃癌细胞端粒酶活性的影响抑制了hTERT启动子转录活性的表达,同时对启动子转录活性调控蛋白c-myc表达的研究也证实了这一点。结论:hTERT mRNA的表达与胃癌的发生和演进有关,癌基因c-myc可能通过参与hTERT启动子转录活性的表达调控而调控hTERT mRNA表达。多西紫杉醇抑制胃癌细胞BGC-823的增殖可能与其抑制BGC-823细胞hTERT启动子转录活性和c-myc蛋白表达相关。     

c-myc靶向siRNA抑制人结直肠癌Colo320细胞的增殖及下调hTERT基因表达的研究

 目的 探讨发夹状shRNA封阻c-myc基因,抑制人结直肠癌Colo320细胞增殖、生长的状况。 方法 针对原癌基因c-myc构建发夹状shRNA的真核表达质粒,并转染人结直肠癌Colo320细胞。荧光定量RT-PCR检测c-myc及细胞端粒酶逆转录酶的mRNA表达,Western blot检测c myc、hTERT蛋白表达水平。Southern blot检测端粒的长度,PCR-ELISE法检测端粒酶活性。³H-thymidine实验分析DNA合成和细胞增殖。 结果 转染细胞增殖、生长皆受到抑制。同时,c-myc和hTERT的mRNA和蛋白表达显著下降,端粒的长度明显缩短,端粒酶活性降低。 结论 c-myc 的shRNA对人结直肠癌Colo320细胞的增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用,并呈剂量依赖关系。     

抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞端粒酶活性的影响及其机制

目的：研究抗HPV16E6核酶（Ribozyme）对宫颈癌CaSKi细胞端粒酶活性的抑制及其机制。方法：以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Western blotting法检测3种细胞HPV16E6蛋白的表达,用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用RT-PCR法检测P53、c-myc、hTERT和hRT的表达。结果：点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Western blotting证实CaSKi-R中表达E6蛋白较CaSKi-P、CaSKi明显降低。CaSKi、CaSKi-P、CaSKi-R3种细胞的端粒酶活性值分别为（0.89±0.14）、（0.90±0.11）、（0.36±0.06）,转染了抗HPV16E6核酶的CaSKi-R细胞端粒酶活性的抑制率为59.55%,与CaSKi、CaSKi-P细胞比较明显下降（P〈0.01）。与CaSKi和CaSKi-P细胞相比,CaSKi-R细胞表达c-myc、hTERT mRNA明显减少,P53、hRT mRNA表达无明显变化。结论：抗HPV16E6核酶明显抑制CaSKi-R细胞端粒酶活性,其机制可能与HPV16的E6蛋白及c-myc、hTERT mRNA减少有关。     

硫醇酊对白血病细胞端粒酶逆转录酶表达和端粒酶活性选择性抑制的作用

为了面容硫醇类低分子化合物梳醇酊(Amifostine,AEF)对正常和恶性造血细胞中端粒酶,逆转录酶(hTERT),端粒酶活性的影响,多聚酶链反应(PCR)及酶联免疫吸咐方法用于检测白血病细胞及正常人单个核细胞hTERT mPNA表达及端粒酶活性.结果显示AMF可抑制白血病HL60细胞株以及急性白血病病人白血病细胞的hTERT转录表达,并进而导致端粒酶活性减低.正常活化淋巴细胞hTERT和端粒酶活性水平不受AMF影响.表明AMF能够选择性抑制肿瘤细胞端粒酶活性.     

三氧化二砷对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)处理HL－60细胞前后人类端粒酶逆转灵酶（hTERT)基因表达和端粒酶活性的改变。方法：采用姬姆萨染色及碘化丙锭染色置流式细胞仪检测来观察细胞的凋亡，以RT－PCR分析hTERT 基因的mRNA表达水平；应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量；利用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测As2O3处理HL－60前后端粒酶活性的改变。结果：2umol/L As2O3诱导HL－60细胞凋亡的过程中，hTERT mRNA表达水平显著下降，细胞内hTERT蛋白含量也相应降低，其端粒酶活性明显受到抑制，结论：As2O3可通过下调hTERT基因的表达而抑制HL－6细胞的端粒酶活性。     

白花蛇舌草对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性及hTERT基因表达的影响

目的 探讨白花蛇舌草(HD)对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响,分析HD抗肿瘤机制.方法 分别以不同浓度的HD作用于体外培养的Hela细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用PCR-TRAP-ELISA方法 定量检测HD处理后Hela细胞端粒酶活性,用RT-PCR法测定hTERT mRNA的表达水平.结果 一定浓度的HD作用于Hela细胞一定时间后可诱导Hela细胞凋亡,端粒酶活性明显降低,hTERT mRNA的表达水平下降.结论 HD可能通过下调hTERT基因表达来降低端粒酶活性,进而诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

