Survivin在急性白血病患者的表达及意义

目的　探讨急性白血病 (AL)患者Survivin基因表达及其临床意义。方法　应用RT -PCR方法检测 43例初治急性白血病患者Survivin基因mRNA表达。结果　AL患者SurvivinmRNA表达阳性率为 69 77%( 3 0 /4 3 )。 18例急性淋巴细胞白血病 (ALL)和 2 5例急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)患者SurvivinmRNA表达阳性率 (分别为 72 2 2 %和 68 0 %)均高于对照组 ( 3 3 3 3 %,P <0 0 5 )。半定量后进行方差分析 ,ALL、ANLL及完全缓解 (CR)组患者的SurvivinmRNA表达水平 (分别为 0 63± 0 12 ,0 66± 0 19,0 73± 0 15 )也高于对照组 ( 0 43± 0 0 7,P <0 0 5 )。ANLL患者SurvivinmRNA表达水平受骨髓白血病细胞百分比影响 (b =1 0 98,P =0 0 0 5 )。AL患者SurvivinmRNA表达与骨髓缓解 (BMR)率无关。结论　Survivin基因在AL患者高表达 ,可能成为急性白血病靶向治疗的一个潜在靶点     

人乳铁蛋白提高MCF7细胞放射敏感性的初步研究

目的 观察hLF对于人乳腺癌细胞辐射敏感性的影响。方法 用pBC1-hLF载体转染MCF7细胞,同时以hLF标准品处理为参照,细胞活力实验、克隆形成试验和流式检测细胞凋亡来观察hLF基因高表达对MCF7细胞生长特性和辐射敏感性的影响。结果 hLF基因高表达可以显著抑制MCF7的生长,提高其对射线的敏感性。hLF可促进MCF7细胞自发和受照后的凋亡,降低克隆形成能力。但胞外直接供给hLF却不能抑制MCF7的生长,也不能显著提高其对射线的敏感性,甚至有提高克隆形成能力的趋势。结论 hLF基因高表达可以在体外显著抑制人乳腺癌MCF7细胞的生长,提高其辐射敏感性,而直接供给hLF却没有上述作用。     

槲皮素逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素耐药及其相关机制的研究

目的 探讨槲皮素（quercetin,Que）逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素（doxorubicin,Dox）耐药及其相关机制。方法 用不同浓度的槲皮素处理MCF - 7细胞及其阿霉素耐药的MCF - 7/dox细胞,MTT法筛选无毒剂量的槲皮素用于实验。用无毒剂量的槲皮素联合不同浓度的阿霉素处理MCF - 7和MCF - 7 /dox细胞,MTT法检测细胞增殖率,Transwell法检测细胞侵袭能力,流式细胞法检测细胞凋亡率和人乳腺癌干细胞表面标志物CD44+/CD24 - /low的表达, Western - blot检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10 ,PTEN）及磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶（Phosphorylated serine/threonine kinases,p - AKT）的表达。结果 与MCF - 7细胞组相比较,MCF - 7/dox细胞组的乳腺癌干细胞表面标志物CD44+/CD24 - /low表达增高(P＜0.01),且PTEN的表达降低、p - AKT的表达升高(P＜0.05);与单用阿霉素组相比较,阿霉素与槲皮素联合应用能抑制细胞增殖和侵袭、诱导细胞凋亡、杀死肿瘤干细胞,并能上调PTEN、下调p - AKT的表达。结论 槲皮素能有效逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素耐药,其机制可能与槲皮素协同阿霉素杀死人乳腺癌干细胞,调控PTEN/AKT信号通路有关。     

沉默长链非编码PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响

目的探究沉默长链非编码RNA (lncRNA) PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响。方法 qRTPCR实验检测PCAT-1的mRNA表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和MTT实验检测MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的活性; TUNEL实验检测MCF7/ADM细胞凋亡。结果 PCAT-1在乳腺癌组织和MCF7细胞中的mRNA表达水平明显高于癌旁组织和人乳腺上皮细胞MCF10A。PCAT-1在MCF7/ADM细胞的mRNA表达水平明显高于MCF7细胞。沉默PCAT-1可以促进ADM对MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的抑制作用。沉默PCAT-1能够增强ADM诱导的MCF7/ADM细胞的凋亡。此外,沉默PCAT-1可以促进Bax的表达,抑制Bcl-2和PCNA的表达。结论沉默PCAT-1增强ADM对乳腺癌细胞的毒性作用。     

