AG490对肾小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在白介素-1β(interleukin-1βIL-1β)诱导的高糖培养的人肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为高糖对照组(30mmol·L-1);高糖(30mmol·L-1)+IL-1β(5μg·L-1)组;高糖(30mmol·L-1)+IL-1β(5μg·L-1)+AG490(10μmol·L-1)组。分别于处理后24、48、72h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)水平。结果IL-1β能使高糖培养的人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18的表达逐渐减少;IL-1β刺激的同时加入AG490干预能减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用,并使CK-18的表达回升。结论炎症因子IL-1β能促进高糖培养的HKC发生表型转化,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断IL-1β的该作用。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对糖基化终末产物诱导的肾小管细胞转分化的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及JAK/STAT信号通路的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用白蛋白和AGEs进行刺激。采用Western印迹检测SOCS-1、α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(collagenI,ColI)、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和ColI蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。SOCS-1过表达能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及STAT1和STAT3的磷酸化,减少TGF-β1的含量,下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达,同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论SOCS-1过表达抑制AGEs诱导的肾小管上皮细胞转分化可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。     

晚期氧化蛋白产物对肾小管上皮细胞表型转分化影响的基础研究

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)参与肾间质纤维化发生、进展的可能机制。在细胞水平探索AOPP致慢性肾脏病肾小管间质纤维化可能的分子机制,探索慢性肾功能衰竭发病机制的新着眼点和治疗靶点,为进一步临床研究提供理论依据。方法本研究选择体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2作为肾小管上皮细胞模型,观察AOPP修饰的人血清白蛋白对上皮细胞表型转分化的影响,主要通过检测α-SMA、E-cadherin等标志物水平的变化来实现。结果体外研究发现,AOPP通过NADPH氧化酶介导诱导内皮细胞氧化应激损伤,提示AOPP是一种新的具有氧化应激活性的尿毒病毒素。结论 AOPP是一种新的具有氧化应激活性的尿毒症毒素,慢性肾功能衰竭的治疗应着眼于如何有效降低患者血浆中的AOPP水平。     

激活素A及卵泡抑素对肾小管上皮细胞转分化的作用

目的探讨激活素A(ACTA)对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化的影响及卵泡抑素(FS)的干预作用。方法 NRK-52E细胞生长于达氏修正伊氏培养基(DMEM)/F12培养基。实验A:将培养的NRK-52E细胞按rh-ACTA浓度不同分为4组:ACTA浓度分别为0,1,10,100ng/ml。实验B:分为4组:对照组;ACTA组(A组),rh-ACTA浓度10ng/ml;rh-FS组(F组),rh-FS浓度为100ng/ml;ACTA+FS组(A+F组):rh-ACTA浓度10ng/ml,rh-FS浓度为100ng/ml。24h后收集各组细胞及细胞上清液。蛋白印迹法检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN)的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液转化生长因子-β(TGF-β)的含量。结果 ACTA能剂量依赖性刺激肾小管上皮细胞α-SMA及FN的表达(P<0.05),而对TGF-β的表达没有影响。FS能抑制ACTA的上述效应,而单纯FS对肾小管上皮细胞α-SMA及FN的表达无影响(P>0.05)。结论 ACTA能刺激NRK-52E细胞转分化及FN的合成;FS可通过阻断ACTA的上述效应产生有效的肾脏保护作用。     

丹酚酸B对肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的:用转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化,观察丹酚酸B(SA-B)对HK-2细胞转分化过程的干预作用并初步探讨其机制。方法:TGF-β1(5 ng.mL-1)刺激HK-2细胞,用丹酚酸B(SA-B)(10μmol.L-1)干预;用免疫荧光法检测各组HK-2细胞黏着斑激酶(FAK)、整合素β1(β1-integrin)的表达。结果:TGF-β1成功诱导HK-2转分化;相比空白对照组,SA-B可抑制HK-2转分化,且SA-B可有效降低HK-2细胞FAK及β1-integrin蛋白的表达(P均小于0.05)。结论:SA-B可有效调节人肾小管上皮细胞转分化过程,其机制可能与其能调控HK-2细胞FAK及β1-integrin蛋白的表达有关。     