肝细胞癌端粒酶活性及hTERT mRNA表达与术后早期复发的关系

目的：研究肝细胞癌端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达与肝细胞癌术后早期复发的关系。方法：采用ELISA—TRAP法检测60例肝癌组织及其癌旁组织端粒酶活性，RT—PCR法检测hTERT mRNA表达，5例正常肝脏组织作为对照。分析端粒酶活性及hTERT mRNA表达与临床病理之间的关系。结果：肝癌组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达阳性率分别为86．7％（52／60）及90％（54／60），癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达阳性率分别为40％（24／60）及43．3％（26／60）。正常肝脏组织均未检测到端粒酶活性及hTERT mRNA表达。癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达与术后早期复发及包膜浸润、门静脉侵犯、肝内转移等恶性肿瘤的恶性生物学行为有关。结论：癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达可能是肝细胞癌术后早期复发的预后指标。     

反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响

 目的　研究靶向封闭端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的反义硫代寡核苷酸（ASPSODN）对K562细胞目的基因的抑制及其对端粒酶活性及细胞增殖周期和凋亡的影响 。方法　ASPSODN转染到人类红白血病细胞株K562,采用MTT法、酶联免疫吸附（ELISA）法和流式细胞术（FCM）检测K562细胞的增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果　0.6 μmol／L的ASPSODN（0.42±0.16）能明显下调hTERT表达（P＜0.05）,端粒酶相对活性降至52 %;MTT法检测显示明显抑制K562细胞增殖活性;FCM显示细胞凋亡率为10.31 %,PI染色显示细胞被阻止在G1／G0期,S期及G2／M期的细胞减少,但无特征性的凋亡峰。结论　ASPSODN靶向 hTERT 能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调端粒酶活性,抑制K562细胞增殖,并通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞凋亡。     

长春瑞滨对人肺腺癌Anip973细胞凋亡和端粒酶表达的影响

目的 探讨长春瑞滨(NVB)对人肺腺癌Anip973细胞的凋亡、端粒酶活性以及人端粒酶逆转录酶mRNA(hTERT mRNA)表达的影响.方法 以不同浓度的NVB作用于Anip973细胞,在不同时间内收集细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察NVB对Anip973细胞的生长抑制作用;通过流式细胞术观察Anip973细胞凋亡率;用倒置显微镜和电镜观察细胞形态学变化;应用以聚合酶链反应(PCR)为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT mRNA表达.结果 不同浓度的NVB可诱导Anip973细胞凋亡,而且可降低Anip973细胞中端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,并呈时间-剂量依赖性.0.08μg/ml NVB作用Anip973细胞24 h,细胞增殖被抑制,细胞凋亡率为(7.37±0.35)%,hTERT mRNA表达为57.01±1.71,与对照组差异均有统计学意义(P＜0.01);端粒酶活性值为6.36±0.06,与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);hTERT mRNA表达的改变比端粒酶活性更敏感.0.4μg/ml NVB组和2.0μg/mlNVB组各时间点的细胞凋亡率、端粒酶活性和hTERT mRNA表达与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).2.0μg/ml NVB作用Anip973细胞72 h时,端粒酶活性为1.36±0.27,而细胞凋亡率为(74.87±1.88)%,表明细胞凋亡率的增加与细胞hTERT mRNA表达呈负相关(r=-0.96046,P＜0.01).结论 NVB的作用机制与端粒酶有关,诱导凋亡是其发挥抗癌作用的机制之一.检测端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,有助于判定NVB诱导肺癌细胞凋亡的敏感性.     

β-榄香烯对胃癌SGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响

目的：探讨β-榄香烯对胃癌CGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响。方法：应用β-榄香烯处理人胃癌细胞系SGC-7901后,采有RT-PCR检测c-myc基因mRNA的变化。采用流式细胞仪免疫荧光技术检测c-myc蛋白表达,用端粒酶PCR-ELISA法检测端粒酶活性,结果：β-榄香烯可下调c-myc基因表达及抑制端粒酶活性。结论：β-榄香烯可抑制胃癌细胞端粒酶活性,可能与下调c-myc基因表达有关。     

Telomerase activation by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 is associated with c-Myc expression in human nasopharyngeal epithelial cells

Latent membrane protein 1 (LMP1), one of the oncoproteins encoded by Epstein-Barr virus is sufficient for the development of nasopharyngeal carcinoma in vivo and nasopharyngeal epithelial cellular immortalization in vitro. It has also been shown to increase the telomerase activity in primary human nasopharyngeal epithelial cells by an unknown mechanism. We reported here that LMP1 could increase telomerase activity in coordination with LMP1-induced c-Myc expression in LMP1-transfected primary human nasopharyngeal epithelial cells or in a dual-stable LMP1 integrated nasopharyngeal carcinoma cell line with Tet-on regulatory system, named Tet-on-LMP1 HNE2 by PCR-ELISA analysis and reporter gene assay. Blocking of LMP1 expression decreased telomerase activity and c-myc transactivation. Mutagenesis of Myc-responsive E-box elements in the minimal core of hTERT promoter could inhibit the hTERT expression induced by LMP1. Moreover, blocking of c-myc transactivation could further decrease LMP1-mediated hTERT expression. It has been suggested that LMP1 can be used to aid myc control telomerase. In addition, we also found that C-terminus of LMP1, including CTAR1 and CTAR2 domains participated in telomerase activation. Together, these findings suggested that LMP1 activated telomerase via c-myc.