沉默葡萄糖调节蛋白94对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的机制

目的探讨沉默葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的作用机制,旨在对GRP94在乳腺癌发生发展中的作用及机制提供数据参考。方法将人乳腺癌细胞株MCF7细胞随机分为空白对照组、空白转染组和实验组,其中空白转染组和实验组分别转染siRNA和siRNA-GRP94,采用CCK8实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测GRP94 mRNA表达,Western blot检测GRP94、c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达。结果实验组GRP94 mRNA和蛋白表达量分别为(0.106±0.031)和(0.211±0.068),明显低于空白对照组的(0.984±0.122)和(0.943±0.117)及空白转染组的(0.980±0.120)和(0.946±0.121),差异有统计学意义(P0.05)。实验组培养24 h、48 h MCF7细胞增殖A值分别为(0.426±0.120)和(0.547±0.114),明显低于空白对照组的(0.864±0.121)和(1.064±0.117)及空白转染组的(0.870±0.119)和(1.060±0.110),差异有统计学意义(P0.05)。实验组MCF7细胞凋亡率为(8.92±1.01)%,明显高于空白对照组的(3.16±0.64)%和空白转染组的(3.20±0.59)%,差异有统计学意义(P0.05)。实验组MCF7细胞c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白相对表达量分别为(0.813±0.104)、(0.214±0.067)和(0.511±0.121),明显低于空白对照组和空白转染组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 GRP94可抑制乳腺癌MCF7细胞增殖、诱导凋亡,可能与其下调c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达有关。     

长链非编码PCAT-1在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA (lnc RNA) PCAT-1在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 q RT-PCR检测PCAT-1在乳腺癌组织和乳腺癌MCF7和MDA-MB-468细胞中的表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和Ed U实验检测si-PCAT-1对MCF7细胞活性和增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测si-PCAT-1对MCF7细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 PCAT-1在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,PCAT-1在MCF7和MDA-MB-468细胞中的表达水平显著高于人乳腺上皮细胞MCF10A。MCF7细胞转染si-PCAT-148 h后,MCF7细胞的活性和增殖能力明显降低,迁移距离显著减少,侵袭能力也明显下降。结论 PCAT-1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞(MCF7和MDA-MB-468)中的表达水平明显升高;下调PCAT-1表达显著抑制了乳腺癌MCF7细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

芬太尼对MCF-7细胞增殖和细胞周期影响研究

目的　探讨芬太尼对MCF -7细胞增殖和细胞周期的影响及其机制。方法　MCF -7细胞在不同浓度芬太尼、纳洛酮和两药联合干预后 ,采用MTT法检测细胞增殖活性 ;流式细胞术检测细胞周期 ;免疫细胞化学染色SP法检测p5 3、p2 1/WAF1的表达。结果　芬太尼浓度≥ 0 1μmol/L时 ,细胞增殖活性较对照组显著下降 (P <0 0 5 ) ,其效应与时间和浓度均呈正相关 (P <0 0 1) ,72h半数抑制浓度 (IC50 )为 0 81± 0 0 2 μmol/L。随着芬太尼浓度增加 ,G0 /G1期比例逐渐增加 ,(S +G2 /M )期比例逐渐减少。芬太尼组浓度≥ 0 1μmol/L时 ,细胞增殖活性较对照组显著下降 (P <0 0 5 ) ,较纳洛酮和芬太尼联合给药组差异无显著性。给予芬太尼 10 μmol/L后胞核内p5 3、p2 1/WAF1AOD显著增加 (P <0 0 5 )。结论　芬太尼浓度和时间依赖性抑制MCF -7细胞增殖 ,主要是将细胞阻滞在G1期 ;其机制可能是上调野生型p5 3和p2 1/WAF1的表达。     