红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察红花黄色素注射液对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的的影响,探讨其肾脏保护机制。方法45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction;UUO）组（B组）、UUO联合红花黄色素治疗组（C组）,各15只。C组红花黄色素5mg/（kg·d）,造模术前1d开始腹腔注射给药,各组术后10d处死大鼠,处死后取术侧肾组织行HE、Masson染色,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果B组、C组可见明显肾间质纤维化的病理改变,可检测到凋亡细胞。C组与B组相比,肾间质纤维化病变程度较轻,凋亡细胞明显减少（P〈0.01）。结论注射用红花黄色素对大鼠肾间质纤维化有保护作用,这种作用可能通过抑制肾小管细胞过度凋亡实现。     

抑瘤素M对照射后小鼠造血系统的影响

为探讨抑瘤素M(OSM)对照射后小鼠造血系统的影响，对20只小鼠分4组进行对比观察。结果表明，OSM对照射后骨髓细胞、外周血细胞的损伤均有明显的恢复作用，与单纯照射组相比差异有显著意义。结论：OSM对辐射后小鼠造血系统的损伤有促进恢复的作用。     

骨化三醇对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的骨化三醇在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表型转化中的作用。方法体外传代培养NRK52E后按以下分组加入不同干预因素,骨化三醇终浓度为10-6mmol/L,AngⅡ终浓度为10-6mmol/L,①对照组:NRK52E培养液中不加入干预因素;②AngⅡ组:NRK52E培养液中加入AngⅡ;③骨化三醇组:NRK52E培养液中加入骨化三醇;④AngⅡ+骨化三醇组:NRK52E培养液中加入AngⅡ和骨化三醇。经AngⅡ和骨化三醇干预12、24、48h后,应用细胞免疫化学染色法检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)的表达,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和纤维粘连蛋白(FN)的表达。结果①与对照组比较,AngⅡ作用48h后,E-cadherin的表达减弱(P<0.05),α-SMA的表达显著增强(P<0.05),同时加入AngⅡ和骨化三醇后,与AngⅡ组比较,E-cadherin的表达增强(P<0.05),α-SMA的表达减弱(P<0.05);②AngⅡ作用48h后,细胞上清液细胞外基质成分FN、ColⅠ含量在AngⅡ组较对照组明显升高(P<0.05),同时加入骨化三醇和AngⅡ后,与AngⅡ组比较,FN、ColⅠ分泌有明显减少(P<0.05)。结论①骨化三醇能抑制AngⅡ诱导的NRK52E细胞的表型的转化;②骨化三醇能减少血管紧张素Ⅱ诱导的NRK52E细胞外基质FN、ColⅠ的分泌。     

抑癌素M的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

应用ＰＣＲ技术制备了抑癌素Ｍ的全基因ＤＮＡ顺序，将其克隆到表达载体ｐＳＰ质粒上，并转化进大肠杆菌宿主细胞ＪＭ１０３构建成工程菌。该工程菌经诱导表达后，经ＳＤＳ电泳和薄层扫描测定，表明表达量可达３５％。经初步提纯后进行细胞活性测定，表明其抑制黑色素瘤细胞的活性为１２ＧＩＡ／ｎｇ蛋白。     

血清抑瘤素M联合组蛋白H4在脓毒症诊断及预后评估中的意义

目的 探讨血清抑瘤素M(OSM)联合组蛋白H4在脓毒症诊断及预后评估中的意义。方法 选择2020年9月至2021年8月合肥市第一人民医院41例脓毒症病人为研究对象,使用酶联免疫吸附（ELISA）法测定脓毒症病人血清中抑瘤素M及组蛋白H4水平,选取年龄、性别相似的健康者40例为健康对照组;依据脓毒症病人28 d预后分为生存组和死亡组,使用统计学软件分析临床资料,比较两组血清抑瘤素M及组蛋白H4的差异。结果 脓毒症组、脓毒性休克组病人血清OSM[55.49(41.96,63.09)ng/L、108.03(58.22,86.44)ng/L比40.85(27.92,51.26)ng/L]及H4[29.93(25.09,31.74)μg/L、34.81(28.03,36.16)μg/L比25.85(22.50,28.23)μg/L]水平均高于健康对照组（P<0.05）。与脓毒症组相比,脓毒性休克组中血清OSM及H4水平更高（P<0.05）;ROC曲线分析,H4、OSM及二者联合对脓毒症的诊断的AUC为0.79、0.76、0.83,两者联合效能高于两者单独检测;与存活组相比,死亡组病人...     