Survivin siRNA、HSP70双基因转染对乳腺癌细胞株MCF7 survivin及HSP70表达的影响

目的探讨survivin siRNA、HSP70双基因转染对乳腺癌细胞株MCF7survivin、HSP70表达的影响。方法常规培养乳腺癌细胞株MCF7,将已构建的真核表达载体(pIRES2-EGFP-survivin siRNA、pIRES2-EGFP-HSP70)用脂质体介导转染MCF7细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染后的细胞,通过western-blot、RT-PCR检测转染后细胞中HSP70蛋白、survivin蛋白及survivinmRNA表达的变化。结果转染空载体与转染真核表达载体的乳腺癌细胞株MCF7于倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,证实转染成功。转染真核表达载体的MCF7细胞与转染空载体的MCF7细胞和未转染的MCF7细胞相比,survivin mRNA和survivin蛋白表达水平降低,而HSP70蛋白表达升高。结论 survivin siRNA能有效抑制MCF7细胞内源survivin基因的表达,HSP70能上调MCF7细胞HSP70蛋白的表达,为进一步深入研究survivin siRNA、HSP70双基因对乳腺癌细胞株MCF7生物学特性的影响奠定实验基础。     

JWA基因参与细胞氧化应激的机制研究

目的　建立氧化应激模型 ,探讨新基因JWA参与细胞氧化应激的机制。方法　用H2 O2处理人乳腺癌细胞株 (MCF 7)和人胚胎肺纤维细胞株 (WI 38)两种细胞 ,观察细胞培养上清中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽 (GSH)的含量 ,用RT PCR半定量的方法及Westernblot蛋白质印迹法分别检测JWA在mRNA水平和蛋白质水平上的表达以及应激蛋白HSP2 7、HSP70、HSP90的表达。结果　MCF 7细胞培养上清中H2 O2 处理前MDA为 (0 .5 31± 0 .0 38)mmol/L ,处理后为 (0 .6 74± 0 .0 4 1)mmol/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;GSH在H2 O2 处理前为 (0 .0 5 3± 0 .0 0 2 )g/L ,处理后为 (0 .0 4 4±0 .0 0 2 )g/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。WI 38细胞培养上清中H2 O2 处理前MDA的含量为 (0 .5 72±0 .0 35 )mmol/L ,处理后为 (0 .6 83± 0 .0 2 8)mmol/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;H2 O2 处理前GSH含量为(0 .0 5 8± 0 .0 0 2 )g/L ,处理后为 (0 .0 5 0± 0 .0 0 2 )g/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。经H2 O2 孵育不同时间后 ,JWAmRNA在MCF 7细胞中明显下降 ,6h下降 6 8.4 % ,在WI 38细胞中则变化不明显 ;JWA蛋白和HSP2 7在两种细胞中的表达水平都有明显增加 ,但增加的程度不同。结论　JWA基因参与细胞氧化应激且在不同类型的细胞中     

三种增塑剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的　观察对 壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯 (DBP)对乳腺癌细胞株MCF 7增殖的影响。方法　将MCF 7细胞在达尔克 (DMEM)培养液 (含 10 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养 ,开始实验前将培养细胞用磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤后改在无酚红DMEM (含 5 %胎牛血清 )中培养继续 4d以耗尽其内源性雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及 3种受试物各 4个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对MCF 7细胞的增殖情况进行分析。结果　与对照组相比 ,NP、BisA和DBP对细胞处理 2 4h ,分别在 96× 10 -7mol/L、96× 10 -7mol/L、96× 10 -6mol/L可促进MCF 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并推进G0 /G1期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ;随着培养时间延长至 96h ,3种化合物在较低浓度条件下也表现促进细胞增殖的效果。结论　对 壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯可促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF 7的增殖 ,可能具有雌激素样作用。     

RNA干扰hTERT基因对人乳腺癌细胞株MCF-7周期及凋亡影响的研究

目的 观察载体介导的RNA干扰技术能否有效抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的hTERT的表达及其对细胞周期及凋亡的影响.方法 构建2个针对hTERT基因表达短发夹状siRNA的真核表达载体（pshRNA-hTERT）并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,通过RT-PCR检测该基因mRNA,Western blot蛋白质检测,端粒酶活性检测,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡等方法检测RNAi效果,从中筛选出基因沉默效果好的靶位点.结果 转染乳腺癌细胞后,pshRNA - hTERT1,2质粒均能抑制hTERT基因表达,mRNA表达分别下调了54.6%,55.2% 蛋白表达分别下调46.6%,47.8%.端粒酶活性均明显下降.对乳腺癌细胞周期中S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加.结论 RNAi在体外明显抑制乳腺癌细胞中hTERT基因的表达和瘤细胞增殖.     

环境雌激素对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡作用的影响

[目的] 通过观察对-壬基酚(nonylphenol,NP)、双酚A(bisphenol A,BisA)和邻苯二甲酸二丁酯(dibutylphthalate,DBP)对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,探讨环境雌激素促进MCF-7细胞增殖的生物学机制.[方法] 将在DMEM培养液(含10%小牛血清)中的MCF-7细胞采用开放式单层贴壁培养,加受试物前5 d将培养细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS)中培养连续5 d,其目的是耗尽细胞内储存的雌激素.实验设溶剂对照组、雌激素对照组、抗雌激素(它莫西芬)对照组及三个实验组,采用流式细胞术、DNA片段凝胶电泳和细胞苏木素染色(HE),观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用的影响.[结果] 3.2×10-6 mol/L NP和3.2×10-5 mol/L BisA对MCF-7细胞处理72 h,与对照组相比,流式细胞仪分析结果表明,二倍体细胞(G1期细胞)明显增加,亚二倍体细胞峰(即细胞凋亡率)消失,DNA凋亡片段凝胶电泳不显示典型的凋亡DNA片段梯带,细胞苏木素染色结果也显示凋亡细胞明显减少.[结论] 与溶剂对照组相比,NP和BisA均能够抑制MCF-7细胞的凋亡作用,而3.2×10-4 mol/L DBP对细胞凋亡的影响作用不明显.这一结果提示,该类物质有可能是通过抑制细胞凋亡而发挥其促进MCF-7细胞增殖作用的.     

热疗对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的探讨加热对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法以正常培养状态下的MCF-7细胞为对照，应用MTT、Hoechst—PI染色方法分析不同的热处理条件（41℃，42℃，43℃）对MCF-7细胞生长状况的影响，采用细胞荧光免疫法检测热处理前后MCF-7细胞中Bcl-2基因和Bax基因的表达变化。结果热处理后肿瘤细胞凋亡数量明显增多，MCF-7细胞的最佳热处理温度为42℃，热疗使细胞中Bcl-2基因的表达水平降低，Bax基因的表达水平明显升高。结论热疗能够调节Bcl-2基因和Bax基因的表达水平，诱导肿瘤细胞凋亡。     

植物雌激素对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 :　探讨植物雌激素大豆异黄酮 (genistein,GS)和玉米赤霉烯酮 (zearalenone,ZEA)对乳腺癌细胞株 MCF- 7增殖的影响。方法 :　雌激素依赖性 MCF- 7细胞在 DMEM培养液(含小牛血清 1 0 % )中采用开放式单层贴壁培养 ,于加受试物前 5 d将细胞用 PBS洗涤后改为无酚红高糖 DMEM(含 5 %经活性碳 -葡聚糖苷处理的胎牛血清 ,CDT- FBS)培养 ,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及两种受试物各四个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3H- Td R掺入法及流式细胞术对 MCF- 7细胞的增殖情况进行分析。结果 :　与溶剂对照组相比较 ,GS(96μmol/ L,2 4h)可明显抑制 MCF- 7细胞增殖和细胞 DNA合成 ,并将细胞周期阻滞在 G2 / M;8μmol/ L GS处理96 h也能产生类似的抑制效果。 96 nmol/ L ZEA处理 2 4 h可明显促进 MCF- 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并将细胞周期由 G0 / G1向 S期推进 ,提高细胞分裂增殖指数。结论 :　ZEA和 GS均属环境雌激素 ,但对乳腺癌细胞 MCF- 7增殖产生的影响不同 ,ZEA可促进 MCF- 7增殖 ,而 GS能够抑制 MCF- 7细胞的增殖 ,即 GS具有用于癌症预防及有关保健食品开发的价值     

金雀异黄素对MCF乳腺癌细胞NOS、GSH-Px活性及NO、GSH和MDA含量的影响

目的　探讨金雀异黄素对MCF乳腺癌细胞抑制作用的机理。方法　在体外培养的MCF乳腺癌细胞中加入不同浓度的金雀异黄素 ,2 4h后收集细胞和培养液 ,分别采用酶法和分光光度法测定了细胞匀浆液和培养液中一氧化氮合酶 (NOS)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活性及一氧化氮 (NO)、还原性谷胱甘肽(GSH)及丙二醛 (MDA)含量。结果　加入金雀异黄素作用后 ,细胞匀浆液和培养液中NOS、GSH PX活性及NO含量明显升高 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 )。GSH、MDA含量则明显降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 )。结论　金雀异黄素可影响MCF乳腺癌细胞NO生成系统和抗氧化系统 ,这可能是金雀异黄素抑制乳腺癌作用机理之一     