The JAK2 inhibitor AG490 regulates the Treg/Th17 balance and alleviates DSS-induced intestinal damage in IBD rats

The pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD) remains unclear, and it is currently believed that an imbalance in regulatory T (Treg) cells/T helper 17 cells (Th17 cells) is related to the occurrence and development of IBD. Recently, the JAK2 inhibitor AG490 has been used in animal models such as rheumatoid arthritis and bronchial asthma models and shown to exert immunoregulatory functions that improve disorder in the Treg/Th17 cell balance. This study aimed to evaluate the effect of AG490 on the intestinal inflammatory process in an IBD rat model. A dextran sulfate sodium (DSS)-induced IBD rat model was established, and disease activity index (DAI) scores were calculated. The histopathological damage score was determined by haematoxylin-eosin (H&E) staining. Treg/Th17 cells in the spleen were detected by flow cytometry. The levels of interleukin (IL)-10, IL-6 and IL-17A were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). AG490 attenuated DSS-induced IBD injury by regulating the Treg/Th17 balance and related cytokine secretion to reduce the DAI and colonic tissue damage. Thus, AG490 may be a new method for effective treatment of IBD.     

AG490 对重症急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响

摘要： 目的 探讨 AG490 对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡及凋亡基因 FasL 和 Bcl-2 表达的影响。方法 健康 Wistar 大鼠 72 只, 按随机数字表法分为对照组(24 只)、 SAP 模型组(24 只)和 AG490 治疗组(24 只)。后 2 组采用 5%牛磺胆酸钠胆胰管内逆行注入诱导 SAP 大鼠模型, 3 组大鼠均于术后 6 h、 12 h、 24 h 心脏采血, 检测血清淀粉酶。剖腹取胰腺组织, 光镜下观察胰腺组织病理改变并进行病理学评分, TUNEL 法检测胰腺腺泡细胞凋亡指数, RT-PCR 检测胰腺组织 FasL、 Bcl-2 mRNA 的表达。结果 与对照组比较, SAP 模型组大鼠胰腺病理损伤加重, 病理评分增高, 血清淀粉酶明显升高, 胰腺腺泡细胞凋亡指数升高, FasL mRNA 表达明显升高, Bcl-2 mRNA 表达明显降低(P＜0.05 或 P＜0.01)。与 SAP 模型组相比较, AG490 治疗组大鼠胰腺病理损伤明显改善, 病理评分降低,血清淀粉酶明显降低, 胰腺腺泡细胞凋亡指数升高, FasL mRNA 表达明显升高, Bcl-2 mRNA 表达明显降低(P＜0.05 或 P＜0.01)。结论 抑制 JAK/STAT3 信号通路可能通过调节凋亡相关基因, 增加胰腺腺泡细胞凋亡, 从而减轻胰腺炎症反应及病理损害。     

PG490及PG736的抗肿瘤活性研究

目的通过研究PG490及血清孵化PG736对肿瘤细胞的毒性作用,评价PG736的抗肿瘤活性。方法采用14种人肿瘤细胞为实验瘤株,通过MTT法检测PG490、PG736对14种肿瘤细胞的毒性作用。结果与对照组相比较,PG490对所试14种人类肿瘤细胞的增殖均有显著抑制作用(P<0.05),对于不同来源的细胞作用强度略有不同;PG736经人血清孵化后对LOVO及GMC-803细胞增殖有显著抑制作用(P<0.05)。结论PG490及PG736对14种人肿瘤细胞具有不同程度抗肿瘤作用。     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用(英文)

目的　为了观察TyrphostinAG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理。方法　利用基因工程克隆 ,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 32 P]ATP或 [γ 32 P]GTP的 [32 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 +、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG114对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 2 0 .8μmol·L- 1,抑制强度介于已知CK2抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3)之间。AG114对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈混合竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论　AG114不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点     

AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

目的　观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP或 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 + 、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG1112对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 6 0 μmol·L-1,抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3。AG1112对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP和酪蛋白分别呈混合性和非竞争性抑制作用。结论　由于AG1112对重组人CK2显示出很强的抑制作用 ,因此重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点