金雀异黄素的抗雌激素效应

应用雌激素耗尽的方法诱导乳腺癌细胞株MCF - 7和T47D发生凋亡 ,从而探讨金雀异黄素(genistein ,GS)对凋亡的影响作用。结果表明 ,同抗雌激素药物它莫西芬类似 ,3 2× 10 - 6 mol L及 96× 10 - 6 mol LGS可加剧雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用 ,且这种效应存在着良好的剂量 -效应关系。结果提示GS对女性乳腺癌发病率的预防作用是通过其抗雌激素效应诱导细胞的凋亡而实现的     

Anti-apoptotic action of zearalenone in MCF-7 cells

Zearalenone (ZEA), a nonsteroidal estrogenic mycotoxin, is present in high concentrations in dairy products and cereals. Studies have indicated that ZEA could strongly provoke proliferation in estrogen-dependent breast cancer MCF-7 cells following estrogen ablation. The current study confirmed the previous studies that within the range of concentrations of 2-96nM, like endogenous estradiol, ZEA could stimulate proliferation in MCF-7 cells with inducing a profound increase in S phase and a modest increase in G(2)/M phase that was accompanied by a decrease in G(0)/G(1) phase. The Cell Death Detection ELISA was used to determine whether the robust cell viability retrieved by ZEA was a result of inhibited apoptosis. Data indicated that ZEA-mediated inhibition of apoptosis is significantly evident (P<0.05) and in a dose-dependent manner. Western blot and multiple RT-PCR analysis revealed that the anti-apoptotic bcl-2 was upregulated at both protein and mRNA levels, together with the downregulation of pro-apoptotic bax. In short, the results here showed that ZEA possessed comparative estrogenic activity and could promote the progression of MCF-7 cells through the cell cycle by a decrease in G(0)/G(1) phase and a significant increase in S phase. The pro-proliferative activity of ZEA was due to inhibition of apoptosis through regulation of bax/bcl-2 expression. Therefore, we conclude that contamination of ZEA in food might contribute to the increasing incidence rates of breast cancer.     

芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖及迁移和凋亡的影响

目的：探讨芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法：将MCF-7乳腺癌细胞分为6组,正常对照组（C组）,芬太尼组（F1组、F2组、F3组、F4组、F5组）,芬太尼的终浓度分别为1、O．1、0．01、0．001、0．0001μmol／L,在含去激素新生小牛血清的无酚红培养基培养条件下,分别采用MTr法、划痕实验、AnnexinV—FITC细胞凋亡检测试剂盒结合流式细胞仪观察芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果：芬太尼组各组OD值、迁移距离和凋亡率与C组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：在含去激素新生小牛血清的无酚红培养基培养条件下,芬太尼对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡无明显影响。     

乳腺癌细胞耐药机理及药物逆转的实验研究

目的:探讨乳腺癌早期耐药的机理,并寻求药物耐药逆转的方法。方法:采用流式细胞术检测经低浓度的阿霉素处理后的乳腺癌细胞系MCF7的多药耐药蛋白(MRP)和P糖蛋白(Pgp)表达,探讨耐药发生机制。用MTT比色法检测利多卡因与抗肿瘤药物合用后对抗肿瘤药物的增敏作用。结果:经低浓度阿霉素处理后,MRP表达明显增加,并随时间延长而进一步增加,而Pgp表达无明显增高。利多卡因在本身没有毒性的浓度下(2 mg/m l),与3种化疗药物合用后降低了3种化疗药物的半数抑制浓度,单用药物分别为(76.3±3.63)mg/L、(7.9±1.2)mg/L、(15.6±1.1)mg/L,合用分别为(10.5±2.9)mg/L、(1.97±0.62)mg/L、(3.32±0.8)mg/L,差异显著(P<0.01)。结论:MRP在肿瘤细胞早期耐药性起主要作用。利多卡因作为钙调蛋白阻制剂,在体外能有效逆转MRP引起的多药耐药,为进一步应用于临床提供理论依据。